CC BY
122
72
Оригинальные исследования
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эффективность использования аутофибробластов при хирургическом лечении пародонтита
А.И. Гоудянов 1, ВЛ. Зорин 2, Р.В. Переверзев 1, А.И. Зорина 2, И.Я. Бозо 23
1 Центральный научно-исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии МЗ РФ, Москва
2 Институт стволовых клеток человека, Москва
3Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва
Efficiency of autofibroblasts in surgical treatment of parodontitis
A.I. Grudyanov1, V.L. Zorin 2, R.V. Pereverzev1, A.I. Zorina2, I.Y. Bozo2-3
1 Central Research Institute of Dentistry and maxillofacial surgery of MH Russia, Moscow
2 Human Stem Cells Institute, Moscow
3 A.I. Evdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry, Moscow
Деструктивные формы заболеваний пародонта имеют высокую распространённость. Наше исследование было нацелено на оценку эффективности тканеинженерного остеопластического материала в лечении пациентов с патологией пародонта. Мы получали аутогенные фибробласты слизистой оболочки полости рта пациентов, совмещали их с носителем из гидроксиапатита и трансплантировали в ходе стандартного хирургического лечения при деструктивных формах пародонтита. В качестве контроля использовался материал без клеток, имплантированный тем же пациентам, но в области пародонта других пораженных зубов.
Был показан больший эффект тканеинженерного остеопластического материала по показателю глубины паро-донтальных карманов, однако существенной разницы по приросту костной ткани и другим показателям не было выявлено. Таким образом, требуется продолжение исследований для изменения технологии создания тканеинженерного материала и выбора более оптимального носителя для фибробластов слизистой оболочки.
Ключевые слова: фибробласты слизистой оболочки, тканеинженерный остеопластический материал, пародонтит, клиническое исследование.
Проблема лечения воспалительных заболеваний пародонта актуальна ввиду их высокой распространенности среди населения [1—3]. Так, по данным Американской академии пародонтологии, озвученным на заседании ВОЗ в 2005 г. и опубликованным в журнале «Periodontology», деструктивными формами патологии пародонта страдает 10—15% населения Земли. В популяции лиц трудоспособного возраста (35—44 года) частота распространенности патологии достигает 20%. Важно, что пародонтит легкой степени — потенциально переходящий в более тяжелые, деструктивные формы, характерен еще для 20—40% населения планеты трудоспособного возраста [4]. В России, по данным ЦНИИ Стоматологии и че-
e-mail: [email protected]
The destructive forms of periodontal disease have a high prevalence. Our study was aimed to evaluate the effectiveness of tissue-engineering osteoplastic material in treatment of patients with periodontal pathology. We have obtained autologous gingival fibroblasts of patients, combined with the hydroxyapatite carriage and transplanted on a standard surgical treatment of periodontitis destructive forms. As a control we used the material without cells implanted into periodontal defects of other affected teeth of the same patients.
We have shown the better effect of tissue-engineering osteoplastic material regarding the periodontal pockets depth, but significant difference in bone regeneration and other indicators has not been revealed. Thus, a continuation of researches is required to modify the technology of tissueengineering osteoplastic material creation and to choice the more optimal carrier for gingival fibroblasts.
Key words: gingival fibroblasts, tissue-engineering
osteoplastic material, periodontal disease, clinical study.
люстно-лицевой хирургии, распространенность воспалительных заболеваний пародонта соответствует общемировой ситуации [5].
При этом основу современного комплексного лечения пациентов с патологией пародонта воспалительного генеза составляют хирургические методы, направленные на устранение очагов костной деструкции и обеспечение условий для эффективного репаративного процесса. Сложность получения оптимальных результатов лечения — полного восстановления утраченных объемов костной ткани пародонта — обусловлена не только объемами образовавшегося дефекта и недостаточной активностью репаративного остеогенеза, но и спецификой
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
Оригинальные исследования
73
компенсаторно-адаптационных реакций тканей полости рта, а именно выраженным репаративным потенциалом слизистой оболочки. Так, без восполнения пародонтального костного дефекта остеопластическими материалами происходит избыточный рост слизистой оболочки десны по «свободной» от костной ткани поверхности корня зуба, что препятствует восстановлению объема костной ткани [6, 7]. В этой связи, деструктивные формы пародонтита являются абсолютным показанием для применения остеопластических материалов в ходе хирургического лечения.
Разрешенные для применения в клинической практике остеопластические материалы, в целом, позволяют оптимизировать репаративный остеогенез в парадонтальной области и получить удовлетворительные результаты лечения. При этом, механизм их действия обеспечен лишь остеокондукцией, то есть способностью служить своеобразной матрицей, направляющей рост костного регенерата [8]. Однако в целом ряде клинических ситуаций, особенно при больших объемах костных дефектов и (или) значительной распространенности деструктивного процесса, остеокондуктивного действия остеопластических материалов недостаточно для успешного лечения пациента.
В этой связи, в попытке наделить остеопластические материалы остеокондукцией и (или) остеоген-ностью активно разрабатываются тканеинженерные технологические подходы, среди которых одним из наиболее эффективных является клеточный.
Среди различных клеточных типов, потенциально способных активировать репаративный остеогенез, нашей исследовательской группой выбраны фибробласты, которые по профилю продуцируемых биологически активных веществ, во многом, сопоставимы с мультипотентными мезенхимными стромальными клетками (ММСК) и могут быть получены из минимального по размеру биоптата слизистой оболочки полости рта — тканевого источника, наиболее доступного для врачей стоматологического профиля. Более того, в последние годы показано, в том числе и нашей исследовательской группой, что фибробласты, как и ММСК, способны к мультилинейной дифференцировке, в том числе в остеогенном направлении [9—11].
Целью работы явилось изучение эффективности использования аутогенных фибробластов при проведении лоскутных операций у лиц с пародонтитом средней и тяжелой степени.
Материал и методы
Характеристика пациентов
Проведение клинического исследования было одобрено Ученым советом и Локальным этическим комитетом ФГБУ «ЦНИИС и ЧЛХ» МЗ России. В исследование были включены пациенты (n = 9, 5 мужчин, 4 женщины; возраст — 36—49 лет) с пародонтитом средней и тяжелой степеней. Основными критериями включения являлись:
— величина потери клинического прикрепления десны (> 5 мм) и убыль костной ткани альвеолярного отростка верхней челюсти или альвеолярной части нижней челюсти на величину более 1/2 длины корня;
— распространение патологического процесса на пародонт нескольких зубов.
От всех пациентов было получено письменное информированное согласие на участие в клиническом исследовании. Для выявления патологии, соответствующей критериям невключения, каждому пациенту выполнялось клиническое обследование, а также ряд лабораторных анализов: общий, биохимический анализы крови и мочи; серологическое исследование крови.
На первом этапе клинического исследования у всех пациентов, осуществляли биопсию — иссекали фрагмент слизистой оболочки размером 2x2 мм со стороны преддверья полости рта, твердого неба или ретромолярной области. Полученный биоптат помещали в герметичную стерильную пробирку с питательной средой и антибиотиком, которую доставляли в лабораторию не позднее 3 сут. с момента забора.
Получение и характеристика
тканеинженерного остеопластического
материала
Исследуемый тканеинженерный остеопластический материал состоял из носителя («ГАП-99», Полистом, Россия) и аутогенных фибробластов человека. В качестве контрольного материала использовали носитель без клеток.
Получение первичной культуры фибробластов человека. Биоптаты слизистой оболочки полости рта обрабатывали коллагеназой II типа (Sigma, США). Полученные клеточные суспензии культивировали в среде DMEM (Панэко) с 10% ЭТС (Панэко) и 40 мкг/мл гентамицина в течение 14 сут. в культуральных флаконах 25 см2 (Nunc, США). При достижении монослоем 80—100% конфлуэнтности клетки снимали с поверхности флаконов 0,05% раствором трипси-на-ЭДТА ( Biological Industries, США) и пересевали с плотностью около 104 клеток на см2 на поверхности культуральных флаконов большей площади (75 см2 Nunc, США), культивировали в среде DMEM, содержащей 10% FBS и 40 мкг/мл гентамицина. По достижении 80—100% конфлуентности клетки пересевали во флаконы с площадью поверхности 170 см2 (Nunc, США) и культивировали до получения необходимого количества.
Иммунофенотипический анализ фибробластов десны человека. Поверхностные маркеры (CD) определяли посредством цитофлуориме-тра FACS Canto™ II c программным обеспечением «FACSDiva™» (Becton Dickinson, США). В работе использовали флуоресцентные антитела к маркерам гемопоэтических (CD34, CD45), мезенхимальных (CD73, CD90, CD105 (Invitrogen, США)) и эпителиальных (цитокератины 14—16, 19)
(BD Pharmingen™, США) клеток.
Совмещение носителя и клеток. Полученную после трипсинизирования суспензию клеток иммоби-лизовывали на гранулах ГАП-99 размером 250 мкм из расчета 2x107 клеток на 1 г носителя в среде культивирования в течение 24 ч. После этого гранулы носителя с клетками трижды отмывали от культуральной среды буферным раствором Хенкса и ресуспендировали в 0,5 мл раствора Хенкса, содержащего 5% аутологичной сыворотки пациента. Персонализированные тканеинженерные материалы использовали в течение 1—2 ч после изготовления.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
74
Оригинальные исследования
Применение остеопластических материалов
Всем пациентам была оказана стандартная медицинская помощь, включающая терапевтические и хирургические методы. Оперативное лечение в виде лоскутных операций по методике Видмана — Неймана выполнялось после необходимой санации полости рта и местной противовоспалительной и (или) антибактериальной терапии.
В ходе выполнения хирургического этапа лечения каждому пациенту в одном сегменте челюсти выполняли введение тканеинженерного остеопластического материала (клиническая группа, № 1), а в другом — носителя без клеток (контрольная группа, № 2). В общем исчислении, с трансплантацией целевого материала лечение было проведено в области 32 зубов, а пародонтальные зоны в области еще 34 зубов составили контрольную группу.
Оценка результатов исследования
Клинические методы. Для клинической оценки состояния тканей пародонта определяли глубину пародонтальных карманов и подвижность зубов, а также использовали следующие индексы: индекс кровоточивости (Muhlemann H.R. в модификации Cowell I., 1975), индекс гигиены J. Silness — H. Loe (1967); тяжесть пародонтита определяли по паро-донтальному индексу A. Russel (1956).
Инструментальные методы исследования. Для количественной оценки степени убыли альвеолярной части нижней челюсти и альвеолярного отростка верхней челюсти использовали индекс деструкции альвеолярной кости (индекс Фукса). Степень поражения фуркаций в горизонтальном направлении определяли по S.E. Hamp (1975). Вертикальную убыль кости от фуркации оценивали по D. Tarnow и P. Fletcher (1984).
Изучение метрических параметров десны и паро-донтальных карманов проводили с использованием градуированного пародонтального зонда и автоматизированной компьютерной диагностической системы «Флорида Проуб» (США).
Кровоток в десне определяли методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) с помощью анализатора ЛАКК-02 (ЛАЗМА, Россия). Состояние микроциркуляции оценивали по показателю, характеризующему уровень капиллярного кровотока (М), и коэффициенту вариаций (Kv), отражающему вазомоторную активность сосудов гемомикроциркуляторного русла.
КТ костей челюсти осуществляли на компьютерном томографе New Tom 3G (Nim S.r.l., Италия), ортопантомографию — на аппарате рентгеновском панорамном ORTHOPHOS XG. Повторные исследования клинических показателей проводили через 3, 6 и 9 мес., рентгенологические исследования — через 6, 9 мес.
Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью программы Statistica 7.0 (StatSoft, США). Количественные результаты исследования были представлены средними значениями показателей и стандартной ошибкой средних значений. Проверку на соответствие распределения значений исследуемых параметров закону нормального распределения осуществляли с помощью критерия Колмогорова — Смирнова. Ввиду отличия выборок от нормального распределения для проверки стати-
стических гипотез использовали непараметрические методы: U-критерий Манна — Уитни и критерий Вил-коксона.
Результаты и обсуждение
Тканеинженерные медицинские изделия и технологии для лечения пациентов с деструктивными формами заболеваний пародонта активно разрабатываются в виду значительной актуальности проблемы. Для их создания используются различные клеточные популяции, как то ММСК, остеогенные клетки надкостницы, фибробласты и др. Однако все большее значение придается не столько типу клеток, сколько его тканевому источнику, доступность эксплантации которого для врача соответствующей специальности имеет существенное значение. Одни исследователи используют ММСК пульпы зуба, периодонтальной связки для создания тканеинженерных остеопластических материалов [12], другие — клетки дентальных фолликулов [13], наше исследование связано с фибробластами слизистой оболочки ротовой полости, ввиду их наибольшей доступности и практичности использования в рамках разрабатываемой медицинской технологии.
Характеристика клеточного материала
Известно, что фибробласты не имеют специфических иммунофенотипических маркеров, однако характеризуются высоким уровнем экспрессии поверхностных антигенов, характерных для ММСК, отличаясь от последних значимо большей продукцией структурных белков — компонентов межклеточного матрикса. В этой связи, для обоснованного отнесения полученных культур клеток к фибробластам нами был использован стандартный перечень антигенов, исследуемых при идентификации ММСК, а также оценен профиль экспрессии структурных белков. В результате клетки, выделенные из слизистой оболочки полости рта человека, характеризовались отсутствием гемопоэтических (CD34, CD45) и эпителиальных (цитокератины 14—16, 19) маркеров и экспрессировали мезенхимальные поверхностные антигены (CD73, CD90, CD105), а также коллагены I, III типа, эластин и виментин, что позволило отнести полученные нами культуры клеток к фибробластам (табл. 1).
Таблица 1. Иммунофенотип фибробластов слизистой оболочки полости рта человека
Антиген Ф, %
CD34 <0,5
CD45 <0,5
CD73 >99
CD90 >99
CD105 >99
Коллаген I >95
Коллаген III >95
Эластин >95
Виментин >95
Цитокератины 14-16,19 <0,5
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
Оригинальные исследования
75
Результаты клинического обследования пациентов
Клиническое течение послеоперационного периода в обеих группах практически не отличалось. На протяжении первых 3 сут. наблюдался умеренный отек мягких тканей, незначительная гиперемия лоскута и его болезненность при пальпации. На 7 сут. явления операционной травмы исчезали.
Динамика пародонтальных индексов 1 и 2 групп после операции представлена в таблице 2. Исходная индексная оценка степени выраженности воспалительной реакции в тканях десны соответствовала умеренному воспалению. Изначально определялись достаточно глубокие пародонтальные карманы (более 5 мм) и большая потеря прикрепления десны, что закономерно сопровождалось выраженной
подвижностью зубов. Исходное значение индекса Фукса в 1 группе составило 0,47±0,03, а во 2 — 0,49±0,07, что соответствовало степени деструкции костной ткани в пределах от 1/2 до 2/3 длины корня. Таким образом, исходное состояние тканей пародонта в участках вмешательства в обеих группах было практически идентичным.
Индексы гигиены, кровоточивости и гингивальный индекс в послеоперационном периоде (через 3 мес. после операции) отражали благоприятную динамику состояния десны и гигиены рта в обеих группах. Выраженность воспалительных изменений десны (по индексу кровоточивости) последовательно снижалась с высоким градиентом к 6 мес. после операции в обеих группах с дальнейшей стабилизацией показателей на низких уровнях.
Таблица 2. Динамика пародонтальных индексов в клинической и контрольной группах до и в различные сроки после операции (n1 = 32, n2 = 34)
Показатели Группы Исходные значения Значения в послеоперационном периоде
3 мес. 6 мес. 9 мес.
Индекс гигиены Silness- Loe 1 1,63±0,4 1,59±0,2 1,47±0,3 1,02±0,2
2 1,56±0,3 1,53±0,4 1,57±0,4 1,25±0,3
Индекс кровоточивости (Muhlemann) 1 1,9±0,3 1,1±0,2* 0,5±0,1* 0,7±0,2*
2 1,7±0,1 1,4±0,4 0,7±0,3* 0,6±0,1*
Пародонтальный индекс (PI) Russel 1 5,21±0,4 2,82±0,2* 2,03±0,3* 1,72±0,2*
2 5,62±0,3 3,13±0,2* 2,11±0,4* 1,93±0,3*
Глубина пародонтального кармана (мм) 1 7,5±0,2 4,7±0,2* 4,1±0,3* 3,7±0,4*
2 7,8±0,3 4,9±0,4* 4,3±0,5* 4,1±0,2*
Подвижность зубов 1 1,7±0,1 1,1±0,2* 0,6±0,1* 0,4±0,05*
2 1,8±0,2 1,3±0,1* 0,7±0,2* 0,5±0,01*
Индес Фукса 1 0,47±0,03 0,64±0,04* 0,68±0,02* 0,76±0,03*
2 0,49±0,07 0,61±0,05* 0,65±0,04* 0,73±0,05*
величина потери прикрепления десны (мм) 1 7,0±0,4 3,9±0,2* 3,2±0,3* 2,7±0,4*
2 7,2±0,3 4,0±0,3* 3,6±0,2* 3,4±0,3*
Примечание: * — различия по сравнению с исходными значениями показателей статистически значимы (p<0,05).
Достижение стабильно хорошей гигиены полости рта (индекс Silness — Loe <1,0) через 6 мес. после операции было отмечено у половины пациентов. Глубина пародонтальных карманов прогрессивно снижалась в двух изучаемых группах. Однако во 2 группе после 6 мес. отмечалась относительная стабилизация показателей, тогда как в 1 группе имело место дальнейшее уменьшение глубины пародон-тальных карманов. Вследствие этого через 9 мес. после операции в клинической группе глубина паро-донтальных карманов была меньше (3,7±0,4 мм), чем в контрольной (4,1±0,2 мм).
В последнее время многие отечественные и зарубежные исследователи, характеризуя степень деструкции тканей пародонта, используют величину потери прикрепления, поскольку глубина пародон-тального кармана может быть ложно определена за счет отека мягких тканей, либо из-за рецессии десны. Прирост зубодесневого прикрепления является ключевым клиническим показателем эффективности хирургического лечения тканей пародонта. В результате проведенного лечения было определено
увеличение этого показателя в послеоперационном периоде в обеих группах (рис. 1). Однако при анализе полученных данных было показано, что в 1 группе через 9 мес. после операции прирост зубодесневого прикрепления был большим, чем в контроле.
1- я группа
2- я группа
Прирост зубодесневого прикрепления в клинической (№ 1) и контрольной (№ 2) группах после операции
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
76
Оригинальные исследования
Результаты инструментальных методов
обследования
На ортопантомограммах и компьютерных томограммах костей челюстей у пациентов обеих групп было отмечено уменьшение костных и фуркацион-ных дефектов разной степени, уплотнение костной структуры, восстановление межальвеолярных перегородок. Через 9 мес. на ортопантомограммах в обеих группах обнаруживалась нормализация костного рисунка при сохранении на отдельных участках очагов остеосклероза: контур альвеолярной кости становился четким, межальвеолярные перегородки приобретали дугообразную форму, костные карманы уменьшались.
Показатели фуркационных дефектов в горизонтальном и вертикальном направлениях до и в различные сроки после операции приведены в таблице 3, которая наглядно демонстрирует положительную динамику изменения показателей в обеих группах по сравнению с исходными. Статистически значимых различий в изменении данных показателей между группами не было выявлено.
Для комплексной оценки восстановительного процесса в тканях пародонта важную роль имеют методы исследования микроциркуляции, которая в определенной степени отражает условия, в которых протекает репаративный остеогенез. Параметры микроциркуляции в тканях десны в норме составляют для М — 18—20 усл.ед., а для Kv — 12—13%. Исходно повышенные показатели ЛДФ типичны для воспаления, сопровождающегося гиперемией, расширением сосудов гемомикроциркуляторного русла. Достоверное снижение показателя микроциркуляции М с нормализацией уровня в обеих группах наблю-
далось через 6 мес. после операции. Вазомоторная активность микрососудов у пациентов обеих групп снижалась через 3 мес. и нормализовалась через 12 мес. после хирургического вмешательства. Межгрупповые различия показателей ЛДФ отсутствовали (табл. 4).
Заключение
Таким образом, лечение пациентов с деструктивными формами генерализованного пародонтита было успешным при использовании остеопластического материала как с аутогенными фибробластами, так и без них. Однако полученный результат нельзя трактовать как «стопроцентный», так как костная ткань пародонта ни в одной из групп не восстановилась полностью. Кроме того, по причине необходимости минимизации использования инвазивных методов в клинических исследованиях не был выполнен гистологический анализ регенерата из областей введения материалов, что не позволяет констатировать реализацию гистотипической регенерации костной ткани. При этом лишь формирование зрелой костной ткани может обеспечить стабильность достигнутых результатов лечения. Учитывая, что эффективность тканеинженерной конструкции обеспечивается не только клеточной популяцией, входящей в ее состав, но и носителем, можно предположить, что примененные в данном исследовании аутогенные фибробласты не проявили весь свой «терапевтический» потенциал, показанный в целом ряде работ, из-за недостаточной «пригодности» выбранного носителя. В этой связи, исследование будет продолжено, но уже с другими, более подходящими для создания тканеинженерных костных графтов носителями.
Таблица 3. Величина фуркационных поражений в горизонтальном и вертикальном направлениях в клинической и контрольной группах до и в различные сроки после операции (n1 = 32, n2 = 34)
Вид фуркационных дефектов Группы Исходные значения Сроки наблюдения, мес.
3 6 9
Горизонтальные, мм 1 3,9±0,1 2,5±0,15* 2,4±0,04* 2,3±0,06*
2 3,7±0,1 2,4±0,17* 2,4±0,05* 2,3±0,04*
Вертикальные, мм 1 6,1±0,1 3,2±0,11* 2,8±0,07* 2,4±0,05*
2 6,3±0,1 3,1±0,14* 2,9±0,08* 2,6±0,07*
Примечание: * — различия по сравнению с исходными значениями показателей статистически значимы (p<0,05).
Таблица 4. Параметры микроциркуляции в тканях десны до и в различные сроки после операции (M±m) (n1 = 32, n2 = 34)
Показатели ЛДФ Группы Исходные значения Сроки наблюдения, мес.
3 мес. 6 мес. 9 мес. 12 мес.
М, усл.ед. 1 48,2±1,3 23,1±1,1 18,7±1,7* 19,1±1,1* 19,5±1,5*
2 49,9±1,55 22,7±1,4 18,3±1,2* 19,2±1,3* 19,4±1,0*
Kv, % 1 21,4±0,6 5,9±0,3* 7,8±0,4* 9,2±0,8* 12,5±0,7*
2 23,0±0,4 6,2±0,5* 6,5±0,7* 8,7±0,3* 12,0±0,6*
Примечание: * — различия по сравнению с исходными значениями показателей статистически значимы (p<0,05).
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
Оригинальные исследования
77
ЛИТЕРАТУРА:
1. Безрукова И.В. Быстропрогрессирующий пародонтит. М.: Медицинская книга; 2004.
2. Григорьян А.С., Грудянов А.И., Фролова О.А. и др. Видовой состав анаэробной микрофлоры пародонтального кармана в зависимости от стадии пародонтита. Стоматология 2009; 4: 43—7.
3. Грудянов А.И. Заболевания пародонта. М.: Медицинское информационное агентство; 2009.
4. Petersen P.E., Ogawa H. Strengthening the prevention of periodontal disease: the WHO approach. Periodontol 2005; 76: 2187-93.
5. Григорьян А.С., Грудянов А.И., Рабухина Н.А. Болезни пародонта: патогенез, диагностика, лечение. М.: Медицинское информационное агентство; 2004.
6. Bowers G.M., Chadroff B., Carnevale R. et al. Histologic evaluation of new attachment apparatus formation in humans. Part III. Periodontol. 1989; 60(12): 683-93.
7. Cortellini P, Bowers G. Periodontal regeneration of intrabony defects: An evidence based treatment approach. Int. J. Periodontol. Rest. Dent. 1995; 15:128-45.
8. Гололобов В.Г., Дулаев А.К., Деев Р.В. и д.р. Морфофункциональная организация, реактивность и регенерация костной ткани. СПб: 2006; 47 с.
9. Зорин В.Л., Зорина А.И., Воложин Г.А. и др. Изучение фенотипического профиля и остеогенных свойств фибробластов десны. Саратовский научно-медицинский журнал 2013; 9(3): 393-7.
10. Lorenz K., Sicker M., Schmelzer E. et al. Multilineage differentiation potential of human dermal skin-derived fibroblasts. Exp. Dermatol. 2008; 17(11): 925-32
11. Mostafa N.Z., Uludag H., Varkey M. et al. In vitro osteogenic induction of human gingival fibroblasts for bone regeneration. Open Dent J. 2011;5:139-45.
12. Huang G.T., Gronthos S., Shi S. Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine. J. Dent. Res. 2009; 88(9): 792806.
13. Guo W., Chen L., Gong K. et al. Heterogeneous dental follicle cells and the regeneration of complex periodontal tissues. Tissue Eng. Part A. 2012; 18(5-6): 459-70.
Поступила 2508.2013
Система для проведения экстракорпорального фотофереза -UVAR XTS («Therakos», США)
Экстракорпоральный фотоферез представляет собой метод, основанный
на сочетании лейкафереза и облучения лейкоцитов, предварительно обработанных фотосенсибилизатором (8-метоксипсораленом), ультрафиолетовым светом диапазона А (320 - 400 нм).
Область применения:
Лечение онкологических, аутоиммунных, дерматологических и пролиферативных заболеваний:
•кожная Т-клеточная лимфома
•уменьшение реакции трансплантат против хозяина (РТПХ)
•предотвращение отторжения органов после трансплантации
•склеродермия
•дерматиты, псориаз
•ревматоидный артрит
•болезнь Крона
Особенности системы:
Безопасность для пациента:
•одноразовая система расходных материалов •исключение риска воздушной эмболии •исключение риска заражения
•осуществление контроля поступления антикоагулянта •контроль давления в системе
•контроль скорости забора и возвращения крови пациенту •возможность изменения параметров процесса в течение процедуры •при необходимости автоматическая блокировка системы магистралей.
Простота в работе и обслуживании:
•удобное использование для оператора
•конструкция аппарата и расходных материалов исключают возможность ошибки при загрузке
•однократная венепункция •полная автоматизация процедуры
•быстрое и безопасное извлечение компонентов процедурного набора после завершения процедуры
•наличие ключа данных, на котором фиксируется вся информация о протекании процесса
ш ЫпьаРе.
Система для выделения стволовых клеток - Sepax («BioSafe»,
Швейцария)
•Самая современная, компактная, мобильная система, позволяющая выделять гемопоэтические стволовые клетки из пуповинной, периферической крови, костного мозга, а также осуществлять их отмывку после криохранения
•Идеальная система для быстрой автоматической обработки крови или ее компонентов с высоким уровнем жизнеспособности клеток после процедуры.
•Sepax позволяет проводить 9 протоколов (выделение стволовых клеток, концентрация стволовых клеток и их отмывка).
•Принцип действия Sepax основан на сепарации центрифугированием, позволяющем разделять компоненты крови в соответствии с их плотностью и размером.
•Система предназначена для применения в онкогематологии и клеточной терапии (регенеративной медицине), где необходимо получение определенных компонентов крови.
•Обработка крови или ее компонентов происходит в закрытой одноразовой стерильной системе.
• Компоненты крови собираются в специальные мешки и готовы для дальнейшего использования (криоконсервация, наращивание in vitro, трансплантация и др.).
Эксклюзивный представитель ООО «Инновационные Медицинские Технологии» Москва, Хорошевское шоссе, д.43 Г, тел: +7(495)380-36-62, факс: +7(499)707-01-64 E-mail: [email protected] , gdv@ imt-stemcells.ru, nmv@ imt-stemcells.ru
Автоматизированная система для хранения стволовых клеток в жидком азоте - BioArchive («Thermogenesis», США)
Система рассчитана на 3626 образцов стволовых клеток •Низкая стоимость операционного процесса
- низкий расход жидкого азота на один образец во время хранения и программного замораживания
- полностью автоматизированный процесс сокращает время работы персонала
•Снижение затрат на оборудование
- не требуется большого количества дьюаров для хранения (одна система BioArchive заменяет 6-7 дьюаров)
- наличие двух встроенных программных замораживателей
•Безопасность и защита
- полузакрытая система сокращает воздействие азота на оператора
- источник бесперебойного питания позволяет разместить/извлечь образец в случае отключения электричества
- параметры 24-часового контроля и управления доступом включают в себя:
• Мониторинг уровня жидкого азота
• Пароль для доступа
• ID номер для оператора, хранящийся в базе данных
Интегрированный программный замораживатель
- минимизирует температурные колебания
- отсутствует этап ручного переноса образца из программного замораживателя в дьюар для хранения
Криоконтейнер на 25 мл
- Постоянный геометрический размер образца
- Воспроизводимый процесс заморозки для каждой единицы
- Возможность роботизированной закладки на хранение и извлечение образцов
- Снижается вероятность ошибки, связанной с человеческим фактором
Система управления образцом
- Использование штрих-кода исключает ошибки при перемещении образца
- Отчет по образцу:
• История образца
• Инвентаризация
• График замораживания
Расходные материалы для культивирования стволовых клеток «CellGenix» (Германия):
Комплекты CellGro для культивирования клеток в закрытых системах.
• CellGro HPC для культивирования гемопоэтических клеток NK-клеток, T-клеток
• CellGro DC для культивирования дендритных клеток Бессывороточные среды CellGro:
• SCGM для культивирования: гемопоэтических прогениторных клеток, NK-клеток, T-клеток
• DC для культивирования дендритных клеток Культуральные мешки VueLife (сделаны из FEP Teflon)
CellGro цитокины
Для увеличения гемопоэтических прогениторных клеток,
NK-клеток, T-клеток и дендритных клеток
www.imt-stemcells.ru
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
