CC BY
46
■ lililí
ш
Новости клеточных технологий
R. Majeti и соавт. продемонстрировали, что популяция CD90-CD45RA- клеток пуповинной крови является муль-типотентной, обладает ограниченной способностью к самообновлению и в гематопоэтической иерархии находится на ступень ниже CD90+CD45RA- клеточной популяции. По мнению авторов, CD90-CD45RA- клетки представляют фракцию мультипотентных клеток-предшественниц в гемопоэзе человека.
В данном исследовании впервые был применен подход с использованием набора маркеров Lin-CD34+CD38-CD90+CD45RA- и новорожденных NOG мышей, что позволило выделить фракцию клеток с ГСК активностью в гораздо меньшем числе клеток, чем в предыдущих работах.
Выделение новой фракции мультипотентных клеток предшественников может иметь большое значение для изучения и терапии острого миелобластного лейкоза. В серии экспериментов по ксенотрансплантации было показано, что стволовые клетки лейкоза (СКЛ) локализованы в Lin-CD34+CD38-CD90- фракции лейкозных клеток [3, 4]. Исследователи предполагают, что выделенная в данной работе фракция мультипотентных клеток-предшественников является теми самыми клетками, которые могут давать начало СКЛ. R. Majeti и соавт. надеются выявить генетические или эпигенетические изменения, которые ведут к трансформации МПП в способные к долговременному самообновлению СКЛ.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Kondo M., Wagers A., Manz M. et al. Biology of hematopoietic stem cells and progenitors: Implications for clinical application. Annu. Rev. Immunol. 2003; 21: 759-806.
2. Ishikawa F., Yasukawa M., Lyons B. et al. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice. Blood 2005; 106: 1565-73.
3. Blair A., Hogge D., Ailles E., Lansdorp P., Sutherland H. Lack of expression of Thy-1 (CD90) on acute myeloid leukemia cells with long-term proliferative ability in vitro and in vivo. Blood 1997; 89: 3104-12.
4. Miyamoto T., Weissman I., Akashi K. AML1/ETO expressing nonleukemic stem cells in acute myelogenous leukemia with 8;21 chromosomal translocation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000; 97: 7521-6.
Подготовила А.Д. Краснодембская По материалам: Majeti R, Park С., Weissman I. Identification of a hierarchy of multipotent
hematopoietic progenitors. Cell Stem Cell 2007; 1: 635-45
ф КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ^ Эффективность дендритноклеточных вакцин на основе дендритных клеток I типа: результаты клинических исследований
Противоопухолевая вакцинотерапия - это лечебный и профилактический метод активной специфической иммунотерапии, основанный на использовании опухолевых антигенов как с адъювантом, так и без него для усиления противоопухолевого иммунного ответа. Особенностью действия противоопухолевых вакцин является индукция иммунного ответа, направленного на элиминацию имму-норезистентных опухолевых клеток. Противоопухолевый эффект достигается повторным введением антигенного материала в режиме вакцинотерапии [1].
Несмотря на то, что применение вакцин в терапии онкологических заболеваний в настоящий момент находится на стадии клинических испытаний, этот подход считается весьма перспективным. Дендритные клетки (ДК), как ключевое звено регуляции иммунных реакций, опосредованных Т-лимфоци-тами [2], привлекают большой интерес в качестве возможных адъювантов для иммунной терапии различных заболеваний. В настоящее время результаты клинических исследований дендритноклеточных вакцин в терапии неоплазий были получены несколькими независимыми клиническими центрами. В большинстве проведённых тестов in vivo и in vitro было показано, что подобные вакцины стимулируют развитие
противоопухолевого иммунного ответа и не имеют тяжёлых побочных эффектов [1, 3-5]. Однако до настоящего времени исследования были направлены на определение переносимости и токсичности вакцин, но не их эффективности.
Важным вопросом в разработке дендритноклеточных вакцин является вопрос о том, какие именно дендритные клетки следует использовать в качестве основы вакцины, а именно: зрелые или незрелые ДК. Использование зрелых ДК, как предполагают некоторые исследователи [6], более предпочтительно, так как они с меньшей вероятностью способны вызывать состояние толерантности к антигену. Незрелые дендритные клетки присутствуют в тканях организма, постоянно фагоцитируя антигены, находящиеся во внеклеточном матриксе [7, 8]. Связывание бактериальных продуктов с паттерн-распознающими рецепторами ДК [9], связывание рецептора CD40 на мембране ДК с его лигандом CD154 [10] на мембране Т-лимфоцита и !РЫ—/ [11] запускают процесс созревания дендритных клеток. В зависимости от природы антигена и, соответственно, от пути стимуляции незрелые ДК дифференцируются в ДК первого либо второго типа (ДК1 и ДК2 соответственно), которые мигрируют в регионарные лимфатические узлы [12].
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том III, № 2, 2008
тттт
ш
Новости клеточных технологий
ДК1 характеризуются продукцией ^-12, главного фактора дифференцировки FN-y-продуцирующих Т-лим-фоцитов-хелперов первого типа (^1) (рис.). ДК2, напротив, не продуцируют ^-12 и стимулируют в основном, диффе-ренцировку незрелых Т-лимфоцитов в Т-лимфоциты-хел-перы второго типа (^2), секретирующие IL-4 [13]. ^1-опосредованный иммунный ответ характеризуется клеточными иммунными реакциями и активацией цитоток-сических лимфоцитов; Th2 индуцируют развитие гуморальных иммунных реакций, то есть, главным образом, продукцию антиген-специфических иммуноглобулинов В-лимфоцитами [14].
Основываясь на этих данных, исследователи из группы А.М. Dohnal предположили, что именно ^^опосредованные цитолитические иммунные реакции являются основными в элиминации опухолевых клеток, то есть реакции, запускаемые ^-12-продуцирующими ДК1. Исходя из этого, они сочли, что противоопухолевая вакцина, разработанная на основе ДК1, будет наиболее эффективна. В клиническом эксперименте приняли участие двадцать два пациента дет-ского и подросткового возраста с различными видами неоплазий: остеосаркомой (с метастазами в костях и лёгких), гепатоцеллюлярной карциномой (с метастазами в кости), саркомой Юинга (с метастазами в лёгких), почечной карциномой и фибросаркомой. Все пациенты до начала
вакцинации получали стандартную противоопухолевую терапию.
Дендритные клетки были получены из моноцитов, выделенных из аутогенного аферезного продукта крови и стимулированы бактериальным липополисахаридом (ЛПС) и IFN-Y для максимизации продукции IL-12 [15]. Поскольку продукция IL-12 происходит только в первые 24 часа после созревания ДК [16], культивирование клеток в присутствии стимуляторов продолжалось в большинстве случаев не более 6 часов (за исключением ДК для первых восьми пациентов), после чего в культуру помещали суспензию опухолевых клеток пациента, полученную из биопсийного материала. Для активации фагоцитоза, процессинга и презентации опухолевых антигенов в культуру в качестве адъюванта добавляли также высокоиммуногенный белок - гемоцианин морского моллюска фиссуреллии (keyhole lymphet hemocyanin, KLH).
Вакцинацию производили либо подкожно (14 пациентов), либо непосредственно в регионарные лимфатические узлы (8 пациентов). Каждый пациент получал по девять инъекций по следующей схеме: три инъекции производились еженедельно в течение трёх недель, после чего следовал трёхнедельный перерыв в вакцинации для развития стойкого клеточного иммунитета. Части пациентов, получавших подкожные инъекции вакцины, производились также инъекции рекомбинантного IFN-y человека.
Регуляция развития иммунного ответа по 1Ъ-1 или 1Ъ-3 типам разными субпопуляциями дендритных клеток
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том III, № 2, 2008
I I I I I
Ш
Новости клеточных технологий
Для определения эффективности вакцинации были проведены тесты на гиперчувствительность замедленного типа, в которых было показано развитие позитивной реакции на KLH и опухолевые антигены у шести из девяти пациентов, вакцинированных подкожно, и четырёх из шести пациентов, вакцинированных интранодально. Реакция была статистически более выраженной при интранодальном пути вакцинации, нежели при подкожном. Ярко выраженная реакция на опухолевые антигены была отмечена у трёх из шести интранодально вакцинированных пациентов и лишь у двух из девяти пациентов, вакцинированных подкожно. Была также оценена продукция IFN-y T-лимфоцитами до и после вакцинации и получены статистически достоверные данные о том, что активность Thl-лимфоцитов после применения дендритноклеточной вакцины существенно повышается у всех пациентов, вакцинированных интранодально, и только
у трёх пациентов, получивших подкожные инъекции. Серьёзных побочных эффектов вакцинации выявлено не было, однако в целом не было отмечено какого-либо положительного эффекта на клиническое течение заболевания. Тем не менее, в данной фазе исследования трудно что-либо говорить о какой-либо эффективности.
Таким образом, противоопухолевая вакцинация дендритноклеточными вакцинами эффективна для стимуляции цитотоксических реакций и безопасна для пациентов. Это первая работа, в которой для вакцинации использовались ДК1. ДК1 могут быть получены в достаточном количестве из продукта афереза крови пациента. Дальнейшие клинические испытания должны проводиться на более однородных группах пациентов для определения эффективности применения М2-секретирующих ДК1 в терапии отдельных форм неоплазий.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Моисеенко В.М., Балдуева И.А., Орлова Р.В. и др. Способ иммунотерапии опухолевым лизатом с адъювантом беталейкин больных с солидными опухолями. Патент РФ RU2267326.
2. Banchereau J., Briere F., Caux C. et al. Immunobiology of dendritic cells. Annu. Rev. Immunol. 2000; 18: 767-811.
3. Felzmann T., Gadner H., Holter W. Dendritic cells as adjuvants in antitumor immune therapy. Onkologie. 2002; 25: 456-64.
4. Geiger J.D., Hutchinson R.J., Hohenkirk L.F. et al. Vaccination of pediatric solid tumor patients with tumor lysate-pulsed dendritic cells can expand specific T cells and mediate tumor regression. Cancer Res. 2001; 61: 8513-9.
5. Dagher R., Long L.M., Read E.J. et al. Pilot trial of tumor-specific peptide vaccination and continuous infusion interleukin-2 in patients with recurrent Ewing sarcoma and alveolar rhabdomyosarcoma: an inter-institute NIH study. Med. Pediatr. Oncol. 2002; 38: 158-64.
6. Labeur M.S., Roters B., Pers B. et al. Generation of tumor immunity by bone marrow-derived dendritic cells correlates with dendritic cell maturation stage. J Immunol. 1999; 162: 168-75.
7.Mazzaccaro R.J., Gedde M., Jensen E.R. et al. Major histocompatibility class I presentation of soluble antigen facilitated by Mycobacterium tuberculosis infection. PNAS. 1996; 93: 11786-91.
8. Simmons C.P., Mastroeni P., Fowler R. et al. MHC class I-restricted cytotoxic lymphocyte responses induced by enterotoxin-based mucosal adjuvants. J Immunol. 1999; 163: 6502-10.
9. Cho H.J., Takabayashi K., Cheng P.M. et al. Immunostimulatory DNA-based vaccines induce cytotoxic lymphocyte activity by a T-helper cell-independent mechanism. Nat Biotechnol. 2000; 18: 509-14.
10. Ridge J.P., Di-Rosa F., Matzinger P. A conditioned dendritic cell can be a temporal bridge between a CD4+ T-helper and a T-killer cell. Nature. 1998; 393: 474-8.
11. Sigal L.J., Crotty S., Andino R., Rock K.L. Cytotoxic T-cell immunity to virus-infected non-haematopoietic cells requires presentation of exogenous antigen. Nature. 1999; 398: 77-80.
12. Liu Y.-J., Kanzler H., Soumelis V., Gilliet M. Dendritic cell lineage, plasticity and cross-regulation. Nat. Immunol. 2001; 2: 585-9.
13. Kalinski P., Hilkens C.M., Wierenga E.A., Kapsenberg M.L. T-cell priming by type-1 and type-2 polarized dendritic cells: the concept of a third signal. Immunol Today. 1999; 20: 561-7.
14. Mosmann T.R., Coffman R.L. TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annu. Rev. Immunol. 1989; 7: 145-73.
15. Felzmann T., Huttner K.G., Breuer S.K. et al. Semi-mature IL-12 secreting dendritic cells present exogenous antigen to trigger cytolytic immune responses. Cancer Immunol. Immunother. 2005; 54: 769-80.
16. Langenkamp A., Messi M., Lanzavecchia A., Sallusto F. Kinetics of dendritic cell activation: impact on priming of TH1, TH2 and nonpolarized T cells. Nat. Immunol. 2000; 1: 311-6.
Подготовила A.C. Григорян
По материалам: Dohnal A.M., Witt V., Huegel H. et al. Phase I study of tumor Ag-loaded IL-12 secreting semi-mature DC for the treatment of pediatric cancer. Cytotherapy 2007; 9: 755-70
Котрансплантации гемопоэтических и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток при онкогематологических заболеваниях увеличивают риск развития рецидивов
Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является общепринятым методом терапии многих заболеваний [1-3]. Одно из самых частых и тяжёлых осложнений этого метода - реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ). Даже в случае полной ^А-совместимости донора и реципиента острая РТПХ развивается в 35% случаев, а хроническая - в 50% [4, 5]. Иммуносупрессив-ная терапия кортикостероидными препаратами достаточно эффективна для предотвращения острой РТПХ, однако она, в свою очередь, может приводить к осложнениям, среди
которых наиболее значимо возникновение тяжелых сопутствующих инфекций. Также существуют тяжелые формы РТПХ, устойчивые к стероидам, которые на данный момент остаются практически неизлечимыми [6]. Полное удаление из трансплантата донорских Т-лимфоцитов, снижая интенсивность РТПХ, одновременно повышает риск развития рецидива основного заболевания и несостоятельности трансплантата [7, 8].
Помимо ГСК, костный мозг млекопитающих содержит ещё одну популяцию стволовых клеток - мультипотентных
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том III, № 2, 2008
