CC BY
0химерным антигенным рецептором (CAR-Т-клетки) продемонстрировала значительную эффективность при лечении онкогематологических заболеваний, но крайне ограниченное воздействие на солидные опухоли, что заставляет искать новые подходы и возможности. Натуральные киллерные клетки (NK-клетки) представляют собой популяцию эффекторных клеток с мощной противовирусной и противоопухолевой активностью. Они обладают способностью быстро распознавать и убивать патологические клетки без необходимости предварительной стимуляции, имеют различные механизмы цитотоксического действия. Проведенные клинические исследования препаратов на основе NK-клеток показали многообещающие результаты эффективности и безопасности. Использование NK-клеточной терапии предполагает введение пациенту значительных количеств клеточной массы.
Цель
Разработка технологии получения и экспансии NK-клеток в культуре является критически важными, хотя и длительным, и трудоемким процессом.
Материалы и методы
Источником для экспансии NK-клеток служила периферическая кровь. Выделение мононуклеарной фракции клеток проводили в градиенте плотности фиколла, а также применяли магнитную сепарацию. Полученную мононуклеарную фракцию культивировали в присутствии фидерной линии K562-mIL15-mIL21-4-1BBL в течение 3 нед.
Результаты
В результате культивирования были получены значительные количества NK-клеток: увеличение от исходного количества от 50 000 до 100 000 раз, содержание NK-клеток в конечной популяции составляло от 80 до 98%. Оценку функциональной активности полученных клеток проводили в прямом цитотоксическом тесте с флуоресцентной визуализацией против опухолевых клеточных линий: К562, меланомы, нейробласто-мы. В цитотоксическом тесте наблюдали 100% гибель мишеней через 48-72 ч кокультивирования. Кроме того, с помощью проточного цитометрического анализа проводили оценку маркера дегрануляции (CD107a) против клеточной линии К562. При кокультивировании NK-клеток и клеток К562 маркер дегрануляции увеличивался в среднем в 4 раза по сравнению с интактными клетками. Для оценки возможности хранения полученных функциональных NK-клеток их криоконсервировали. Функциональную активность после размораживания проверяли в тестах, аналогичных свежеприготовленным клеткам. Все характеристики сохранялись.
Выводы
Таким образом, разработан и апробирован протокол экспансии и масштабной наработки NK-клеток, пригодных для клинического применения.
Список литературы
1. Lanier, L . L . Up on the tightrope: natural killer cell activation and inhibition // Nat . Immunol . 2008 . 9, 495-502 . 2 . Prager, I . & Watzl, C . Mechanisms of natural killer cell-mediated cellular cytotoxicity // J . Leukoc . Biol . 2019 . 105, 1319-1329 .
Эффективность анализа экспрессионных биомаркеров в практике Пап-теста у женщин репродуктивного возраста
Авторы:
(1) Мельникова Н. В., n_melnikova@list.ru, ФГБУ «Российский научный центр рештенорадиологии» Минздрава России, Москва
(2) Боженко В. К., vbojenko@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(3) Близнюков О. П., blisnukov@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(4) Антонова И. Б., iran24@yandex.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(5) Ивашина С. В., s.ivashina@bk.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(6) Моцкобили Т. А., taimoc@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(7) Захаренко М. В., zak-margarita@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(8) Кудинова Е.А., dockudinova@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(9) Кулинич Т. М., sobral@mail.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(10) Солодкий В. А., mailbox@rncrr.ru, ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
Ключевые слова
Пап-тест, мРНК, рак шейки матки
Актуальность
Оценка экспрессионных профилей мРНК различных генов в практике жидкостной цитологии у пациенток с предраковыми процессами шейки матки — тенденция настоящего времени [1, 2].
Цель
Повысить эффективность диагностики предраковых процессов и рака шейки матки у пациенток репродуктивного возраста на основе оценки экспрессии мРНК 21-генной панели методом количественной поли-меразной ценой реакции (ПЦР) в материале жидкостной цитологии.
Материалы и методы
Проанализированы результаты Пап-теста CellPrep 183 пациенток в возрасте от 20 до 45 лет, средний возраст 35,21±6,46 года (M±SD, M — среднее, SD — среднеквадратичное отклонение), проходивших лечение в ФГБУ РНЦРР Минздрава России в 2015-2022 гг., которым в последующем выполнено гистологическое исследование биопсийного материала шейки матки [3]. В режиме ПЦР в реальном времени в консервирующем растворе определены уровни экспрессии мРНК 21 целевого гена: Ki-67, STK-15, CCNB1, CCND1, MYC, MYBL2, P16INK4A, PTEN, BIRC5, BCL2, BAG1, TERT, NDRG1, ESR1, PGR, HER2, GRB7, MGB1, MMP11, CTSL2, CD68 — и 3 референсных: GUSB, HPRT1, B2M. Статистическая обработка выполнена в программном комплексе Statistica 7.0.
Результаты
Информативный цитологический материал получен в 183 (100%) случаях. Дискриминантный анализ показал, что сочетанная оценка экспрессии 21 целевого гена позволяет классифицировать группу, объединяющую LSIL и доброкачественные изменения в 92,05% случаев, а группу HSIL+, включающую HSIL, плоскоклеточный рак и эндоцервикальную аденокарциному, в 78,95% случаев. Суммарная точность классификации составила 85,25% случаев. Наибольшее влияние на правильность классификации оказывает оценка экспрессии мРНК генов CTSL2, PTEN, PGR, STK15, p16INK4a.
Выводы
В практике жидкостной цитологии дополнительная оценка экспрессии 21 целевого гена позволяет диагностировать у женщин репродуктивного возраста с точностью 85,25% две клинически важные группы: LSIL или менее (неизмененный эпителий/доброкачественные изменения тканей шейки матки) и не менее, чем HSIL (HSIL, плоскоклеточный рак, эндоцервикальная аденокарцинома), и может претендовать на роль теста медицинской сортировки в скрининге рака шейки матки
Список литературы
1. Бурменская О . В . , Назарова Н . М ., Сычева Е . Г и др . Применение молекулярно-генетических методов для диагностики
и прогноза развития дисплазии тяжелой степени и рака шейки матки // Акушерство и гинекология . 2021. № 10 . С .
85-92 . DOI: 10 ,18565/aig . 2021.10 . 85-92 .
2 . Chen L ., Huang L . , Dong B . et al . ADCY7 mRNA Is a Novel Biomarker in HPV Infection and Cervical High-Grade Squamous
Lesions or Higher // Biomedicines . 2023 . №3:868 . DOI: 10 .3390/biomedicines11030868 .
3 . Kurman R ., Carcangiu M ., Herrinngton C . , Young R . WHO Classification of Tumors of Female Reproductive Organs . 4th ed .
IARC Press . Lyon . France, 2014 . P. 183-194.
