CC BY
15УДК 615.917
Доклиническое исследование общетоксического действия Этоксидола
Проведено доклиническое исследование общетоксического действия Этоксидола - производного 3-оксипиридина, включающее острую токсичность, кумуляцию и хроническую токсичность на нелинейных белых
Березовская И.В., Рымарцев В.И., Волкова Л.И., Борисова Л.Н., Зюзя Ю.Р.
ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ», Старая Купавна, Московская обл.
крысах и собаках породы Бигль. Дан анализ безопасности Этоксидола.
Ключевые слова: Этоксидол, производное 3-оксипиридина, токсичность
Введение. Концепция о важнейшей роли пере-кисного окисления липидов в генезе атероскле-ротических изменений сердца и сосудов является теоретическим обоснованием использования анти-оксидантов в качестве ангиопротекторов.
В ходе многолетних исследований в ВНЦ БАВ выявлено химическое соединение из ряда производных 3-оксипиридина - Этоксидол, обладающее высокой антиоксидантной и церебропротек-торной активностью. В результате проведенных ранее исследований было установлено, что Эток-сидол проявляет выраженные липидрегулирую-щие свойства и обладает антиоксидантной активностью. Дальнейшие исследования активности Этоксидола позволили установить, что кроме ан-тиатерогенных свойств это химическое соединение обладает антиангинальным эффектом. Эток-сидол проявляет противоишемическое действие при острой ишемии миокарда, что выражается в стабилизации показателей кардиогемодинами-ки, уменьшении размеров зоны некроза, антифи-брилляторной и антиаритмической активности на модели ранних постокклюзионных и реперфузи-онных аритмий.
Целью настоящего исследования является доклиническое изучение общетоксического действия Этоксидола для его последующего внедрения в клиническую практику.
Материалы и методы исследования. Опыты проведены на 60 нелинейных белых мышах-самцах массой 18-20 г, 60 нелинейных крысах-самцах, 30 - крысах-самках массой 180-200 г, полученных из Филиала «Столбовая» ГУ НЦ БМТ РАМН (сертификат №№20361, 20359). В качестве второго вида животных использованы 20 половозрелых собак породы Бигль (12 самцов и 8 самок) из питомника ВНЦ БАВ.
Грызунов содержали в виварии института в пластиковых клетках при естественном освещении. Собаки содержались в питомнике института по две особи в комнатах с выходом в вольер. Животных кормили комбикормом ПК-120-1 для лабораторных крыс и мышей в соответствии с ГОСТ Р 50258-92. Собаки получали Чаппи-корм сухой, гра-
нулированный для собак старше 8-ми месяцев (ТУ 9296-073-17062028-95)
Условия содержания и обращение с используемыми в эксперименте животными соответствовало Приказу МЗ РФ от 19.06.2003 №267 «Правила лабораторной практики в Российской Федерации» и Директиве Совета ЕС от 24 ноября 1986 о сближении законов, постановлений и административных положений государств ЕС по вопросам защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (86/609ЕЕС)»
Острую токсичность изучали на мышах-самцах массой 18-20 г при однократном внутрижелудоч-ном введении в дозах 1500, 2000, 2500 и 3000 мг/кг и внутрибрюшинно в дозах 300, 450, 525 и 600 мг/кг. Наблюдение за поведением и состоянием животных проводили в течение 14 дней. Средние смертельные дозы рассчитывали методом пробит-ана-лиза по Литчфилду и Уилкоксону по программе для ЭВМ СБЬБИОМ 366.
Кумулятивное действие Этоксидола изучали на 10 нелинейных белых мышах-самцах массой 18-20 г по Лиму с соавторами [4]. Продолжительность хронического эксперимента (3 месяца) была установлена в соответствии с длительностью рекомендованного курса клинического применения Этоксидола в течение 30 дней. Хронический эксперимент проводили на нелинейных крысах-самцах со средней массой 233±6 г и крысах-самках со средней массой 191±4 г. Препарат вводили внутримышечно в дозах 20 (терапевтическая), 100 и 200мг/ кг. Максимальная доза для крыс в 70 раз превышала терапевтическую дозу для человека в мг/кг по Этоксидолу. Контрольным крысам вводили раствор натрия хлорида 0,9 % для инъекций
Межвидовый расчет доз проводили по Фрейри-ху с соавторами [3]. Инъекционную лекарственную форму Этоксидола вводили внутримышечно собакам в течение 3 месяцев самцам в дозах 6 и 30 мг/кг, десятикратно превышающую дозу для человека в мг/кг по Этоксидолу, самкам 6 мг/кг. Контрольным животным вводили раствор натрия хлорида 0,9 % для инъекций. Программа хронического эксперимента вклю-
чала интегральные, гематологические, биохимические, физиологические и гистологические показатели в соответствии с «Методическими указаниями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» [1].
Эвтаназию грызунов проводили с помощью дислокации под эфирным наркозом, собак путем внутривенного введения дитилина. Вскрытие животных и забор органов производили непосредственно после эвтаназии. Результаты вскрытия и гистологических исследований оформлены индивидуальными протоколами.
Статистическую обработку результатов проводили по t - критерию Стьюдента (программа на CELERON 366).
Результаты и обсуждение. При изучении острой токсичности на нелинейных белых мышах массой 18 - 20 г установлена величина ЛД50 при внутрибрю-шинном введении 487 (430 + 553) мг/кг, а при вну-трижелудочном введении - 2389 (1972 + 2894) мг/кг.
Полученные результаты дают основание отнести Этоксидол к III классу токсичности и опасно-
Гиперлипидемия констатирована только у крыс после введения Этоксидола в течение 3 месяцев, что, вероятно, может быть вызвано предшествующим липолизом.
Этоксидол не вызывал достоверных изменений в функциональном состоянии выделительной системы. Суточный диурез, рН мочи, удельная масса мочи, концентрация мочевины в сыворотке крови и моче, СКОМ, клубочковая фильтрация, клиренс
сти (умеренно токсичным веществам) по классификации И.В. Березовской. [2].
Результаты субхронического эксперимента по Лиму свидетельствуют об отсутствии кумулятивного эффекта у Этоксидола. Коэффициент кумуляции более 1 не исключает возможности привыкания к препарату.
В течение хронического эксперимента Эток-сидол не вызывал изменений интегральных показателей (прирост массы тела, потребление пищи, воды, поведенческие реакции).
Не обнаружено существенных изменений в клеточном составе периферической крови и параметрах свертывания крови у крыс и собак.
Не наблюдали влияния препарата на выделительную и поглотительную функцию печени у крыс, судя по бромсульфалеиновой пробе. Концентрация глюкозы в сыворотке крови крыс и собак не отличалось от контроля. В дозе 100 и 200 мг/ кг Этоксидол вызывал снижение концентрации общего холестерина в сыворотке крови крыс через 1 месяц воздействия. (табл. 1)
Таблица 1
креатинина и секреторная функция почек по экскреции фенолового красного, состояние минерального обмена не отличались от контроля.
После месяца введения Этоксидола изменения в параметрах ЭКГ не установлены. По завершению эксперимента препарат в дозе 100мг/кг увеличивал длительность интервала ОТ у крыс-самцов и интервала ОИ^ у крыс самок в обеих группах. (табл. 2).
Воздействие этоксидола на концентрацию общего холестерина в сыворотке крови крыс (М ± m; п = 10).
№ Пол Доза, мг/ кг Общий холестерин (мМ/л)
До начала воздействия После 1-го месяца воздействия После 3-х месяцев воздействия
1 в 20,0 1,83 0,05 1,82 0,06 1,95 0,04
2 в 100,0 1,80 0,04 1,81** 0,05 1,91 0,04
3 в 200,0 1,82 0,05 1,82* 0,05 1,93 0,06
4 в контроль 1,89 0,02 1,96 0,03 1,97 0,05
5 ? 20,0 1,68 0,04 1,64 0,05 1,83 0,03
6 ? 200,0 1,71 0,06 1,64 0,05 1,82 0,04
7 ? контроль 1,65 0,03 1,59 0,04 1,96 0,06
Примечание: * - P < 0,05; ** - P < 0,02
Таблица 2
Параметры ЭКГ крыс после 1-го месяца воздействия этоксидола (М± т; п=10)
№№ Доза, Пол Амплитуда зубцов, мв Длительность интервала, сек ЧСС в
групп Мг/кг P R S Т PQ QRS QT RR мин.
1 20,0 в 0,062 0,485 0,008 0,099 0,043 0,017 0,059 0,124 484,7
0,003 0,034 0,005 0,007 0,001 0,0005 0,001 0,003 12,0
2 100,0 в 0,069 0,524 0,021 0,099 0,042 0,018 0,058 0,126 476,6
0,007 0,049 0,011 0,008 0,001 0,0005 0,001 0,003 10,0
3 200,0 в 0,058 0,566 0,011 0,105 0,044 0,018 0,060 0,121 469,9
0,004 0,045 0,011 0,010 0,001 0,0006 0,001 0,002 7,3
4 контроль в 0,058 0,487 0,011 0,102 0,043 0,018 0,057 0,125 481,0
0,003 0,019 0,005 0,004 0,001 0,0003 0,001 0,002 8,7
5 20,0 ? 0,059 0,477 0,006 0,118 0,043 0,016 0,059 0,119 508,1
0,005 0,026 0,006 0,009 0,001 0,0003 0,001 0,003 11,8
6 200,0 ? 0,059 0,475 0,032 0,098 0,044 0,018 0,060* 0,121 496,6
0,005 0,024 0,020 0,008 0,001 0,0002 0,001 0,002 8,9
7 контроль ? 0,050 0,470 0,015 0,094 0,043 0,017 0,057 0,118 511,0
0,003 0,042 0,008 0,008 0,001 0,0005 0,001 0,002 7,0
Примечание: * - Р < 0,05
Таблица 3
Параметры ЭКГ собак после 3-х месяцев воздействия этоксидола (M±m; n=4)
№№ групп Доза, Мг/кг Пол Амплитуда зубцов, мв Длительность интервала, сек ЧСС в мин.
P R S Т PQ QRS QT RR
1 6,0 в 0,250 1,635 0,455 -0,102 0,096 0,045 0,181 0,420 143,4
0,021 0,658 0,079 0,091 0,004 0,003 0,006 0,017 5,5
2 30,0 в 0,243 1,245 0,630 0,035 0,111 0,046 0,189* 0,505 123,1
0,012 0,315 0,101 0,234 0,005 0,003 0,002 0,059 11,9
3 контроль в 0,213 1,230 0,545 0,150 0,106 0,042 0,181 0,482 126,1
0,023 0,270 0,057 0,098 0,004 0,001 0,002 0,033 8,4
4 6,0 ? 0,225 1,727 0,350 -0,152 0,106 0,044 0,186 0,449 134,5
0,005 0,102 0,149 0,077 0,005 0,002 0,004 0,020 6,3
5 контроль ? 0,248 1,445 0,410 -0,003 0,114 0,046 0,190 0,517 117,0
0,016 0,185 0,146 0,155 0,005 0,003 0,002 0,024 5,0
Примечание: * - Р < 0,05
Удлинение длительности интервала ОТ наблюдали у собак-самцов после введения препарата в дозе 30мг/кг. (табл. 3).
Нейротропный эффект Этоксидола обнаружен только у крыс-самцов при введении в дозе 100 и 200 мг/кг по увеличению суммационно-порогового показателя (СПП) (табл. 4).
Относительная масса органов у обоих видов подопытных животных не имела отличий от контроля. По результатам гистологических исследований установлено слабое дозозависимое местное раздражающее действие Этоксидола у крыс и собак в виде диффузной лимфоидно-гистиоцитар-ной инфильтрации и мелкоочагового фиброза.
В терапевтической дозе у крыс Этоксидол вызывал слабо выраженные мелкоочаговые дистрофические изменения печени и почек. Воздействие в дозах 100 и 200 мг/кг сопровождалось венозным полнокровием, отеком внутренних органов, лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрацией стромы почек и печени, ги-дропической дистрофией гепатоцитов и эпителия канальцев почек, небольшой реакцией со стороны иммунных органов. У части животных отмечена гиперсекреция слизи в желудке и толстой кишке. В тонкой кишке у многих животных выявлена мелкоочаговая десквама-ция эпителия, микронекрозы апикальных от-
Таблица 4
Воздействие этоксидола на суммационно-пороговый показатель крыс (М ± m; n = 10).
№№ групп Пол Доза, мг/кг Суммационно-пороговый показатель (СПП)
До воздействия После 1-го мес. воздействия После 3-х мес воздейсвия
1 в 20,0 3,67 0,122 4,15 0,11 3,51 0,13
2 в 100,0 4,00 0,19 4,69* 0,23 3,67 0,21
3 в 200,0 3,85 0,15 4,11 0,18 4,40* 0,31
4 в контроль 3,91 0,24 4,02 0,19 3,62 0,16
5 ? 20,0 3,78 0,07 3,80 0,13 3,33 0,09 4,57 0,20 3,13 0,15 3,93** 0,23
6 ? 200,0
7 ? контроль 3,73 0,14 3,10 0,13 3,00 0,14
Примечание: * - P < 0.05; ** - P < 0.01
делов ворсинок слизистой оболочки и единичные микроэрозии.
Аналогичные изменения дозозависимого характера обнаружены у собак. При этом в большой дозе отмечена гидропическая дистрофия кардиомиоцитов. В печени у всех животных под влиянием большой дозы умеренная гидропи-ческая дистрофия гепатоциов, у большинства собак признаки васкулита или периваскулита с облитерацией сосудов, фиброз портальных трактов.
Заключение. Этоксидол относится к умеренно токсичным веществам, не обладает кумулятивным действием, может вызывать привыкание. В терапевтической дозе он не оказывает существенного влияния на функцию и структуру органов и тканей подопытных животных. В больших дозах возможно незначительное кардиотропное и нейротропное
Berezovskaya I.V., Rymartsev V.I., Volkova L.I. Borisova L.N., Zuzya Yu.R. Preclinical study of general toxic action of Ethoxydole
All-Russian Scientific Centre for Safety of Biologically Active Substances, Staraya Kupavna, Moscow Region
A pre-clinical study of general toxic action ( acute toxicity, accumulation and chronic toxicity) of Ethoxydole-a derivative of 3-oxypyridine, in outbred white rats and Beagle dogs was performed. The analysis of Ethoxydole safety is presented.
Материал поступил в редакцию 29.10 2009 г.
действие. Этоксидол обладает слабым местным раздражающим действием.
Р СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Арзамасцев Е.В., Гуськова Т.А., Березовская И.В., Любимов Б.И., Либерман С.С., Верстакова О.Л. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2005. - с.41 - 54.
2. Березовская И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения // Хим. -фарм. журнал, 2003. - т.37. - № 3. -с.32 - 34.
3. Freireich E.J., Gehan E. Rail D. at al Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey and man // Cancer Chemother. Res., 1966. - v. 50. - P. 219-244.
4. Lim R.K, Rin K K.G, Glass H.G, Soaje-Echague EA method for the evaluation of cumulation and tolerance by the determination of acute and subchronic median effective // Arch. intern. Phar. Therapie, 1961. - v.130.-№ 3-4.- P. 336.
