CC BY
216
Биомедицина • № 2. 2010. C. 53 — 64
Доклинические исследования препаратов природного происхождения в условиях цитостатического воздействия
О. С. Борсук, Н. В. Масная, А. А.Чурин, Е. Ю. Шерстобоев
Научно-исследовательский институт фармакологии СО РАМН, Томск
Контактная информация: Борсук Ольга Сергеевна
634034, г. Томск, ул. Косарева, д.33, кв.169, Россия. e-mail: nvm13@rambler.ru. тел. 8(3822) 418377
Применение экстракта шлемника байкальского в условиях развивающейся цитостатической гемодепрессии, вызванной однократным введением мышам линии СВА/СаЬас циклофосфана в максимально переносимой дозе, оказывает выраженное стимулирующее влияние на процессы восстановления в большей степени эритроидного и лимфоидного ростков кроветворения, а использование пантовита - на репарацию миелоидного и лимфоидного. Курсовое применение экстракта шлемника байкальского нивелирует иммуносупрессивное действие циклофосфана путем стимуляции фагоцитарной активности макрофагов и восстановления количества клеток-антителопродуцентов. Введение пантовита иммунизированным мышам на фоне цитостатической иммуносупрессии вызывает повышение фагоцитарной активности макрофагов и усиление синтетической активности антителообразующих клеток.
Ключевые слова: мыши линии СБЛ/СаЬас, циклофосфан, препараты природного происхождения, кроветворная и иммунная системы.
Общеизвестно, что иммунная и кроветворная системы являются индикаторами приспособления организма к изменяющимся условиям внешней и внутренней среды [9, 12, 16]. Различные по своей природе экстремальные воздействия способны вызывать угнетение отдельных звеньев системы крови и иммунитета, что в свою очередь может привести к подавлению кроветворения и развитию вторичного иммуноде-фицитного состояния [12]. Применение противоопухолевых препаратов в онкологической практике до сих пор остается одним из основных способов воздействия на опухолевый процесс [1, 3, 7, 19]. Однако при таком методе лечения часто возникает цитостатическая болезнь, являющаяся следствием повреждения бы-
стро обновляющихся клеточных систем, к которым относятся также кроветворная и иммунная. Необходимость поиска патогенетически обоснованных методов достижения гомеостаза организма в таких случаях требует от исследователей поиска новых эффективных малотоксичных фармакологических корректоров [7, 13]. Многие используемые группы лекарственных средств не обеспечивают комплексной терапии, кроме того, обладают широким спектром побочных эффектов [15]. В свете изложенного становится очевидным необходимость поиска альтернативных средств, способных действовать на системном уровне, нетоксичных, с возможностью длительного применения, высокой биодоступностью. К таким препаратам относятся модифика-
торы биологических реакций, представителями которых являются препараты природного происхождения [4, 7].
Целью нашей работы явилась разработка патогенетически обоснованных методов фармакологической коррекции нарушений в кроветворной и иммунной системе, вызванных введением цикло-фосфана, с помощью препаратов природного происхождения.
Материалы и методы
Эксперименты были проведены на 190 мышах обоего пола линии CBA/ CaLac массой 18-20 г в возрасте 2-2,5 месяцев. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 198б). До и в период эксперимента мыши находились в стандартных пластиковых клетках (по 10-12 особей) с мелкой древесной стружкой на стандартном рационе. Все эксперименты были проведены в осенне-зимний период.
Экспериментальную модель цитоста-тической болезни создавали с помощью стандартного препарата циклофосфа-на (производство Саранского комбината «Биохимик»), который растворяли в стерильном физиологическом растворе и вводили мышам (n=20) однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (2S0 мг/кг). Для исследования функциональной активности иммунной системы другую группу животных (n=20) иммунизировали корпуску-
лярным тимусзависимым антигеном
- эритроцитами барана (ЭБ), полученными из НПО «Вирион». ЭБ трижды отмывали стерильным физиологическим раствором и вводили однократно внутрибрюшинно по 0,2 мл 15% взвеси эритроцитов. Для исследования функциональной активности иммунной и кроветворной систем после воздействия циклофосфаном на 4 сутки после введения противоопухолевого препарата мышей иммунизировали тимусзависи-мым антигеном (n=20). Для коррекции изменений в кроветворной и иммунной системах после цитостатического воздействия в работе использовали экстракт шлемника байкальского (ЭШБ) («ГНЦЛС», г. Харьков, Украина; стандартизован по содержанию байколина - 3236%) и пантовит («Фармпанто», разрешен к применению на территории России, рег. №000954.3.643.06.99). Препараты вводили животным через зонд в желудок курсами, начиная со дня экспериментального воздействия и далее в течение 5 дней, в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды или 1% крахмального геля соответственно (n=40). Контрольным животным (получившим только циклофосфан) вводили соответствующий объем растворителя. Другую контрольную группу мышей (n=40), получивших препараты природного происхождения курсом, иммунизировали ЭБ на 5 сутки эксперимента (что соответствовало 4 суткам после введения циклофосфана). Иммунизировали мышей, получивших однократно циклофосфан и курсовое (5-дневное) введение препарата, на 4 сутки после введения цитостатика (n=40).
Мышей умерщвляли методом дека-питации. Забор материала для исследования осуществляли на 4, 7, 14 и 21 сутки после иммунизации, что соответ-
ствует 8, 11, 18 и 25 сутки после введения циклофосфана. Мышей умерщвляли методом декапитации под эфирным наркозом. Сравнение данных, полученных при изучении влияния препаратов природного происхождения на кроветворную и иммунную системы, производили с соответствующими значениями у мышей, получивших антиген и циклофосфан, либо только антиген, либо циклофосфан, либо антиген и препарат природного происхождения. В качестве фона использовали интактных мышей (n=10).
Изучение показателей кроветворных (костный мозг, периферическая кровь) и лимфоидных (тимус, селезенка) органов осуществляли стандартными гематологическими методами [6]. Определение антителобразующих клеток в селезенке (АОК) проводили методом локального гемолиза [22], уровень специфических антител в сыворотке крови - в реакции гемагглютинации [14]. Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (ФАПМ) определяли методом, основанным на измерении оптической плотности лизирующего раствора после разрушения фагоцитов, поглотивших частицы нейтрального красного [24]. Полученные в ходе исследования данные обрабатывали методом вариационной статистики. В случае нормального распределения сравнение выборочных средних осуществляли по критерию t-Стьюдента, при несоответствии распределения нормальному использовали непараметрический критерий Вилкоксо-на, Колмогорова-Смирнова с помощью пакета программ «Statistica 5.0».
Результаты и их обсуждение
Как показали наши исследования, после однократного введения циклофос-фана в максимально переносимой дозе
отмечалось снижение общего количества миелокариоцитов по сравнению с фоном, сохранявшимся на протяжении всего эксперимента. Анализ миелограмм позволил установить, что эта депрессия была обусловлена подавлением практически всех ростков гемопоэза, но в большей степени значительным снижением абсолютного числа эритроидных клеток (на 8, 11 и 18 сут.), незрелых нейтрофиль-ных гранулоцитов (на 8 сут.), зрелых ней-трофильных гранулоцитов, моноцитов, эозинофилов и лимфоидных элементов на протяжении всего исследования. Как следствие угнетения костномозгового кроветворения, в периферической крови экспериментальных животных отмечалось развитие лейкопении на 8 сут. после цитостатического воздействия до 78% от уровня фона, при этом обращало на себя внимание резкое падение абсолютного числа лимфоидных клеток и эозинофилов. Количество палочкоядерных нейтрофилов также было ниже фоновых значений. Лимфопения сохранялась до конца исследования.
Изучение влияния ЭШБ на качественный и количественный состав ми-елокариоцитов после однократного воздействия циклофосфаном, позволило выявить, что введение препарата мышам линии СВА/СаЬае оказывало выраженное стимулирующее действие на процессы восстановления костномозгового кроветворения, подавленного цитостатиком. Так, общее количество клеток костного мозга уже на 8 сут. эксперимента достоверно превышало описанное в группе мышей, получивших только цитостатик, а на 18 и 25 сут. отмечалась достоверная гиперплазия кроветворного органа относительно интактных животных. Увеличение числа ядросодержащих элементов под действием ЭШБ было
обусловлено стимуляцией практически всех ростков гемопоэза, но, в основном, возрастанием содержания эритроидных и лимфоидных элементов. Несколько меньшая активность данного препарата была выявлена в отношении гранулоци-тарного ростка кроветворения: абсолютное количество миелоидных клеток восстанавливалось до уровня интактных животных к 11 сут. и достоверно превышало значения данных показателей в группе сравнения на протяжении всего эксперимента.
Нами было выявлено, что у мышей, иммунизированных на 4 сут. после введения циклофосфана, клеточность костного мозга была снижена по сравнению с группой иммунизации на 4 и 7 сут. (рис. 1а) за счет уменьшения абсолютного числа эри-троидных (рис. 1г), лимфоидных (рис. 1д) и зрелых миелоидных элементов (рис. 1в).
Исследование показателей костного мозга мышей, иммунизированных после введения ЭШБ на фоне гипоплазии кроветворения, вызванной однократным применением циклофосфана в максимально переносимой дозе, позволило установить, что общее количество мие-локариоцитов у животных, получивших препарат шлемника, в значительной мере превышало описанное при введении только цитостатика и антигена во все сроки эксперимента (рис. 1а) за счет недифференцированных бластов, незрелых и зрелых нейтрофильных грануло-цитов (рис. 1б, в), эозинофилов, эритро-идных (рис. 1г), лимфоидных (рис. 1д) и плазматических клеток, а также митозов. Динамика содержания зрелых клеток в периферической крови мышей данной опытной группы в целом соответствовала изменениям, описанным выше: содержание лимфоидных клеток существенно превышало данный показатель у живот-
ных, иммунизированных после введения циклофосфана на протяжении всего исследования.
Согласно данным литературы, ЭШБ способен стимулировать регенерацию костномозгового кроветворения, подавленного циклофосфаном, за счет усиления процессов пролиферации и дифференцировки коммити-рованных клеток-предшественников гемопоэза типа колониеобразующих единиц эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных (КОЕ-Э и КОЕ-ГМ) [1, 2, 19]. Кроме того, показано активирующее влияние исследуемого растительного экстракта на образование ге-мопоэтических островков и продукцию клеточными элементами гемопоэзинду-цирующего микроокружения короткодистантных гуморальных регуляторов типа эритропоэтической и колониестимулирующей активностей (ЭПА и КСА) и их уровень в периферической крови [1]. Вместе с тем, в наших исследованиях мы выявили возрастание содержания не только гранулоцитарных и эритроидных костномозговых клеток. Абсолютное количество лимфоидных элементов в костном мозге животных опытной группы превышало контрольные значения на протяжении всего эксперимента. В связи с вышеизложенным, мы предполагаем, что ЭШБ оказывает свое влияние не только на колониеобразующие единицы, которые впоследствии дают начало формированию моноцитов, эритроцитов и гранулоцитов, а на еще менее дифференцированные клетки-предшественники.
В значительной мере менее выраженное повреждение кроветворения в результате сочетанного введения противоопухолевого препарата и ЭШБ относительно мышей, получивших один циклофосфан, может быть связано с
106/бедро a
25 3*
20 І5 * хчГ 2 І 4*
І0
5
0 —I —}— 1
106/ бедро
106/ бедро
106/ бедро
І4
2І
Рис. 1. Динамика содержания общего числа миелокарио-цитов (а), незрелых нейтрофи-лов (б), зрелых нейтрофилов (в), эритроидных (г) и лимфоидных (д) клеток в костном мозге иммунизированных животных (1), иммунизированных после введения циклофосфана (2) и на фоне коррекции ЭШБ (3) или пантовитом (4). * Достоверность различий с контролем (р < 0,0S).
б
в
г
прямым мембранопротективным действием исследуемого экстракта. Известно, что метаболиты циклофосфана обладают способностью концентрироваться в клеточных, митохондриальных и ми-кросомальных мембранах и, включаясь в свободнорадикальную фракцию, индуцировать перекисное окисление последних, продукты которого нарушают их структуру и функции, что в свою очередь приводит к нарушению всех клеточных процессов, протекающих с участием энергии [1У]. В работе Р. Р. Сай-футдинова [20] показано, что байкалин, являющийся основным действующим флавоноидом ЭШБ, обладает способностью препятствовать дезинтеграции мембранных структур и предотвращать нарушения активности митохондриального аппарата в связи с прямым мем-бранотропным действием. Этот эффект проявляется нормализацией степени со-
пряженности окислительного фосфо-релирования. Превращение байкалина обеспечивает поток атомов водорода от восстановленных пиридиннуклеотидов (НАДФН и НАДН) через токоферол и, возможно убехинон, на гашение свободных радикалов липидов. При этом бай-калин служит донором водорода для фермента глутатион-пероксидазы.
Введение пантовита линейным мышам, иммунизированным тимусзависи-мым антигеном на 4 сут. после воздействия противоопухолевым препаратом, привело к увеличению общего количества миелокариоцитов на 4, 7 и 14 сут. после антигенной стимуляции по сравнению с контрольной группой (животные, получившие ЭБ и противоопухолевый препарат) (рис. 1а). Повышение числа ядросодержащих клеток костного мозга на указанные выше сроки исследования было связано преимущественно с
возрастанием содержания лимфоидных (рис. 1д) и эритроидных (рис. 1г) элементов. Общее содержание лейкоцитов в периферической крови мышей данной опытной группы достоверно превышало контрольные значения на 7 сут. после антигенной стимуляции за счет увеличения абсолютного числа миелоидных и лимфоидных клеток.
О механизмах стимулирующего действия пантовита можно судить по многочисленным исследованиям, указывающим на эффективность применения препаратов из пантов оленя в условиях подавленного кроветворения. В частности, показано, что в условии гипоплазии костного мозга, развивающейся под действием циклофосфана, пантогематоген стимулирует процессы костномозгового грануломоноцитопоэза и эритропоэ-за. В основе активирующего влияния препарата на процессы костномозгового кроветворения лежит увеличение продукции адгезирующими клеточными элементами гемопоэзиндуцирующего микроокружения короткодистантных гуморальных регуляторов (КСА и ЭПА), стимуляция образования гемопоэтических островков, процессов пролиферации ком-митированных клеток-предшественников грануломоноцитопоэза типа КОЕ-Э и КОЕ-ГМ [3, 21]. По-видимому, пантовит, обладая схожим химическим составом, оказывает подобное действие.
Кроме того, интерпретируя полученные данные, не следует забывать о но-отропных свойствах пантовита. Было показано, что пантовит существенно увеличивает выживаемость и восстановление функций центральной нервной системы после гипоксической травмы у мышей, одновременно предохраняя внутренние органы и системы от повреждающего действия невротических
и стрессовых ситуаций [18]. Таким образом, вполне вероятно, что в основе активации данным препаратом гемо-поэза лежит модуляция тонуса вегетативной нервной системы (ВНС), которая, в свою очередь, действует через гипоталамо-гипофизарный комплекс и через нервные волокна, иннервирующие различные органы гемопоэза (селезенка, костный мозг, тимус, лимфоузлы) [4, 5, 12]. При этом лимфоциты и макрофаги вступают в непосредственные контакты с нервными волокнами и, обладая соответствующим рецепторным аппаратом, воспринимают нервно-регуляторные влияния [8, 23]. Подтверждением справедливости данного предположения могут служить результаты исследования
В. М. Рыжакова [19], в которых проведена комплексная оценка участия ВНС в регуляции гемопоэза у онкологических больных в условиях проведения полихимиотерапии. Автором убедительно доказано стимулирующее влияние ЭШБ, являющегося ноотропным средством, на процессы восстановления костномозгового кроветворения за счет модуляции тонуса и реактивности вегетативной нервной системы.
По результатам наших исследований, после однократного введения ци-клофосфана мышам общая клеточность селезенки оставалась достоверно ниже фоновых значений во все сроки исследования. Анализ спленограмм позволил установить, что в указанный период имело место резкое падение абсолютного числа лимфоидных клеток (до 19,2% от уровня фона на 8 сут.), моноцитов (с 21,5% на 8 сут. до 7,1% на 25 сут. от уровня фона), и эозинофилов (до 54,5% от уровня фона на 11 сут.). В то же время содержание недифференцированных бластных клеток, незрелых форм нейтро-
фильных гранулоцитов, митозов и эри-троидных клеток было повышено во все сроки исследования.
Однократное введение противоопухолевого препарата мышам стало причиной резкого снижения клеточности центрального лимфоидного органа, сохранившегося на протяжении всего эксперимента. Минимальная клеточность тимуса была зафиксирована на 11 сут. исследования (до 14,8% от уровня фона). Падение клеточности было обусловлено значительным понижением абсолютного числа лимфоидных клеток всех степеней зрелости. Вместе с тем, было зарегистрировано высокое содержание незрелых и зрелых нейтрофилов и ретикулярных клеток во все сроки исследования, а также митозов на 25 сут.
Общее число ядросодержащих элементов лимфоидных органов мышей, получивших ЭШБ после введения циклофосфана, превышало значения животных, получивших только цитостатик, во все сроки исследования, что, по-видимому, явилось следствием миграции костномозговых нуклеаров. Как известно, незрелые Т- и В-лимфоциты мигрируют из костного мозга в лимфоидные органы для дальнейшей диффе-ренцировки. Подтверждением высказанного предположения может служить повышенное содержание бластов и митозов на 8, 11 и 18 сут. в селезенке и на 18 и 25 сут. в тимусе относительно фоновых значений. Помимо перемещения клеток из кроветворного органа, существенное увеличение абсолютного числа эритро-идных элементов в селезенке, возможно, связано с активацией процессов пролиферации и дифференцировки эритро-идных прекурсоров под действием продуктов распада зрелых эритроцитов, вызванного введением циклофосфана.
Кроме того, ЭШБ, вероятно, действуя на ЮГА почек через нейроэндокринный аппарат, способствует выработке эри-тропоэтина [1]. Выявленное нами увеличение общей клеточности лимфоидных органов у животных, получивших исследуемый препарат, по сравнению с группой, получившей только цитостатик, явилось следствием повышения содержания преимущественно миелоидных клеток всех форм зрелости и, в значительно меньшей степени, лимфоидных.
Изучение влияния иммунизации, осуществленной на 4 сут. после однократного введения цитостатического препарата, на изменение клеточности и морфологического состава лимфоидных органов позволило выявить статистически значимое снижение общего числа ядросодержащих элементов (рис. 2а, 3а) преимущественно за счет уменьшения абсолютного количества лимфоидных элементов (рис. 2, 3д). В то же время нами было отмечено существенное увеличение количества бластов, митозов и плазматических клеток, а также миело-идных элементов (рис. 2, 3б, в).
Под действием ЭШБ у иммунизированных после введения циклофосфана мышей было выявлено увеличение общего количества ядросодержащих элементов лимфоидных органов (рис. 2а, 3а). Анализ сплено- и тимограмм позволил установить, что увеличение общей кле-точности селезенки под влиянием ЭШБ было обусловлено, в основном, стимуляцией эритроидного (рис. 2г) и лимфоидного (рис. 2д) ростков гемопоэза, а тимуса
- повышением содержания миелоидных (рис. 3б, в) клеток, что, вероятно, связано с миграцией их из костного мозга.
Выявленное нами увеличение общей клеточности лимфоидных органов у животных, получивших пантовит и цикло-
фосфан, по сравнению с группой мышей, получивших только цитостатик, явилось следствием повышения содержания преимущественно миелоидных клеток всех форм зрелости и, в значительно меньшей степени, лимфоидных.
Исследование показателей селезенки мышей, иммунизированных ЭБ после введения пантовита на фоне однократного применения циклофосфана, позволило установить, что общее количество ядросодержащих элементов у животных, получивших природный препарат, достоверно превышало описанное в контроле на 4 сут. эксперимента (рис. 2а). Увеличение общей клеточности селезенки под действием пантовита было обусловлено, в основном, стимуляцией эритро-идного (рис. 2г) и лимфоидного ростков гемопоэза (рис. 2д). На 14 и 21 сут. после введения антигена общее число спле-ноцитов мышей, получивших пантовит, не отличалось достоверно от показа-
телей животных контрольной группы. Вместе с тем, нами было зафиксировано увеличение содержания незрелых на 14 сут. и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов на 14 и 21 сут. (рис. 2б, в). Исследование показателей тимуса мышей данной опытной группы позволило установить, что общее количество ти-моцитов у животных, получивших изучаемый препарат, в значительной мере превышало описанное в контроле лишь на 14 сут. эксперимента (рис. За) за счет возрастания абсолютного числа лимфобластов (рис. Зг) и средних лимфоцитов (рис. Зд).
В наших экспериментах было установлено, что абсолютное количество AОK в селезенке мышей, иммунизированных после введения ци-клофосфана, было существенно снижено относительно группы только иммунизированных животных на 7 сут. исследования (рис. 4а).
а б в
4 7 14 21
г
4 7 14 21
д
Рис. 2. Динамика содержания общего числа спленокариоцитов (а), незрелых нейтрофилов (б), зрелых нейтрофилов (в), эритроид-ных (г) и лимфоидных (д) клеток в селезенке иммунизированных животных (1), иммунизированных после введения циклофосфана (2) и на фоне коррекции ЭШБ (3) или пантовитом (4). * Достоверность различий с контролем (р<0,05).
Введение животным ЭШБ на фоне сочетанного применения цитостатика и ЭБ привело к увеличению содержания АОК в селезенке на 7, 14 и 21 сут. относительно контрольной группы (рис. 4а). Это, вероятно, связано со способностью ЭШБ препятствовать токсическому действию циклофосфана на лимфоидные клетки за счет прямого мембранотроп-ного эффекта [20], а также способностью ЭШБ стимулировать регенерацию костномозгового кроветворения, подавленного циклофосфаном, за счет усиления процессов пролиферации и дифференцировки коммитированных клеток-предшественников гемопоэза. Более низкое, нежели у контрольных животных, количество АОК на 4 сут. эксперимента, возможно, связано с увеличением под действием ЭШБ абсолютного числа эритроидных клеток в селезенке мышей, которые оказывают супрессорное влияние на ранние этапы индукции гумораль-
ного иммунного ответа через продукцию растворимых факторов [10, 11].
Курсовое применение пантовита на фоне цитостатического воздействия и иммунизации тимусзависимым антигеном стало причиной увеличения содержания АОК в селезенке мышей относительно контрольной группы на 7 сут. исследования (рис. 4а) вследствие возрастания под действием исследуемого препарата общей клеточности данного иммунокомпетентного органа и количества лимфоидных клеток в частности.
При исследовании в сыворотке крови животных, иммунизированных на фоне введения цитостатического препарата, уровня специфических антител было выявлено снижение уровня ^М на 4 и 7 сут. и на 4 сут относительно мышей с иммунизацией (рис. 4б, в).
Введение животным ЭШБ на фоне развивающейся цитостатической иммуносупрессии и последующей иммуниза-
1СР/орган
106/ орган
1С6/ орган
107 орган
Рис. 3. Динамика содержания общего числа тимоцитов (а), незрелых нейтрофилов (б), зрелых нейтро-филов (в), лимфобластов (г), средних лимфоцитов (д) и малых лимфоцитов (е) в тимусе иммунизированных животных (1), иммунизированных после введения циклофосфана (2), и на фоне коррекции ЭШБ (3) или пантовитом (4). * Достоверность различий с контролем (р<0,05).
б
а
в
е
ции не оказывало выраженного стимулирующего влияния на продукцию клетками-антителопродуцентами и способствовало увеличению титра ^О на 4 и 21 сут. эксперимента по сравнению с животными контрольной группы (рис. 4б, в). Применение пантовита в условиях введения цитостатика и тимусзависимо-го антигена способствовало повышению титра ^М на 7, 14 и 21 сут. и ^О на 4 и 21 сут. после иммунизации относительно контрольных мышей (рис. 4б, в).
Сочетанное применение цитостатика и ЭБ привело к увеличению ФАПМ на 4 сут. после иммунизации как относительно интактных животных, так и иммунизированных мышей с последующим снижением до уровня фона и повторно-
му повышению данного показателя на 21 сут. (рис. 4г).
Антигенная стимуляция мышей, получивших циклофосфан и ЭШБ, привела к активации ФАПМ на 7 сут. после иммунизации (рис. 4г) относительно контрольных мышей вследствие, вероятно, прямого действия исследуемого препарата на макрофаги [2, 19]. ФАПМ у животных, получивших пантовит, существенно превышала показатели контрольной группы на 4 и 7 сут. после иммунизации ЭБ.
Таким образом, применение экстракта шлемника байкальского у мышей линии СБЛ/СаЬае, получивших циклофос-фан в дозе 250 мг/кг, способствовало более раннему восстановлению морфологического состава кроветворных (преимущественно за счет лимфоидного и эритро-идного ростков кроветворения, и, позднее, миелоидно-го) и лимфоидных органов (лимфоидные и эритроидные элементы). По сравнению с мышами, получившими ци-клофосфан и антиген, у животных, иммунизированных после введения циклофосфа-на и получивших курсовое введение экстракта шлемника байкальского, выявлена более выраженная стимуляция кроветворения за счет лимфоидного, эритроидного, миелоидного ростков, в лимфоидных органах за счет эри-троидных (селезенка), лимфоидных (селезенка, тимус) и миелоидных клеток (тимус). Курсовое введение ЭШБ повышало возможность иммунной системы отвечать
Рис. 4. Динамика содержания антителообразующих клеток в селезенке (а), титра 1дМ (б), 1дО (в) в сыворотке крови и фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов (г) у иммунизированных животных (1), иммунизированных после применения циклофосфа-на (2) и на фоне коррекции ЭШБ (3) или пантовитом (4). * - Достоверность различий с контролем (р<0,05)
на введение тимусзависимого антигена в сравнении с группой мышей, получавших только цитостатик и антиген, за счет увеличения количества лимфоидных клеток в селезенке, стимуляции фагоцитарной активности макрофагов, увеличения числа антителопродуцирующих клеток.
Курсовое введение пантовита мышам, получившим циклофосфан, приводило к стимуляции костномозгового кроветворения преимущественно за счет эритроидного и лимфоидного ростков, возрастанию числа клеток в лимфоидных органах, в большей степени за счет миелоидных и, в меньшей, лимфоидных. Применение пантовита у мышей, получивших цитостатик и антиген, стимулировало лимфоидный и эритроидный ростки в костном мозге и селезенке. В тимусе активация регенераторных процессов запускалась позже, чем в других исследованных органах. Введение пан-товита мышам, получившим циклофос-фан, приводило к большей стимуляции иммунной системы, чем у мышей, получивших только цитостатик и антиген: повышению ФАПМ, повышению уровня
Список литературы
1. Абрамова Е.В. Влияние экстракта шлемника байкальского на процессы регенерации кроветворения в условиях химиотерапии: ав-тореф. дис. ...канд. мед. наук. Томск, 1992. 21 с.
2. Агафонов В.И. Роль гемопоэзинду-цирующего микроокружения в регуляции кроветворения при действии на организм миелоингибирующих факторов. Принципы фармакологической коррекции: автореф. дис. ...докт. мед. наук. Томск, 1994. 44 с.
3. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Жданов В.В. Тез. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях. Томск: STT, 1999. 128 с.
АОК в селезенке, уровня специфических антител (^М) в сыворотке крови.
Выводы
1. Применение экстракта шлемника байкальского в условиях развивающейся цитостатической гемодепрессии, вызванной однократным введением мышам линии СВА/СаЬас циклофосфана в максимально переносимой дозе, оказывает выраженное стимулирующее влияние на процессы восстановления в большей степени эритроидного и лимфоидного ростков кроветворения, а использование пантовита - на репарацию миелоид-ного и лимфоидного ростков.
2. Курсовое применение экстракта шлемника байкальского нивелирует им-муносупрессивное действие циклофосфана путем стимуляции фагоцитарной активности макрофагов и восстановления количества клеток-антителопродуцентов. Введение пантовита иммунизированным мышам на фоне цитостатической иммуносупрессии вызывает повышение фагоцитарной активности макрофагов и усиление синтетической активности антителообразующих клеток.
4. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Жданов В.В., Першина О.В., Скурихин Е.Г. Фармакологическая регуляция системы крови при экспериментальных невротических воздействиях. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 2007. 156 с.: ил.
5. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Хлусов И.А.
Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза. Томск, 1997. 217 с.
6. Гольдберг Е. Д., Дыгай А М., Шахов В. П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, 1992. 272 с.
7. Гольдберг Е.Д., Т.Г. разина, Е.П. зуева, Е.Н. Амосова, С.Г. Крылова, В.Е. Гольдберг Растения в комплексной терапии опухолей. М.: Изд. РАМН, 2008. 232 с.
8. Гордон Д. С., Сергеева В. Е., зеленова И. Г.
Нейромедиаторы лимфоидных органов. Л.: Наука, 1982. 128 с.
9. Иванова С. А. Психоэмоциональный стресс и иммунитет//Сибирский вестник психиатрии и наркологии, 2000. №1. С. 31-37.
10. Козлов В. А., Журавкин И. Н., Цыр-лова И. Г. Стволовая кроветворная клетка и иммунный ответ. Новосибирск: Наука, 1982. 221 с.
11. Козлов В. А., Цырлова И. Г., чегля-кова В. В. Иммунорегуляторные клетки нелимфоидной природы - эритроциты-супрессоры//Доклады АН СССР, 1984. Т. 13.
С. 195-216.
12. Крыжановский Г. Н., Магаева С. В., Макаров С. В. Нейроиммунопатология. М.,
1997. 282 с.
13. Лазарева Д. Н., Алехин Е. К. Стимуляция иммунитета. М., Медицина, 1985. 256 с.
14. Линг Н. р., Кэтти Д. Гемагглютина-ция и реакции антителозависимого гемолиза. Антитела. Методы / Под ред. Кэтти Д. кн.1. М.: Мир, 1991. С. 238-243,
15. Машковский М. Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. М.: «Новая Волна», 2006. 1206 с.
16. Минакова М.Ю. Моноаминергиче-ские механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях. Авто-реф. дисс. .„д. м. н. Томск, 2009. 50с.
17. Олейник А. В. Влияние циклофосфана на перекисное окисление липидов. Вопросы онкологии, 1985. Т.31, №7. С. 97-101.
18. Першина О.В., Суслов Н.И., Прова-лова Н.В., Скурихин Е.Г. Влияние препаратов природного происхождения на систему крови и когнитивные функции при гипокси-ческом воздействии//Бюлл. эксперим. биол. 2002. (прил. №1). С. 27-30.
19. рыжаков В. М. Структурная организация систем жизнеобеспечения при злокачественном росте и в условиях противоопухолевой химиотерапии. Принципы фармакологической коррекции нарушений гомеостаза. Автореф. дисс. ...д. м. н. Томск,
1998. 42 с.
20. Сайфутдинов р. р. Влияние шлемника байкальского на энергетический метаболизм головного мозга крыс при гипоксии. Автореф. дисс. ...к. м. н. Томск, 1997. 21 с.
21. Удут Е.В. Коррекция анемического синдрома при миелоингибирующих воздействиях. Автореф. дисс. ...д. м. н. Томск, 2008. 44с.
22. Cunningham A. J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells//Nature. 1965. Vol.207, № 5001, P. 11061107.
23. Novotny D. E. K. Direct innervation of lymphatic organ in the rat//1st Intern. Congr. of ISNIM (4th Intern Workshop on Neuroimmunimodulation). Florence, Italy, May 23-26. 1990. P. 293.
24. Vrav B., Hoebeke J., Saint-Guillain M. et al. A new quantitative fluorimetric assay for phagocytosis of bacteria//Scand. J. Immunol. 1980. Vol.11, №2. P. 147-153.
Preclinical investigation of plants drugs in the conditions of cytostatic influence
O. S. Borsuk, N. V. Masnaya, A. A. Churin, E. Yu. Sherstoboev
The extract of Skutellaria baicalensis use in the conditions of developing cytostatic hemodepression, induced by a single administration of cyclophosphamide in a maximum tolerant doses in CBA/CaLac mice, stimulates the regenerating processes in a greater degree of erythroid and lymphoid lineages of hemopoiesis, but pantovit use - the reparation of myeloid and lymphoid lineages. Course application of Scutellaria baicalensis grades immunosuppressive effect of cyclophosphamide by stimulation of phagocyte activity of macrophages and regeneration of antibody-producing cells contents. Pantovit administration in immunized mice on the background of cytostatic immunossupression gives rise to increasing phagocyte activity of macrophages and intensification of synthetic activity of antibody-producing cells.
Key words: mice CBA/CaLac, cyclophosphamide, plant drags, hematopoietic and immune systems.
