CC BY
14
Сельскохозяйственный журнал. 2023. № 2 (16). С. 108-116 Agricultural journal. 2023; 16 (2). P. 108-116
Зоотехния и ветеринария
Научная статья
УДК 591.151:636.22/.28.033
DOI 10.48612/FARC/2687-1254/011.2.16.2023
ДНК-ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ПО ГЕНАМ CAPN1, GH,
LEP РЕМОНТНОГО МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЯСНОГО НАПРАВЛЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ
1 12 Евгения Семеновна Суржикова , Дарья Дмитриевна Евлагина ' ,
1 1, 2 Татьяна Николаевна Михайленко , Ольга Николаевна Онищенко '
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Северо-Кавказский
федеральный научный аграрный центр», Россия, Ставропольский край, Михайловск.
E-mail: info@fnac.center
2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ставропольский государственный аграрный университет», Россия, Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12. E-mail: 74helga74@mail.ru
Аннотация. Проблема сохранения породного разнообразия и контроля управления генетическими ресурсами сельскохозяйственных животных особо актуальна для всего мирового сообщества, в том числе и для России. Стремительное сокращение биоразнообразия сельскохозяйственных животных в нашей стране, формирует угрозу уменьшения отечественных пород, в зависимости от импорта, а также опасность распространения инфекционных и генетических заболеваний.Разработка и совершенствование методологий, позволяющих оценить особенности генофонда отечественных, а также локальный пород, идентифицировать гены, участвующие во многих признаках, в том числе и адаптированных к инфекционным заболеваниям, генетическим аномалиям, выявлять генотипы, отвечающие требованиям при формировании баз данных фенотипической изменчивости сельскохозяйственных животных по селекционно-значимым признакам для ассоциативных исследований, имеет как фундаментальное, так прикладное значение. Вышеизложенное определило цель настоящих исследований - изучить породные особенности аллельного полиморфизма генов: кальпаина - CAPN1, гормона роста - GH, лептина - LEP в выборках ремонтного молодняка мясного скота, разводимого в племенных хозяйствах Ставропольского края. Исследования проводились в лицензируемой лаборатории иммуногенетики и ДНК-технологий отдела генетики ВНИИОК - филиала ФГБНУ «СевероКавказский ФНАЦ» методом ПЦР-ПДРФ (для генов GH, LEP) и ПЦР в реальном времени (ген CAPN1) с использованием стандартных наборов реагентов согласно методическим рекомендациям. Изучен полиморфизм по генам мясной продуктивности у ремонтного молодняка мясного скота разных пород: герефордской (n = 99), казахской белоголовой (n = 93), калмыцкой (n = 46). CAPN1 - кальпаин, GH - гормон роста, LEP - лептин. Полученные данные указывают на своеобразное распределение частот встречаемости аллелей и генотипов в разных породах.
Ключевые слова: ген, полиморфизм, кальпаин (CAPN1), гормон роста (GH), лептин (LEP), мясной скот
Для цитирования: Суржикова Е.С., Евлагина Д.Д., Михайленко Т.Н., Онищен-ко О.Н. / ДНК-генотипирование по генам CAPN1, GH, LEP ремонтного молодняка крупного рогатого скота мясного направления продуктивности // Сельскохозяйственный журнал. 2023. № 2 (16). С. 108-116. DOI 10.48612/FARC/2687-1254/011.2.16.2023
Zootechny and veterinary science
Original article
DNA GENOTYPING BY CAPN1, GH, LEP GENES OF HERD REPLACEMENTS OF BEEF CATTLE
1 12 Evgeniia S. Surzhikova , Daria D. Evlagina ' ,
1 1 1 Tatiana N. Mikhailenko1, Olga N. Onishchenko1' 2
1Federal State Budgetary Scientific Institution "North Caucasus Federal Agricultural Research Centre", Russia, Stavropol Territory, Mikhailovsk. E-mail: info@fnac.center 2Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Stavropol State Agrarian University", Russia, Stavropol, Zootekhnicheskii, 12. E-mail: 74helga74@mail.ru
Abstract. The problem of preserving breed diversity and controlling the management of genetic resources of farm animals is especially relevant for the entire world community, including Russia. The rapid decline in the biodiversity of farm animals in our country creates the threat of a decrease in domestic breeds, depending on import, as well as the danger of the spread of infectious and genetic diseases.The development and improvement of methodologies, which allow assessing the features of the gene pool of domestic as well as local breeds, identifying genes involved in many traits, including those, which are adapted to infectious diseases, genetic anomalies, revealing genotypes that meet the requirements for the formation of databases of phenotypic variation of farm animals on significant breeding traits for associative research, have both fundamental and applicational significance. The abovementioned determined the purpose of the research - to study the breed features of gene polymorphism: cal-pain - CAPN1, growth hormone - GH, leptin - LEP in samples of herd replacements of beef cattle, which were bred in breeding farms of the Stavropol Territory. The research was carried out in the licensed laboratory of Immunogenetics and DNA technologies, Department of Genetics in All-Russian Research Institute of Sheep and Goat Breeding - branch of the FSBSI "North Caucasus FARC" with the method of PCR- RFLP (for GH, LEP genes) and real-time PCR (CAPN1 gene), using standard reagent kits, according to the methodological recommendations. Polymorphism of meat productivity genes was studied in herd replacements of beef cattle of different breeds: Hereford (n = 99), Kazakh Whiteheaded (n = 93), Kalmyk (n = 46). CAPN1 - calpain, GH - growth hormone, LEP - leptin. The obtained data indicated a peculiar frequency distribution of alleles and genotypes in different breeds.
Key words: gene, polymorphism, calpain (CAPN1), growth hormone (GH), leptin (LEP), beef cattle
For citation: Surzhikova E.S., Evlagina D.D., Mikhailenko T.N., Onishchenko O.N. / DNA genotyping by CAPN1, GH, LEP genes of herd replacements of beef cattle // Agricultural journal. 2023; 16(2). Р. 108-116. DOI 10.48612/FARC/2687-1254/011.2.16.2023
Введение. Важной задачей агропромышленного комплекса является совершенствование селекционно-племенной работы с имеющимся генофондом крупного рогатого скота. В сфере животноводства мясное скотоводство может иметь высокую рентабельность только с применением ресурсосберегающих технологий и интенсификации. Постоянный мониторинг данных селекционно-племенной ценности животных, подбор родительских пар с оптимальным учетом продуктивности, а также динамика роста и развития - основа в отрасли скотоводства. Использование современных молекулярно-генетических методов, статических обработок данных о животном позволяют в короткие сроки получать необходимые для селекционно-племенной работы данные [1, 2].
Скотоводство считается важной и сложной отраслью сельского хозяйства. Производство доброкачественной говядины - главная цель разведения скотоводства мясного направления. На формирование мясной продуктивности оказывают воздействие пол животного, тип телосложения, физиологическое состояние организма, условия кормления и содержания, а также генетические основы селекции мясного скота. Важное значение для генетического потенциала работы в отрасли скотоводства имеет использование высокопродуктивных животных разных пород, благодаря которым возрастает спрос молодой говядины [3, 4].
В разведении сельскохозяйственных животных важно использовать современные методы маркерной селекции. Перспективными и распространенными генами, затрагивающими мясные качества, выступают кальпаин (САРШ), гормон роста (ОН) и лептин (ЬБР) [5].
Кальпаин (CAPN1), ассоциирующийся с мраморностью и нежностью мяса, — продукт экспрессии гена - кальций-зависимая протеаза, модифицирующая во время послеубойного созревания мяса мышечную ткань [6]. Гормон роста (ОН) продуцируется передней долей гипофиза, относится к регуляторам соматического роста животных, контролирует синтез гормонов роста, а также участвует в углеводном и жировом обмене [7]. В организме животного ген лептин (ЬБР) — гормон, вырабатывающийся клетками жировой ткани, влияющий на качество мяса, убойный выход, участвующий в накоплении жира и метаболизме [8].
Цель исследования заключалась в определении породных особенностей ал-лельного полиморфизма генов: кальпаина — САРШ, гормона роста — ОН, лептина — ЬБР в выборках ремонтного молодняка мясного скота.
Материалы и методы исследований. Объектом исследования стал ремонтный молодняк мясного скота разных пород (герефордская, п = 99; казахская белоголовая, п = 93; калмыцкая, п = 46) в возрасте 12 месяцев, разводимых в разных селекционно-племенных хозяйствах Ставропольского края.
На базе лаборатории иммуногенетики и ДНК-технологи отдела генетики и биотехнологии ВНИИОК — филиала ФГБНУ «Северо-Кавказский ФНАЦ» проводились исследования по ДНК-генотипированию. Из цельной крови ремонтного молодняка мясного скота с использованием коммерческого набора «DIAtomtmDNAPrep100» выделили ДНК. Генотипирование осуществляли методом ПЦР-ПДРФ (для генов ОН, ЬЕР) и ПЦР в реальном времени (ген СЛРЫ1) с использованием стандартных наборов реагентов согласно методическим рекомендациям [9].
Результаты исследованийи их обсуждение. Полиморфизм гена САРШ в исследуемых популяциях представлен двумя аллелями (САРШ и САРШ°). Отмечено, что у животных герефордской породы выявлена очень низкая (0,04) частота встречаемости аллеля САРШ и с преобладание в 2,4 раза высокая встречаемость (0,96) аллеля
САРШ". Анализ результатов генотипирования молодняка крупного рогатого скота представлен на рисунке 1.
0^6 0,65 0,61 0,76 □ ш □ ОД 9 0,81 □ 0,14 0,27 од 0,9 0,11 0,89
0,87 9,84 Ш 0,86
0,4 Г 0,73
ОДЗ }Дб 0,35 0,39 0Д4
123 123 123 123
САР>-1 СН ЬЕР/А80У ЬЕРАГ7Г
□ США/У 1С/Ш'/Г
1 - Герефордекая порода, (□= 99)
2 - Казахская белоголовая порода, (а=93)
3 - Калмыцкая порода, (11=46)
Рисунок 1. Частота встречаемости аллелей у ремонтного молодняка мясного направления продуктивности разных пород
Сравнительно равномерным (0,13-0,16) оказалось распределение аллеля САРШС среди молодняка казахской белоголовой, калмыцкой пород. Высокая частота встречаемости (0,96-0,84) аллеля САРШ° среди животных калмыцкой, казахской белоголовой пород нашла отражение в разной частоте встречаемости генотипов: гомози-
сс оо со
готных САРШ , САРМ"" и гетерозиготного САРШ. Так, в выборке ремонтного
молодняка герефордской породы доля носителей гомозиготного САРШСС генотипа составила 2,0 %, у казахской белоголовой и калмыцкой - 5,0 и 6,0 % (таблица 1).
Таблица 1
Породные особенности частоты встречаемости генотипов у ремонтного молодняка мясного направления продуктивности разных пород, %
Маркерные гены
САРШ ОН ЬБР/А80У ЬБР/У7Б
генотипы
СС СО ОО УУ ЬУ ЬЬ АА АУ УУ УУ УБ ББ
герефордская, (п = 99)
2,0 4,0 94,0 16,0 39,0 45,0 78,0 9,0 13,0 60,0 27,0 13,0
казахская белоголовая, (п = 93)
5,0 15,0 80,0 32,0 14,0 54,0 75,0 12,0 13,0 85,0 11,0 4,0
калмыцкая, (п = 46)
6,0 20,0 74,0 2,0 43,0 55,0 76,0 20,0 4,0 83,0 13,0 4,0
Полиморфизм локусного гена ОН в исследуемых выборках животных представлен двумя ОН , ОН аллелями и тремя ОН , ОН , ОН генотипами с разной частотой встречаемости. Частота встречаемости аллеля ОНУ варьировала от 0,24 до 0,32, концентрация аллеля ОНЬ — от 0,61 до 0,76. Доля животных носителей желательных гомозиготного ОНУУ и гетерозиготного ОНЬУ генотипов колебалась от 2,0 и 43,0 % в выборке молодняка калмыцкой породы, казахской белоголовой — 32,0 и 14,0 %, гере-фордской — 16,0 и 38,0 %.
Особенностью полиморфизма локусов А80У и У7Б гена лептина является высокая частота встречаемости аллеля ЬБР/А80УА с незначительной межпородной вариабельностью (0,81; 0,86), аллеля ЬБР/У7БУ (0,73; 0,90; 0,89), но меньшая аллелей ЬБР/А80УУ и ЬБР/У7р — соответственно 0,14—0,19, 0,10—0,27, что обеспечило достаточно высокую частоту встречаемости генотипов гомозиготных ЬБР/А80УАА; ЬБР/У7БУУ при сравнительно одинаковом межпородном распределении — соответственно 78,0; 75,0; 76,0 % и 60,0; 85,0; 83,0 %.
Исследование генетической сбалансированности стад молодняка мясного скота позволило установить своеобразие генетической структуры, зависящей как от породной принадлежности, так и от изучаемого гена.
В наших исследованиях сравнительно одинаковой оказалась степень гомозигот-ности в пределах 73,1 и 77,4 % у молодняка калмыцкой и казахской белоголовой породы по гену кальпаин, а несколько выше (92,3 %) отмечалась у герефордской. Число эффективно действующих аллелей этого гена варьировалось от минимальных (1,08) у ге-рефордов до максимальных значений (1,37) у калмыцкой породы, тест гетерозиготно-сти оказался отрицательным со значительной вариабельностью от 0,04 до 0,12 (таблица 2).
Межпородные различия степени гомозиготности у исследуемого поголовья молодняка оказалась незначительной — соответственно 54,5; 52,4; 63,5 %. Наибольшее число эффективных аллелей (1,83 и 1,91) по гену САРШ выявлено у молодняка гере-фордской, казахской белоголовой пород, меньшее (1,57) — у калмыцкой породы.
Таблица 2
Породные особенности генетической структуры _ремонтного молодняка мясного скота_
Показатель Герефордская порода, (п = 99) Казахская белоголовая порода, (п = 93) Калмыцкая порода, (п = 46)
СЛРШ
наблюдаемая гетерози-готность 0,04 0,18 0,24
ожидаемая гетерозигот-ность 0,80 0,29 0,37
степень гомозиготности, % 92,3 77,4 73,1
число эффективно действующих аллелей 1,08 1,29 1,37
тест гетерозиготности -0,04 Ф < Т -0,11 Ф < Т -0,12 Ф < Т
ОН
наблюдаемая гетерози-готность 0,62 0,16 0,77
ожидаемая гетерозигот-ность 0,84 0,91 0,57
степень гомозиготности, % 54,5 52,4 63,5
число эффективно действующих аллелей 1,83 1,91 1,57
тест гетерозиготности -0,21 Ф < Т -0,74 Ф < Т +0,19 Ф > Т
ЬЕР/Л8 0У
наблюдаемая гетерози-готность 0,10 0,13 0,24
ожидаемая гетерозигот-ность 0,42 0,44 0,32
степень гомозиготности, % 70,5 68,9 75,9
число эффективно действующих аллелей 1,42 1,45 1,32
тест гетерозиготности -0,31 Ф < Т -0,34 Ф < Т -0,07 Ф< Т
LЕР/Y7F
наблюдаемая гетерози-готность 0,38 0,12 0,150
ожидаемая гетерозигот-ность 0,65 0,22 0,244
степень гомозиготности, % 92,3 82,0 80,4
число эффективно действующих аллелей 1,08 1,22 1,24
тест гетерозиготности -0,27 Ф < Т -0,10 Ф < Т -0,09 Ф < Т
Тест гетерозиготности гена оказался отрицательным (-0,21; -0,74) у молодняка герефордской и казахской белоголовой пород, но положительным (+0,19) - у калмыцкой породы.
В локусах гена лептина (A80V и Y7F) у молодняка мясного скота степень гомо-зиготности варьировалась от 68,9 до 75,9 % (A80V) и от 80,4 до 92,3 % (Y7F). Сравнительно одинаковым оказалось у исследуемого поголовья число эффективных аллелей в локусах гена лептина - 1,32-1,45 (A80V); 1,08-1,24 (Y7F). Тест гетерозиготности в исследуемом поголовье молодняка был отрицательным в локусеA80V (- 0,07; - 0,31; -
0.44) и Y7F (- 0,09; - 0,10; - 0,27).
Методом сравнительного анализа установлено, что вариабельность наблюдаемой гетерозиготности (Hobs) гена CAPN1 колебалась от 0,04 среди молодняка герефордской до 0,18-0,24 среди казахской белоголовой, калмыцкой пород; стала ожидаемой от минимальных величин (0,292; 0,37) у молодняка казахской белоголовой и калмыцкой пород до максимальных (0,80) у герефордской породы. Уровень наблюдаемой гетерозиготности гена гормона роста составил 0,16 у молодняка казахской белоголовой, 0,62; 0,77 - у герефордской и калмыцкой пород. Вариабельность ожидаемой гете-розиготности (Hex) гена GH насчитывала 0,57-0,91, при этом наиболее высокие показатели (0,84; 0,91) данного признака обнаружены у молодняка герефордской и казахской белоголовой пород, средние (0,57) - у калмыцкой породы.
Вариабельность величины уровней Hobs и Hex в локусах гена LEP была незначительной и варьировалась: наблюдаемой - от 0,10 до 0,24 в локусе LEP/A80V, от 0,12 до 0,38 - LEP/Y7F, ожидаемой в локусе LEP/A80V - от 0,32 до 0,44, от 0,22 до 0,65 -LEP/Y7F.
Заключение. В результате лабораторных исследований выявлены особенности полиморфизма генов CAPN1, GH, LEP, обусловлены породные принадлежности скота мясного направления, а изучаемые породы свидетельствуют о неоднозначности выстраивания селекционно-значимых аллелей.
В связи с вышеизложенным проявление интереса к исследованиям в лаборатории иммуногенетики и ДНК-технологий установили породные особенности аллельного полиморфизма генов кальпаина (CAPN1), гормон роста (GH), лептина (LEP) мясного скота. Выявили генотипы - носители генетических маркеров, являющихся перспективными для дальнейшего изучения у разных пород крупного рогатого скота мясной продуктивности. Результаты проведенных исследованиях планируется использовать в племенных хозяйствах Ставропольского края, специализированных на разведении и поддержании пород крупного рогатого скота мясного направления продуктивности.
Список источников
1. Кузьминков И.И., Подречнева И.Ю., Егоров О.С. Оценка аллелофонда заводских семейств скота костромской породы // Мичуринский агрономический вестник. 2018. №
1. С. 61-66.
2. Полиморфизм генов соматотропин-рилизинг-гормона и инсулиноподобного фактора роста у быков-производителей Республики Татарстан / Р.Р. Вафин, С.В. Тюлькин, Л.Р. Загидуллин и др.// Достижения науки и техники АПК. 2017. Т. 31. № 4. С. 75-78.
3. Показатели мясной продуктивности животных желательного типа в ООО «Племзавод «Димитровский» / А.Н. Сазонов, Ф.Г. Каюмов, А.П. Искандерова и др. // Вестник мясного скотоводства. 2016. № 4 (96). С. 59-64.
4. Епишко О.А., Пешко Н.Н. Использование гена гормона роста в селекции крупного рогатого скота // Сельское хозяйство - проблемы и перспективы: сб. науч. тр. УО «ГГАУ», Гродно, 2017. Т. 37 (Зоотехния). С. 60-675.
5. Перспективные генетические маркеры крупного рогатого скота / М.И. Селионова, Л.Н. Чижова, Г.Т. Бобрышова и др. // Вестник АПК Ставрополья. 2018. № 3 (31). С. 4451. DOI 10.31279/2222-9345-2018-7-31-44-51.
6. Features of holstein cattle bred in kazakhstan by the polymorphic genes of the somatotropin cascade / I.S. Beishova, V.A. Ulyanov, G. Shaikamal et al. // Advances in Animal and Veterinary Sciences. 2019. Vol. 7. No. Special Issue 1. P. 60-65. doi: 10.17582/journal.aavs/2019/7.s1.60.65.
7. Молекулярно-генетические аспекты селекции мясного скота по мраморности мяса / А.А. Шарипов, Ш.К. Шакиров, Ю.Р. Юльметова и др.// Вестник мясного скотоводства. 2014. № 2. С. 59-64.
8. Sharifzaden A., Doosti A. Investigation of leptin gene polymorphism in Iranian native cattle // Bulgarian Journal of Veterinary Medicine. 2012. V.15. №2. P. 86-92.
9. Изучение и проведение ДНК-тестирования сельскохозяйственных животных по генам, определяющим продуктивные качества: методические рекомендации / З.К. Гаджиев, Е.С. Суржикова, Т.Н. Михайленко, Д.Д. Евлагина // Ставрополь: Общество с ограниченной ответственностью фирма «Ставрополь-сервис-школа», 2022. 78 с. ISBN 978-5-6048650-3-3.
References
1. Kuzminkov I.I., Podrechneva I.Yu., Egorov O.S. Evaluation of the allele pool of commercial cattle of the Kostroma breed // Michurinsk Agronomy Bulletin. 2018. No. 1. P. 61-66.
2. Polymorphism of genes of somatotropin-releasing hormone and insulin-like growth factor in servicing bulls of the Republic of Tatarstan / R.R. Vafin, S.V. Tyulkin, L.R. Zagidullin et al.// Achievements of Science and Technology of AIC. 2017. V. 31. No. 4. P. 75-78.
3. Indicators of meat productivity of animals of the desired type in OOO Dimitrovsky Breeding farm / A.N. Sazonov, F.G. Kayumov, A.P. Iskanderova et al. // Herald of beef cattle breeding. 2016. No. 4 (96). P. 59-64.
4. Epishko O.A., Peshko N.N. Use of the growth hormone gene in cattle breeding // Agriculture - problems and prospects: collection of research papers "GSAU", Grodno, 2017. V. 37 (Zootechny). P. 60-675.
5. Promising genetic markers of cattle / M.I. Selionova, L.N. Chizhova, G.T. Bobryshova et al. // Agricultural Bulletin of Stavropol Region. 2018. No. 3 (31). P. 44-51. DOI 10.31279/2222-9345-2018-7-31 -44-51.
6. Features of holstein cattle bred in kazakhstan by the polymorphic genes of the somatotropin cascade / I.S. Beishova, V.A. Ulyanov, G. Shaikamal et al. // Advances in Animal and Veterinary Sciences. 2019 Vol. 7. No. Special Issue 1. P. 60-65. doi: 10.17582/journal.aavs/2019/7.s1.60.65.
7. Molecular genetic aspects of beef cattle selection for marbling / A.A. Sharipov, Sh.K. Shakirov, Yu.R. Yulmetova et al. // Herald of beef cattle breeding. 2014. No. 2. P. 59-64.
8. Sharifzaden A., Doosti A. Investigation of leptin gene polymorphism in Iranian native cattle // Bulgarian Journal of Veterinary Medicine. 2012. V.15. №2. P. 86-92.
9. Studying and DNA testing of farm animals for genes that determine productive qualities: guidelines / Z.K. Gadzhiev, E.S. Surzhikova, T.N. Mikhailenko, D.D. Evlagina // Stavropol: OOO Stavropol-Service-School, 2022. 78 p. ISBN 978-5-6048650-3-3.
Информация об авторах Е.С. Суржикова - кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник. Тел.: 8(8652)71-72-18. E-mail: surzikovaevgeniya20@gmail.com
Д.Д. Евлагина - кандидат биологических наук, научный сотрудник. Тел.: 8(8652)71-72-18. E-mail: d1319731@yandex.ru
Т.Н. Михайленко - научный сотрудник. Тел.: 8(8652)71-72-18. E-mail: mihailenkozzz111@gmail.com
О.Н. Онищенко - младший научный сотрудник. Тел.: 8(8652)71-72-18. E-mail: 74helga74@mail.ru
Information about the authors E.S. Surzhikova - Candidate of Agricultural Sciences, Leading Researcher. Tel.: 8(8652)71-72-18. E-mail: surzikovaevgeniya20@gmail.com
D.D. Evlagina - Candidate of Biological Sciences, Researcher. Tel.: 8(8652)71-72-18. Email: d1319731@yandex.ru
T.N. Mikhailenko - Researcher. Tel.: 8(8652)71-72-18. E-mail: mihailen-kozzz111@gmail.com
O.N. Onishchenko - Junior researcher. Tel.: 8(8652)71-72-18. E-mail: 74helga74@mail.ru
Вклад авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Authors' contribution: All authors have made an equivalent contribution to the preparation of the publication. The authors declare that there is no conflict of interest.
Статья поступила в редакцию 20.05.2023; одобрена после рецензирования 08.06.2023; принята к публикации 17.06.2023.
The article was submitted 20.05.2023; approved after reviewing 08.06.2023; accepted for publication 17.06.2023.
© Суржикова Е.С., Евлагина Д.Д., Михайленко Т.Н., Онищенко О.Н., 2023
