CC BY
18УДК 577.21:636.22/28.082.12
B. И. Трухачев, М. И. Селионова, Л. Н. Чижова, Н. З. Злыднев,
C. А. Олейник, Г. Т. Бобрышова
Trukhachev V. I., Selionova M. I., Chizhova L. N., Zlydnev N. Z., Oleynik S. A., Bobryshova G. T.
ДНК-ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МОЛОЧНОГО СКОТА
DNA DIAGNOSTICS OF HEREDITARY DISEASES IN DAIRY CATTLE
Интенсивное использование мирового породного генофонда крупного рогатого скота и биотехнологий репродукции (искусственное осеменение, трансплантация эмбрионов) позволили значительно повысить генетический потенциал продуктивности животных. Однако широкое использование ограниченного контингента производителей привело к тому, что в разных странах, в том числе и РФ, фиксировалось рождение телят с различными аномалиями, которые, как показала ДНК-диагностика, имели наследственную основу, обусловленную мутациями генов. Совершенно не случайно в странах с развитым животноводством действуют национальные программы генетического мониторинга, включающие в качестве обязательного элемента генетическое обследование животных на присутствие наследственных заболеваний. В России подобные исследования предусмотрены рядом законодательно-правовых документов. Однако в силу разных причин молекулярно-генетическая диагностика не получила широкого распространения в животноводстве нашей страны и отсутствует на Ставрополье. Впервые получены и проанализированы результаты скрининговых исследований на носительство мутаций, детерминирующих развитие наследственных заболеваний молочного скота, разводимого в племенных хозяйствах Ставропольского края. Установлено присутствие генетических мутаций: CV - комплексный порок позвоночника (CVM), BL - дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD), DP - дефицит уридинмонофосфатсинтетазы (DUMPS) у коров с функциональными нарушениями воспроизводства, с частотой встречаемости от 4,5 до 6,3 %. Даны обозначения и описание действия мутантных аллелей, симптомы их воздействия на организм. Приводится схема проведения скри-нинговых работ для своевременного выявления и элиминации животных-носителей генетического груза.
Ключевые слова: генетические аномалии, мутация генов, ДНК-диагностика, CVM, BLAD, DUMPS, молочный скот.
Intensive use of the world breed fund of horned cattle and reproduction biotechnologies (artificial insemination, embryo transplantation) allowed us to increase significantly the genetic potential of animal productivity. However, the widespreaduse of sires limited contingent led to the fact that in different countries, including Russia, the birth of calves with various anomalies was fixed, which, as DNA diagnostics showed, had the genetic basis due to gene mutations. It is not by chance that in countries with developed animal breeding, national genetic monitoring programs operate including the genetic examination of animals for presence of hereditary diseases as an obligatory element. In Russia, such investigations are envisaged by a number of legislative and legal documents. However, due to various reasons, molecular genetic diagnosis has not become widespread in the animal breeding of our country and is absent in the Stavropol region. For the first time, the results of screening studies on the carriage of mutations, determining the development of hereditary diseases of dairycattle, bred in the breeding farms of the Stavropol region were obtained and analyzed. The presence of genetic mutations is established: CV causing complex vertebral malformation (CVM), BL - deficit of bovine leukocyte adhesion (BLAD), DP - deficiency of uridine monophosphate synthetase(DUMPS) in cows with functional reproduction disorders with frequency of occurrence from 4.5 to 6.3 %. The designations and the description of mutant allele action, the symptoms of their effect on the organism are given. The scheme of carrying out of screening works for timely revealing and elimination of animals that are carriers of a genetic load is resulted.
Key words: genetic abnormalities, gene mutations, DNA diagnostics, CVM, BLAD, DUMS, dairy cattle.
Трухачев Владимир Иванович -
Академик РАН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, доктор экономических наук, профессор, ректор
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет»
г. Ставрополь
Тел.: 8(8652)35-22-82
E-mail: rector@stgau.ru
Селионова Марина Ивановна -
доктор биологических наук, профессор РАН, директор
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский
институт овцеводства и козоводства»
г. Ставрополь
Тел.: 8(8652)37-10-39
E-mail: priemnaya@sniizhk.ru
Чижова Людмила Николаевна -
доктор сельскохозяйственных наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории иммуногенетики и ДНК-технологий
Trukhachev Vladimir Ivanovich -
Full member (academician) of the Russian Academy of Sciences (RAS), Doctor of Agricultural Sciences, Professor, Doctor of Economic Sciences, Professor, Rector
FSBEI HE «Stavropol State Agrarian University» Stavropol
Теl.: 8(8652)35-22-82 E-mail: rector@stgau.ru
Selionova Marina Ivanovna -
Doctor of Biology Sciences, Professor of RAS, Director FSBSI «All-Russian Research Institute of Sheep breeding and Goat breeding» Stavropol
Tel.: 8(8652)37-10-39 E-mail: priemnaya@sniizhk.ru
Chizhova Lyudmila Nikolaevna -
Doctor of Agricultural Sciences, Professor, Principal researcher of the Laboratory of Immunogenetics and DNA technologies
в
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский
институт овцеводства и козоводства»
г. Ставрополь
Тел.: 8(8652)71-72-18
E-mail: immunogenetika@yandex.ru
Животноводство
121
FSBSI «All-Russian Research Institute of Sheep breeding and Goat breeding» Stavropol
Tel.: 8(8652)71-72-18
E-mail: immunogenetika@yandex.ru
Злыднев Николай Захарович -
доктор сельскохозяйственных наук, профессор
кафедры кормления и общей биологии
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет»
г. Ставрополь
Тел.: 8(8652)28-61-10
E-mail: nz-kormlenec@yandex.ru
Олейник Сергей Александрович -
доктор сельскохозяйственных наук, профессор
кафедры частной зоотехнии,
селекции и разведения животных
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет»
г. Ставрополь
Тел.: 8(8652)35-22-82
E-mail: soliynik60@gmail.com
Бобрышова Галина Тимофеевна -
кандидат сельскохозяйственных наук, доцент, заместитель директора
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский
институт овцеводства и козоводства»
г. Ставрополь
Тел.: 8 (8652)35-94-56
E-mail: science@vniiok.ru
Ziydnev Nikolay Zakharovich -
Doctor of Agricultural Sciences, Professor of the Department offeeding and general biology
FSBEI HE «Stavropol State Agrarian University» Stavropol
Tel.: 8(8652)28-61-10 E-mail: nz-kormlenec@yandex.ru
Oieynik Sergey Aieksandrovich -
Doctor of Agricultural Sciences, Professor
of the Department of Particular animal science,
breeding and animal husbandry
FSBEI HE «Stavropol State Agrarian University»
Stavropol
Tel.: 8(8652)35-22-82 E-mail: soliynik60@gmail.com
Bobryshova Galina Timofeevna -
Ph.D of Agricultural Sciences, Assistant professor, Deputy director FSBSI «All-Russian Research Institute of Sheep breeding and Goat breeding» Stavropol
Tel.: 8(8652)35-94-56 E-mail: science@vniiok.ru
В последние годы особую актуальность приобрела проблема распространения вредных летальных рецессивных мутаций практически во всех породах молочного скота и, к сожалению, с регулярной повторяемостью появления новых дефектов [1].
В крупнейшей базе данных мира, содержащей информацию о наследственных дефектах 186 видов животных, - ОМ1А - каталог (online-mendelian inheritance in animals) Университета Сиднея дано фенотипическое описание 398 наследственных аномалий крупного рогатого скота, в том числе 145 обусловленных изменениями в одном локусе, из которых 79 наследственных дефектов описано на молекулярном уровне [2, 3].
К наиболее часто встречаемым генетическим дефектам молочного скота, приносящим значительный экономический ущерб, относятся: комплексный порок позвоночника - CVM, дефицит адгезии лейкоцитов - BLAD, дефицит уридинмонофосфатсинтетазы - DUMPS.
Комплексный порок позвоночника - CVM. Причиной этой наследственной аномалии является точечная G/T мутация гена SLC35A3 в позиции 559 из семейства НотоЬох-генов [4, 5, 6].
Результаты мониторинга свидетельствуют о том, что доля быков - скрытых носителей CVM на племпредприятиях России составляет 3,7 %, то есть в среднем 1 из 27 производителей, используемых в системе искусственного осеменения, является скрытым носителем этого наследственного дефекта [7].
Синдром CVM сопровождается многочисленными уродствами скелета новорожденных телят: сросшиеся и деформированные позвонки, неправильное развитие позвоночных дисков, сколиоз, кифоз, расщепление позвоночника, известны случаи полного отсутствия поясничных, крестцовых и хвостовых позвонков [8, 9]. Как правило, уродства телят сопровождаются низкой живой массой, а также аномалиями внутренних органов [10].
Дефицит лейкоцитарной адгезии - BLAD. Молекулярной основой BLAD является точечная мутация в кодирующей части гена CD18, она связана с заменой нуклеотида аденина на гуанин в 383 позиции ДНК, вызывающая в свою очередь замещение в положении 128 аспараги-новой кислоты на глицин, имеющая аутосомно-рецессивный характер наследования.
Носительство мутации установлено в 1992 г Мутация быстро распространилась в голштин-ской породе из-за доминирования потомков быка-производителя USA000001667366 Carlin-M Ivanhoe Bell (К. М. Белла Айвенго Бемм), 1974 г. р., а также быков-носителей деда, отца, братьев, сестер, многочисленных сыновей, внуков и других родственных групп.
Синдром BLAD сопровождается резким падением функциональной активности фагоцитоза, эндотелиальной адгезии, невозможностью выхода лейкоцитов за пределы кровеносного русла и неспособностью выполнять защитную функцию, в результате возникает иммунодефи-цитное состояние, при котором животное погибает от любой инфекции в ранний период онтогенеза (2-4 месяца).
Уридинмонофосфататсинтетаза - DUMPS. Установлено, что заболевание обусловлено точечной мутацией (С^Т) в 405 кодоне. Это приводит к образованию преждевременного стоп-кодона и усеченной с-терминальной субъединицы протеина. Точка мутации обозначена как R405Stop. Изучен молекулярный механизм мутации: у гетерозиготных животных вследствие точечной замены С^Т ко-дон 405 CGA, кодирующий аргинин, заменяется нонсенакодоном (Stop-codon) TGA. Носительство этого скрытого генетически рецессивного заболевания было выявлено у быка-производителя USA000001308101 Skokie Sensation Ned, 1957 г. р. Аутосом-ная рецессивная мутация DUMPS приводит к дефициту активности фермента уридинмоно-фосфатсинтетазы, который связан с воспроизводительной функцией животных и влияет на выживаемость потомства. Эта рецессивная мутация, обнаруженная у голштинского скота,вызывает у гомозигот раннюю эмбриональную смерть, в то время как гетерозиготы фенотипически нормальны, но с низкой (в два раза) активностью фермента в различных тканях [1-4, 7-10].
Цель исследования - скрининг генетических аномалий купного рогатого скота разных пород молочного направления продуктивности.
Скрининговые исследования осуществлены на выборке молоч ных коров основных пород, разводимых в племенных хозяйствах Ставропольского края: черно-пестрая (СПК «Россия» Новоалександровского района, n=24; СПК КПЗ «Казьминское», n=35; сПк КПЗ им. Чапаева Ко-чубеевского района, n=36; СПК колхоз им. Ворошилова Труновского района, n=22), айршир-ская (СПК КПЗ «Кубань» Кочубеевского района, n=17), голштинская красно-пестрая (СПК колхоз им. Ворошилова Труновского района, n=10), голштинская (ООО СП «Чапаевское» Шпаков-ского района, n=37; ООО «Приволье» Красногвардейского района, n=22). Всего генотипиро-вано 203 головы.
Материалом для исследований служила ДНК животных, выделенная из крови с применением стандартных наборов (ООО «Изоген», г. Москва).
Точечные мутации CVM и BLAD выявлялись методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с использованием набора реагентов (CVM - BLAD), разработанного компанией ЗАО «Синтол», позволяющего одновременно диагностировать обе аномалии.
При диагностировании BLAD для кодирующей части гена CD18 использовались аллель-специфические наборы олигонуклеотидов в положениях 383A^G, а для диагностики CVM -точечная G^T мутация гена SLC35A3 в позиции 559. Для определения CT и CV аллелей использовались 2 канала - Green и Yellow: нормальный CT аллель давал рост сигнала по каналу Green, детектируемый флуорофором FAM, а мутант-
ный аллель CV - по каналу Yellow, детектируемый флуорофором R6G.
Что касается TL и BL аллелей, то для их определения использовались также 2 канала -Orange и Red. Нормальный TL аллель давал рост сигнала по каналу Orange, детектируемый флуорофором ROX, а мутантный аллель BL - по каналу Red, детектируемый флуорофором Cy5.
Результаты интерпретировались на основании наличия или отсутствия кривой флуоресценции. При оптимальном количестве копий ДНК кривая хорошо просматривалась начиная с 20-25 цикла до окончания 45 циклов амплификации. Так как использование кривых не требует никаких дополнительных манипуляций с пробирками, то интерпретация полученных данных осуществлялась автоматически.
При идентификации мутации DUMPS использовался метод гель-электрофореза с визуализацией продуктов ПЦР-ПДрф под ультрафиолетовым светом. Амплификация проводилась с помощью двух синтезированных олигонуклео-тидных праймеров следующего состава: UMPS L 5'GCAAATGGCTGAAGAACATTCTG-3' UMPS R 5' GCTTCTAACTGAACTCCTCGAGT-3'. Режим амплификации: «горячий старт» (94 °С - 4 мин); 35 циклов ПЦР: денатурация (94 °С - 1 мин); отжиг праймеров (62 °С - 1 мин); элонгация (72 °С -1 мин). В амплифицируемом участке ДНК находились два сайта узнавания для эндонуклеазы Aval.
Рестрикция ДНК производилась с помощью рестриктаз, относящихся к группе бактериальных эндонуклеаз. В случае разрезания продукта амплификации рестриктазой на фрагменты 53, 36, 19 п. н. образец диагностировался как гомозиготный TD/TD DUMPS-генотип (здоровое животное), если - 89, 53, 36 п. н. - как гетерозиготный TD/DP DUMPS-генотип (скрытый носитель мутаций), если - 89, 19 п. н. - как гомозиготный DP/DP DUMPS-генотип (больное животное).
Исходя из того, что существует вероятность присутствия носителей генетических дефектов среди коров с нарушениями функционального воспроизводства (аборты, рождение мертвых телят, гинекологические заболевания), то особое внимание для предотвращения распространения скрытых мутаций должно уделяться этой группе животных.
На основании анализа материалов первичного зооветеринарного учета, журналов осеменений и отелов, регистрации приплода была осуществлена выборка коров с нарушениями воспроизводительных функций.
В результате скрининговых работ по выявлению генетических мутаций в локусах генов BLAD, CVM, DUMPS установлено, что в выборе коров с нарушениями функций воспроизводства айрширской (СПК КПЗ «Кубань»), черно-пестрой (СХ ПК «Россия», СПК КПЗ им. Чапаева) пород мутантные аллели (BL, CV, DP) отсутствовали (табл. 1).
I^ch'tuhk АПК
Животноводство
123
Таблица 1 - Характеристика выборки коров с проблемами воспроизводства
Хозяйство Исследовано, всего/с ген. аномалией* гол. В том числе случаи Частота встречаемости аномалий, %
абортов мертворожденных гинекологические заболевания
СХПК «Россия» 24 3 6 15 -
СПК КПЗ «Кубань» 17 5 3 9 -
СПК КПЗ «Казьминский» 35/2* 9 10/1* 16/1* 5,7
СПК колхоз им. Ворошилова 32/2* 4/1* 6 22/1* 6,3
ООО СП «Чапаевское» 37/2* 8/1* 5/1* 24 5,4
СПК КПЗ им. Чапаева 36 4 6 23 -
ООО «Приволье» 22/1* - - 22/1* 4,5
* Число животных с генетическими аномалиями.
В выборке коров черно-пестрой породы (ООО СП «Чапаевское») установлено присутствие генетических аномалий: BL в локусе гена BLAD у абортированной коровы, DP в локусе гена DUMPS - в группе коров, родивших мертвых телят.
В выборке коров этой же породы (СПК КПЗ «Казьминский») мутантная аллель BL гена BLAD присутствовала среди коров, родивших мертвых телят, а также с нарушениями воспроизводительного цикла.
В выборке коров ООО «Приволье» мутантная аллель DP присутствовала в группе животных с гинекологическими заболеваниями.
В выборке коров черно-пестрой породы (СПК им. Ворошилова) выявлены носители генетических аномалий: CV в локусе гена CVM у абортированной коровы черно-пестрой породы, Dp в локусе гена DUMPS - среди коров этой же породы с гинекологическими заболеваниями.
Выявленная ситуация свидетельствует об актуальности скрининга стад голштинского и гол-штинизированного скота, разводимого в хозяйствах Ставропольского края.
Для определения причин появления мутант-ных аллелей в стадах молочного скота необхо-
дим генеалогический анализ выявления путей передачи генетического груза.
Одним из основных методических подходов контроля распространения мутаций, обусловливающих наследственные дефекты и постепенное их элиминирование из племенных стад, является системная организация в проведении скрининговых работ, которая позволит, прежде всего, оценить генетическую ситуацию в каждом хозяйстве, провести целенаправленный подбор родительских пар для получения потомства, лишённого генетических дефектов, установить причину нарушений функции воспроизводства коров. Такой подход позволит осуществлять идентификацию генетических дефектов в течение очень короткого периода времени, определить статус животных на носительство наследственных аномалий, получить информацию о их распространении в стадах.
С учетом количества животных, подлежащих ДНК-диагностике, для каждого хозяйства определяется оптимальное поголовье для проведения скрининговых работ по выявлению генетических дефектов (табл. 2).
Таблица 2 - Группы животных, подлежащих ДНК-диагностике наследственных заболеваний
(для племенных хозяйств)
Группа животных Всего голов Подлежат ДНК-диагностике Примечание
n n %
Быки-производители 4 4 100 В случаях отсутствия данных о генотипиро-вании
Коровы селекционного ядра (высокопродуктивные) 500 150 30 С учетом ротации
Первотелки 400 200-280 50-70 С учетом ротации
Коровы с проблемами воспроизводства: аборт 20 10 50
гинекологические заболевания 30 15 50 В случаях превышения нормы
рождение мертвых телят 10 10 100
рождение уродов 6 6 100
Системный скрининг обеспечивает: высокую информативность, возможность использования любого исходного биоматериала (кровь, сперма, кожа) для проведения генодиагностики в раннем возрасте независимо от пола и физиологического состояния животных, а также длительность хранения образцов при низких температурах; а высокая производительность метода (50 и более голов в день) - минимальную стоимость работ при ее проведении.
Благодаря фундаментальным достижениям в биотехнологии генетические факторы в настоящее время используются в решении вопросов не только при прогнозе селекционной перспективности сельскохозяйственных животных, но и при оценке их генетического благополучия, являющегося одним из основных факторов экономической составляющей животноводческой отрасли.
Сложность ситуации заключается в том, что основная часть врожденных дефектов не имеет клинического проявления в течение всей жизни животного, кроме того, зачастую носителями наследственного дефекта являются высокопродуктивные и, как правило, широко используемые в селекционном процессе животные. В этой связи значительная роль отводится организации и проведению скрининговых работ по выявлению генетически наследуемых заболеваний.
Одним из ключевых элементов по выявлению наследственных аномалий является организация и проведение системного генетического скрининга. Что дает возможность определить статус племенных животных на носительство наследственных дефектов, контроля их распространения, разработать программы, направленные на их элиминацию как в стадах, так и в хозяйствах в целом.
Проведение ДНК-мониторинга показало отсутствие генетических аномалий у племенных коров айрширской породы, имеющих проблемы с воспроизводством, и наличие генетических мутаций CV (комплексный порок позвоночника, CVM), BL (дефицит лейкоцитарной адгезии, BLAD), дефицит уридинмонофосфатсинтетазы (DUMPS) у коров черно-пестрой и голштинской пород с функциональными нарушениями воспроизводства, с частотой встречаемости от 4,5 до 6,3 %.
Системная организация скрининговых работ позволяет осуществлять идентификацию летальных генетических дефектов в воспроизводительной части стада (быки-производители, коровы селекционного ядра, первотелки) до случной компании. Такой подход обеспечивает участие в селекционном процессе только тех животных, которые не имеют генетического груза.
Литература
1. Роль ДНК-диагностики в контроле и элиминации рецессивных наследственных аномалий у сельскохозяйственного животного / Н. А. Зиновьева, Е. А. Гладырь, О. В. Костюнина [и др.] // Достижения науки и техники АПК. 2012. № 11. С. 37-40.
2. Online Mendelian inheritance in animals [Электронный ресурс]. URL: http://omia. angis.org.au/home.
3. Моногенные наследственные дефекты и их роль в воспроизводстве / Н. А. Зиновьева, Н. И. Стрекозов, Г. В. Ескин [и др.] // Животноводство России. 2015. № 6. С. 3031.
4. ДНК-диагностика наследственных заболеваний быков-производителей РУП «Витебское племпредприятие» по гену CVM / А. В. Вишневец, Р. В. Бекиш, Ж. В. Виш-невец, В. К. Смунева // Ученые записки учреждения образования «Витебская ордена «Знак почета»: ГАВетМ. 2013. Т. 49, вып. 2, ч. 2. С. 13-17.
5. Schutz E., Scharfenstein M., Brenig B. Implication of complex vertebral malformation and bovine leukocyte adhesion deficiency DNA-based Testing on disease frequency in the Holstein population // J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91. P. 4854-4859.
6. Missense mutation in the bovine SLC35A3 gene, encoding a UDP-N- acetylglucosamine transporter, causes complex vertebral
Reference
1. The role of DNA diagnostics in the control and elimination of recessive hereditary anomalies in agricultural animal / N. A. Zinovieva, E. A. Gladyr, O. V. Kostyunina [et al.] // Advances in science and technology of AIC. 2012. № 11. P. 37-40.
2. Online Mendelian inheritance in animals -[Electronic resource]. Available at: http:// omia.angis.org.au/home.
3. Monogenic hereditary defects and their role in reproduction / N. A. Zinovieva, N. I. Strekozov, G. V. Eskin [et al.] // Animal breeding of Russia. 2015. № 6. P. 30-31.
4. DNA diagnostics of hereditary diseases in servicing bulls of the Republican UnitaryEnterprise «Vitebsk breeding enterprise» for the CVM gene / A. V. Vishnevets, R. V. Bekish, Zh. V. Vishnevets, V. K. Smuneva // Scientific notes of the educational institution «Vitebsk awards» «ZnakPocheta» GAVetM. 2013. Vol. 49. Issue. 2. Part 2. P. 13-17.
5. Schutz E., Scharfenstein M., Brenig B. Implication of complex vertebral malformation and bovine leukocyte adhesion deficiency DNA-based Testing on disease frequency in the Holstein population // J. Dairy Sci. 2008. Vol. 91. P. 4854-4859.
6. Missense mutation in the bovine SLC35A3 gene, encoding a UDP-N-acetylglucosamine transporter, causes complex vertebral
в
Животноводство
malformation / B. Thomsen, P. Horn, F. Panitz [et al.] // Genome Res. 2006. Vol. 16. P. 97-105.
7. Определение носителей генетических дефектов среди быков-производителей / А. Яковлев, В. Терлецкий, О.Митрофанова, Н. Дементьева // Молочное и мясное скотоводство. 2004. № 7. С. 31-32.
8. Встречаемость и значение мутации CVM у племенных животных Ленинградской области / Н. В. Дементьева, О. В. Митрова-нов, В. И. Тищенко, Е. В. Никитин // Молочное и мясное скотоводство. 2014. № 6. С. 7-9.
9. Evaluation of the inheritance of the complex vertebral malformation syndrome by breeding studies / J. S. Agerholm, О. Anderson, M. B. Almskou [et al.] // Acta Vet Scand. 2004. Vol. 45. P. 133-137.
10. Усенбеков Е. С., Жумалов К. Ж., Терлецкий В. П. Генетическая природа наследственных болезней крупного рогатого скота и молекулярно-генетические методы из диагностики // Вестник КазНУ. Серия биологическая. 2014. № 12. С. 375-378.
125
malformation / B. Thomsen, P. Horn, F. Panitz [et al.] // Genome Res. 2006. Vol. 16. P. 97-105.
7. Definition of genetic defects carriers among servicing bulls / A. Yakovlev, V. Terletsky, O. Mitrofanova, N. Dementieva // Milk and meat cattle breeding. 2004. № 7. P. 31-32.
8. The occurrence and significance of CVM mutation in breeding animals of the Leningrad Region / N. V. Dementieva, O. V. Mitrofanov, V. I. Tishchenko, E. V. Nikitin // Milk and meat cattle breeding. 2014. № 6. P. 7-9.
9. Evaluation of the inheritance of the complex vertebral malformation syndrome by breeding studies / J. S. Agerholm, O. Anderson, M. B. Almskou [et al.] // Acta Vet. Scand. 2004. Vol. 45. P. 133-137.
10. Usenbekov E. S., Zhumalov K. Zh., Terletsky V. P. Genetic nature of hereditary diseases of horned cattle and molecular genetic methods from diagnostics // Bulletin of KazSU, biological series. 2014. № 12. P. 375-378.
