CC BY
52
© Коллектив авторов, 2019
Нестерова И.В.1' 2, Митропанова М.Н.1, Чудилова Г. А.1, Ломтатидзе Л.В.1, Ковалева С.В.1
Дисрегуляция системы цитокинов на уровне мукозального и системного иммунитета, ассоциированная с нарушениями микробиоценоза верхних дыхательных путей у детей с врожденной расщелиной губы и нёба
1 ФГБОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России, 350063, г. Краснодар, Россия
2 ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов», 117198, г. Москва, Россия
Резюме. Исследованы особенности состояния микробиоценоза верхних дыхательных путей и цитокинового профиля сыворотки крови и ротовой жидкости у детей с врожденной расщелиной губы и нёба (ВРГН). Детей с ВРГН подразделяли на группы в соответствии с возрастом и этапом хирургического лечения. В исследовании использованы ротовая жидкость и сыворотка периферической крови, полученные от детей с ВРГН и условно здоровых детей соответствующего возраста. Концентрацию цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-4, ИФН-у в исследуемых средах определяли методом иммунофермент-ного анализа. Для детекции состояния микробиоценоза проведены бактериологические и серодиагностические исследования, использован метод ПЦР-диагностики. Выявлены особенности нарушений микробиоценза верхних дыхательных путей, характерные для различных возрастных групп детей с ВРГН. Установлено, что нарушения микробиоценоза ассоциированы с дифференцированными нарушениями баланса про- и противовоспалительных цитокинов в большей степени мукозального, а не системного иммунитета. Установленные изменения варьировали в зависимости от степени зрелости иммунной системы и особенностей инфекционно-воспалительного процесса, ассоциированного с нарушениями микробиоценоза верхних дыхательных путей, они негативно влияли на эффективность этапной хирургической реабилитации детей с ВРГН. При этом изменения цитокинового профиля ротовой жидкости в различные возрастные периоды у детей с ВРГН имели более выраженный характер по сравнению с профилем про- и противовоспалительных цитокинов сыворотки крови. Состояние про- и противовоспалительных цитокинов локального иммунитета в различные возрастные периоды у детей с ВРГН имело свои особенности и свидетельствовало о неадекватности противомикробной защиты на фоне различных по своей этиологии и характеру инфекционно-воспалитель-ных заболеваний верхних дыхательных путей. Полученные данные свидетельствуют о дисрегуляции системы цитокинов на уровне мукозального и системного иммунитета, что тесно сопряжено с нарушениями микробиоценоза ротовой полости, верхних дыхательных путей и особенностями клинических проявлений нетипично протекающих ин-фекционно-воспалительных процессов у детей с врожденной расщелиной губы и нёба. Обосновывается необходимость разработки новых подходов к проведению локальной таргетной иммунотерапии с целью коррекции дисрегуляторных процессов в системе цитокинов на уровне мукозального иммунитета.
Ключевые слова: дети; врожденная расщелина губы и нёба; мукозальный и системный иммунитет; цитокины; микробиоценоз
Статья поступила 26.06.2019. Принята в печать 16.08.2019.
Для цитирования: Нестерова И.В., Митропанова М.Н., Чудилова Г.А., Ломтатидзе Л.В., Ковалева С.В. Дисрегуляция системы цитокинов на уровне мукозального и системного иммунитета, ассоциированная с нарушениями микробиоценоза верхних дыхательных путей у детей с врожденной расщелиной губы и нёба. Иммунология. 2019; 40 (5): 62-71. 10.24411/0206-4952-2019-15007.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для корреспонденции
Нестерова Ирина Вадимовна -доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник отдела клинической и экспериментальной иммунологии и молекулярной биологии Центральной научно-исследовательской лаборатории, профессор кафедры аллергологии и иммунологии факультета непрерывного медицинского образования Медицинского института ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов», Москва, Россия E-mail: inesterova1@yandex.ru http://orcid.org/0000-0002-5339-4504
Nesterova I.V.1 2, Mitropanova M.N.1, Chudilova G.A.1, Lomtatidze L.V.1, Kovaleva S.V.1
Dysregulation of the cytokine system at the level of mucosal and systemic immunity associated with impaired microbiocenosis of the upper respiratory tract in children with congenital cleft lip and palate
1 Kuban State Medical University, Ministry of Health of Russian Federation, 350063, Krasnodar, Russia
2 Peoples' Friendship University of Russia (RUDN University), 117198, Moscow, Russia
Abstract. The study of the peculiarities of the microbiocenosis of the upper respiratory tract and cytokine profile of serum and oral fluid in children with congenital cleft lip and palate (CCLP). Children with CCLP were divided into groups according to age and stage of surgical treatment. In study we used oral fluid and peripheral blood serum obtained from children with CCLP and healthy children of appropriate age. The concentration of cytokines IL-1p, IL-6, IL-17, IL-4, IFN-y was determined by enzyme immunoassay. For the detection of the state of microbiocenosis, bacteriological and serodiagnostic studies, the method of PCR diagnostics were carried out. The features of violations of the upper respiratory tract microbiota, characteristic of different age groups of children with CCLP, are revealed. It has been established that microbiocenosis disorders are associated with differentiated imbalances of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines to a greater degree of mucosal than systemic immunity. The established changes varied depending on the degree of maturity of the immune system and the characteristics of the infectious inflammatory process associated with impaired microbiocenosis of the upper respiratory tract, and may also affect the effectiveness of the staged surgical rehabilitation of children in the CCLP. It was noted that the changes in the cytokine profile of the oral fluid in different age periods in children with CCLP were more pronounced compared to the profile of pro- and anti-inflammatory cytokines in the serum. The state of pro-and anti-inflammatory cytokines of local immunity at different age periods in children with high CCLP had its own characteristics and indicated inadequate antimicrobial protection against the background of infectious and inflammatory diseases of the upper respiratory tract, different in their etiology and nature. The data indicate dysregulation of the cytokine system at the level muco-sal and systemic immunity, which is closely associated with violations microbiocenosis upper respiratory tract and clinical manifestations of atypical flowing infectious and inflammatory processes in children with congenital cleft lip and palate. The obtained data substantiate the need to develop new approaches to the conduct of local target immunotherapy for correction the cytokine system at the level of mucosal immunity.
Keywords: children; congenital cleft lip and palate; mucosal and systemic immunity; cytokines; microbiocenosis
Received 26.06.2019. Accepted 16.08.2019.
For citation: Nesterova I.V., Mitropanova M.N., Chudilova G.A., Lomtatidze L.V., Kovaleva S.V. Dysregulation of the cytokine system at the level of mucosal and systemic immunity associated with impaired microbiocenosis of the upper respiratory tract in children with congenital cleft lip and palate. Immunologiya. 2019; 40 (5): 62-71. doi: 10.24411/0206-4952-2019-15007.
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
For correspondence
Nesterova Irina V. - MD, PhD, Professor, Chief Researcher, Department of Clinical and Experimental Immunology and Molecular Biology of Central Scientific Research Laboratory, Professor of Department of Allergology and Immunology of Faculty of Continuing Medical Education of Medical Institute, Peoples' Friendship University of Russia (RUDN University), Moscow, Russia E-mail: inesterova1@yandex.ru http://orcid.org/0000-0002-5339-4504
Введение
Дети с врожденной расщелиной губы и нёба (ВРГН) в различном возрасте нуждаются в проведении пошаговых хирургических реконструктивных операций. Достаточно часто своевременное хирургическое лечение бывает отсрочено и может заканчиваться гнойными осложнениями, длительным заживлением операционной раны, что требует массивной антибактериальной
терапии. Это обусловлено, с одной стороны, анатомо-топографическими особенностями (дефектами верхней губы, нёба и т. д.), облегчающими проникновение патогенной микрофлоры и приводящими к нарушению микробиоценоза слизистых ротовой полости и носа. С другой стороны, частые инфекционно-воспалитель-ные процессы у детей с ВРГН также связаны с нарушениями функционирования иммунной системы [1]. Ранее
нами было показано, что дети с ВРГН иммунокомпро-метированы и с высокой степенью частоты страдают острыми вирусными, бактериальными, грибковыми и микст-инфекциями респираторного тракта и ЛОР-органов [2-4]. Так, показано, что на протяжении двух и более лет дети переносили 10 и более эпизодов ОРВИ в год, неосложненных и осложненных присоединением бактериальных инфекций, при этом продолжительность острого периода варьировала от 10 до 14 и более дней, что является клиническими критериями иммуноком-прометированности ребенка. Наблюдаемая недостаточность функционирования иммунной системы у данной группы пациентов к тому же усугубляется возрастными периодами становления иммунной системы, что совпадает со временем проведения различных этапов хирургической реабилитации.
В настоящее время неоспорим тот факт, что оценка цитокинового профиля является современным диагностическим подходом, позволяющим получить объективную информацию о напряженности, своевременности и/или корректности включения механизмов противоми-кробной иммунной защиты. Известно, что цитокины, режиссирующие жизненный цикл и выживаемость клеток иммунной системы, их дифференцировку и функциональную активность, служат организаторами и регуляторами единой защитной реакции на местном и на системном уровне, держа под контролем процессы регенерации поврежденных тканей. Накапливаясь в очаге воспаления, они оказывают как прямое, так и опосредованное влияние на работу почти всех клеток иммунной системы, включая гранулоциты, макрофаги, Ти В-лимфоциты, фибробласты, а также клетки эндотелия и эпителия [5].
В то же время исследование особенностей состояния микробиоценоза верхних дыхательных путей в различные возрастные периоды у детей с ВРГН с одномоментной оценкой цитокинового профиля мукозального и системного иммунитета до настоящего времени не проводилась, что, с нашей точки зрения, представляет определенный интерес.
Цель исследования - уточнить особенности нарушений системы цитокинов на уровне мукозального и системного иммунитета и их ассоциированность с вариантами нарушений микробиоценоза при нетипично протекающих инфекционно-воспалительных заболеваниях слизистой ротовой полости и верхних дыхательных путей у детей с врожденной расщелиной губы и верхнего нёба в различные возрастные периоды.
Материал и методы
В исследовании использован биологический материал (ротовая жидкость, сыворотка периферической крови), полученный от 80 детей с ВРГН и 40 условно здоровых детей. Дети с ВРГН были разделены на группы в соответствии с возрастом и этапом реабилитации: 1-ю группу составили 20 детей в возрасте от 0 до 1 года до хирургической реабилитации; 2-ю группу составили 20 детей от 1 года до 3 лет на этапе подготовки
к велопластике или ранней уранопластике; в 3-ю группу вошли 20 детей 4-6 лет - поздняя уранопластика, ор-тодонтическая реабилитация; 4-ю группу составили 20 детей от 7 до 12 лет ранняя аутоостеопластика, удаление временных и постоянных зубов по ортодонтическим показаниям, компактостеотомия. Группы сравнения составили условно здоровые дети соответствующих возрастных диапазонов (по 10 человек в каждой группе).
Ротовую жидкость (РЖ) получали без стимуляции, в утренние часы, 10-11 ч (время максимальной секреции), через 10-15 мин после полоскания питьевой водой в 2 пробирки типа эппендорф (объемом 1,5 мл), по 1 мл в каждую с помощью одноразовой пластиковой пипетки Пастера. Затем РЖ центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную часть цен-трифугата отбирали в чистые пробирки типа эппендорф и хранили при температуре -30 °С. Периферическую кровь (ПК) центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин, надосадочную часть центрифугата отбирали в пробирки типа эппендорф и хранили при температуре -30 °С.
Концентрацию цитокинов ИЛ-Щ ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-4, ИФН-у определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на анализаторе LabSystems Multiskan Ascent (Финляндия) с использованием соответствующих тест-систем (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). С целью выявления этиологии инфекций ротовой полости и верхних дыхательных путей всем детям c ВРГН проведены бактериологические, серодиагностические исследования и ПЦР-диагностика.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерных программ Microsoft Excel 2016, StatPlus 2009 с применением непараметрических тестов Вилкоксона и Манна-Уитни. Результаты представляли в виде медианы (верхний и нижний квартиль) (Me [Q1; Q3]). Различия определяли значимыми при p < 0,05.
Результаты и обсуждение
В ходе проведенного исследования было выявлено, что каждая исследуемая группа детей с ВРГН в зависимости от возраста и этапа реабилитации имела свой характерный набор причинно-значимых этиологических факторов, приводящих к нарушениям микробиоценоза ротовой полости и верхних дыхательных путей.
Так, у детей с ВРГН в 1-й группе (от 0 до 12 мес) часто отмечалась вирусная инфекция (острый герпетический стоматит), сопровождающаяся повышением температуры, афтозными высыпаниями на слизистой оболочке полости рта, грибковыми стоматитами, воспалением десен. Помимо детекции различных герпес-вирусов (ВПГ I, ВЭБ, ЦМВ, ВГЧ VI) у данной группы детей микробный пейзаж носоглотки был представлен в 100% случаев монокультурами, из них в 30% случаев Candida albicans и в 70% случаев условно-патогенными бактериями с преобладанием Streptococcus viridans, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumonia, Enterococcus faecium (табл. 1).
У детей 2-й группы (1-3 года) на фоне физиологического воспаления слизистой десен при прорезывании временных зубов отмечалось снижение противоин-фекционной резистентности, связанной с постоянной вирусной нагрузкой (персистенция респираторных и герпетических вирусов, повторные острые герпетические стоматиты), а также бактериальной нагрузкой, наиболее часто представленной регистрируемыми ассоциациями бактерий (Str. viridans, Str. pneumoniae, Enterococcus faecalis) - 30% случаев, а также в 70% случаев монокультурами преимущественно бактерий Ent. du-rans, Ent. faecium, S. epidermidis, Haemophilus influenza и в 20% случаев Candida albicans при обилии мягкого зубного налета, а также вне острого периода клинических проявлений инфекционно-воспалительных заболеваний (см. табл. 1).
Для детей 4-6 лет (3-я группа) характерны хронические герпетические стоматиты разной степени тяжести, афтозные высыпания на слизистой оболочке полости рта, катаральное воспаление десен. Следует отметить, что в этот период появляется сменный прикус (смена временных зубов на постоянные), слизистая десен находится в состоянии физиологического воспаления, что в свою очередь облегчает проникновение вирусной и бактериальной инфекций. На этом фоне активно появляются кариес и осложненный кариес зубов. Наличие в полости рта несанированных зубов увеличивает микст-инфицирование до 70% случаев с колонизацией ассоциациями Str. viridans, Str. pneumoniae, Ent. durans, Haemophilus influenzae, Haemophilus parainfluenzae и в 30% случаев моноинфицирование с большей частотой встречаемости типичной бактериальной флоры (S. aureus) (см. табл. 1). Дети этого возраста с ВРГН болели детскими инфекциями, которые проявлялись воспалением в полости рта (корь, ветряная оспа, скарлатина и т. д.), - эрозиями, афтами, язвами, рецидивирующими бактериальными стоматитами, катаральными и гнойными тонзиллитами, острыми и хроническими ринитами и синуситами.
В 4-й группе (7-12 лет) отмечалась склонность к пролиферативным и гипертрофическим воспалительным процессам в области десневого сосочка и маргинальной десны (отечно-воспалительные и фиброзные формы гипертрофического гингивита), а также аллергические риниты, аллергические стоматиты. В этиологии инфекционно-воспалительных заболеваний, проявляющихся в данной возрастной группе у большинства детей, несмотря на ранее проведенную хирургическую реабилитацию, преобладала смешанная бактериальная флора (85% случаев) в различных сочетаниях с преимущественной представленностью S. aureus и S. epidermidis, а также Str. viridans и Ent. durans (см. табл. 1).
Выбор спектра про- и противовоспалительных цито-кинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-4, ИФН-у, для данного исследования был не случаен, так как он, с нашей точки зрения, позволял выявить баланс синергистов и антагонистов и оценить адекватность их реагирования на инфекционно-воспалительный процесс и зависимость
Таблица 1. Микробный пейзаж носоглотки у детей с врожденной расщелиной губы и нёба
Вид Частота встречаемости
микроорганизмов в группах, %
« ^ se - — H ^ H
- II 2 ® £ 11 7 S 4 ЧО II T S 4 S 2 II ^
Candida albicans 30 20 5 5
Candida krusei 5 15 5
Enterococcus durans 5 15 25 20
Enterococcus faecalis 10 20 20 10
Enterococcus faecium 10 10 15 10
Haemophilus influenzae - 10 15 5
Haemophilus parainfluenzae - 5 5 10
Klebsiella pneumoniae 10 5 15 10
Staphylococcus aureus 5 10 20 30
Staphylococcus epidermidis 10 15 10 35
Streptococcus pneumoniae 5 15 10 5
Streptococcus viridans 15 25 15 20
от этиологических факторов, тяжести и распространенности патологического процесса [6-8].
Известно, что главной формой секреторного ИЛ-1 является провоспалительный ИЛ-1Р, интенсивность синтеза которого прямо пропорциональна концентрации индуктора [9]. Влияя на терморегуляцию и синтез гормонов, ИЛ-1Р индуцирует синтез белков острой фазы, цитокинов провоспалительного каскада, усиливает уровень антиген-презентации и уровень экспрессии молекул адгезии на эндотелиоцитах, проявляет ан-тикоагулянтную активность, активируя гемопоэз.
ИЛ-6 синтезируется под влиянием попадающих в организм вирусов, бактерий и их продуктов, являясь ранним индуцибельным цитокином, обладает парадоксальной дуальной природой воздействия на направление и исход иммунного ответа. Праймируя клетки врожденного иммунитета, усиливая функциональную активность фибробластов и остеокластов, данный цитокин участвует и в активации и пролиферации В-лимфоцитов, потенцируя таким образом антителогенез [10]. Обладая как про-, так и противовоспалительной функцией, ИЛ-6 способен переводить острое воспаление в хроническое.
ИЛ-17 синтезируется широким спектром иммуно-компетентных клеток, мишенями для данного цитокина являются кератиноциты, синовиоциты, фибробласты, эпителиальные клетки, активация которых сопровождается индукцией синтеза каскада цитокинов, усиливающих пролиферацию ТЫ7-клеток и рекрутирование нейтрофильных гранулоцитов в зону воспаления [11].
ИФН-у играет важную роль в дифференцировке ТЫ, сдвигая баланс в сторону активации клеточного пути иммунного ответа [12]. Это важнейший цитокин, регулирующий функциональную активность клеток, участвующих в защите организма от инфекций: активирует макрофаги, НК-клетки, усиливает экспрессию антигенов ИЬЛ II класса, регулирует синтез иммуноглобулинов. Но следует
отметить, что ИФН-у, синтезируемый Т-регуляторными лимфоцитами, подавляет пролиферацию Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы для ИФН-у [13].
ИЛ-4 является регулятором, предопределяющим запуск и контроль адаптивного иммунного ответа по гуморальному пути, и реакций клеточного иммунитета, подавляя опосредованную активацию клеток и препятствуя развитию воспалительно-деструктивных процессов в тканях [14, 15]. ИЛ-4, продуцируемый !Ъ2, базофилами, тучными клетками, цитотоксическими лимфоцитами, эозинофилами, активирует пролиферацию и дифференцировку В-клеток, контролируя их переключение на определенный класс иммуноглобулинов.
Современное представление о том, что саливар-ные критерии отражают не только местные, но и общие нарушения гомеостаза, вызвало особое внимание к изучению мукозального иммунитета. В отличие от периферической крови, иммунологические показатели ротовой жидкости (РЖ) из инфекционного очага являются зеркалом местного воспаления [8] и имеют диагностически значимые изменения при патологических процессах, что особенно актуально для детей с ВРГН при подготовке их к этапам реабилитации.
Сравнительный анализ уровней ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-4, ИЛ-17 и ИФН-у ПК и РЖ детей позволил получить динамику изучаемых параметров и выйти на диагностически значимые цитокиновые профили детей с ВРГН.
Так, оценка уровня цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-4, ИЛ-17 и ИФН-у в сыворотке ПК условно здоровых детей не выявила статистически значимых различий для групп различного возраста (р > 0,05). В частности, выявлено различное содержание ИЛ-4: минимальное
3
12 10
4 8
I 6
10,31
11,26*
9,82
9,32
Э
45 40 35 , 30 ! 25 ! 20 15 10 5 0
8 44/ &35...... ;5,95 6,1 | ^■¡8 74"" | - —« -1 К 9,12 1 6,43
4,25..... ' 4,61
3,33 1 8 4,21 4,22*
2,29
0-1 год 1-3 года 4-6 лет 7-12 лет
<
'.......•< 34,31*
/ .............^2.5:?.*.................< > 26,14*
\ 18,65*
14,27* /15,27*
10,6 16,74
/ 6,2 5,4 5,3 6,2 '11
0,81 --А - д 1 0,1
0-1 год 1-3 года 4-6 0,92 лет -? 7-12 лет
-0-ИЛ-1Р
■ИЛ-6 -Д-- ИЛ-17
ИЛ-4 --Ж" ИФН-у
Рис. 1. Уровень цитокинов в периферической крови (А) и ротовой жидкости (Б) условно здоровых детей Здесь и на рис. 2: * - р < 0,05 достоверность различий.
в 1-й группе у детей от 0 до 1 года - 1,80 [1,65; 2,72] пкг/мл, максимальное у детей младшего возраста (1-3 года) - 11,26 [7,53; 13,09] пкг/мл, низкое у детей 4-6 лет - 2,29 [1,91; 3,79] пкг/мл и у детей 7-12 лет -4,22 [2,69; 4,62] пкг/мл (рис. 1А).
Оценка уровня изучаемых цитокинов, определяемых в РЖ у условно здоровых детей из групп сравнения, позволила установить динамику снижения с увеличением возраста (рис. 1Б). При этом показано, что содержание исследуемых цитокинов в РЖ не коррелирует с их уровнем в крови: уровни ИЛ-1Р, ИЛ-4 и ИФН-у, определяемые в РЖ, оказались выше, а ИЛ-17 и ИЛ-6 ниже, чем соответствующие концентрации в сыворотке ПК. Так, уровень ИЛ-1Р в РЖ был выше количества, определяемого в сыворотке ПК: в группе детей 0-1 года в 12,42 раза - 41 [30,66; 72,35] пкг/мл, в группе от 1 года до 3 лет - в 8,12 раз - 34,31 [27,25; 36,13] пкг/мл, в группе 4-6 лет - в 11 раз - 25,20 [15,53; 27,88] пкг/мл и в группе 7-12 лет - в 6,19 - 26,14 [20,32; 32,60] пкг/мл. Выявленная разница концентраций исследуемых цитокинов в различных биологических средах может свидетельствовать о местном характере синтеза на фоне физиологического воспаления слизистой десен при прорезывании временных зубов или их смене на постоянные в определенные возрастные периоды.
Следует отметить, что ИЛ-4 и ИФН-у являются ключевыми факторами, определяющими индукцию экспрессии секреторного компонента ^А, играющего важную роль в обеспечении противоинфекционного иммунитета. Интересен факт, что максимальный уровень регуляторного ИФН-у в РЖ отмечался в группе сравнения 0-1 год (32,0 [18,1; 38,5] пкг/мл), и был выше определяемого количества в сыворотке ПК в 3,36 раза (р < 0,05). В РЖ групп сравнения детей 1-3, 4-6 и 7-12 лет уровень ИФН-у снижался, но оставался в 2 раза выше, чем в ПК. При анализе содержания ИЛ-4 в сыворотке ПК и РЖ в разных возрастных группах сравнения выявлены одинаковые закономерности: повышение в возрастной с 1-3 лет, снижение к 4-6 годам и сохранение этого уровня до 7-12 лет, при этом концентрация данного цитокина оставалась выше в РЖ (р < 0,05) для всех возрастных групп (рис. 1, табл. 2).
Оценка ИЛ-17 выявила статистически не отличающиеся значения его уровня в РЖ и сыворотке ПК у условно здоровых детей 0-1 года (р > 0,05), снижение концентрации локального ИЛ-17 с увеличением возраста до следовых количеств в группе детей 7-12 лет, при этом уровень ИЛ-17 в ПК не менялся. Также выявлено, что уровень ИЛ-6 в ПК всех возрастных группах сравнения не отличался, а в РЖ присутствовал в очень низких концентрациях (см. табл. 2).
Сравнительная межгрупповая оценка цитокино-вого профиля в сыворотке ПК у детей разного возраста с ВРГН, находящихся на различных этапах реабилитации, продемонстрировала иной характер изменений.
Показано, что уровни сывороточных ИЛ-1Р, ИЛ-6 у детей с ВРГН в различные возрастные периоды сохра-
Таблица 2. Цитокиновый профиль у детей с врожденной расщелиной губы и нёба в сыворотке крови и ротовой жидкости,
Ме ^ 63]
Показатель Сыворотка крови Ротовая жидкость
группа сравнения исследуемая группа группа сравнения исследуемая группа
ИЛ-1Р пг/мл пг/мл пг/мл пг/мл
0-1 год 3,33 [2,25; 3,58] 4,15 [3,68; 4,86]* 41,00 [30,66; 72,35] 188,95 [71,00; 306,9]л
1-3 года 4,21 [3,30; 4,45] 3,80 [3,38; 4,65] 34,31 [27,25; 36,13] 42,13 [30,03; 57,79]
4-6 лет 4,25 [4,18; 4,36] 4,10 [2,92; 6,81] 25,20 [15,53; 27,88] 72,44 [42,13; 73,45]л
7-12 лет 4,61 [4,39; 4,83] 3,69 [2,92; 4,24]* 26,14 [20,32; 32,60] 41,92 [38,00; 45,84]*
ИФН-у пг/мл пг/мл пг/мл пг/мл
0-1 год 8,81 [8,67; 9,01] 16,46 [12,82; 18,32]* 32,00 [18,10; 38,50] 2,00 [1,20; 2,80]л
1-3 года 8,35 [7,81; 8,93] 14,47 [11,25; 19,78]* 16,74 [5,21; 17,30] 12,7 [8,11; 17,50]
4-6 лет 8,74 [8,06; 9,17] 11,56 [10,20; 15,60]* 14,27 [12,75; 15,80] 5,36 [4,07; 5,82]л
7-12 лет 9,32 [8,90; 9,55] 11,47 [4,95; 18,00] 15,27 [15,34; 27,78] 57,11 [37,15; 65,13]л
ИЛ-17 пг/мл пг/мл пг/мл пг/мл
0-1 год 8,44 [5,97; 10,01] 17,44 [15,25; 20,08]* 6,2 [3,20; 8,30] 44,10 [33,00; 45,19]л
1-3 года 10,31 [9,18; 12,27] 17,48 [11,97; 18,04] 5,4 [3,80; 5,90] 21,8 [0,01; 37,80]
4-6 лет 9,82 [9,03; 10,22] 12,29 [10,77; 15,29]* 1,80 [1,50; 2,50] 14,18 [0,21; 33,64]
7-12 лет 9,12 [7,59; 12,62] 5,14 [3,63; 6,32]* 0,10 [0,08; 1,00] 0,01 [0,01; 10,60]л
ИЛ-6 пг/мл пг/мл пг/мл пг/мл
0-1 год 5,10 [3,75; 5,39] 5,82 [5,37; 6,18] 0,81 [0; 2,36] 6,86 [3,84; 7,87]л
1-3 года 5,95 [5,08; 6,18] 5,63 [5,05; 6,41] 2,63 [2,41; 2,85] 3,80 [1,37; 4,32]
4-6 лет 6,10 [5,67; 6,18] 2,74 [1,59; 6,13]* 0,92 [0; 1,27] 2,14 [1,37; 5,32]л
7-12 лет 6,43 [6,22; 6,67] 5,49 [4,10; 6,04]* 1,10 [0,23; 3,12] 1,58 [1,13; 3,17]
ИЛ-4 пг/мл пг/мл пг/мл пг/мл
0-1 год 1,80 [1,65; 2,72] 7,13 [4,91; 18,34]* 10,60 [4,40; 16,80] 7,09 [5,97; 8,21]
1-3 года 11,26 [7,53;13,09] 6,13 [1,74; 16,69] 18,65 [15,13; 19,14] 12,4 [7,13; 13,14]л
4-6 лет 2,29 [1,91; 3,79] 1,21 [0,41; 3,02] 5,3 [2,46; 5,42] 8,65 [6,66; 9,02]л
7-12 лет 4,22 [2,69; 4,62] 7,32 [2,71; 17,11] 6,2 [3,30; 6,43] 26,7 [14,65; 28,34]л
Примечание. * - р < 0,05 - значимость различий между показателями в сыворотке крови исследуемых групп и соответствующих групп сравнения ; л - р < 0,05 - значимость различий между показателями в ротовой жидкости исследуемых групп и соответствующих групп сравнения.
нялись на одинаковом уровне и не отличались от таковых у условно здоровых детей (см. табл. 2). При этом уровень регуляторного цитокина ИФН-у был статистически значимо повышен у детей с ВРГН по сравнению с условно здоровыми детьми в ранние возрастные периоды - на первом году жизни 16,46 [12,82; 18,32] против
8.81 [8,67; 9,01] пкг/мл в группе сравнения и в возрасте от 1 года до 3 лет - 14,47 [11,25; 19,78] против 8,35 [7,81; 8,93] пкг/мл в группе сравнения (р < 0,05) (рис. 2А). В последующие возрастные периоды у детей с ВРГН в 3-й и 4-й группах уровень ИФН-у постепенно снижался и не отличался от такового у условно здоровых детей (см. табл. 2).
Также выявлено, что уровень ИЛ-17 в сыворотке ПК у детей с ВРГН значительно выше, чем у условно здоровых детей в 1-й и во 2-й группах - 17,44 [15,25; 20,08] против 8,44 [5,97; 10,01] пкг/мл (р < 0,05) и 17,48 [11,97; 18,04] против 10,31 [9,18; 12,27] пкг/мл (р < 0,05) соответственно. Далее в возрасте 4-9 лет уровень ИЛ-17 постепенно снижался - 12,29 [10,77; 15,29] против
9.82 [9,03; 10,22] пкг/мл. В 4-й группе регистрировался уровень ИЛ-17 5,14 [3,63; 6,32], что было ниже значений в соответствующей группе сравнения 9,12 [7,59; 12,62] пкг/мл (р < 0,05) (рис. 2А).
Аналогичные, но более выраженные тенденции в отношении концентрации ИЛ-17 наблюдались на локальном уровне в РЖ при ВРГН (рис. 2Б, см. табл. 2). В частности, установлены высокие концентрации ИЛ-17 в 1-й группе - в 7,11 раза, в 3-й группе - в 7,78 раза, во 2-й группе - в 4,03 раза выше по сравнению с соответствующими параметрами возрастных групп сравнения. Наиболее высокие показатели ИЛ-17 зафиксированы в РЖ детей 1-й группы - 44,1 [33,0; 45,2] пкг/мл. При этом в 4-й группе выявлены следовые количества данного цитокина на уровне значений контроля (рис. 2Б).
Выявлено повышение уровня ИЛ-6 во всех исследуемых группах относительно групп сравнения: в 1-й группе - 6,86 [3,84; 7,87] пкг/мл, во 2-й группе - 3,8 [1,37; 4,3] пкг/мл, в 3-й группе - 2,14 [1,3; 5,3] пкг/мл, в 4-й группе - 1,58 [1,13; 3,2] пкг/мл.
Следует отметить значительное увеличение уровня ИЛ-1Р в 1-й группе - 188,95 [77,0; 306,9] пкг/мл при контрольном значении 41,0 [30,6; 72,4] пкг/мл, тогда как концентрация ИЛ-1Р у детей в 3-й группе была выше, чем в группе сравнения, всего в 2,9 раза - 72,44 [42,13; 73,45] против 25,20 [15,53; 27,88] пкг/мл, а у детей 4-й группы - в 1,6 раза - 41,92 [38; 45,84] против
Э
20 15 10 50
Э
200 180 160 140120 \ 10080 60 40 20 0
16 46 j^i---------^ Л7И8
\4,47 12,29 ...........-Ж 11,47
7,13. 6,13 ¡1__5,63 11,56 .. 7,32 4,1 5,49
5,8».......................5,14* 4J15 13,8 Т 2,74 1 3,69
1,21* 0-1 год 1-3 года 4-6 лет 7-12 лет
<¡>188,95
44,1
7,09
6,86; 2
72,44*
................
_
8,65
21,8
•Ж4" >
J"~.......5,3£.*Л
0-1 год -0-ИЛ-1Р -|
.,8* 1-3 года
-ИЛ-6 -Д-ИЛ-17
14,18
2,14* 4-6 лет
57,11*
41,92*
26,7*
1,58*
'0,01* 7-12 лет
ИЛ-4 --Ж--ИФН-У
Рис. 2. Уровень цитокинов в периферической крови (А) и ротовой жидкости (Б) детей с врожденной расщелиной губы и нёба
26,14 [20,32; 32,60] пкг/мл. При этом уровень ИЛ-1Р во 2-й группе имел только тенденцию к повышению -42,13 [30,0; 57,8] против 34,3 [27,3; 36,1] пкг/мл в группе сравнения (р > 0,05).
Анализ содержания ИФН-у позволил выявить следующую динамику: значительное снижение его уровня у детей 1-й и 3-й групп, повышение у детей 4-й группы и отсутствие достоверности различий изучаемого показателя от соответствующей группы сравнения у детей 2-й группы с ВРГН.
В то же время отмечено снижение концентрации противовоспалительного ИЛ-4 в 1-й (р > 0,05) и в 3-й группе (р < 0,05), а также ее значительное повышение в 4-й группе (в 4,3 раза) - до 26,7 [14,65; 28,34] против 6,2 [3,3; 6,43] пкг/мл в группе сравнения (рис. 2Б).
Последующий сравнительный анализ полученных результатов позволил выявить характерные особенности ци-токиновых профилей ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-4, ИФН-у у детей с ВРГН в разные периоды реабилитации, отражающие состояние системного и локального иммунитета с учетом инфекционно-воспалительного процесса, характерного для каждой возрастной группы. Нами установлено, что тестирование исследуемого спектра цитокинов в РЖ по сравнению с ПК оказалось наиболее информативным и диагностически значимым для ВРГН.
Так, в 1-й группе (от 0 до 12 мес) выявлено самое высокое содержание триады провоспалительных цито-
кинов ИЛ-ip, ИЛ-17 и ИЛ-6 по сравнению с другими исследуемыми группами детей с ВРГН. При этом уровень ИЛ-ip составил 460%, уровень ИЛ-17 - 711,29%, уровень ИЛ-6 - 846,9% по отношению к соответствующим показателям в группе сравнения (в соотношении 1:1,6:1,8) при уровнях ИЛ-4 и ИФН-у ниже соответствующих показателей в группе сравнения (рис. 3А), что свидетельствовало о высокой степени провоспалитель-ной активности локальной цитокиновой сети и включенности механизмов защиты врожденного иммунитета слизистых ротовой полости на фоне нарушения микро-биоты ротовой полости с превалированием Candida albicans. Отмечена концентрационная поляризация синер-гистов ИЛ-1Р, ИЛ-17, ИЛ-6 в сторону ИЛ-17 и более выраженная - в сторону ИЛ-6.
У детей с ВРГН от 1 года до 3 лет (2-я группа) установлена достоверно значимая гиперпродукция ИЛ-17 (403% по отношению к соответствующему показателю в группе сравнения) в РЖ на фоне статистически не отличающихся от контроля значений ИЛ-4, ИЛ-1Р, ИЛ-6 и ИФН-у (рис. 3Б), что свидетельствовало об отсутствии адекватного включения механизмов защиты слизистых и гиперполяризации иммунного ответа в сторону рекрутирования нейтрофильных гранулоцитов, раскручивающих колесо острого воспаления на фоне частой выявляемости ассоциаций бактерий (Str. viridans, Str. pneumoniae, Ent. faecalis).
К 4-6 годам у детей с ВРГН (3-я группа) в РЖ наблюдалась усиленная индукция синтеза провоспали-тельной триады цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-17 и ИЛ-6, как и у детей 1-й группы, но со значительной поляризацией сторону ИЛ-17 (ИЛ-1Р - 287,76% от уровня в группе сравнения, ИЛ-17 - 787,8%, ИЛ-6 - 232,6% соответственно), что можно выразить соотношением 1,2:3,4:1. При этом было отмечено, что ИЛ-4, находящийся как в 1-й, так и во 2-й группах на уровне значений 66% от такового у условно здоровых детей, в 3-й группе составил 160% от соответствующего показателя в группе сравнения на фоне низкой концентрации ИФН-у (37,5% от соответствующего показателя в группе сравнения), что, возможно, свидетельствует о компенсаторном повышенном включении гуморальных механизмов защиты адаптивного иммунитета при отсутствии полноценности запуска адаптивного иммунного ответа по клеточному пути. Следует отметить, что в этот возрастной период повышение уровня ИЛ-6 в тканях ротовой полости потенцирует увеличение количества плазматических клеток, синтезирующих IgG, иммунные комплексы которого, активируя систему комплемента, способствуют пролонгированию и усугублению воспаления в полости рта, особенно при ВРГН, на фоне часто повторяющихся респираторных инфекций и устойчивой ассоциацией бактерий в ротоглотке Str. viridans, Ent. durans и S. aureus.
В 7-12 лет (4-я группа) у детей с ВРГН цитокино-вый профиль в РЖ характеризовался значительным приростом содержания ключевых цитокинов, регулирующих клеточный - ИФН-у (374% от соответствую-
щего показателя в группе сравнения) и гуморальный -ИЛ-4 (430% от соответствующего показателя в группе сравнения) пути адаптивного иммунитета, которые находились в равном соотношении (1:1,1) на фоне повышенных концентраций ИЛ-ф (160% от соответствующего показателя в группе сравнения) и ИЛ-6 (146% от соответствующего показателя в группе сравнения) при следовых количествах ИЛ-17 (10% от соответствующего показателя в группе сравнения) (рис. 3Г). Выявленные нами «весы» антагонистов ИФН-у и ИЛ-4 при ВРГН, по всей видимости, связаны с гипервключением в этот возрастной период регуляторных механизмов и клеточного, и гуморального пути адаптивного иммунитета, что также связано с высокой частотой вирусных респираторных инфекций и обострений хронических заболеваний респираторного тракта и ЛОР-органов в сочетании с нарушениями микробиоты ротоглотки в виде преобладания ассоциаций бактериальных культур S. аыгеш и S. epidermidis. Конкурентное вирусно-бактериальное взаимодействие обусловливает повышенную индукцию синтеза ИФН-у и ИЛ-4, приводящую к повышенному рекрутированию всех участников про-
тивоинфекционной защиты на локальном уровне, что в свою очередь впоследствии может приводить к проли-феративным и гипертрофическим воспалительным процессам, фиброзным формам гипертрофического гингивита, способствовать развитию аллергического ринита и аллергического стоматита, характерных для данной группы пациентов.
Заключение
Проведенное нами комплексное исследование позволило выявить особенности нарушений микро-биоценза ротовой полости и верхних дыхательных путей, характерные для различных возрастных групп детей с ВРГН. Установлено, что особенности нарушений микробиоценоза ассоциированы с дифференцированными нарушениями баланса про- и противовоспалительных цитокинов мукозального и системного иммунитета. Установленные изменения варьировали в зависимости от степени зрелости иммунной системы и особенностей инфекционно-воспалительного процесса, ассоциированного с нарушениями микробиоценоза ротовой полости и верхних дыхательных путей, что может нега-
Э
1000
ИЛ-lß
ИЛ-4
ИФН-у
ИЛ-6
ИЛ-17
Группа сравнения 0-1 год ВРГН 0-1 год
ИЛ-lß
ИЛ-4
ИФН-у
ИЛ-6 w ИЛ-17
Группа сравнения 4-6 лет О ВРГН 4-6 лет
500
ИЛ-ф
ИЛ-4
ИФН-у
ИЛ-6
ИЛ-17
Группа сравнения 1-3 года Д ВРГН 1-3 года
ИЛ-ф
ИЛ-4
ИФН-у
ИЛ-6
ИЛ-17
Группа сравнения 7-12 лет О ВРГН 7-12 лет
Рис. 3. Цитокиновый профиль ротовой жидкости детей с врожденной расщелиной губы и нёба в различные возрастные периоды (А-Г) (% от соответствующего показателя в группе сравнения)
тивно влиять на эффективность этапной хирургической реабилитации детей с ВРГН. Отмечено, что изменения цитокинового профиля РЖ в различные возрастные периоды у детей с ВРГН имели более выраженный характер по сравнению с профилем про- и противовоспалительных цитокинов сыворотки крови. Состояние про-и противовоспалительных цитокинов локального иммунитета в различные возрастные периоды у детей с ВРГН имеет свои особенности и свидетельствует о неадекватной противомикробной защите на фоне различных по своему характеру инфекционно-воспалительных заболеваний ротовой полости и верхних дыхательных путей.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о дисрегуляции системы цитокинов на уровне мукозального и системного иммунитета, что тесно со-
■ Литература
1. Мусаходжаева Д. А., Иноятов А.Ш., Якубов Ш.Н. Некоторые показатели иммунной системы детей с врожденной расщелиной губы и нёба. Пробл. биол. и мед. 2011; 4 (67): 33.
2. Митропанова М.Н. Особенности функционирования иммунной системы у детей с врожденными расщелинами губы и нёба на этапах хирургического лечения. Стоматология детского возраста и профилактика. 2017; 16 (2, 61): 79-83. URL: https://elibrary.ru/item. asp?id=29206060.
3. Nesterova I.V., Kovaleva S.V., Chudilova G.A., Lomtatidze L.V, Malinovskaj V.V. The positive transformation of the phenotype, the functional activity of neutrophilic granulocytes in children with recurrent respiratory infections as treatment' results of interferon and immunomodulation therapy. In: Allergy, Asthma and Immunophysiology: Recent Advances in Understanding and Management. Medimond International Proceedings. 2015: 69-72. URL: https://repository.rudn.ru/ru/ records/article/record/8339/
4. Нестерова И.В., Ковалева С.В., Чудилова Г.А., Ломтатидзе Л.В. и др. Эффективность и безопасность препарата ВИФЕРОН® в моно- и комбинированной иммунотерапии иммунокомпромети-рованных детей с возвратными респираторными инфекциями. Фар-матека. 2017; 4 (337): 54-62. URL: https://pharmateca.ru/ru/archive/ article/34675.
5. Митропанова М.Н., Гайворонская Т.В., Любомирская Е.О. Цитокины крови у детей с врожденными расщелинами губы и нёба. Кубанский мед. науч. вестн. 2016; 4 (159): 79-81. URL: https://doi. org/10.25207/1608-6228-2016-4-79-81.
6. Попова Е.В., Семенова О.М., Красников В.Е., Ковалевский Д.А. Патогенетическая и диагностическая значимость интерлейкина-17 при хроническом посттравматическом остеомиелите нижней челюсти. Соврем. пробл. науки и образования. 2016; 2. URL: https:// science-education.ru/ru/article/view?id=24308.
пряжено с нарушениями микробиоценоза ротовой полости, верхних дыхательных путей и особенностями клинических проявлений нетипично протекающих ин-фекционно-воспалительных процессов у детей с ВРГН в различные возрастные периоды. При этом просматривается насущная необходимость в разработке новых подходов к проведению дифференцированной локальной таргетной иммунотерапии в различные возрастные периоды у детей с ВРГН с целью коррекции дис-регуляторных процессов в системе цитокинов на уровне мукозального иммунитета, что должно способствовать восстановлению нормального микробиоценоза ротовой полости и верхних дыхательных путей, а следовательно, улучшать клиническую эффективность терапии и хирургической реабилитации при нетипично протекающих инфекционно-воспалительных процессах.
7. Rawlinson A., Dalati M.H.N., Rahman S., Walsh T.F. et al. Inter-leukin-1 and IL-1 receptor antagonist in gingival crevicular fluid. J. Clin. Periodontal. 2000; 27: 738-43.
8. Kishimoto T. Interleukin-6 discovery of a pleiotropic cytokine. Arthritis Res. Ther. 2006; 8 (2): 2. doi: 10.1186/ar1969.
9. Smolen J.S., Maini R.N. Interleukin-6: a new therapeutic target. Arthritis Res. Ther. 2006; 8 (2): 5. doi: 10.1186/ar2065.
10. Костарева О.С., Габдулхаков А.Г., Коляденко И.А., Гарбер М.Б. и др. Интерлейкин-17: функциональные и структурные особенности; использование в качестве терапевтической мишени. Успехи биол. химии. 2019; 59: 393-418. URL: https://www.fbras.ru/wp-con-tent/uploads/2019/01/Kostareva_et_al.pdf.
11. Szabo S. J., Sullivan B.M., Peng S.L., Glimcher L.H. Molecular mechanisms regulating Th1 immune responses. Annu. Rev. Immunol. 2003; 21: 713-58. doi: 10.1146/annurev.immunol.21.120601.140942.
12. Wood K.J., Sawitzki B. Interferon-gamma: a crucial role in the function of induced regulatory T-cells in vivo. Trends Immunol. 2006; 27: 183-7. doi: 10.1016/j.it.2006.02.008.
13. Donati M., Berglundh T., Hytonen A.M., Hahn-Zoric M. et al. Association of the - 159 CD14 gene polymorphism and lack of association of the -308 TNFA and Q551R IL-4RA polymorphisms with severe chronic periodontitis in Swedish Caucasians. J. Clin. Periodontal. 2005; 32 (5): 474-9. doi: 10.1111/j.1600-051X.2005.00697.x.
14. Gonzales J.R., Mann M., Stelzig J., Bodeker R.H. et al. Sin-gle-nucleotide polymorphisms in the IL-4 and IL-13 promoter region in aggressive periodontitis. J. Clin. Periodontol. 2007; 34 (6): 473-9. doi: 10.1111/j.1600-051X.2007.01086.x.
15. De Freitas M.N., Imbronito A.V., Neves A.C., Nunes F.D. et al. Analysis of IL-1A (-889) and TNFA (-308) gene polymorphism in Brazilian patients with generalized aggressive periodontitis. Eur. Cytokine Netw. 2007; 18: 142-7. doi: 10.1684/ecn.2007.0100.
■ References
1. Musakhodzhaeva D.A., Inoyatov A.S., Yakubov S.N. Some indicators of the immune system of children with congenital cleft lip and palate. Problemy biologii i meditsiny. 2011; 4 (67): 33. (in Russian)
2. Mitropanova M.N. Features of the immune system in children with congenital cleft lip and palate during the stages of surgical treatment. Stomatologiya detskogo vozrasta i profilaktika. 2017; 16 (2, 61): 79-83. (in Russian)
3. Nesterova I.V., Kovaleva S.V., Chudilova G.A., Lomtatidze L.V, Malinovskaj V.V. The positive transformation of the phenotype, the functional activity of neutrophilic granulocytes in children with recurrent respiratory infections as treatment' results of interferon and immunomodulation therapy. In: Allergy, Asthma and Immunophysiology: Recent Advances in Understanding and Management. Medimond International Proceedings. 2015: 69-72. URL: https://repository.rudn.ru/ru/ records/article/record/8339/
4. Nesterova I.V., Kovaleva S.V., Chudilova G.A., Lomtatidze L.V., et al. The efficacy and safety of VIFERON® in mono- and combina-
tion immunotherapy of immunocompromised children with recurrent respiratory infections. Farmateka. 2017; 4 (337): 54-62. URL: https:// pharmateca.ru/ru/archive/article/34675. (in Russian).
5. Mitropanova M.N., Gaivoronskaya T.V., Lubomirskaya E.O. Blood cytokines among children with cleft lip and palate. Kubanskiy meditsinskiy nauchnyy vestnik. 2016; 4 (159): 79-81. URL: https://doi. org/10.25207/1608-6228-2016-4-79-81. (in Russian)
6. Popova E.V., Semenova O.M., Krasnikov V.E., Kovalevskiy D.A Pathogenetic and diagnostic significance of interleukin-17 in chronic posttraumatic osteomyelitis of the mandible. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2016; 2. URL: https://science-education.ru/ru/ar-ticle/view?id=24308. (in Russian)
7. Rawlinson A., Dalati M.H.N., Rahman S., Walsh T.F., et al. Inter-leukin-1 and IL-1 receptor antagonist in gingival crevicular fluid. J. Clin. Periodontal. 2000; 27: 738-43.
8. Kishimoto T. Interleukin-6 discovery of a pleiotropic cytokine. Arthritis Res. Ther. 2006; 8 (2): 2. doi: 10.1186/ar1969.
9. Smolen J.S., Maini R.N. Interleukin-6: a new therapeutic target. Arthritis Res. Ther. 2006; 8 (2): 5. doi: 10.1186/ar2065.
10. Kostareva O.S., Gabdulhakov A.G., Kolyadenko I.A., Garber M.B., et al. Interleukin-17: functional and structural features; use as a therapeutic target. Successes of biological chemistry. Uspekhi biologiches-koy khimii. 2019; 59: 393-418. URL: https://www.fbras.ru/wp-content/ uploads/2019/01/Kostareva_et_al.pdf. (in Russian)
11. Szabo S. J., Sullivan B.M., Peng S.L., Glimcher L.H. Molecular mechanisms regulating Th1 immune responses. Annu. Rev. Immunol. 2003; 21: 713-58. doi: 10.1146/annurev.immunol.21.120601.140942.
12. Wood K.J., Sawitzki B. Interferon-gamma: a crucial role in the function of induced regulatory T-cells in vivo. Trends Immunol. 2006; 27: 183-7. doi: 10.1016/j.it.2006.02.008.
13. Donati M., Berglundh T., Hytonen A.M., Hahn-Zoric M., et al. Association of the - 159 CD14 gene polymorphism and lack of association of the -308 TNFA and Q551R IL-4RA polymorphisms with severe chronic periodontitis in Swedish Caucasians. J. Clin. Periodontal. 2005; 32 (5): 474-9. doi: 10.1111/j.1600-051X.2005.00697.x.
14. Gonzales J.R., Mann M., Stelzig J., Bödeker R.H., et al. Sin-gle-nucleotide polymorphisms in the IL-4 and IL-13 promoter region in aggressive periodontitis. J. Clin. Periodontol. 2007; 34 (6): 473-9. doi: 10.1111/j.1600-051X.2007.01086.x.
15. De Freitas M.N., Imbronito A.V., Neves A.C., Nunes F.D., et al. Analysis of IL-1A (-889) and TNFA (-308) gene polymorphism in Brazilian patients with generalized aggressive periodontitis. Eur. Cytokine Netw. 2007; 18: 142-7. doi: 10.1684/ecn.2007.0100.
