Дисбиотические механизмы патогенеза токсических стоматитов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

46

"Bíchuk стоматологИ", № 2, 2012

ренное повышение уровня экспрессии Fas - позитивных лимфоцитов. Приведенные данные о изменениях в системном иммунитете больных с латентным проявлением генерализованного пародонтита свидетельствует, что в патогенезе этого заболевания ведущую роль играют возникшие нарушения гуморального иммунного ответа (повышение количества В-лимфоцитов, неизмененная экспрессия CD72, CD30 -клеток) на фоне адекватного реагирования клеточных факторов защиты (увеличение CD8 - клеток в десне-вой ткани и повышение экспрессии Fas - позитивных лимфоцитов).

Ведущая патогенетическая роль в развитии активно прогрессирующих форм генерализованного пародонтита принадлежит сформированному вторичному дефициту клеточной иммунной защиты на уровне как системного, так и разбалансированного локального процесса иммунного реагирования. При системных нарушениях снижена хелперно-индукторная и цито-статическая функция организма за счет значительного снижения CD4 и CD8 - клеток и наблюдается усиление экспрессии молекул ранней и поздней активации на фоне незначительного повышения экспрессии Fas -антигенов, что свидетельствует о постоянном поддержании активационного процесса, по-видимому, вследствие невозможности полной элиминации микробных и тканевых антигенов из очага поражения. Особенно страдает у больных прогрессирующим течением генерализованного пародонтита локальный иммунитет, который характеризуется наличием признаков клеточного иммунодефицитного состояния и индивидуальной выраженностью дисбаланса в экспрессии активационных маркеров. Уменьшение экспрессии CD95 и CDn6 свидетельствует о глубоком нарушении процессов локального апоптоза у больных активно прогрессирующим генерализованным паро-донтитом.

Выводы. 1. Активно прогрессирующий генерализованный пародонтит обуславливается иммунными нарушениями как на системном, так и на локальном уровне, проявляющимися в изменении количественных характеристик популяционного состава лимфоцитов и параметров их активации.

2. На фоне общего снижения Т-лимфоцитов за счет снижения хелперно-индукторных и цитостатиче-ских субпопуляций при системных нарушениях иммунитета наблюдается дисбаланс экспрессии актива-ционных агентов на лимфоцитах периферической крови: число лимфоцитов экспрессирующих Fas - рецептор (CD95) увеличивается значительно меньше, чем число клеток экспрессирующих другие активаци-онные антигены, что свидетельствует о перестройке характера клеточного и цитостатического ответа у больных с активно прогрессирующим генерализованным пародонтитом.

3. Локальное изменение иммунитета у больных генерализованным пародонтитом обусловлено клеточным иммунодефицитом и выраженной разбалан-сировкой в экспрессии активационных маркеров, указывающей на резкое снижение процессов апоптоза в патологически измененной десневой ткани.

4. При латентно текущем генерализованном па-родонтите незначительные иммунные изменения как

системного, так и локального иммунитета, происходят за счет изменения хелперно-супрессорных клеток (CD4), повышения числа В-лимфоцитов, CD16 и CD72 - клеток и увеличения индукции Fas зависимого апоптоза.

5. Изучение экспрессии молекулы CD30 у больных генерализованным пародонтитом может служить дополнительным критерием, позволяющим определить типы иммунного реагирования (Th1 или Th2).

Список литературы

1. Мащенко I. С. Запальш та дистро(^чш захворювання пародонта: навч. поабник / I. С. Мащенко. — Дншропетровськ : АРТ-ПРЕС, 2003. — 244 с.

2. Цепов Л. М. Генерализованный пародонтит: этиология, патогенез, клинические взаимосвязи и комплексная терапия / Л. М. Цепов. — Смоленск, 1994. — 149 с.

3. Фрейдлин И. С. Ключевая позиция макрофагов в цито-киновой регуляторной сети / И. С. Фрейдлин // Иммунология. — 1995. — № 3. — С. 44—48.

4. Page R. S. The role of inflammatory mediators in the pathogenesis of periodontal disease / R. S. Page // J. Periodontol. Res. — 1991. — Vol. 26, N 3. — P. 230—242.

5. Gingival mononuclear cells from chronic inflammatory periodontal tissues produce interleukin (IL)-5 and IL-6 but not IL-2 and IL-4 / K. Fujihashi, K. W. Beagley, Y. Kono [et al.] // Am. J. Pathol. — 1993. — Vol. 142, N 4. — P. 1239—1250.

6. Чумакова Ю. Г. Роль лейкинов в патогенезе генерализованного пародонтита: особенности при различных формах заболевания / Ю. Г. Чумакова // Вюник стоматологи. - 2007. - N»1. - С. 17-30.

7. Мащенко I. С. Про класифжащю захворювань пародонта / I. С. Мащенко // Матерiали I (VIII) з'1'зду Асоц. стоматолопв Украши. — К., 1999. — С. 221—222.

8. Леус П. А. Значение некоторых индексов в эпидемиологических исследованиях болезней пародонта / П. А. Леус // Стоматология. - 1990.- Т.69 - №1. - С. 80-83.

9. Оценка иммунного статуса человека / [Петров Р. В., Лопухин Ю.М., Череднев А.Н. и др.] - М., 1984.- 36с.

10. Сибиряк С. В. Иммунофенотипирование лимфоцитов в клинической практике / Сибиряк С. В., Юсупова Р. Ш., Курчатова Н. Н. - Уфа: - 1997. - 22 с.

Поступила 26.04.12

УДК 16.153.1:577.152.321:016.633:612.31.017 В. Н. Почтарь, к. мед. н.

ГУ «Институт стоматологии НАМН Украины»

ДИСБИОТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПАТОГЕНЕЗА ТОКСИЧЕСКИХ СТОМАТИТОВ

В эксперименте на крысах исследовано действие ряда токсикантов (линкомицин, индометацин, аллоксан, литохоле-вая кислота) и сахара на уровень маркеров воспаления (малоновый диальдегид, эластаза) в слизистой оболочке полости рта. Установлено развитие воспаления, а также дисбиоза в слизистой оболочке при определении ферментативным методом. Аналогичные воспалительные процессы вызывает аппликация на слизистую оболочку кишечного эндотоксина (липополисахарида) в значительно меньших концентрациях.

Ключевые слова: стоматит, дисбиоз, ферменты, липопо-лисахарид, токсикология.

© Почтарь В. Н., 2012.

В. М. Почтар

ДУ «1нститут стоматологи НАМН Укра'ши»

ДИСБ1ОТИЧН1 МЕХАН1ЗМИ ПАТОГЕНЕЗУ ТОКСИЧНИХ СТОМАТИТ1В

В eKcnepuMeHmi на щурах дотдили дЮ низки moKcumHmie (лткомщин, шдометацин, алоксан, лтохолева кислота) та цукру на pieeHb маркерiв запалення (малоновий дiальдегiд, еластаза) в слизовш оболонц ротовое порожнини. Встано-влено розвиток запалення, а також дисбюзу в слизовш обо-лонц при визнчент ферментативним методом. Аналогiчнi запальш процеси викликае аплжащя на слизову оболонку кишкового ендотоксину (лтопол^ахариду) в значно менших концентращях.

Ключов1 слова: стоматит, дuсбiоз, ферменти, лiпополiса-харид, токсuкологiя.

V. N. Pochtar'

SE "The Institute of Dentistry of the NAMS of Ukraine"

THE DISBIOTIC MECHANISMS OF THE PATHOGENESIS OF TOXIC STOMATITES

The influence of some toxicants (lincomycin, indometacin, al-loxan, lithocholic acid) and sugar upon the level of the markers of inflammation (malonic dialdehyde, elastase) in oral mucous membrane was studied at the experiments with rats. The development of inflammation as well as disbiosis in mucous membrane at the determination with enzymatic method was revealed. The same inflammatory processes are caused by the application of enteric endotoxin (lypopolysaccharide), considerably less concentrated.

Key words: stomatitis, disbiosis, enzymes, lypopolysaccharide), toxicology.

Значение микробного фактора в развитии различных стоматитов общеизвестно [1-4]. Однако, в патогенезе токсических стоматитов, как правило, рассматривают прямое патогенное действие на слизистую полости рта токсического фактора [5-7].

Целью нашей работы стало исследование возможности участия собственной микрофлоры слизистой полости рта в патогенезе токсических стоматитов, вызываемых различными токсикантами.

Материалы и методы исследования. Исследования были проведены на 56 крысах линии Вистар (самцы, возраст 13-14 месяцев), которые были разделены на 7 равных групп: 1-ая - интактные (норма), 2-ая - получала с питьевой водой антибиотик линко-мицин в дозе 70 мг/кг в течение 5 дней, 3-ья - получала индометацин в дозе 10 мг/кг внутрижелудочно в течение 4 дней, 4-ая - получала аллоксан в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно однократно, 5-ая - получала литохолевую кислоту (ЛХК) в виде аппликаций на слизистую геля ЛХК в дозе 3 мг/кг однократно, 6-ая группа получала с питьевой водой сахар в дозе 5 г/кг в течение двух недель и, наконец, 7-ая группа получала кишечный эндотоксин (липополисахарид, ЛПС) в виде геля в дозе 30 мкг/кг однократно.

Животные умерщвлялись на пике воздействия токсикантов: 2-ая группа - на 10-й день, 3-ья - на 5-й день, 4-ая - на 10-й день, 5-ая - через 24 часа, 6-ая -на 14-й день, 7-ая - через 1 час после аппликации. Эв-

таназию животных осуществляли под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг), иссекали слизистую щеки и языка и готовили гомогенаты из расчета 50 мг/мл 0,05 М трис-НС1 буфера рН 7,5. В надосадочной жидкости (после центрифугирования при 3000 об/мин, 15 мин, +4 °С) определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) [8], активность эластазы [9], уреа-зы [10] и лизоцима [11].

По соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима рассчитывали степень дисбиоза слизистой [12].

Результаты исследований и их обсуждение. Концентрация конечного продукта перекисного окисления липидов - МДА и активность протеолитическо-го фермента эластазы, которая в тканях имеет, главным образом, лейкоцитарное происхождение, служили биохимическими маркерами воспаления [13]. Результаты их определения в слизистой полости рта первых 6-ти групп представлены в табл. 1, из которой следует, что все токсиканты (линкомицин, индомета-цин, аллоксан, ЛХК) и даже пищевая сахароза вызывают достоверное увеличение уровня маркеров воспаления как в слизистой щеки, так и в слизистой языка. То, что сахароза вызывает развитие воспалительной реакции в слизистой полости рта было показано ранее в работе [14], что автор объясняла развитием дисбиоза.

Для определения наличия дисбиоза в слизистой полости рта крыс, получавших токсиканты, была исследована активность фермента уреазы, имеющего исключительно микробное происхождение, и активность лизоцима, отражающего состояние неспецифического иммунитета [11]. Соответствующие данные представлены в табл. 2, из которой следует, что все токсиканты (кроме ЛХК) и сахароза вызывают увеличение активности уреазы, свидетельствующее об увеличении микробной обсемененности, особенно после введения аллоксана, который вызывает сахарный диабет 1 типа, и употребления больших доз сахарозы.

ЛХК проявляет в некоторой степени даже бактерицидное действие, о чем свидетельствует снижение активности уреазы.

Что же касается лизоцима, то все изученные средства вызывали достоверное снижение его активности, причем в большей степени это проявляли ал-локсан, линкомицин и как это не странно, сахароза.

Рассчитанные по методу Левицкого [12] показатели степени дисбиоза слизистых представлены в табл. 3, из которой следует, что все токсиканты (кроме ЛХК) и сахароза вызывают увеличение степени дисбиоза, причем в большей степени аллоксан и сахароза.

Более значительное увеличение степени дисбиоза (в 2-17 раз) по сравнению с увеличением уровня маркеров воспаления (в 1,3-1,9 раза) может указывать на превалирование дисбиотических процессов над воспалительными, которые, по-видимому, являются второстепенными по отношению к дисбиозу.

Как известно, при дисбиозе главным токсикантом является кишечный эндотоксин (ЛПС), который образуется Грам-отрицательными бактериями [15, 16].

Аппликации ЛПС на слизистую полости рта в очень малых дозах (30 мкг/кг, что почти в тысячу раз

48

"Вiсник стоматологИ", № 2, 2012

меньше, чем дозы использованных нами токсикантов) паления, как и большие дозы токсикантов или сахаро-вызывают такое же повышение уровня маркеров вос- зы (табл. 4).

Таблица 1

Влияние различных токсикантов и сахарозы на уровень маркеров воспаления в слизистой полости рта крыс

№ п/п Группы Щека Язык

МДА, ммоль/кг Эластаза, мк-кат/кг МДА, ммоль/кг Эластаза, мк-кат/кг

1 Интактные 32,1±1,8 38±4 38,4±1,5 45±2

2 Линкомицин 63,3±3,1 р<0,001 54±5 р<0,05 54,9±1,9 р<0,001 55±3 р<0,05

3 Индометацин 60,1±4,3 р<0,004 52±4 р<0,05 48,3±1,7 р<0,05 57±6 р>0,05

4 Аллоксан 45,9±4,0 р<0,05 46±4 р>0,05 42,6±2,0 р>0,05 70±4 р<0,01

5 Литохолевая кислота (ЛХК) 40,0±2,5 р<0,05 41±2 р>0,3 45,0±2,2 р<0,05 51±3 р>0,05

6 Сахар 46,8±3,0 р<0,05 55±6 р<0,05 55,0±3,1 р<0,01 60±4 р<0,05

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1.

Таблица 2

Влияние различных токсикантов и сахарозы на активность уреазы и лизоцима в слизистой полости рта крыс

№ п/п Группы Щека Язык

Уреаза, мк-кат/кг Лизоцим, ед/кг Уреаза, мк-кат/кг Лизоцим, ед/кг

1 Интактные 4,3±0,3 527±12 1,1±0,1 134±6

2 Линкомицин 5,2±0,2 р<0,05 182±21 р<0,001 1,5±0,1 р<0,05 60±5 р<0,001

3 Индометацин 6,9±0,5 р<0,05 350±31 р<0,01 1,6±0,3 р>0,05 91±7 р<0,01

4 Аллоксан 11,5±1,0 р<0,01 94±8 р<0,001 6,0±0,7 р<0,001 41±3 р<0,001

5 Литохолевая кислота (ЛХК) 4,1±0,3 р>0,3 290±15 р<0,001 0,8±0,1 р>0,05 79±5 р<0,01

6 Сахар 9,3±0,8 р<0,01 194±10 р<0,001 5,3±0,4 р<0,01 46±4 р<0,001

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1.

Таблица 3

Влияние различных токсикантов и сахарозы на степень дисбиоза в слизистой полости рта крыс

№ п/п Группы Щека Язык

1 Интактные 1,0±0,1 1,0±0,1

2 Линкомицин 3,6±0,3 р<0,01 3,0±0,3 р<0,01

3 Индометацин 2,4±0,2 р<0,01 2,1±0,2 р<0,01

4 Аллоксан 15,0±1,4 р<0,001 17,6±2,1 р<0,001

5 ЛХК 1,7±0,3 р<0,05 1,2±0,2 р>0,1

6 Сахар 5,8±0,3 р<0,001 14,2±0,9 р<0,001

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1.

Таблица 4

Влияние ЛПС на уровень маркеров воспаления

_в слизистой полости рта крыс_

№ п/п Группы n МДА, ммоль/кг Эластаза, мк-кат/кг

Щека

1 Интактные 8 32,1±1,8 38±4

7 ЛПС 8 4,89±2,5 49±3

р<0,01 р<0,05

Язык

1 Интактные 8 38,4±1,5 45±2

7 ЛПС 8 65,0±0,9 52±2

р<0,001 р<0,05

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1.

Проведенные нами исследования дают определенные основания считать развитие дисбиоза ведущим звеном патогенеза токсических стоматитов, в котором решающую роль играет ЛПС, образуемый условно-патогенными бактериями.

Спи сок литературы

1. Ушаков Р. В. Микрофлора полости рта и ее значение в развитии стоматологических заболеваний / Р. В. Ушаков, В. Н. Царев // Стоматология для всех. - 1998. - № 3. - С. 22-24.

I.Савичук Н. О. Хрошчш ураження слизово! оболонки по-рожнини рота у дггей: сучасний стан i проблеми / Н. О. Савичук // Украшський медичний часопис. - 1999. - № 3 (11). - С. 125-128.

3. Почтарь В. Н. Роль патогенных дрожжевых грибов в развитии и течении атопического хейлита / В. Н. Почтарь // Вюник стоматологи. - 2000. - № 2. - С. 13-15.

4. Почтарь В. Н. Вирусная инфекция как этиологический фактор при стоматитах / В. Н. Почтарь, А. Б. Македон, В. Я. Скиба // Современная стоматология. - 2009. - № 2. - С. 52-56.

5. Максименко П. Т. Медикаментозная патология в стоматологии / П. Т. Максименко. - Полтава, 2001. - 138 с.

6. Современные представления о патогенезе заболеваний слизистой оболочки полости рта и пути их коррекции / В. Я. Скиба, А. П. Левицкий, В. Н. Почтарь [и др.] // Вюник стоматологи. - 2003. - Спецвыпск. - С. 25-28.

7. Морфологические нарушения слизистой полости рта крыс с алиментарной недостаточностью растительных полифенолов при комбинированном действии стресса и прооксиданта делагила / И. Н. Моисеев, О. Н. Воскресенский, Ю. В. Калабин [и др.]. - Досяг-нення бюл. та мед. - 2006. - № 2 (8). - С. 52-56.

8. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальде-гида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // В кн.: "Современные методы в биохимии". - М.: Медицина, 1977. - С.66-68.

9. Левицкий А. П. Методы определения активности эластазы и ее ингибиторов: Метод. рекомендации / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - Киев: ГФЦ, 2002. - 15 с.

10. Гаврикова Л. М. Уреазная активность ротовой жидкости у больных с острой одонтогенной инфекцией челюстно-лицевой области / Л. М. Гаврикова, И. Т. Сегень // Стоматология. - 1996. -Спец. вып. - С. 49-50.

II. Левицкий А. П. Лизоцим вместо антибиотиков / Левицкий А. П. - Одесса : КП ОГТ, 2005. - 74 с.

12. Ферментативный метод определения дисбиоза полости рта для скрининга про- и пребиотиков: Метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Селиванская [и др.]. - К. : ГФЦ, 2007. - 23 с.

13. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: Метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса, 2010. - 16 с.

14. Демьяненко С. А. Биохимические показатели слизистой оболочки полости рта крыс, получавших высокосахарозную диету / С. А. Демьяненко // Вюник стоматологи. - 2010. - № 1. - С. 9-12.

15. Яковлев М. Ю. "Эндотоксиновая агрессия" как предбо-лезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека

и животных / М. Ю. Яковлев // Успехи современной биологии. -2003. - Т. 123, № 1. - С. 31-40.

16. Прозапальна дiя лшоплюахариду на слизову оболонку порожнини рота щурiв / А. П. Левицький, С. О. Дем'яненко, О. А. Макаренко [та ш.] // Одеський медичний журнал. - 2010. - № 2 (118). - С. 9-11.

Поступила 01.02.12

УДК 616.342-002:616.314-08-009.611

Н. В. Савченко

ИС НМАПО им. П. Л. Шупика

ЛЕЧЕНИЕ ГИПЕРЕСТЕЗИИ ТВЕРДЫХ ТКАНЕЙ ЗУБОВ УБОЛЬНЫХ С ГАСТРОЭЗОФАГЕАЛЬНОЙ РЕФЛЮКСНОЙ БОЛЕЗНЬЮ

В работе показана необходимость изменения рН ротовой жидкости у больных ГТТЗ, развившейся на фоне ГЭРБ, путем ее ощелачивания с целью получения антисенситивного эффекта при использовании десенситайзерной пасты Sensitive Pro-Relief (Colgate).

Ключевые слова: гиперестезия твердых тканей зуба, ГЭРБ(гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь), метаболический ацидоз, десенситайзерная паста Sensitive ProRelief (Colgate).

М. В. Савченко

1С НМАПО iM. П. Л. Шупика

Л1КУВАННЯ Г1ПЕРЕС ТЕЗ11 ТВЕРДИХ ТКАНИН ЗУБ1В У ХВОРИХ 1З ГАСТРОЕЗОФАГАЛЬНОЮ РЕФЛЮКСНОЮ ХВОРОБОЮ

Основною складовою статтi е створення необхiдних умов для змти рН середовища ротовоЧ порожнини шляхом Ii за-луження з метою ефективного застосування новоi десен-ситайзерноi пасти Sensitive Pro-Relief (Colgate) в процеЫ ii втирання в твердi тканини зуба,що дозволить забезпечити стткий клШчний ефект в процеЫ л^вання гтерестезп твердих тканин зубiв у хворих на ГЕРБ.

© Савченко Н. В.,, 2012.