CC BY
28
биохимия
©коллектив авторов, 2019
Рак А.Я., Трофимов А.Б., Петров А.Б., Горбунов Н.П., Ищенко А.М.
ДИНАМИКА СЫВОРОТОЧНЫХ УРОВНЕЙ ОБЩЕГО И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО АНТИМЮЛЛЕРОВА ГОРМОНА У ЧЕЛОВЕКА В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ЖИЗНИ
Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов ФМБА России, 197110, Санкт-Петербург, Россия
В работе исследованы изменения сывороточного уровня общего антимюллерова гормона (АМГ) и его активированной формы у детей разного пола и женщин с различным репродуктивным статусом. Известно, что этот цитокин суперсемейства TGFP в эмбриогенезе млекопитающих обеспечивает формирование репродуктивной системы по мужскому типу, а после рождения регулирует фолликулогенез, сперматогенез и баланс половых гормонов. Биологически активная форма гормона (аАМГ) образуется в результате ограниченного протеолиза молекулы АМГ; достоверно не известно, в каких тканях и под действием какого фермента он происходит. Сывороточный уровень аАМГ представляется более информативным клиническим показателем, чем содержание общего АМГ (оАМГ), однако на мировом рынке отсутствуют иммуноферментные диагностические системы, позволяющие осуществлять прямую количественную детекцию аАМГ. В данной работе количественная детекция оАМГ и аАМГ в сыворотке крови была проведена с использованием специально разработанных иммуноферментных тест-систем. Показано, что у девочек сывороточный уровень оАМГ, как и отношение концентраций аАМГ/оАМГ, практически не изменяется с возрастом, тогда как у мальчиков с возрастом наблюдается не только ранее описанное в литературе достоверное снижение сывороточного уровня оАМГ (коэффициент корреляции Пирсона R=-0,86, p<0.001), но и соотношения уровня аАМГ/оАМГ (R=-0.531, p<0.001). Также было установлено, что у беременных женщин количество оАМГ и доля аАМГ в сыворотке крови достоверно выше (p<0,01 и p<0,001, соответственно), чем у женщин контрольной группы. Полученные результаты хорошо согласуются с известными данными о содержании оАМГ и аАМГ в сыворотке крови людей разного пола и возраста и свидетельствуют об изменении соотношения сывороточных уровней аАМГ/оАМГ при беременности, что может быть важно как для углубления понимания биологии АМГ, так и интерпретации результатов, полученных с помощью диагностикумов на основе АМГ.
Ключевые слова: антимюллеров гормон; АМГ; беременность; ИФА, постнатальный период; протеолиз; сыворотка.
Для цитирования: Рак А.Я., Трофимов А.В., Петров А.В., Горбунов Н.П., Ищенко А.М. Динамика сывороточных уровней общего и биологически активного антимюллерова гормона у человека в различные периоды жизни. Клиническая лабораторная диагностика. 2019; 64 (6): 342-347. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2019-64-6-342-347 RakA.Ya., TrofimovA.V., PetrovA.V., GorbunovN.P., IschenkoA.M.
THE DYNAMICS OF HUMAN TOTAL AND ACTIVATED ANTI-MULLERIAN HORMONE SERUM LEVELS IN DIFFERENT LIFE PERIODS
state Research Institute for Highly Pure Biopreparations, 197110, st. Petersburg, Russia
Here, changes in the .serum level of total anti-mullerian hormone (AMH) and its activated form in children of both sexes and women with different reproductive status are investigated. This TGFfi superfamily cytokine is known to provide the formation of the male-type reproductive system in mammalian embryogenesis, and regulate folliculogenesis, spermatogenesis and the balance of sex hormones after birth. The biologically active form of the hormone (aAMH) is formed as a result of limited proteolysis of the AMH molecule; it is not reliably known in which tissues and under the action of which enzyme it occurs. The serum level of aAMH seems to be a more informative clinical indicator than the content of total AMH (tAMH), but there are no ELISA systems at the world market that provide direct quantitative detection of aAMH. In this work, quantitative detection of total hormone (tAMH) and its biologically active form (aAMH) in serum was performed using specially developed enzyme immunoassay systems. We showed that in girls, the total serum AMH level, as well as the concentration ratio aAMH / tAMH, practically does not change with age, whereas in boys, there is not only a significant decrease in the total serum AMH level previously described in the literature (Pearson correlation coefficient R = - 0.86, p <0.001), but also in the ratios of the aAMH / tAMH level (R = -0.531, p <0.001). It was also found that in pregnant women, the amount of total AMH and the proportion of aAMH in serum was significantly higher (p <0.01 andp <0.001, respectively) than in the control group women. The obtained results are in good agreement with the available data on the total and activated AMH content in the blood serum ofpeople of different sex and age and indicate a change in the ratio of aAMH / tAMH serum levels in pregnancy. These data may be important both for deepening the understanding of AMH biology and for interpreting the results obtained using AMH detection based diagnostics.
Keywords: anti-mullerian hormone, AMH, ELISA, MIS, postnatal life, pregnancy, proteolysis, serum. For correspondence: RakAleksandra Yakovlevna, junior researcher of the protein biochemistry laboratory; e-mail: a.ya.rak@hpb.spb.ru
For citation: Rak A.Ya., Trofimov A.V., Petrov A.V., Gorbunov N.P., Ischenko A.M. The dynamics of human total and activated anti-mullerian hormone serum levels in different life periods. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2019; 64 (6): 342-347 (inRuss.) . DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2019-64-6-342-347 Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 23.04.2019 Accepted 26.04.2019
Для корреспонденции: Рак Александра Яковлевна, мл. науч. сотр. лаб. биохимии белка; e-mail: a.ya.rak@hpb.spb.ru
Введение. Антимюллеров гормон (АМГ) - гликопро-теин с молекулярной массой около 140 кДа, принадлежащий суперсемейству цитокинов трансформирующего фактора роста-Р (TGF-P). В отличие от других членов этого суперсемейства, экспрессия которых наблюдается в организме повсеместно, АМГ экспрессируется крайне тканеспецифично - в клетках Сертоли семенников и клетках гранулёзы яичников [1]. АМГ является одним из ключевых факторов, определяющих пол и регулирующих функционирование репродуктивной системы у млекопитающих [2]. Гормон обеспечивает регрессию мюллеровых протоков в мужских эмбрионах, а в пост-натальном периоде жизни млекопитающих регулирует фолликулогенез [3], созревание половых клеток и функционирование половых желез [4]. Связывание АМГ с М^ЯП служит сигналом к запуску сигнального пути с участием АМГ и реализации сигнального каскада с участием белков семейства Smad, что в конечном счете приводит к изменению экспрессии генов-эффекторов [5]. Также существуют данные, свидетельствующие о возможности М^ЯП-зависимой активации сигнального пути с участием Р-катенина [6] и NF-кB [7], однако этот аспект действия АМГ на клетки-мишени пока исследован достаточно слабо.
Экспрессия АМГ у человека происходит как в эмбриогенезе, так и в постнатальном периоде жизни [8]. У мужчин АМГ начинает определяться в крови в эмбриогенезе в начале регрессии мюллеровых протоков. После их инволюции секреция АМГ не прекращается, а остается стабильно сильной (50-70 нг/мл) в течение всего оставшегося фетального периода [9]. Такой уровень секреции сохраняется в неонатальном периоде, младенчестве и детстве. Известно, что у мужчин концентрация АМГ в сыворотке крови снижается более чем на порядок в пубертатном периоде и сохраняется на таком уровне на протяжении всей взрослой жизни [9]. Важно, что до начала пубертатного периода АМГ секретируется через базальную мембрану клеток Сертоли в интерстициаль-ное пространство семенников, а затем оттуда попадает в кровяное русло. В течение пубертатного периода, когда формируется гематотестикулярный барьер, АМГ постепенно начинает секретироваться в просвет семенных канальцев, что в итоге приводит к возрастанию его концентрации в семенной плазме (150 пМ) по сравнению с таковой в плазме крови (около 10 пМ) [9]. Обнаружена позитивная корреляция между уровнем АМГ в семенной жидкости и числом и подвижностью сперматозоидов [9].
В женском организме АМГ начинает секретировать-ся гранулезными клетками фолликулов яичников в конце эмбрионального развития (на 36-38-й нед беременности), однако до начала пубертатного периода его концентрация в сыворотке остается чрезвычайно низкой [10]. В пубертатном периоде начинается рост преантральных и малых антральных фолликулов, и секреция АМГ их гранулезными клетками становится интенсивнее - уровень гормона в крови достигает 2-5 нг/мл. Известно, что в начале беременности уровень общего АМГ (оАМГ) в сыворотке крови меняется недостоверно, а после родов - снижается по сравнению с содержанием до беременности [9].
Ключевую роль в регуляции продукции АМГ играют генетические и гормональные факторы. В промоторе гена гормона содержатся консервативные сайты связывания с транскрипционными факторами - продукта-
biochemistry
ми генов Sry, Sf1 (стероидогенного фактора 1), Sox9 и Gata-4 [11, 12]. Белки SOX9 и SF1 являются важными регуляторами развития репродуктивной системы в эмбриогенезе, а кроме того - активаторами транскрипции гена АМГ [13]. Другим регулятором уровня экспрессии АМГ являются гормоны, главным образом тестостерон [14]. В ходе пубертатного периода изменение концентраций АМГ и тестостерона в сыворотке крови мужчин происходит в противоположных направлениях: концентрация тестостерона нарастает, а АМГ - снижается [5]. Помимо тестостерона, продукцию АМГ также регулирует и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) [14]. В женском организме продукция антимюллерова гормона находится под контролем не только тестостерона и ФСГ, но и эстрогенов [15, 16].
Известно, что для проявления биологической активности димерная молекула АМГ (прогормона) должна претерпеть протеолиз по специфическому сайту, что приводит к образованию активированной формы гормона (аАМГ)- нековалентно ассоциированного комплекса N- и C-концевого фрагментов АМГ [8]. Показано, что величина константы ассоциации С-концевого фрагмента АМГ с внеклеточной частью рецептора АМГ II типа (MISRII), составляет (4±0,32)x1010 М-1, в то время как непротеолизированная форма АМГ практически не связывается с MISRII [17]. Вопрос о том, в каких тканях и под действием какого фермента происходит специфический протеолиз молекулы АМГ in vivo, остается открытым. Некоторые авторы предполагают, что АМГ активируется посредством расщепления исключительно в процессе биосинтеза и секреции, но не в сыворотке крови. При этом фрагментация гормона происходит в гонадах, и в циркуляцию поступает как нерасщеплен-ный прогормон, так и нековалентно ассоциированный комплекс N- и C-концевого фрагментов АМГ [9]. По мнению других исследователей, специфический про-теолиз АМГ может происходить как в кровяном русле под действием плазмина, так и в гонадах под действием таких ферментов, как фурин и PC5, принадлежащих к семейству пропротеин-конвертаз [18, 19]. Наконец, существует гипотеза о том, что расщепление гормона по специфическому сайту является аутокаталитическим и сопряжено с его поступлением в ткани и взаимодействием с рецепторами АМГ I и II типа - MISRI и MISRII, соответственно [20].
Достоверно неизвестно и то, каким образом изменяется сывороточный уровень биологически активной формы АМГ женщин при изменении репродуктивного статуса. Между тем этот показатель может иметь более важное прогностическое значение, чем содержание оАМГ в сыворотке крови, поскольку именно биологически активная форма гормона ответственна за реализацию его действия [2, 8]. Исследованию динамики сывороточного уровня биологически активного АМГ во многом препятствует отсутствие отечественных диагностических наборов.
В литературе имеются сведения о разработанной ранее тест-системе для количественной детекции аАМГ [10]. В ее основе - использование деоксихолата на этапе связывания сывороточного АМГ с иммобилизованными антителами. Этот реагент способствует диссоциации комплекса N- и C-концевых фрагментов АМГ (активированной формы), что обеспечивает возможность дальнейшей детекции только прогормона. Таким образом, после определения сывороточных уровней прогормона и оАМГ, определение
биохимия
Таблица 1
Сведения о возрасте и половой принадлежности детей, сыворотки крови которых были исследованы
Возраст, годы Пол
Мужской , n Женский, n
0-2 11 13
3-6 9 13
7-10 8 13
11-15 11 12
16-18 7 10
Примечание. n - число обследованных.
сывороточного уровня активированной формы гормона производится расчетным путем [10]. В отличие от ранее проведенных исследований, в настоящей работе количественная детекция аАМГ осуществлялась не расчетным способом, а напрямую с помощью антител, специфичных к эпитопу молекулы АМГ в составе сайта специфического протеолиза, который экспонирован лишь у активированной формы гормона. Эта особенность не только повышает точность анализа, но и снимает необходимость использования для количественной детекции аАМГ каких-либо вспомогательных реагентов и тест-систем. В дальнейшем тест-система 1 может стать основой для разработки диа-гностикумов для определения фертильного статуса у женщин и детекции АМГ-секретирующих новообразований как у женщин, так и у мужчин.
Материал и методы. Исследование проведено с использованием 107 образцов периферической крови соматически здоровых детей возрастом от 1 мес до 18 лет, предоставленных центральной клинико-диагностической лабораторией ГБУЗ «Консультативно-диагностический центр для детей» (г. Санкт-Петербург) после получения информированного согласия от законных представителей пациентов. Данные о возрасте и половой принадлежности детей, сыворотки крови которых были исследованы, представлены в табл. 1.
Кроме того, в работе были использованы 15 образцов венозной крови беременных женщин (20-25 нед) и 15 образцов венозной крови соматически здоровых женщин контрольной группы (ФГБНУ «НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта, г. Санкт-Петербург), взятие
осуществляли также после получения информированного согласия от пациенток. Образцы крови были отобраны в вакутейнеры с коагулянтом, после чего методом центрифугирования при 3000g в течение 10 мин из них были выделены сыворотки, которые были использованы в экспериментах.
Для приготовления стандартных проб в работе использованы препараты рекомбинантного прогормо-на и аАМГ, характеризующиеся чистотой около 97%. Они были получены ранее из культуральной жидкости клеток-продуцентов линии СНО («American Type Tissue Collection», США), трансфицированных геном АМГ человека (штамм продуцента CHO-MIS#26) [21], методом тандемной иммуноаффинной и обращенно-фазовой хроматографии по разработанной методике [17]. Кроме того, в экспериментах были использованы следующие, полученные ранее моноклональные антитела мыши:
М1 [22], специфичные к N-концевому эпитопу SA-GATA, оказывающемуся доступным после специфического протеолиза молекулы АМГ, и не взаимодействующие с нерасщепленным гормоном;
6Е11 [23], распознающие эпитоп в составе N-концевого фрагмента АМГ, способные к детекции как прогормона, так и аАМГ;
М2-Пх [17] - пероксидазный конъюгат антител, распознающих N-концевой фрагмент обоих форм АМГ. Он был использован в качестве детектирующих антител для определения уровней обеих форм гормона.
Количественную детекцию оАМГ и аАМГ проводили методом твердофазного гетерогенного сэндвич-иммуноферментного анализа (ИФА), на первом этапе которого в лунках планшета проводили сорбцию антител 6Е11 или М1, соответственно (1,5 мкг/мл в 20 мМ боратном буфере, рН 8.0). Далее осуществляли внесение тестируемых сывороток и серии разведений стандартных препаратов АМГ (прогормона и активированной формы, соответственно). Детекцию связанного с иммобилизованными антителами АМГ в обоих случаях проводили с помощью пероксидазного конъюгата М2-Пх (0,25 мкг/мл). Регистрацию иммуноферментной реакции проводили стандартным методом с использованием тетраметилбензидина и ридера для микроплат BioRad Reader Model 680 («BioRad», США) при 450 нм. Таким образом, в работе были использованы две иммунофер-
Рис. 1. Калибровочные кривые, построенные для проведения анализа с помощью тест-системы 1 (а) и 2 (б).
biochemistry
Пол X м
o*
»*
о
ЪюФЯяоВ
о too 0 в о О I | I 8 о
Возраст, лет
Возраст, лет
I -
о z
il О О о s
&е
5 о -о I ° I
S й
s 8
150,0- + о О
120,0- + О о о + + + + °
900600- + * + __^ + + О + О о ® + - - ТЭ R2=0,009 о
о °° 8 о ° о + о + £г=0,344 "о
зор- ° О О О о° ° о о + о t У +
U0- о о
0 5 10 Возраст, лет 15 20
+ м
О ж
б
а
в
Рис. 2. Уровни двух форм АМГ, определенные с помощью тест-систем 2 (а), и 1 (б) и соотношение сывороточных уровней аАМГ и оАМГ у детей различного пола и возраста (в). На панели В показаны линии тренда для образцов сывороток мальчиков (сплошная линия) и девочек (пунктирная линия).
ментные тест-системы, одна из которых - (М1) - сыворотка крови - (М2-Пх) (1) - позволяла определить сывороточный уровень аАМГ, а другая - (6Е11) - сыворотка крови - (М2-Пх) (2) - уровень оАМГ. Калибровочные кривые, построенные по соответствующим стандартным препаратам для двух тест-систем, представлены на рис. 1.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Statistica 10, рассчитывая ^критерий Стьюдента для оценки значимости различий между сравниваемыми показателями и определяя значе-
ние коэффициента корреляции Пирсона R для проверки существования линейной зависимости между величинами. Результаты признавали статистически значимыми при р<0,05. Минимальные размеры выборок были определены на основе статистической мощности 95% и уровня значимости 0,05; для первой части исследования требуемый размер каждой выборки составил 47, для второй - 15. Нормальность распределения в каждом случае определяли, применяя критерий Шапиро-Уилка; во всех исследуемых выборках распределение не отличалось от нормального.
Таблица 2
Сывороточные уровни аАМГ и оАМГ, определенные с помощью двух иммуноферментных тест-систем, а также отношение сывороточных уровней аАМГ/оАМГ у детей разного пола и возраста
Возраст, годы Уровень оАМГ, нг/мл Уровень аАМГ, нг/мл Отношение концентраций аАМГ/оАМГ, %
М Ж М Ж М Ж
69,87±2,74 1,58±0,22 59,08±1,69 0,68±0,07 91,4±2,6 51,1±3,4
[63,72-76,02] [1,46-1,80] [42,04-70,12] [0,60-0,76] [85,6-97,2] [41,8-56,1]
68,86±2,08 0,94±0,08 52,92±1,65 0,54±0,04 78,1±1,6 61,7±3,9
[62,22-75,55] [0,82-1,06] [49,12-60,24] [0,46-0,60] [65,3-80,9] [55,5-68,0]
33,69±1,05 1,28±0,08 30,87±0,88 0,89±0,06 92,6±1,1 67,2±3,0
[26,27-41,11] [1,08-1,48] [24,68-37,06] [0,72-1,08] [84,9-100,2] [61,3-73,1]
5,78±0,53 1,58±0,11 3,27±0,32 0,85±0,07 55,7±2,2 71,6±7,6
[5,25-6,13] [1,37-1,79] [2,82-3,72] [0,67-1,05] [46,8-66,4] [60,1-79,5]
3,38±0,22 1,46±0,11 1,67±0,14 0,73±0,04 47,7±2,1 82,2±7,7
[3,00-4,02] [1,18-1,75] [1,40-1,84] [0,62-0,83] [41,4-52,3] [73,3-93,1]
Примечание. Данные представлены в виде средней величины ± ошибка среднего. В квадратных скобках приведен 95% доверительный интервал.
биохимия
Рис. 3. Уровни двух форм АМГ, определенные с помощью тест-систем 2 (а), 1 (б) и соотношение сывороточных уровней аАМГ и оАМГ у женщин с различным репродуктивным статусом (в). На панели В данные представлены как средние величины ± ошибка среднего (планки погрешностей). В ряде случаев детектировано низкое содержание в сыворотке крови аАМГ на фоне повышенного уровня оАМГ, и наоборот.
Результаты. В табл. 2 приведены результаты определения уровня оАМГ с помощью тест-системы 2 и аАМГ - с помощью тест-системы 1.
Видно, что общее содержание АМГ в сыворотке крови было примерно в 50-100 раз выше у мальчиков, чем у девочек раннего возраста (1-6 лет). С возрастом уровень оАМГ снижался в 10-20 раз у мальчиков и оставался примерно постоянным у девочек.
Статистическая обработка результатов показала, что отношение уровней активированной формы гормона и оАМГ становится значительно ниже с возрастом у мальчиков (коэффициент корреляции Пирсона R = -0,587, р <0,001), но остается постоянным или лишь немного увеличивается у девочек (Я = 0,245, р = 0,059). Графическое распределение уровней двух форм АМГ и отношения их содержания в сыворотке крови детей разного возраста и пола показано на рис. 2.
Исследование содержания двух форм АМГ в сыворотках крови беременных женщин (15 образцов) и женщин контрольной группы в возрасте 21-35 лет (15 образцов) показало, что в первом случае сывороточный уровень как оАМГ, так и аАМГ был достоверно выше (р<0,01 и^<0,001, соответственно). При этом у беременных женщин доля аАМГ (р<0,01) была достоверно выше по сравнению с контрольными образцами. Графическое распределение уровней двух форм АМГ и отношения их содержания в сыворотке крови женщин двух групп представлено на рис. 3.
Обсуждение. Представленные результаты хорошо согласуются с имеющимися в литературе данными о
различном содержании оАМГ и аАМГ у мужчин и женщин в разном возрасте [10], полученными с использованием импортных тест-систем [10, 24]. Показано, что уровень оАМГ у мальчиков (0-10 лет) существенно выше, чем у девочек, и значительно снижается с возрастом, приближаясь по значению к женскому (рис. 2, а). Содержание активированной формы гормона (рис. 2, б) в сыворотках крови детей сильно коррелировало с уровнем оАМГ (коэффициент корреляции Пирсона R=0.965, ^<0.001), однако было обнаружено важное половое и возрастное различие в соотношении уровней аАМГ и общего гормона (рис. 2, в). У мальчиков раннего возраста (0-10 лет) значение этого отношения достигало 91% и было значительно выше, чем у девочек соответствующего возраста (50-60%). У мальчиков старшего возраста соотношение сывороточных уровней активированной формы гормона и оАМГ снижалось примерно до 50% и оставалось примерно таким же или слегка увеличивалось у девочек (табл. 2). Вероятно, обнаруженные изменения отношения сывороточных уровней аАМГ и оАМГ отражают специфическую для пола роль АМГ в постна-тальном развитии и позволят углубить понимание биологии АМГ.
Обнаруженное увеличение содержания оАМГ в сыворотке крови (рис. 3, а) и доли аАМГ при беременности (рис. 3, в) может быть связано с необходимостью временного предотвращения созревания фолликулов, торможение дифференцировки которых является одной из важнейших биологических функций АМГ в постна-тальном периоде жизни млекопитающих [3]. Отметим,
что наблюдаемое в ряде случаев повышение содержания активированной формы гормона в сыворотке крови до 100% также может быть связано с АМГ-индуцируемым формированием репродуктивной системы плода по мужскому типу [2], что предстоит выяснить в ходе дальнейших исследований.
Заключение. Данные, полученные в настоящем исследовании, свидетельствуют об изменении сывороточного уровня оАМГ и уровня активированного гормона у человека в зависимости от пола, возраста и репродуктивного статуса. С использованием специально разработанных тест-систем была исследована динамика сывороточных уровней прогормона и аАМГ у детей; показано, что концентрация обеих форм гормона, как и доля аАМГ у мальчиков с возрастом уменьшается, в то время как у девочек остается практически неизменной. Впервые было показано, что при беременности происходит не только существенное увеличение сывороточного уровня оАМГ, но и доли аАМГ. Это явление может быть использовано в качестве прогностического признака и ассоциировано с развитием репродуктивной системы плода.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1, 3-20, 23-24 см. REFERENCES)
2. Гукасова Н.В., Северин С.Е. Белок MIS: структура, регуляция экспрессии и молекулярный механизм действия. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2005; 4: 3-9.
21. Петров А.В., Карасев М.М., Кудлинг Т.В., Пигарева Н.В., Сергеева В.Е. и др. Синтетическая ДНК, кодирующая антимюлле-ров гормон человека, содержащий ее экспрессионный вектор pTVK4pu/MISOPT и штамм клеток яичников китайского хомячка CHO-MIS - продуцент рекомбинантного антимюллерового гормона человека. Патент РФ №2616273; 2017.
22. Рак А.Я., Трофимов А.В., Колобов А.А., Ищенко А.М. Моноклональные антитела к С-концевому фрагменту рекомбинантного антимюллерова гормона человека: инструмент для очистки, детекции и исследования. Цитокины и воспаление. 2018; 17(1-4): 72-9.
REFERENCES
1. Lee M. M., Donahoe P. K. Mullerian inhibiting substance: a gonadal hormone with multiple functions. Endocrin. Rev. 1993; 14(2): 152-64.
2. Gukasova N.V., Severin S.E. MIS protein: structure, expression regulation, and molecular mechanism of action. Voprosy Biologicheskoj, Meditsinskoj iFarmatsevticheskojKhimii. 2005; 4: 3-9. (in Russian)
3. Durlinger A.L., Visser J.A., Themmen A.P. Regulation of ovarian function: the role of anti-Mullerian hormone. Reprod. 2002; 124: 601-9.
4. Sriraman V., Niu E., Matias J.R., Donahoe P.K., MacLaughlin D.T., Hardy M.P. et al. Mullerian inhibiting substance inhibits testosterone synthesis in adult rats. J. Androl. 2001; 22: 750-8.
5. Teixeira J., Maheswaran S., Donahoe P. K. Mullerian inhibiting substance: an instructive developmental hormone with diagnostic and possible therapeutic applications. Endocrin. Rev. 2001; 22(5): 657-74.
6. Allard S., Adin P., Gouedard L., di Clemente N., Josso N., Orgebin-Crist M. C. et al. Molecular mechanisms of hormonemediated Mullerian duct regression: involvement of beta-catenin. Development. 2000; 127: 3349-60.
7. Segev D. L., Hoshiya Y., Hoshiya M., Tran T. T., Carey J. L., Stephen A. E. et al. Mullerian-inhibiting substance regulates NF-
biochemistry
kB signaling in the prostate in vitro and in vivo. Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). 2002; 99: 239-44.
8. McLennan, I. S., Pankhurst M. W. Anti-Müllerian hormone is a gonadal cytokine with two circulating forms and cryptic actions. J. Endocrinol. 2015; 226(3): R45-R57.
9. Pankhurst M.W., Leathart B.L., Batchelor N.J., McLennan I.S. The anti-Müllerian hormone precursor (proAMH) is not converted to the receptor-competent form (AMHNC) in the circulating blood of mice. Endocrinology. 2016; 157(4): 1622-9.
10. Pankhurst M.W., Chong Y.H., McLennan I.S. Relative levels of the proprotein and cleavage-activated form of circulating human anti-Müllerian hormone are sexually dimorphic and variable during the life cycle. Physiol. Rep. 2016; 4(9): 1-10.
11. Lane A.H., Donahoe P.K. New insights into Mullerian inhibiting substance and its mechanism of action. J. Endocrinol. 1998; 158(1): 1-6.
12. Nef S., Parada L.F. Hormones in male sexual development. Genes Dev. 2000; 14(24): 3075-86.
13. De Santa Barbara P., Bonneaud N., Boizet B., Desclozeaux M., Moniot
B., Sudbeck P. et al. Direct interaction of SRY-related protein SOX9 and steroidogenic factor 1 regulates transcription of the human anti-Müllerian hormone gene. Mol. Cell. Biol. 1998; 18(11): 6653-65.
14. Al-Attar L., Al-Attar L., Noël K., Dutertre M., Belville C., Forest M.G. et al. Hormonal and cellular regulation of Sertoli cell anti-Müllerian hormone production in the postnatal mouse. J. Clin. Invest. 1997; 100(6): 1335-43.
15. Pinola P., Morin-Papunen L.C., Bloigu A., Puukka K., Ruokonen A., Jarvelin M.-R. et al. Anti-Müllerian hormone: correlation with testosterone and oligo- or amenorrhoea in female adolescence in a population-based cohort study.Hum. Reprod. 2014; 29(10): 2317-25.
16. Xu J., Xu F., Letaw J.H., Park B.S., Searles R.P., Ferguson B.M. Anti-Müllerian hormone is produced heterogeneously in primate preantral follicles and is a potential biomarker for follicle growth and oocyte maturation in vitro. J. Assist. Reprod. Genet. 2016; 33(12): 1665-75.
17. Rak A. Ya., Trofimov A.V., Protasov E.A., Rodin S.V., Zhahov A.V., Zabrodskaya Ya. A. et al. Spontaneous proteolytic processing of human recombinant anti-mullerian hormone: structural and functional differences of the molecular forms. Appl. Biochem. Microbiol. 2019; 55(1): 13-20.
18. Nachtigal M. W., Ingraham H. A. Bioactivation of Müllerian inhibiting substance during gonadal development by a kex2/ subtilisin-like endoprotease. Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). 1996; 93(15): 7711-6.
19. Ragin R. C., Donahoe P. K., Kenneally M. K., Ahmad M. F., MacLaughlin D. T. Human Müllerian inhibiting substance: enhanced purification imparts biochemical stability and restores antiproliferative effects. ProteinExpres. Purif. 1992; 3(3): 236-45.
20. Di Clemente N., Jamin S. P., Lugovskoy A., Carmillo P., Ehrenfels
C., Picard J. Y. et al. Processing of anti-mullerian hormone regulates receptor activation by a mechanism distinct from TGF-ß. Mol. Endocrinol. 2010; 24(11): 2193-2206.
21. Petrov A.V., Karasev M.M., Kudling T.V., Pigareva N.V., Sergeeva V.E., Trofimov A.V. et al. Synthetic DNA encoding human anti-mullerian hormone, expression vector pTVK4pu / MISOPT and the Chinese hamster ovary cell strain CHO-MIS - a producer of human recombinant anti-mullerian hormone. Patent RF N 2616273; 2017. (in Russian)
22. RakA.Ya., TrofimovA.V., KolobovA.A., IschenkoA.M. Monoclonal antibodies against the C-terminal fragment of human recombinant anti-mullerian hormone: a tool for purification, detection and study. Tsitokiny i vospalenie. 2018; 17(1-4): 72-9. (in Russian)
23. Hudson P.L., Dougas I., Donahoe P.K., Cate R.L., Epstein J., Pepinsky R.B. et al. An immunoassay to detect human mullerian inhibiting substance in males and females during normal development. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1990; 70(1): 16-22.
24. Pankhurst M. W., McLennan I. S. A specific immunoassay for proAMH, the uncleaved proprotein precursor of anti-Müllerian hormone. Mol. Cell Endocrinol. 2016; 419: 165-71.
Поступила 23.04.19 Принята к печати 26.04.19
