CC BY
49
© ВАСИЛЬЕВА Л.С, КУЛИКОВ Л. К, КАЗАНКОВ С.С., СМИРНОВ А.А., СИМОНОВА Е.В., ТИРАНСКАЯ Н.В. — 2010
ДИНАМИКА МИКРОБНОГО ПЕЙЗАЖА В ХРОНИЧЕСКОЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ РАНЕ ПРИ ЕЁ ЛЕЧЕНИИ ПРЕПАРАТАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА
Л.С. Васильева1, Л.К. Куликов2,С.С. Казанков 3, А.А. Смирнов2, Е.В.Симонова1, Н.В. Тиранская1 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И. В. Малов, 2Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В. В. Шпрах, 3НУЗ «Дорожная клиническая больница на ст. Иркутск-пассажирский ОАО РЖД», гл. врач — к.м.н. Е. А. Семенищева)
Резюме. Проведен сравнительный анализ микробного пейзажа при лечении экспериментальных хронических ран, сформированных у 180-ти белых беспородных крыс, массой 170-200г. Доказано, что Антиран в сочетании с ультразвуковой кавитацией (УЗК) снижает бактериальную обсемененность хронических ран в 13,2 раза к 21-м суткам от начала лечения, в отличие от Абисила и Куриозина. При лечении хронических экспериментальных ран Абисилом и Куриозином количество бактерий на поверхности хронических ран снижалось в 6,9 раза лишь к 28-м суткам от начала их лечения. Установлено, что бактерицидное действие Антирана проявляется по отношению как к Ps. aureginosa, так и St. aurus, но более выражено к Ps. areginosa.
Ключевые слова: хроническая рана, лечение.
DYNAMICS OF MICROBIAL PICTURE IN CHRONIC EXPERIMENTAL WOUND AFTER ITS TREATMENT
WITH BIOLOGICALLY ACTIVE DRUGS
L.S. Vasilieva1, L.K. Kulikov2,S.S. Kazankov3, A.A. Smirnov2, E.V. Simonova1, N.V. Timnskay1 (Irkutsk State Medical University, 2Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education, 3Railway Clinic, Irkutsk)
Summary. Comparative analysis of microbial picture of experimental chronic wounds in 180 white rats (weight 170 — 200 g) after treatment has been performed. It has been established that Antiran with US as compared to Abisil and Kuriozin decreased 13,2 times as much bacterial contamination of wound to 21 th day. Bacterial contamination of chronic wound after treatment with Abisil and Kuriozin decreased 6,9 times only to 28 th day. It has been determined that Antiran has bactericidal effect against Ps. aureginosa and St. aureus.
Key words: chronic wound, treatment.
Лечение хронических ран (ХР) является одной из сложных задач в хирургической практике. Учитывая фактор поликомпонентности, проблема лечения ХР решается с позиции коррекции фоновых заболеваний и нивелирования воздействия внешних патогенных факторов, из которых одним из ведущих является бактериальная обсеменённость раны.
Учитывая, что сочетанное действие экзогенных и эндогенных факторов приводят к ослаблению функциональной активности клеток, участвующих в воспалительном процессе, актуальным является поиск эффективных лекарственных средств, стимулирующих воспалительный процесс и его исход [6].
Цель исследования заключалась в сравнительной оценке антибактериального эффекта препаратов, содержащих биологически активные вещества, при их наружном применении в лечении экспериментальной хронической раны.
Материалы и методы
Экспериментальная работа выполнена на 180-ти беспородных белых крысах массой тела 170-200г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии на обычном рационе (Комитет по этике ИГИУВа, протокол №10 от 21.10.2010). Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утверждённых МЗ СССР (Приложение к приказу Мз СССР №775 от 12.08.1977 г.) Хроническую рану моделировали в течение 8-ми суток, в соответствии с методическими рекомендациями Фармкомитета СССР (№4 от 12.09.1989 г). Модель создавалась в 3 этапа: 1 этап — нанесение стандартного повреждения путём в/к введения под лишённую волосяного покрова кожу боковой поверхности тела 1 мл 1% раствора СаС12, 2 этап (на 4-е сутки) — первичное микробное обсеменение раны, 3 этап (на 8-е сутки) — повторное обсеменение раны. Обсеменение раны проводили путем введения под образовавшийся струп 2 мл микробной взвеси, содержащей в равных соотношениях Ps. aeruginosa и St. aureus в концентрации 2х106 кл/мл. Для обсеменения раны использовали спе-
циально подобранные штаммы Ps. aeruginosa и S. aureus, обладающие набором факторов патогенности.
После создания модели хронической раны, т.е. через 8 суток от момента нанесения повреждения, начинали наблюдение за процессом заживления хронической раны. Материал для исследования брали на 1, 4, 8, 14, 21 и 28-е сутки наблюдения от 6-ти животных в указанные сроки. Животные были разделены на 5 групп, по 36 крыс в каждой. Первая группа — контрольная, вторая и третья — группы сравнения, четвертая и пятая — основные группы. Первая группа крыс не получала лечение, рана заживала спонтанно. Второй группе проводили лечение препаратом Абисил-1, третьей группе — препаратом Куриозин, четвертой группе — препаратом Антиран. Препараты наносили на поверхность раны ежедневно в течение 28-ми суток равномерным слоем в количестве 0,2 мл на 1 см2 площади раны, закрывали рану стерильной марлевой салфеткой и фиксировали повязкой.
Абисил-1 представляет собой 20% раствор пихтового масла на растительном масле, содержит терпеноиды, фла-воноиды, фитогормоны, витамины и микроэлементы.
Куриозин является ассоциатом цинк-гиалуроната, в виде геля, содержащего 2,05 мг/мл гиалуроната цинка.
Антиран — комплексное гелеобразное соединение, включающее 10-15% изоборнилацетата (природный стереоизомер борнилацетата, входящий в состав пихтового масла), 28-30% поверхностно-активного вещества — блоксополимера и 3-4% бензилового спирта, оставшийся объём занимает дистиллированная вода.
Пятой группе животных проводили комплексное лечение препаратом Антиран в сочетании с воздействием ультразвуковой кавитации. Комплексное лечение проводили в течение первых 4-6-ти суток, 1 сеанс в сутки. Каждый сеанс включал нанесение на раневую поверхность средства Антиран, затем воздействие ультразвуком в течение 8-10-ти минут с частотой колебаний 26,5±0,5 кГц, амплитудой 0,60-0,80 мм, после чего на рану повторно наносили Антиран. После комплексной терапии до конца наблюдений проводили монотерапию препаратом Антиран. Животных выводили из эксперимента методом декапитации под эфирным наркозом.
При помощи методов количественной бактериологии раневой инфекции установлено, что количественный показатель содержания бактерий на 1см2 биоптата раны является объективным лабораторным тестом, отражающим характер течения раневого процесса и позволяющим контролировать полноценность хирургической обработки гнойного очага [3].
Кроме того, при определении микробного пейзажа ран применяли бактериоскопический метод. Для этого, в качестве исследуемого материала использовали гнойное отделяемое с раневой поверхности, из которого готовили мазки-отпечатки на стерильные предметные стёкла. Перед приготовлением мазков-отпечатков с раны предварительно удаляли струп, очищали рану от некротических масс. Фиксацию мазков проводили путём высушивания на воздухе с последующим выдерживанием в 96% этиловом спирте в течение 20 минут. Фиксированные мазки-отпечатки окрашивали в течение 1 часа по методу Романовского-Гимза при разведении красителя 1:10, затем промывали водой и высушивали на воздухе. В мазках-отпечатках определяли концентрацию грамположительных кокков и грамотри-цательных палочек. Идентификацию микробных клеток проводили по морфологическим свойствам.
Концентрацию микроорганизмов на 1см2 (N) рассчитывали по формуле (3):
^ 0,0003
где n — среднее число микробных клеток, рассчитанное по результатам просмотренных полей зрения микроскопа (не менее 10); 0,0003 см — объём поля зрения микроскопа.
При статистической обработке данных для каждой выборки проверяли гипотезу о нормальности распределения. Для этого использовали тесты Колмогорова-Смирнова, Шапиро-Вилка и Лиллиефорса. При количестве наблюдений в выборке менее 10-ти или, в случае ненормального распределения, данные представляли в виде медианы с верхними и нижними квартилями (25-й и 75-й процентили) — Ме (25;75). При нормальном распределении в выборке данные представлены в средних величинах с ошибкой среднего арифметического (М (m)). Определение значимости различий полученных данных (р) в сравниваемых выборках при ненормальном распределении проводили по критерию Крускала-Уолиса (k-w), для связанных выборок — по критерию Вилкоксона (W). В случае нормального распределения значимость различий оценивали по критерию Стьюдента (t). Проведен регрессионный анализ полученных данных (множественная регрессия,
R), а также корреляционный анализ — с применением коэффициента корреляции Пирсона (r). Различия между показателями считали статистически значимыми при р<0,05. Статистическая обработка результатов произведена с помощью пакета программ Statistica 6.0 for Windous.
Результаты и обсуждение
В результате проведенного исследования установлено, что в первые 4 суток после моделирования хронической раны во всех сериях эксперимента размножение Ps. aeruginosa подавляется более существенно, чем размножение St. aureus, преобладающего в эти же сроки. Это наблюдение дает основание предположить, что Ps. aeruginosa более, чем St. aureus, подвержена киллерному уничтожению иммунной системой организма.
Возможно, это связано с отсутствием у Ps. aeruginosa, в отличие от St. aureus, способности продуцировать лецитиназу, защищающую от агрессии макроорганизмов. Необходимо подчеркнуть, что в этот срок преимущество St. aureus над Ps. aeruginosa сохраняется даже при лечении раны Абисилом, который оказывает на St. aureus достаточно сильное бактерицидное действие.
С 4-х по 8-е сутки раневого процесса при спонтанном заживлении раны и при лечении Абисилом и Куриозином (рис.1) размножение St. aureus подавляется, а Ps. aeruginosa активно размножается и доминирует в ране.
В последующие сроки наблюдения — при лечении Абисилом с 14-х суток, а при спонтанном заживлении раны и лечении ее Куриозином с 21-х суток — концентрация Ps. aeruginosa в 2-3 раза уменьшалась, а концентрация St. aureus стабилизировалась на относительно низком уровне. Из этого следует, что Ps. aeruginosa постепенно удаляется из тканей раны — сначала с поверхности, затем из микроабсцессов глубоких участков, причем при лечении Абисилом быстрее, чем при лечении Куриозином и спонтанном заживлении.
При лечении Антираном картина бактериальной об-семененности была прямо противоположной. Уже с 4-х по 21-е сутки эксперимента размножение Ps. aeruginosa устойчиво подавлялось, затем ее концентрация вновь незначительно повышалась (к 28-м суткам), тогда как концентрация St. aureus стабилизировалась на минимальном уровне с 8-х суток до конца наблюдений (до 28-х суток). Из этого следует, что Антиран, обладающий и бактерицидным и бактериостатическим действием в
отношении обоих штаммов бактерий, эффективно подавляет размножение бактерий на поверхности раны, особенно, Ps. aeruginosa.
В условиях лечения раны Антираном в сочетании с ультразвуковой кавитацией общая бактериальная об-семененность раны снижалась медленнее, несмотря на высокую антибактериальную эффективность Антирана, вероятно, за счет пополнения жизнеспособных бактерий из глубоких участков раны под действием кавитации. С 14-х суток до конца наблюдений микробный пейзаж раны стабилизировался и содержал, в основном, St. aureus, а Ps. aeruginosa была представлена в следовых количествах.
Традиционно, для лечения хронических ран применяют комбинированные препараты, содержащие антибиотики. В начале лечения это даёт положительные результаты, однако при длительном лечении под влиянием антибиотиков изменяется состав раневой микрофлоры, появляются антибиотикорезистентные формы микроорганизмов [3]. Ухудшение результатов лечения инфицированных ран вследствие прогрессирующего снижения «прямого» действия антибиотиков на микробную клетку определило развитие нового направления в гнойной хирургии, основанного на применении препаратов, содержащих природные биологически активные вещества, и физических (неспецифических) методов воздействия на раневой процесс.
В представленном исследовании разработан и апробирован оригинальный способ лечения ХР, сочетающий комплексное воздействие новым препаратом Антиран,
содержащим природный антисептик изоборнилацетат и физический метод воздействия на рану ультразвуковой кавитацией, при помощи которой достигается быстрое очищение раны от тканевого детрита и ин-фекта. Следует отметить, что изоборнилацетат входит в состав ряда растений [8] и является промежуточным продуктом при получении полусинтетической камфоры. Изоборнилацетат, входящий в состав препарата Антиран, ранее для лечения ХР не применялся.
Терпеноиды, представителем которых является бор-нилацетат, как и многие другие БАВ, успешно применяют в медицинской практике. Они обладают широким спектром биологической активности [1,2,4,5,7], в которой немаловажное место занимает и их антибактериальный спектр.
Оказалось, что Антиран максимально снижает бактериальную обсемененность хронической раны в 7,3 раза через 8-14 суток, а в сочетании с ультразвуковой кавитацией — в 13,2 раза через 21 сутки, в отличие от Абисила и Куриозина, под действием которых количество бактерий на поверхности хронической раны снижалось в 6,9 раза лишь к 28-м суткам.
Таким образом, установлено, что полученные экспериментальные данные свидетельствуют о высокой антибактериальной активности Антирана, значительно превышающей таковую у препаратов групп сравнения — Абисила и Куриозина. Бактерицидное действие Антирана, по нашим данным, проявляется по отношению как к Pseudomonas aureginosa, так и к St. aureus, но более выражено по отношению к Ps. aureginosa.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иванов А.Г., Кирсанов А.И., Юхт М.Ю. К включению масла лаванды в комплексную терапию лечения инфицированных ран у детей // Труды Крым. мед. ин-та. — Симферополь, 1976. — Т.71. — С. 30-31.
2. Киндялов В.М. Применение пихтовых мазей в лечении длительно незаживающих инфицированных ран.// Лесные биологически активные ресурсы. — Хабаровск, 2007. — С. 304-306.
3. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. — М., 1981. — 688 с.
4. Лужанский С.С., Соломченко Н.И., Козловский И.З. Применение фитонцидных препаратов в комплексной тера-
пии туберкулёза лёгких // Матер. Всесоюзн. научн. конф. по фармакологии и клиническому исследованию лекарственных препаратов из растений. — М., 1972. — С. 235-236.
5. Макарчук Н.М., Лещинская Я.С., Акимов Ю.А. Фитонциды в медицине. — Киев, 1990. — 216 с.
6. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. — М., 1991. — 272 с.
7. Николаевский В.В., Ерёменко А.Е., Иванов И.К. Биологическая активность эфирных масел. — М., 1987. — 144 с.
8. Цветковые растения, их химический состав, использование; семейства Нуррипйасеае — ЬоЬеНасеае // Растительные ресурсы СССР. — СПб.: Наука, 1991. — 200 с.
Информация об авторах: 664079, Иркутск, м/р Юбилейный,100, тел. (3952) 638123, 638135, 638104, e-mail: [email protected] Васильева Людмила Сергеевна — заведующая кафедрой, д.б.н., профессор, Симонова Елена Васильевна — д.б.н., профессор,
Тиранская Наталья Вячеславовна — ассистент,
Куликов Леонид Константинович — заведующий кафедрой, д.м.н., профессор, Смирнов Алексей Анатольевич — ассистент, к.м.н.,
Казанков Сергей Станиславович — врач-хирург.
© ДЕМЕНТЬЕВ К.А., КУЛИНИЧ С.И. — 2010
СПОСОБ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ МАЛОГО ТАЗА МЕТОДОМ КЛИНОВИДНОЙ ДЕГИДРАТАЦИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ
К.А. Дементьев, С.И. Кулинич (Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра акушерства и гинекологии, зав. — д.м.н., проф. С.И. Кулинич)
Резюме. Проведен анализ морфо-структурных особенностей фаций сыворотки крови пациенток с воспалительными заболеваниями внутренних женских половых органов. В результате исследования были выявлены специфические изменения фаций сыворотки крови главным образом зависящие от степени тяжести воспалительного процесса. Показана возможность с помощью метода клиновидной дегидратации осуществлять дифференциальную диагностику тяжести воспалительного процесса гениталий. Проведено сравнение полученных данных с лейкоцитарным индексом интоксикации и данными прокальцитонинового теста.
Ключевые слова: биологическая жидкость, клиновидная дегидратация, фасции сыворотки крови, структурнооптические свойства.
