CC BY
22
УДК: 616-001-005.1:616.155.1-06
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ НАНОСТРУКТУРЫ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ
У БОЛЬНЫХ С ТРАВМОЙ И КРОВОПОТЕРЕЙ
В.В.МОРОЗ, Е.А.МЯГКОВА, В.А.СЕРГУНОВА, О.Е.ГУДКОВА, Д.А.ОСТАПЧЕНКО, В.И.РЕШЕТНЯК
CHANGES DYNAMICS OF NANO-STRUCTURE OF ERYTHROCYTES' MEMBRANES
IN PATIENTS WITH INJURIES AND HEMORRHAGE
V.V.MOROZ, E.A.MYAGKOVA, V.A.SERGUNOVA, O.E.GUDKOVA, D.A.OSTAPCHENKO, V.I.RESHETNYAK
Научно-исследовательский институт общей реаниматологии им. В.А. Неговского РАМН, Москва, Россия
Изучены форма, размеры и наноструктура мембран эритроцитов у 18 пострадавших с тяжелой травмой с различным объемом потери крови. Изображения наноструктуры мембран эритроцитов получали с помощью атомно-силового микроскопа в резонансном режиме. Показано, что в первые сутки после тяжелой сочетанной травмы с различной степенью кровопотери наблюдается выраженный анизоцитоз и пойкилоцитоз, характеризующийся уменьшением количества нормоцитов, дискоцитов, увеличением количества макро- и микроцитов, эхиноцитов и плоских клеток. Выраженность анизоцитоза и пойкилоцитоза зависит от степени кровопотери. Выявлены существенные изменения наноструктуры мембран эритроцитов у пострадавших в первый день после травмы. Около 8% дискоцитов имели аномальные углубления пэллора с выростами в центре. Количественно оценена степень изменения наноповерхности мембран эритроцитов в динамике у больных с тяжёлой травмой и различной степенью кровопотери. Величина изменений h1 и h3 зависит от объёма кровопотери, h1 и h2 имели динамику снижения в первые две недели после травмы. Ключевые слова: тяжелая механическая травма, политравма, кровопотеря, атомно-силовая микроскопия, наноструктура мембран эритроцитов.
Study of forms, sizes and nano-structure of erythrocytes' membranes in 18 patients with severe injuries with different volume of hemorrhage have been described. Imaginations of nano-structure of erythrocytes' membranes were received by means of atomic-force microscope in resonant mode. It is shown that in the first days after heavy multitrauma with different degree of hemorrhage apparentanisocytosis and poikilocytosis which describe by decrease of normocytes, discocytes, the quantity of macro-, microcytes, ehinocytes and squamous cells were observed. Evidence of anisocytosis and poikilocytosis depends of hemorrhages' degree. Importantchanges ofnano-structure of erythrocytes'membranes in patients in the first day after trauma are revealed. About 8% of discocytes had anomalous hollow of pallor with excrescences in the centre. Degree of changes of nano-surface of erythrocytes'membranes in evolution in the patients with heavy trauma and different degrees of hemorrhage is appreciated quantitatively. The size of changes h1 and h3 depends of hemorrhages' volume, h1 and h2 had evolutionthe in the first two weeks after trauma. Keywords: heavy mechanical injury, multitrauma, hemorrhage, atomic-force microscopy, nano-surface of erythrocytes'membranes.
Эритроциты человека - это безъядерные клетки, имеющие форму дисков. Особая форма эритроцита обеспечивает выполнение ими основной функции - переноса дыхательных газов. Уменьшение количества эритроцитов, вызванное массивной кровопотерей, может приводить к гипоксии и изменению их формы и поверхности. Это может быть одной из причин развития критических состояний вследствие травмы. Перспективным методом исследования наноповерхности мембран клеток является атомно-силовая микроскопия (АСМ) [1-3,7].
Цель. Изучение формы, размера и наноструктуры мембран эритроцитов у пострадавших с тяжелой травмой с различным объемом потери крови.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Обследованы 18 больных (9 мужчин и 9 женщин) в возрасте от 27 до 79 лет, перенесших тяжелую механическую травму с различным объемом потери крови 23,5±15,9 мл/кг (от 3,3 до 46,1 мл/кг) и нарушением гемодинамики. Все
больные в зависимости от объема потери крови были разделены на две группы: 1-я группа - 7 пострадавших (4 - выживших, 3 - умерших; 1 пострадавший с тяжёлой сочетанной травмой (ТСТ), 5 пострадавших с черепно-мозговой травмой (ЧМТ), 1 пострадавший с ТСТ+ЧМТ). Объем потери крови < 750 мл (5,7±1,9 мл/кг) -кровопотеря (КП) III степени тяжести (СТ), 2-я группа - 11 пострадавших (5 - выживших, 6 - умерших; 5 пострадавших с ТСТ, 5 пострадавших с ТСТ+ЧМТ, 1 пострадавший с ЧМТ). Объем потери крови > 2000 мл (37,5±5,1 мл/кг) - КП IV СТ. Клинико-лабораторные показатели изучали при поступлении больных в отделение реаниматологии и на 3-и, 5-е, 7-е и 15-е сутки. Контрольную группу составили 5 практически здоровых добровольцев в возрасте 26,4±2,7 года.
Для изучения состава и структуры мембран красных клеток крови десять микролитров цельной крови наносили на предметное стекло и готовили монослои эритроцитов с помощью прибора «V-sampler» (Vision, Австрия). Изобра-
жения наноструктуры мембран эритроцитов получали с помощью атомно-силового микроскопа («NTEGRAprima», NT-MDT, Россия) в резонансном режиме. Атомный-силовой микроскоп (АСМ) (рис. 1) — сканирующий зондовый микроскоп высокого разрешения. Используется для определения рельефа поверхности с разрешением от десятков ангстрем вплоть до атомарного. АСМ создали в 1982 два швейцарских физика Герд Бинниг и Гейнрих Рорер (Нобелевская премия 1986). Его достоинством является возможность изучения поверхности непроводящих структур, в частности биологических мембран и других биологических объектов. В последнее время с помощью атомного силового микроскопа физики стали интенсивно изучать биологические объекты, например, молекулы ДНК и другие макромолекулы.
Рис. 1. Атомно-силовой микроскоп.
Принцип действия атомного силового микроскопа основан на использовании сил атомных связей, действующих между атомами вещества. На малых расстояниях между двумя атомами (около одного ангстрема, 1 А = 10-8 см) действуют силы отталкивания, а на больших - силы притяжения (рис. 2). В сканирующем атомном силовом микроскопе такими телами служат исследуемая поверхность биологического объекта и скользящее над нею острие кантивелера. Сканирование осуществляется, как правило, в режиме постоянной силы, когда система обратной связи поддерживает постоянной величину изгиба кантилевера.
При исследовании образцов перепадами высот порядка единиц ангстрем применяют режим сканирования при постоянном среднем расстоянии между зондом и поверхностью образца. В этом случае кантилевер движется на некоторой средней высоте над образцом. Изгиб консоли Z, пропорциональный силе, действующей на зонд со стороны поверхности, записывается для каждой точки. Изображение в таком режиме представляет собой пространственное распределение силы взаимодействия зонда с поверхностью. Разрешающая способность данного метода составляет примерно 0,1-1 нм по горизонтали и 0,01 нм по вертикали.
Количественные оценки изменений наноструктуры мембран получены с использованием про-
Рис. 2. Принцип действия атомно-силового микроскопа.
странственного преобразования Фурье [1]. Полученные изображения поверхности мембран эритроцитов разлагали на три порядка со спектральными окнами: первый порядок - пространственный период L1 в диапазоне 600-1000 нм, второй порядок L2 - 80-210 нм, третий порядок L3 - 30-60 нм. Для каждого порядка выбранного фрагмента клетки измеряли высоты (h.). Параметры выбраны из структурных особенностей мембраны эритроцита. Согласно данным лаборатории биофизики мембран клеток при критических состояниях института общей реаниматологии им. В.А.Неговского РАМН, изменения h1 отражают состояние и структурные изменения фосфолипид-ного бислоя и представляют собой одномоментную реплику flickering, h2 - состояние и структурные изменения спектринового матрикса, h3 - состояние и структурные изменения белковых кластеров цитоплазматической мембраны эритроцита [1,5,7].
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программного обеспечения «Origin» (OriginLabCorporation, USA) [4], с использованием общепринятых математи-ко-статистических методов расчета основных характеристик выборочных распределений (среднее арифметическое (M), стандартное отклонение (SD), медиана (Md), междуквартильный размах (q3;q1)). Для проверки статистических гипотез был использован непараметрический критерий Вилкоксона (Wilcoxon).
ОПИСАНИЕ ПОСТРАДАВШИХ
Все пострадавшие поступали в реаниматологическое отделение в состоянии травматического шока, сопровождавшемся гемодинамическими нарушениями (АДср. <75 мм рт.ст.), в коматозным состоянием (<8 баллов по шкале Глазго), а также с изменениями следующих параметров [Md (q3-q1)]: снижением напряжения кислорода [50.3 (72.8; 43.3) мм рт.ст.] в артериализированной капиллярной крови; нарастанием дефицита оснований [ВЕ= -3.15 (-6.7; -0.4) мМ/л]; уменьшением уровня гемоглобина [102 (124.2;95.2) г/л]; гема-токрита [29 (37;27) %]; количества эритроцитов [3.49 (4.23;3.13)х1012]; повышенным содержанием лактата [2.41 (4.79;1.91) мМ/л] и глюкозы [10.7
(12.75; 8.25) мМ/л]; сниженным содержанием 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина [1.2 (1.5; 1.05) нг/л]. В группе умерших больных, а также в группе пострадавших с кровопотерей IV степени тяжести изменения показателей гомеостаза более выражены, чем в 1-й группе и у выживших. В первые сутки после травмы для восполнения объема циркулирующей крови (гиповолемии) и устранения гемодинамических нарушений пострадавшим вводились кристаллоидные и коллоидные растворы, а при кровопотере, превышающей 40% ОЦК-эритроцитарная масса и свежезамороженная плазма.
На 3-и сутки у больных происходит нарастание количества лейкоцитов [10,7х109 (13,05 х109; 8,85х109], палочкоядерный сдвиг [9.5 (10.25; 7.75)], по данным рентгенологического исследования органов грудной клетки отмечаются инфиль-тративные изменения в лёгких.
На 3-и и 5-е сутки после травмы у всех пострадавших по сравнению с первыми сутками регистрируюется достоверное снижение уровня гемоглобина [79 (81; 69.5) и 85.5 (99.2; 80.2) г/л], р<0,05 [102 (124.2; 95.2) г/л], гематокри-та [22 (23; 20) % и 25 (26; 23) %] р<0,05 [29 (37; 27)%] и количества эритроцитов [2.57 (2.78; 2.34)х1012 и 2.97 (3.21; 2.74)х1012], р<0,05 [3.49 (4.23;3.13)х1012], что обусловлено гемодилюцией за счет проведения массивной инфузионно-транс-фузионной терапии.
На фоне проведения искусственной вентиляции легких, введения буферных растворов отмечается нормализация рН [7,45 (7,48; 7,409) (3-й день) и 7,47 (7,5; 7,45) (5-й день)], напряжения кислорода [95,15 (119,05; 71,7) (3-й день) и 78,9 (119,95; 55,5) (5-й день), мм рт.ст, коррекция дефицита оснований [ВЕ= -1,15 (0,22; -2,25) (3-й день) и 0,5 (2,9; 0,5) (5-й день) мМ/л].
На 7-е сутки отмечается дальнейшее нарастание уровня гемоглобина [88 (104,7; 85) г/л], гематокрита [26 (31; 24)%], эритроцитов [3,04 (3,44; 2,77)х1012)] за счет проводимой трансфузи-онной терапии; снижение уровня гликемии [6,69 (8,08; 6,24) мМ/л] и лактатемии [2,6 (2,7;1,8) мМ/л]. Снижение напряжения кислорода на 7-е сутки до 65,5 (84,4; 54,5) мм рт.ст на фоне ИВЛ относительно 5-х суток обусловлено, скорее всего, развитием нозокомиальной пневмонии.
На 15-е сутки большинство выживших больных переводят на самостоятельное дыхание, в связи с чем, напряжение кислорода снижается и находится в пределах нормальных значений [71,4 (83,2; 58,7) мм рт.ст.].
К 15-м суткам происходит стабилизация параметров гомеостаза, нарастание уровня гемоглобина [105 (119; 92) г/л], эритроцитов [3,44 (3,94; 3,23) х1012], нормализация рН [7,48 (7,52; 7,46)) и ВЕ [0,35 (2,65; -0.15)] плазмы крови. Концентрация лактата в первые две недели наблюдения постепенно снижается и к 15-м суткам достигает нормальных значений - 1,9 (2,09; 1,77) ммоль/л.
В первые сутки после травмы содержание
8-гидрокси-2-дезоксигуанозина в плазме крови пострадавших было снижено и составило 1,2 (1,5; 1,05) пг/мл, что в три раза ниже нормы [3,6 (4,4; 3,2)]. Содержание 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина в сыворотке крови в период наблюдения имеет тенденцию к увеличению. Динамика 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина зависит от степени кровопотери, исхода и вида травмы. В первые сутки после травмы при кровопотере I степени тяжести 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина составляет 1,4 (1,8; 1,1) пг/мл, а при КП IV СТ
- 1,1 (1,3; 0,7) пг/мл. Содержание 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина у выживших 1-й группы на 3-и, 7-е и 15-е сутки примерно в 2 раза ниже, чем у выживших 2-й группы. И лишь на 2-дезоксигуа-нозина составило соответственно 1,1 (1,27; 1,0) и 1,3 (1,7; 1,2) пг/мл.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Группа сравнения. Сравнительную количественную оценку формы и размера эритроцитов проводили методом атомно-силовой микроскопии в поле, содержащем 100, 200, 300 и 1000 клеток. достоверных отличий при подсчете нормоцитов (от 60,0% до 73,5%) и микроцитов (от 6,2% до 8,3%) не выявлено. Количество макроцитов в поле, содержащем 1000 и 300 клеток, составило соответственно 30,7±1,7 и 29,4±3,3%, что достоверно отличалось от количества макроцитов, выявленном при подсчете в поле 100 клеток (18,2±2,2%, р<0,05). Распределение эритроцитов по размеру, полученное с помощью атомно-силовой микроскопии (в поле, содержащем 100 клеток), было следующим: нормоциты - 60,0%±2,4%, макроциты
- 19,0%±4,6%, микроциты - 16,8%±3,8%.
В группе сравнения при АСМ в поле 100х100 мкм выявлены следующие формы эритроцитов: дискоциты (96±5%), эхиноциты (2,5±1%), плоские клетки (1±0.5%). Дискоциты имели двояковогнутую форму, диаметр от 7,0 до 8,2 мкм, толщина от 350 до 550 нм, с углублением в центре (пэллор) от 10 до 270 нм (рис. 3 а). Эхиноциты имеют форму шиповидных дисков толщиной от 280 до 840 нм, без углубления в центре (рис. 3 б). Плоские клетки имели форму дисков с гладкой ровной поверхностью диаметром от 8,5 до 9,5 мкм, толщиной от 300 до 390 нм, без углубления в центре (рис. 3 в).
Группа пострадавших. В первые сутки после травмы у пострадавших снижено количество нормоцитов (44,8±18,3%) по отношению к контролю (73,5±3,1); увеличено количество макроцитов (33,4±19,2%) (18,2±2,2); повышено количество микроцитов (25,6±15,2%) (7,0±1,8). Достоверных различий с группой сравнения не выявлено. К 15-м суткам наблюдения отмечается достоверное увеличение количества макроцитов до 45,3±23,7% (р<0,05, относительно контроля 8,2±2,2), связанное, вероятнее всего, с усилением эритропоэза; а также снижением количества микроцитов до 12,7±8%.
Анизоцитоз, выявленный методом АСМ, зави-
Shoshilish 1ЛьЫуо1 axboгotnomasi, 2013, № 4
39
Рис. 3. Изображение различных форм эритроцитов и их графические профили в группе сравнения, полученные с помощью АСМ: а - дискоцит; б - эхиноцит; в - плоская клетка.
сел от степени кровопотери. Количество нормоци-тов в первые сутки после травмы при кровопоте-ре I степени тяжести составило 58,0 (43,5; 62,5)%, а при КП IV СТ - 39 (30; 54)%; макроцитов: при КП I СТ - 22,0 (20,5; 45,5)%, при КП IV СТ -27,0 (23,0; 37,5)%; микроцитов: при КП I СТ - 11,0 (6,5; 17,0)%, при КП IV СТ - 29 (19; 32)%.
При АСМ в поле 100x100 мкм у пострадавших с травмой в день поступления в реаниматологическое отделение выявлены достоверные отличия изменения количества эритроцитов по форме: количество дискоцитов составило 72 (50; 84)%, p<0,05 относительно контроля [96 (91;101) %]; эхиноцитов - 7,0 (5,0; 13,2)%, p<0,05 относительно контроля [3 (2;4)%]; плоских клеток - 6,0 (2,5; 17,5)%, p<0,05 относительно контроля [1 (0,5;1,5)%]. В группе пострадавших с крово-потерей I степени тяжести количество дискоцитов постепенно нарастает в динамике и к 15-му дню наблюдения достигает нормальных значений [98 (98; 98)%], в то время как в группе с КП IV СТ количество дискоцитов остается сниженным на всем протяжении наблюдения.
Атомно-силовая микроскопия
При поступлении пострадавших с различными видами травмы в стационар отмечаются значительные изменения наноструктуры мембраны
эритроцитов: средние значения высоты 1-го порядка у всех пострадавших возрастает почти в 9 раз (Ь4=9,2±5,5 нм), высоты 2-го порядка - Г в 1,5 раза (Ь2=1,3±0,5 нм), высоты 3-го порядка - Г в 3 раза (Ь3=0,52±0,39). В первые сутки после травмы выявлена тенденция к возрастанию значений высот 1-го и 3-го порядков при увеличении объема кровопотери: Ц - 6,7±5,0 нм при КП I СТ; 10,8±6,0 нм при КП IV СТ; Ь3 - 0,39±0,26 нм при КП I СТ; 0,63±0,47 нм при КП IV СТ. Высота 2-го порядка не зависит от степени тяжести кровопотери и составляет при КП I СТ 1,45±0,48 нм; при КП IV СТ -1,50±0,56 нм.
В первые две недели после травмы высоты всех трёх порядков имеют тенденцию к снижению. На 15-е сутки наблюдения высота 2-го порядка достигает нормальных значений - 0,98±0,09 нм. Высоты 1-го и 3-го порядков к 15-м суткам после травмы остаются повышенными и составляют соответственно 7,2±6,2 нм и 0,46±0,18 нм.
Учитывая, что в момент поступления больного в реаниматологическое отделение массивная инфузионно-трансфузионная терапия еще не проводилась, то выявленные изменения являются следствием травмы, массивной кровопотери, гипоксии, гемодинамических нарушений. Эти изменения могут свидетельствовать о влиянии степени
Рис. 4. Изображение эритроцитов здорового донора (а]и пострадавшего от тяжелой сочетанной травмы (б] при атомно-сияовой (в формате 3D] микроскопии в поле 100x100 мкм. Строктура идиночного эритрлцита с углубленным пэллором и выростом в центре (в] в поле 10х10мкм пострадавшего от тяжелий сочеталной травмы и ого графический профиль, полученные с помощью итомго-силовиг микроскопии.
гипоксии на структурные элементы эритроцита. Кровопотеря и гипоксия приводят к структурным изменениям мембраны эритроцита, свидетельствующим о том, что в этот процесс вовлекаются фосфолипидный бислой (изменения Ц) и белковые компоненты (изменения Ь3) мембраны. Спек-триновый матрикс (значения высот Ь2) подвергается меньшим изменениям.
Основная функция эритроцита - транспорт газов крови. Этим вызваны особенности строения красных клеток крови - отсутствие ядра, митохондрий и анаэробный путь восполнения клетки энергетическим материалом через глюкозо-6-фосфатный цикл. Возрастание значения высоты первого порядка (9,3±5,5 нм) в первые сутки после травмы во всей группе пострадавших сопровождается увеличением уровня глюкозы [10,7 (12,75; 8,25) ммоль/л] в крови и лактата [2,41 (4,76; 1,91) ммоль/л]. Для поддержания жизнеспособности и выработки энергии АТФ эритроцит использует глюкозу и имеющееся в плазме крови небольшое количество растворенного кислорода. Увеличение содержания глюкозы в крови при травме является компенсаторной реакцией организма и частично направлено на поддержание жизнеспособности оставшихся после кровопотери
эритроцитов. Выявленные структурные изменения могут отражать функциональное состояние эритроцита, находящегося в экстремальных условиях гипоксии. Возможно, в связи со снижением напряжения кислорода в крови сразу после травмы и кровопотери происходит компенсаторное увеличение поверхности дискоцита: увеличение глубины пэллора, появление мембранного выроста в центре пэллора, увеличение колебания фосфоли-пидного бислоя (возрастание ^), что позволяет более эффективно использовать сниженное количество в крови кислорода как для обеспечения жизнеспособности самого эритроцита, так и для транспортировки кислорода эритроцитом.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В первые сутки после тяжелой сочетанной травмы с различной степенью кровопотери при атомно-силовой микроскопии наблюдается выраженный анизоцитоз и пойкилоцитоз, характеризующийся снижением уровня нормоцитов, дискоци-тов, увеличение количества макро-, микроцитов, эхиноцитов и плоских клеток. Выраженность анизоцитоза и пойкилоцитоза зависит от степени кровопотери. Выявлены существенные изменения наноструктуры мембран эритроцитов у пострадав-
ЗЬозЫНзЬ tibbiyot ахЬого^отаз^ 2013, № 4
41
ших в первый день после травмы. Около 8% дис-коцитов имели аномальные углубления пэллора с выростами в центре. Количественно оценена степень изменения наноповерхности мембран эритроцитов в динамике у больных с тяжёлой травмой и различной степенью кровопотери. Величина изменений h4 и h3 зависит от объёма кровопотери, h4 и h2 имели динамику снижения в первые две недели после травмы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Козлова Е.К., Черныш А.М., Мороз В.В. и др. Действие ионов цинка на мембраны красных клеток крови in vitro. Мед физика 2011;4(52):43-49.
2. Мороз В.В., Черныш А.М., Козлова Е.К. и др. Атомная силовая микроскопия структуры мембран эритроцитов при острой кровопотере и реинфу-зии. Общая реаниматол 2009;5(5):5-9.
3. Мороз В.В., Черныш А.М., Козлова Е.К. и др. Нарушения наноструктуры мембран эритроцитов при острой кровопотере и их коррекция перфторуглеродной эмульсией. Общая реаниматол 2011;7(2): 5-9.
4. Поликарпов В.М., Ушаков И.В., Головин Ю.М. Современные методы компьютерной обработки экспериментальных данных. ТГТУ 2006;84.
5. Guha T., Bhattacharyya K., Bhar R. 'Holes' on erythrocyte membrane and its roughness contour imaged by atomic force microscopy and lateral force microscopy. Curr Sci 2002;83(6):693-694.
6. Moroz V.V., Chernysh A. M., Kozlova E. K. et al. Comparison of red blood cell membrane microstructure after different physicochemical influences: atomic force microscope research. J Crit Care 2010;25(3):539.e1-539.e12.
7. Park Y., Best C.A., Auth T. et al Metabolic remodeling of the human red blood cell membrane. Proc Natl Acad Sci USA 2010;107(4):1289-1294.
ШИКАСТЛАНИБ ЦОН ЙУКЩГАН БЕМОРЛАРДА ЭРИТРОЦИТЛАР НАНОСТРУКТУРАСИНИНГ УЗГАРИШИ ДИНАМИКАСИ
В.В.Мороз, Е.А.Мягкова, В.А.Сергунова, О.Е.Гудкова, Д.А.Остапченко, В.И.Решетняк Россия тиббиёт фанлари академиясининг В.А.Неговский номидаги Умумий реаниматология ИТИ, Москва
Огир шикастланишлар натижасида турли ми°дорда °он йу°отган 18 беморда эритроцитларнинг шакли, улчамлари ва мембранасининг наноструктураси урганилган. Эритроцитлар мембранасининг наноструктураси тасвири атомли-кувватли микроскоп ёрдамида резонанс тартибида олинган. Турли даражадаги °он йу°отишлар билан кечувчи огир °ушма шикастланишларнинг биринчи кунларида кучли анизоцитоз ва пойкилоцитоз кузи-тилиши ва бу холат нормоцитлар хамда дискоцитлар ми°дорининг камайиши, макро-, микроцитлар, эхиноцит-лар ва ясси хужайралар сонининг ортиши билан фар°ланиши курсатилган. Анизоцитоз ва пойкилоцитознинг намаён булиш даражаси °он йу°отиш даражаси билан богли°дир. Шикастланишнинг биринчи куни эритроцитлар мембранасининг наноструктурасида салмо°ли узгаришлар ани°ланган. Тахминан 8% дискоцитларнинг пэллорида марказида буртмаси булган аномал чукурчалари булган. Огир шикастланиши ва турли ми°дордаги °он йу°отиши булган беморларда эритроцитлар мембранасининг наноюзасидаги узгаришлар даражасининг динамикасига ми°дорий бахо берилган. h1 и h3 даги узгаришлар даражаси йу°отилган °он ми°дори билан богли°лиги ани°ланилиб, шикастланидан сунг биринчи икки хафта ичда h1 и h2 камайишга моил эканлиги курсатилган.
