CC BY
94
УДК 619:579.842 О.С. Дансарунова, ЕД. Дугаржапова,
Н.В. Ковалева, О.А. Зверева, В.Ц. Цыдыпов
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА БЕЛЫХ МЫШЕЙ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТА ПО АЛИМЕНТАРНО-ТОКСИЧЕСКОЙ ПАРОКСИЗМАЛЬНОЙ МИОГЛОБИНУРИИ
В статье представлены результаты по изменению кишечной микрофлоры белых мышей в условиях эксперимента по алиментарно-токсической пароксизмальной миоглобинурии (АТПМ).
Ключевые слова: микрофлора, дисбактериоз, лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечная палочка.
O.S. Dansarunova, E.D. Dugarzhapova, N.V. Kovaleva, O.A. Zvereva, V.Ts. Tsydypov
THE DYNAMICS OF THE CHANGEIN THE INTESTINAL MICROFLORA OF WHITE MICE IN THE EXPERIMENT ON THE ALIMENTARY-TOXIC PAROXYSMAL MYOGLOBINURIA
The results on the change in the intestinal microflora of white mice in the experiment on alimentary toxic paroxysmal myoglobinuria (ATPM) are presented in the article.
Key words: microflora, disbacteriosis, lactobacteria, bifidus bacteria, enterococcus, colibacillus.
Введение. Микрофлора кишечника представляет собой открытый биоценоз микроорганизмов, встречающихся у здоровых животных. Будучи биологическим фактором защиты, нормальная микрофлора способствует поддержанию здорового статуса организма, правильному выполнению его нормальных физиологических функций. Вместе с тем нормальная микрофлора кишечника является весьма чувствительной микроэкологической системой организма [1, 3]. Различные воздействия на организм хозяина и его микрофлору: инфекционные заболевания, витаминное и белковое голодание, стрессы, действие токсин, нерациональная химиотерапия -приводят к синдрому нарушений микроэндоэкологии пищеварительного тракта - дисбактериозам [2].
Цель исследования. Изучение изменений динамики микрофлоры кишечника белых мышей в условиях эксперимента по АТПМ - алиментарно-токсической пароксизмальной миоглобинурии.
Методы и результаты исследования. Для постановки опыта были отобраны белые мыши - самцы, массой не менее 20-25 г, из которых сформировали две группы по 5 животных в каждой - опытная и контрольная. Во время проведения эксперимента рацион опытных животных состоял из сырых внутренних органов брюшной полости рыбы-леща с подозрением на АТПМ - алиментарно-токсическую пароксизмальную миоглобинурию (оз.Котокельское). Каждой группе мышей ежедневно давали утром по 20 г, а вечером по 40 г внутренних органов брюшной полости. Контрольные мыши получали в таком же количестве сырые внутренние органы от здоровой рыбы. Перед кормлением рыбой был определен количественный и качественный состав кишечной микрофлоры белых мышей опытной и контрольной группы. Кроме того, на 2-, 5-, 7-е сутки экспериментов определили общее количество фекальной микрофлоры, содержание лактобактерий, бифи-добактерий, энтерококков и эшерихий. Результаты экспериментов представлены в таблицах 1-4.
Количество микроорганизмов в перерасчете на 1 г фекалий (КОЕ/г) определяли высевом соответствующих десятикратных разведений суспензий кала на плотные питательные среды в чашках Петри и подсчетом выросших колоний бактерий по истечении времени инкубирования в термостате при температуре 37° 18-24 часа по формуле
М = ^Ю"*1,
где М - число микробов в одном грамме кала;
N - число выросших на чашке колоний;
п - степень разведения материала.
ВестникКрасГАУ 2014. №6
Таблица 1
Количественный и видовой состав микрофлоры кишечника белых мышей до кормления рыбой
Номер белой мыши Общее микробное число КОЕ х г-1 Лакто-бактерии КОЕ х г-1 Бифидобактерии КОЕ х г-1 Энтерококки КОЕ х г-1 Эшерихии КОЕ х г-1
Контрольная группа
1 5,0 х 1010 2,8х 107 7,0 х 107 1,9 х 105 0,9 х 106
2 4,5х 1010 2,3 х 106 5,4 х 107 1,1 х 105 0,3 х 106
3 5,1 х 1010 4,1х 106 4,0х 108 1,7х 104 1,3х 107
4 3,8х 1010 2,5х 107 3,8х 107 0,6х 105 0,6х 106
5 4,6х 1010 3,1х 107 4,3х 107 1,2 х 104 0,5 х 107
Сред. число (4,6+0,22)х 1010 (2,9+0,36)х 107 (4,9+0,6)х 108 (1,3+0,2)х 105 (0,7+0,13)х 106
Опытная группа
6 5,3 х 1010 3,0х 108 6,10 х 108 1,8 х 104 1,6 х 106
7 4,7 х 1010 4,9 х 108 3,6 х 107 1,5 х 105 1,9 х 106
8 5,2 х 1010 2,5 х 106 1,9 х108 2,1 х 104 0,3 х 106
9 5,7 х 1010 3,1 х106 5,9 х 106 1,3 х 105 0,8 х 106
10 4,9 х 1010 4,6 х106 5,0х 108 2,0х 104 1,8х 107
Сред. число (5,1+0,18)х 1010 (3,6+0,45)х 106 (4,5+0,77)х 108 (1,7+0,3)х 104 (1,2+0,31)х 106
Из таблицы 1 мы видим, что общее микробное число у контрольных мышей составляет (4,6+0,22) х 1010, в том числе полезной микрофлоры желудочно-кишечного тракта мышей: лактобактерии (2,9+0,36) х 107, бифидобактерии (4,9+0,6) х 108. Условно-патогенная микрофлора состоит из энтерококков (1,3+0,22)х105, кишечной палочки (0,7+0,13) х 106.
У опытной группы мышей общее микробное число составляет (5,1+0,18) х 1010.Полезная микрофлора желудочно-кишечного тракта мышей состоит из лактобактерий (3,6+0,45) х 106, бифидобактерий (4,5+0,77) х 108. Условно-патогенная микрофлора состоит из энтерококков (1,7+0,13) х 104, кишечной палочки (1,2+0,31)х106 .
Таблица 2
Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом белых мышей
на 2-е сутки эксперимента
Номер белой мыши Общее микробное число КОЕ х г-1 Лактобактерии КОЕ х г-1 Бифидобактерии КОЕ х г-1 Энтерококки КОЕ х г-1 Эшерихии КОЕ х г-1
Контрольная группа
1 4,0 х 1010 2,9х 107 4,0 х 107 2,9 х 105 0,5 х 106
2 3,5х 1010 3,1 х 106 5,4 х 106 2,1 х 105 1,3 х 105
3 4,1 х 1010 3,8х 106 3,0х 108 2,0х 104 5,3х 106
4 2,9х 1010 3,2х 106 3,7х 107 5,4х 104 1,7х 106
5 4,6х 1010 4,1 х 106 5,0х 108 1,0 х 104 1,5 х 106
Сред. число (3,8+0,29)х 1010 (3,4+0,22)х 107 (4,2+0,44)х 108 (2,6+0,75)х 105 (2,0+0,85)х 106
Опытная группа
6 0,3 х 1010 2,0х 106 6,1 х 107 1,5 х 106 2,6 х 106
7 0,7 х 1010 3,0 х 105 2,6 х 107 0,5 х 105 1,91 х 105
8 4,2 х 1010 2,3 х 106 1,90 х107 1,9 х 106 0,9 х 106
9 6,7 х 109 2,8 х106 0,9 х 106 3,7 х 105 1,0 х 106
10 4,0 х 1010 3,0 х106 4,8х 108 1,8х 106 1,7х 108
Сред. число (3,1+1,21)х 1010 (2,6+0,20)х 106 (3,2+0,95)х 107 (1,8+0,52)х 106 (1,6+0,31)х 106
Из таблицы 2 определяем количественный и видовой состав белых мышей на 2-е сутки после заражения: у контрольной группы мышей общее микробное число составляет (3,8+0,29) х 1010, лактобактерий (3,4+0,22)х107 , бифидобактерий(4,2+0,44)х108, энтерококков (2,6+0,75) х 105, эшерихий (2,6+0,75) х 105.
У опытной группы мышей общее микробное число составило (3,1+1,21) х 1010, отмечается снижение представителей полезной микрофлоры: лактобактерий (2,6+0,20) х 106, бифидобактерий (3,2+0,95) х 107, одновременно отметился рост энтерококков (1,8+0,52) х 106, число эшерихий и лактобактерий не изменилось (1,6+0,31)х 106 и (2,6+0,20) х 106 соответственно.
Таблица 3
Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом белых мышей
на 5-е сутки эксперимента
Номер белой мыши Общее микробное число КОЕ х г-1 Лактобактерии КОЕ х г-1 Бифидобакте-рии КОЕ х г-1 Энтерококки КОЕ х г-1 Эшерихии КОЕ х г-1
Контрольная группа
1 8,0 х 109 4,3х 107 5,6 х 107 3,0 х 105 1,0 х 106
2 4,0х 109 2,5 х 107 6,2 х 107 5,4 х 105 0,9 х 107
3 5,1 х 1010 5,8х 106 2,7х 108 6,2х 104 2,7х 106
4 7,0х 109 3,7х 107 5,1 х 107 2,7х 105 1,6х 106
5 2,7х 1010 9,1х 107 4,5х 107 7,0 х 103 1,3 х 107
Сред. число (5,3+0,98)х 109 (5,0+1,15)х 107 (4,8+0,60)х 107 (4,8+0,90)х 105 (1,5+0,31)х 106
Опытная группа
6 2,8 х 109 2,5х 106 5,0 х 106 1,6 х 104 0,8 х 108
7 2,7 х 1010 1,97 х 105 3,1 х 107 1,0 х 105 1,2 х 107
8 4,7 х 1010 2,4 х 106 2,0 х106 2,1 х 104 0,6 х 108
9 6,2 х 109 2,9 х106 3,4 х 106 3,3 х 104 1,8 х 107
10 4,45 х 109 3,8 х105 4,9х 107 1,9х 105 1,7х 107
Сред. число (4,1+0,63)х 109 (2,7+0,31)х 106 (3,6+0,54)х 106 (1,9+0,38)х 106 (1,2+0,24)х 107
Из таблицы 3 мы видим, что на 5-е сутки эксперимента отмечается снижение общего количества фекальной микрофлоры; так, у контрольных мышей оно составило (5,3+0,98) х 109, у опытной группы мышей соответственно (4,1+0,63) х 109. У контрольной группы мышей также отмечается небольшое снижение бифидобактерий (4,8+0,60) х 107, число лактобактерий не изменилось (5,0+1,15) х 106. Количество представителей условно-патогенной микрофлоры не изменилось: энтерококки (4,8+0,90) х 105 , эшерихии (1,5+0,31) х 106.
У опытной группы мышей снизилось число бифидобактерий (3,6+0,54) х 106, одновременно увеличилось количество кишечной палочки (1,2+0,24) х 107. Количество лактобактерий, энтерококков не изменилось: (2,7+0,31) х 106, (1,4 +0,55) х 107, (1,9 +0,38) х ^соответственно.
Таблица 4
Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом белых мышей
на 7-е сутки эксперимента
Номер белой мыши Общее микробное число КОЕ х г-1 Лактобактерии КОЕ х г-1 Бифидобактерии КОЕ х г Энтерококки КОЕ х г-1 Эшерихии КОЕ х г-1
1 2 3 4 56
Контрольная группа
1 6,0 х 1010 3,6х 106 4,9 х 107 3,9 х 105 0,75 х 106
2 3,7х 109 2,8 х 106 5,2 х 107 3,75 х 105 1,1 х 106
3 4,6х 109 2,0х 106 2,8х 108 4,1х 104 4,0х 107
4 4,9х 1010 3,4х 106 4,4х 107 4,05х 104 1,65х 106
5 3,6х 109 6,6х 105 4,7х 106 4,0 х 105 1,4 х 107
Сред. число (4,5+0,40)х 109 (3,6+0,77)х 106 (4,4+0,53)х 107 (3,9+0,06)х 105 (1,7+0,58)х 107
ВестникКрасГАУ. 2014. №6
Окончание табл. 4
1 2 3 4 5 6
Опытная группа
6 1,55 x 106 2,25x 105 5,5 x 103 1,55 x 106 1,7 x 107
7 1,7 x 106 2,4 x 104 2,85 x 103 0,75 x 106 1,5 x 107
8 4,45 x 109 2,3 x 104 1,95 x103 2,0 x 106 0,75 x 106
9 6,45 x106 2,85 x103 2,15 x 105 3,5 x 105 1,4 x 107
10 4,2 x 109 3,4 x104 4,8x 105 1,85x 105 1,0x 108
Сред. число (3,6+0,93)х 106 (2,6+0,21)х 104 (3,4+0,7)х 103 (1,9+0,45)х 106 (1,2+0,17)х 107
Из таблицы 4 мы видим, что на 7-е сутки эксперимента у контрольной группы мышей отмечается небольшое снижение общего количества микробов (4,5+0,40) х 109, лактобактерий (3,6+0,77) х 106, бифидобак-терий (4,4+0,53) х 107, число энтерококков не изменилось (3,9+0,06) х 105 , отмечается незначительнее увеличение кишечной палочки (1,7+0,58) х 107.
У опытной группы значительно снизилось общее микробное число (3,6+0,93) х 106, лактобактерий (2,6+0,21) х 104, бифидобактерий (3,4+0,7) х 103, энтерококков (1,9+0,45) х 106, эшерихий (1,2+0,17) х 107 .
Таким образом, полученные результаты динамики кишечной микрофлоры опытной группы мышей показали, что кормление сырыми внутренними органами брюшной полости рыб привело к значительному сдвигу в микробиоценозе кишечника в сторону увеличения численности условно-патогенных микроорганизмов и уменьшения числа полезной микрофлоры у мышей.
Выводы. Анализ полученных результатов показал, что кишечная микрофлора белых мышей подверглась изменениям, которые характеризуются увеличением в кишечном содержимом условно-патогенных бактерий. Наиболее выраженные изменения отмечаются на 7-е сутки наблюдения. Это свидетельствует, что введение в корм рыбы, подозрительной на АТПМ, сопровождается заметным уменьшением колонизационной резистентности кишечника, следствием чего явилось увеличение потенциально-патогенных микроорганизмов.
Литература
1. Евдокимов П.И., Третьяков А.М., Цыдыпов В.Ц. Микрофлора желудочно-кишечного тракта как фактор здоровья макроорганизма // Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне оз. Байкал: мат-лы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию Бурят. гос. с.-х. академии им. В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2002 - С. 96-100.
2. Тармакова С.С., Вахрушкина А.Г. Изменения микрофлоры кишечника белых крыс, вызванные кратковременным голоданием // Незаразные болезни сельскохозяйственных животных: мат-лы Междунар. науч. конф. ветеринарных терапевтов и диагностов, посвящ. 70-летию Гос. с.-х. академии им. В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2001. - С. 210-211.
3. Микрофлора кишечника белых мышей и морских свинок при экспериментальном антибиотико-ассоциированном дисбактериозе и возможность её коррекции пребиотикомстимбифид / И.Ю. Чичерин, И.В. Дармов, И.П. Погорельский [и др.] // Журн. инфектологии. - 2012. - Т. 4, № 1. - С. 75-80.
