CC BY
41
УДК 616.314.17-008.1: 612 - 32 Дирик В. Т., Дирик О.-О. Т.
ДИНАМ1КА 1МУНОЛОГ1ЧНИХ ПОКАЗНИК1В ТА ШЛЯХИ IX КОРЕКЦ11 У ТВАРИН З МОДЕЛЬОВАНИМ ПАРОДОНТИТОМ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМУ ТА 1НГАЛЯЦ1ЙНОМУ НАВАНТАЖЕНН1 ПЕСТИЦИД1В
Львiвський нацiональний медичний унiверситет iменi Данила Галицького
У статт/ представлен змни даних iмунологiчних показник'т у кров щурв з модельованим пародо-нтитом при пероральному та iнгаляцiйному вплив пестицид'в стосовно значень у нтактних щу-р'т та у тварин з модельованим пародонтитом. Доведено, що у п'ддосл'дних щур'в, за впливу пес-тицид/'в, iмунологiчний дисбаланс виражався у збiльшеннi вмсту лейкоцитiв, 1дА на тлi зменшення IgG у сироватц кров¡. Застосування запропонованого нами лкувально-профлактичного комплексу дозволяло суттево покращити стан експериментальних тварин з модельованим пародонтитом при пероральному та iнгаляцiйному вплив/ пестицид 'т. Ключов1 слова: пародонтит, пестициди, лейкоцити, 1муноглобул1ни.
Дана робота виконана згiдно з планом науково-дослiдноТ роботи кафедри терапевтичноТ стоматологТ ФПДО Львiвського национального медичного унiверситету iм. Данила Галицького «Еколо&я та пародонт. Взаемозв'язок захворювань тканин пародонта з загальносоматичною патологiею» № державноТ реестрацТ 0215ио0о045.
Вступ
Захворювання пародонта займають одне з провщних мюць у структурi стоматолопчних захворювань i до сьогодш представляють складну медичну та со^альну проблему [2, 3, 5]. Розпо-всюдженють генералiзованих захворювань пародонта, за даними украшських дослщнимв, до-сягае вщ 60% до 95%, у залежност вщ вку, за-гального стану оргашзму, репону проживання та умов прац [2, 3]. Особливо високий рiвень роз-повсюдженост захворювань тканин пародонта виявлений у роб^нимв тепличних господарств. Так, у Львiвськiй област частота захворювань пародонта складае 80-92%, а у робггниш агро-промислового комплексу 85-96% [2].
1мунопатогенез запальних i дистрофiчно запа-льних захворювань пародонта реалiзуеться завдя-ки факторам клгтинноТ i гуморальной резистентнос-тi. Остановлено, що генералiзований пародонтит являе собою патолопчний процес, при якому спо-стерiгаються як системнi, так i мiсцевi порушення в iмунних мехаызмах, та якi посилюються за впливу негативних факторiв довкiлля [1, 4].
Мета до^дження
Дослiдити стан окремих показнимв iмунiтету у тварин з експериментальним пародонтитом за впливу перорального та шгаляцшного наванта-ження пестицидами.
Об'ект i методи дослщження
Дослiди проведено на бiлих безпородних щу-рах-самцях масою тiла 160-180 г. Пщ час експе-рименту вони перебували на стандартному ра-цюж вiварiю. У процесi роботи використано 120 тварин.
Ус етапи експериментiв затверджен Комiсi-ею з бiоетики ЛНМУ iменi Данила Галицького i виконан згiдно з правилами гуманного ставлен-ня до експериментальних тварин та Мiжнарод-ними вимогами щодо гуманного поводження з тваринами вщповщно до СвропейськоТ конвенци про захист хребетних тварин, як використову-
ються для дослщних та iнших наукових цтей (Страсбург, 2005), «Загальних етичних принци-пiв експериментiв на тваринах», ухвалених П'ятим нацiональним конгресом з бюетики (КиТв, 2013).
Усiх пiддослiдних тварин було подтено на 6 груп, кожна з яких мютила по 20 щурiв: I група -штактш щурi (контрольна); II група - тварини з моделлю пародонтиту. Щурам ^еТ групи протя-гом 2-х тижшв, через день, вводили в тканини ясен по 40 мiкролiтрiв (1 мг/мл) лшополюахари-ду (ЛПС) Е. Со11 (<^дта-АШсЬ>, США) [3]; III група - тварини з модельованим пародонтитом, яким щоденно протягом двох тижшв за допомо-гою перорального зонду вводили розчинений у оли хпоршрифос (<^дта-АШсЬ>, США) з роз-рахунку 5 мг/кг; IV група - тварини з модельованим пародонтитом, як знаходились у камерi з ш-галяцшною подачею ХПФ з розрахунку 5мг/кг. Тривалiсть експерименту у III та IV групах ста-новила 14 дiб; V група - щурi з пародонтитом, з пероральною експозищею пестицидiв, яким, по-чинаючи з 15-Т доби експерименту щоденно, протягом 14-ти дiб призначали лкувально-профтактичний комплекс (ЛПК); VI група - щурi з пародонтитом, що зазнавали шгаляцшного впливу пестицидiв, яким з 15-Т доби експерименту щоденно протягом 14 дiб призначали ЛПК.
Кров для дослщжень вщбирали шсля припи-нення експериментальних крокiв з хвостовоТ ве-ни щурiв. Пщ час бiохiмiчних та iмунологiчних дослщжень використовували сироватку кров^ яку отримували шляхом центрифугування кровi при 600 оборотах протягом 30 хвилин при тем-пературi 20° С.
У сироватц кровi експериментальних тварин з'ясовували ктькюний склад лейкоцитiв, концент-раци 1дА та IgG. У щурiв груп дослiдження визна-чали загальну ктькють лейкоцитiв шляхом пщра-хунку клiтин за допомогою свiтлового мiкроскопу у камерi Горяева [1, 4]. !муноглобулши А, G у сиро-ватцi кровi експериментальних тварин визначали методом радiальноТ iмунодифузiТ [1, 6].
АктуальН проблеми сучасно!' медицини
Лiкувально-профiлактичний комплекс для пщ-дослiдних тварин V та VI груп складався з мюцево-го та загального лкування. Мiсцеве лiкування пе-редбачало зрошення ротовоТ порожнини експери-ментальних тварин 0,1% розчином хлоргексидину бiглюконату впродовж 2-ох тижнiв, а також аплка-цГ|' на ясна «Solcoseryl-dental adhesive» один раз на добу впродовж 2-ох тижшв. В свою чергу, зага-льне лiкування вiдбувалося шляхом введення у харчовий рацюн препарату «Хлорела» (по 0,25 г на добу) та «ВурштиновоТ кислоти» (по 0,5 г на добу) впродовж 2-ох тижшв; до питноТ води додавав-ся 0,05% розчин лiзоциму гiдрохлориду по 0,3 мл протягом двох тижшв.
Для об'ективноТ оцiнки ступеня достовiрностi результатiв дослщження проведена статистична обробка отриманих даних з використанням зага-льноприйнятих методiв варiацiйноï статистики за допомогою персонального комп'ютера Pentium II з застосуванням пакета статистичних програм «Statgraphic 2.3» i «Microsoft Excel 2000».
Результати дослщжень та ïx обговорення
У результатi дослiджень встановлено, що у щурiв I групи (iнтактнi тварини) вмют лейкоцитiв у кровi дорiвнював 7,43±0,29 х 10 9/л, що було у 1,8 рази нижче стосовно даних у тварин з моде-
льованим пародонтитом
група)
13,08±0,27% х 109/л, р<0,01. У пiддослiдних тварин з модельованим пародонтитом, що зазна-вали перорального впливу пестицидiв (III група), вмiст лейкоцитiв у кровi зростав до 16,25±0,29 х 109/л та до 19,41 ±0,28 х 109/л у IV груш (шгаля-цiйний вплив пестицидiв), р<0,01; р1<0,01. Слiд зауважити, що у щурiв IV групи вмют лейкоци^в був у 1,2 рази вище, шж у тварин III експеримен-тальноТ групи,р2<0,01.
Вмiст IgA у кровi iнтактних щурiв I групи дор^ внював 1,18±0,02 г/л та збтьшувався до
1,43±0,06 г/л у щурiв з модельованим пародонтитом II групи, р<0,01. У щурiв III експеримента-льноТ групи вмiст IgA у кровi становив 1,94±0,04 г/л, що було на 64,40% вище, нiж у тварин I групи, р<0,01 та на 35,66% перевищував значення у II груш щурiв, р1<0,01. У шддослщних тварин IV групи вмiст IgA у кровi був максимальним (2,15±0,04 г/л) та перевищував данi у I та II груш ш^в на 82,20% та на 50,34%, р<0,01; р1<0,01, вiдповiдно. У тварин IV групи вмют IgA був на 10,82% вище, шж у шддослщних тварин III групи, р2<0,01.
У результат дослщжень встановлено, що у штактних щурiв I групи концентра^я IgG у кровi була м^мальною та складала 3,20±0,06 г/л. У тварин з модельованим пародонтитом вмют IgG у кровi дорiвнював 3,91±0,05 г/л, що було на 22,18% вище, шж у тварин I групи, р<0,01. У шддослщних тварин III групи вмют IgG у кровi зб^ льшувався до 4,12±0,03 г/л, що було на 28,75% та на 5,37% вище, шж у тварин I та II експери-ментальних груп, р<0,01; р1<0,01. Звертало ува-гу, що у тварин IV групи концентра^я IgG у кровi була максимальною (4,41±0,04 г/л) та переви-щувала данi у iнтактних тварин на 37,81% та була на 7,03% вище, шж у щурiв II групи, р<0,01, р1<0,01. У той же час, у щурiв IV групи вмiст IgG був на 7,03% вище, шж у шддослщних щурiв III групи, р2<0,01.
Застосування лiкувально-профiлактичного комплексу призвело до зниження ктькюного складу лейкоцилв (8,13±0,27 х 10 9/л) у V групi пiддослiдних тварин (рис. 1). Однак, отримаш даш на 9,42% перевищували значення у тварин I групи, р<0,01, але були на 37,85% нижче, шж у тварин з модельованим пародонтитом II групи, р1<0,01.
Рис. 1. Вмют лейкоцитiв у сироватц Kpoei експериментальних щурв у результатi застосування ЛПКе.
У експериментальних тварин VI групи досл^ джували зниження кшькосп лейкоци^в у кровi до 11,42±0,28 х 10 9/л. При цьому, отримаш даш були на 53,70% нижче, шж у штактних тварин I групи, р<0,01, але на 12,70% менше, шж у щурiв II групи з модельованим пародонтитом, р1 <0,01.
У результат застосування ЛПК, у тварин V гру-
пи рiвень IgA у сироватц кровi становив 1,23±0,05 г/л, що було на 13,99% нижче, шж у щурiв II групи з модельованим пародонтитом, р1<0,05, однак за-лишалось на 4,23% вище стосовно значень у штактних тварин I групи, р>0,05. Рiвень IgG у пщдослн дних тварин V групи знижувався до 3,36±0,04 г/л та був на 14,07% менше, шж у щурiв II групи,
Том 16, Випуск 1 (53) 195
р1<0,01, але на 5,0% вище стосовно значень у ш-тактних тварин I групи, р>0,05.
У тварин VI групи, в результат застосування ЛПК, рiвень IgG становив 3,40±0,03 г/л, що було на 13,08% нижче стосовно даних у щурiв з мо-дельованим пародонтитом II групи, р1<0,05, але на 6,25% вище стосовно даних у штактних тварин I групи, р<0,05. Пюля застосування ЛПК, р^
вень IgA у сироватцi кровi експериментальних тварин VI групи знизився до 1,47±0,03 г/л, а отриман значення були на 24,57% вище, шж у iнтактних тварин I групи, р<0,01 та дорiвнювали даним у щурiв з модельованим пародонтитом II групи, р1>0,05 (рис. 2).
Рис. 2. Концентра^я IgA, IgG у сироватц Kpoei експериментальних тварин у результатi застосування ЛПК.
Висновки
Таким чином, застосування опрацьованого лкувально-профтактичного комплексу, на нашу думку, викликало бтьш виражений позитивний ефект у тварин V експериментально'Г групи, де пародонтопатогенн явища комбшувались з пе-роральним впливом пестицидiв, що пщтверджу-валось покращенням iмунологiчного статусу, у порiвняннi з даними у тварин II групи з модельованим пародонтитом та незначно в^знялись вщ даних у штактних щурiв. У тварин з модельованим пародонтитом, як зазнавали шгаляцшно-го впливу пестицидiв (VI група), значення iмуно-логiчних показникiв дорiвнювали даним у щурiв з модельованим пародонтитом та не досягли ре-ферентних значень, що, ймовiрно, потребуе до-даткових корегуючих заходiв.
Перспективи подальших дослщжень
Плануеться вивчити динамiку показникiв зага-льного та мiсцевого iмунiтету у пра^вниш агроп-ромислових пiдприемств, хворих на генералiзова-ний пародонтит, що працюють в умовах вiдкритого та закритого фун^в за впливу пестицидiв.
Лiтература
Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология: Учебное пособие / Г. Н. Дранник. - Одесса : Астропринт, 1999. - 604 с.
Заболотний Т. Д. Генералiзований пародонтит / Т. Д. Заболот-ний, А. В. Борисенко. - Львiв : ГалДент, 2011. - 240 с. Левицкий А. П. Гепато-оральный синдром / А. П. Левицкий, С. А. Демьяненко. - Симферополь, 2012. - 140 с. Сукманский О. И. Метод дифференциальной оценки эмиграции лейкоцитов в полость рта / О. И. Сукманский, Р. Д. Барабаш, С. Я. Клебанская // Патолог. физиол. и эксперим. терапия. - 1980. - № 5. - С. 76-77.
Пудяк В. 6. !мунолопчш аспекти хвороб пародонта та внутрш-шх оргашв / В. 6. Пудяк, Ю. Л. Бандрiвський, Н. Н. Банд|жська // Вюник наукових дослщжень. - 2011. - № 2. - С. 41-44. Manchini G. M. Immunological quantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. M. Manchini, A. O. Garbonara // Immunochemistry. - 1965. - Vol. 6. - P. 234-235.
References
Drannik G. N. Klinicheskaja immunologija i allergologija: Uchebnoe posobie / G. N. Drannik. - Odessa : Astroprint, 1999. - 604 s. Zabolotnij T. D. Generalizovanij parodontit / T. D. Zabolotnij, A. V. Borisenko. - L'viv : GalDent, 2011. - 240 s.
Levickij A. P. Gepato-oral'nyj sindrom / A. P. Levickij, S. A. Dem'janenko. - Simferopol', 2012. - 140 s.
Sukmanskij O. I. Metod differencial'noj ocenki jemigracii lejkocitov v polost' rta / O. I. Sukmanskij, R. D. Barabash, S. Ja. Klebanskaja // Patolog. fiziol. i jeksperim. terapija. - 1980. - № 5. - S. 76-77. Pudjak V. 6. Imunologichni aspekti hvorob parodonta ta vnutrishnih organiv / V. 6. Pudjak, Ju. L. Bandrivs'kij, N. N. Bandrivs'ka // Visnik naukovih doslidzhen'. - 2011. - № 2. - S. 41-44. Manchini G. M. Immunological quantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. M. Manchini, A. O. Garbonara // Immunochemistry. - 1965. - Vol. 6. - P. 234-235.
Реферат
ДИНАМИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ У ЖИВОТНЫХ С МОДЕЛИРОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОЙ И ИНГАЛЯЦИОННОЙ НАГРУЗКЕ ПЕСТИЦИДОВ Дырык В. Т., Дырык О.-О.Т.
Ключевые слова: пародонтит, пестициды, лейкоциты, иммуноглобулины.
В статье представлены изменения данных иммунологических показателей в крови крыс с моделированным пародонтитом при пероральном и ингаляционном воздействии пестицидов относительно значений у интактных крыс и у животных с моделированным пародонтитом. Доказано, что у подопытных крыс, из-за влияния пестицидов иммунологический дисбаланс выражался в увеличении содержания лейкоцитов, 1дА на фоне уменьшения ^ в сыворотке крови. Применение предложенного нами лечебно-профилактического комплекса позволяло существенно улучшить состояние экспериментальных животных с моделированным пародонтитом при пероральном и ингаляционном воздействии пестицидов.
2
3
4
5
6
2
3
4
5
6
AKTya&BHi npoSAeMH cynacHoi' MeAHUHHH
Summary
DYNAMICS OF IMMUNOLOGICAL INDICATORS AND WAYS OF THEIR CORRECTION IN ANIMALS WITH SIMULATED PERIODONTITIS BY ORAL AND INHALATION LOAD WITH PESTICIDES Dyryk V. T., Dyryk O.-O. T.
Key words: periodontitis, pesticides, leukocytes, immunoglobulins.
People working in greenhouses demonstrate especially high prevalence of periodontal diseases. In Lviv region the frequency of periodontal diseases reaches up to 80-92%, and is particularly higher in workers of agroindustrial enterprises running up to 85-96%.
The immunological pathogenesis of the inflammatory and dystrophic-inflammatory periodontal diseases is triggered by the factors of cellular and humoral resistance. It has been established that generalized periodontitis is a pathological process resulted from both systemic and local impairment of immune mechanisms that in turn increases the influence of negative environmental factors.
The purpose of this work was to investigate the state of some indices of immunity in animals with experimental periodontitis under the influence of peroral and inhalation loading with pesticides.
Materials and methods. The experiments were conducted on white outbred rats-males weighing 160-180 g. During the experiment they were kept on the standard ration of vivarium. The study involved 120 animals. All animals were divided into 6 groups. All stages of the experiments were approved by the Bioethics Commission of Danylo Halytskyi Lviv National Medical University and carried out in accordance with the rules of the humane attitude to the experimental animals and International standards on the humane treatment of animals in accordance with the European Convention for the protection of vertebrate animals used for research and other scientific purposes (Strasbourg, 2005).
All experimental animals were divided into 6 groups, 20 rats in each of them. We evaluated white blood count of the experimental animals and IgA and IgG concentrations.
The treatment and preventive complex designed for the experimental animals of V and VI groups consisted of local and general treatment. The local treatment included irrigation of the oral cavity with 0.1% solution of chlorhexidine digluconate for 2 weeks, and gum appliques of "Solcoseryl-dental adhesive" once a day for 2 weeks. In turn, the general treatment included the administration of the diet supplement "Chlorella" (0.25 g per day) and "Succinic acid" (0.5 g per day) for 2 weeks; 0.05% solution of lysozyme hydrochloride in 0.3 ml for 2 weeks was added into drinking water.
To estimate the degree of reliability of our results the statistical processing of the findings obtained was conducted with methods of variation statistics.
Results and their discussion. The use of therapeutic and preventive complex (TPC) resulted in the decrease of quantitative content of leukocytes (8.13±0.27 x 10 9/l) in the experimental animals of V. However, the obtained data by 9.42% exceeded the value in animals of I group, p<0.01, but was by 37.85% lower than in animals with simulated periodontitis of II group, p1<0,01.
The experimental animals of VI group demonstrated the decrease of leukocytes in the blood to 11.42±0.28 x 10 9/l. In this case, the obtained data were lower by 53,70% than in the intact animals of I group, p<0.01, but by 12.70% less than in rats with simulated periodontitis of II group, p1<0,01.
As a result of the use of therapeutic and preventive complex, the animals of V group, the level of IgA in the blood was 1.23±0.05 g/l, which was by 13.99% lower than in rats with simulated periodontitis of II group, p1<0,05, still remaining by 4.23% higher relative to the values in intact animals of I group, p>0.05. The level of IgG in the experimental animals of V group decreased to 3.36±0.04 g/l and was by 14.07% less than in rats of II group, p1<0.01, but was by 5.0% higher compared to the values in the intact animals of I group, p>0.05.
In animals of VI group, as a result of the use of TPC, the level of IgG amounted 3.40±0.03 g/l, which was by 13.08% lower relative to the data in rats with simulated periodontitis of II group, p1<0,05, but by 6.25% higher compared to the data in intact animals of I group, p<0.05. After the use of TPC, the level of IgA in the serum of the animals of VI group decreased to 1.47±0.03 g/l, and the obtained values were by 24.57% higher than in the intact animals of I group, p<0.01 and were equal to the indices in rats with simulated periodontitis of II group, p1>0.05.
Conclusions. Thus, the use of the treatment and preventive complex we designed can lead to more pronounced positive effect in the animals of V experimental group, where periodontopathogenic phenomena were combined with oral influence of pesticides. This was confirmed by the improvement of immunological status and compared with the data in the animals of II group with simulated periodontitis and was not significantly different from data in the intact rats. In the animals with simulated periodontitis subjected to inhalation influence of pesticides (VI group), the values of immunological parameters equal data in the rats with simulated periodontitis and do not reached the reference values that, probably, requires additional corrective measures.
TOM 16, BunycK 1 (53) 197
