CC BY
36
Выводы
Штаммы мелиоидозного микроба разной вирулентности вызывают в макроорганизме инфекционный процесс, тяжесть которого находится в прямой зависимости от вирулентности возбудителя.
После подкожного заражения морских свинок вирулентным штаммом В. р$еис1ота1Ы 100 наблюдается тяжелое нарушение обменных процессов, что клинически проявляется в острой форме мелио-идозной инфекции с началом гибели животных на 7-9-е сутки.
Заражение морских свинок авирулентным мутантном В. рьеийотсЛЫ 100-16-1 обусловливает, в целом, доброкачественное течение инфекционного процесса без значительного изменения гомеостаза.
Биохимические показатели крови у зараженных животных (концентрация белка, креатинина, мочевины, ферментов (АсТ, АлТ, ЛДГ) и коэффициент Ритиса, уровень билирубина, ТП, электролитного обмена) отражают состояние макроорганизма в зависимости от заражающего штамма возбудителя мелиоидоза.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Алексеев В.В., Тихонов Н.Г., Вязьмина Т.Н. и др. // Мелиоидоз / Под ред. Н.Г.Тихонова. - Волгоград: Ниж-не-Волжское изд-во. - 1995. - С. 91-119. - 2. Маршалл
В.Дж. Клиническая биохимия. - СПб, 2000. - 368с. -3. Медицинская лабораторная диагностика. Программы и алгоритмы. - СПб, 2001. - 544 с. - 4. Flazer С. Interpretation of clinical chemistry laboratory data. - Oxford, 1981.
V.V.Alekseyev, T.Yu.Kivokurtseva, A.T.Yakovlev, N.G.PIekhanova
A Study of Biochemical Processes in a Macroorganism Affected with Experimental Melioidosis
Volgograd Anti-Plague Research Institute
Investigations into the biochemical processes going on in a macroorganism in the case of experimental challenge with melioidosis pathogens varying in their virulence, demonstrated that even the early stage of the acute disease caused by a highly virulent strain was characterized by major disorders in the protein, carbohydrate and lipide metabolism. A number of enzymes showed enhanced activity. The clinical manifestations of melioidosis were confirmed with the blood bilirubin assay and thymol tests. A significant shift in the electrolytic exchange could be observed without any important alterations in homeostasis of the animals infected with a low-virulence strain.
Поступила 26.03.04
УДК 615.981.42:616.9-092.9
О.В.Малецкая
ДИНАМИКА ФАКТОРОВ ИММУНИТЕТА БЕСПОРОДНЫХ БЕЛЫХ МЫШЕИ С ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ ПРИ ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Использование левамизола, глутоксима, ликопида и полиоксидония в комплексном лечении бруцеллеза способствовало наиболее быстрому и полному возвращению к исходному уровню значительно измененных показателей активности микробицидных систем и энергетических процессов клеток периферической крови беспородных белых мышей. Указанные иммунокорригирующие препараты не влияли на величину и динамику титра специфических антител в крови животных и изменяли активность лизоцима в легких зверьков, уменьшая степень отклонения уровня фермента, вызванного инфекцией. Максимальное влияние на изучаемые факторы иммунитета при бруцеллезе оказывало применение полиоксидония.
Иммунокорригирующие препараты способствуют активации защитных сил организма в борьбе с инфекционными заболеваниями, усиливая развитие неспецифической резистентности и специфического иммунитета. Любой иммуномодулятор, влияющий преимущественно на фагоцитоз, гуморальный или клеточный иммунитет, в той или иной степени будет оказывать действие и на все другие компоненты иммунной системы [11]. Под действием иммуномодуляторов происходит усиление функциональной активности факторов как клеточного, так и гуморального иммунитета. В настоящее время в клинической практике успешно используются иммуно-тропные препараты, в том числе левамизол, глуток-сим, ликопид, полиоксидоний [5, 9, 11].
Целью исследования явилось изучение влияния указанных иммунокорригирующих средств на состояние интралейкоцитарной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов,
а также динамику специфических антител и лизоцима при бруцеллезе.
Материалы и методы
Действие иммуномодуляторов на величину содержания катионных белков (КБ) и гликогена (Гл) нейтрофилов периферической крови белых мышей, активность миелопероксидазы (МПО) нейтрофилов и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) лимфоцитов, величину и динамику уровня лизоцима и титра специфических антител изучали в стадии генерализованного процесса, вызванного введением беспородным белым мышам патогенного штамма возбудителя бруцеллеза - В. теШет1з 565. Лечение начинали на 21-е-сутки после инфицирования и проводили 2 курсами с интервалом . 10 сут. Левамизол («Декарис», Будапешт, Венгрия) животные получали по 50 мкгУмышь, ликопид (ЗАО Пептек, Москва) -
100 мкг/мышь, глутоксим (ЗАО «ФАРМА ВАМ», Москва) - 400 мкг/мышь, полиоксидоний |000 «Иммафарма», Москва) - 120 мкг/мышь одно1фатно в начале каждого курса лечения в режиме монотерапии и в сочетании с антибиотиком. Левами-зол и ликопид вводили перорально, глутоксим и полиоксидоний - внутримышечно. Антибиотгасоте-рапию проводили азитромицином перорально 3-дневным курсом в субтерапевтической курсовой, дозе - 3 мг/мышь. Одну группу животных лечили азитромицином без иммуномодуляторов. Контрольной группе лечение не проводили. Животных исследовали до начала лечения, после каждого курса терапии и через 14сут, после его окончания, что соответствовало 21, 24, 38, 41 и 55 сут после введения инфекта.
Содержание гликогена в нейтрофилах периферической крови определяли по McManus [8],-катионных белков - В.П.Пигаревскому [7], активность миелопероксидазы - Р.Лилли [3], сукцинатдег;идро-геназы - Р.П.Нарциссову [4]. Вычисление полуко-личественных показателей активности 'СДГ и МПО, содержания Гл и КБ. проводили по методу L.S.Kaplow [13]. Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики по И.А.Ойвину [6] с определением средних величин (М) и их:ошибок (т), среднего квадратического отклонения: (а) и достоверных различий с помощью критерия t Стью-дента при уровне статистической значимости различий р<0,05. Титр специфических антител в крови мышей определяли в реакции непрямой гемагглюг тинации с использованием набора ингредиентов для серологических реакций и диагно.стикума бруцеллезного .эритроцитарного антигенного сухого (Казахский НИГТЧИ, Алматы). Активность лизоцима в легких белых мышей определяли при помощи непрямого метода, основанного на способности фермента лизировать культуру Micrococcus lysodeikticus [1]. Кроме того, проводили посев гомогенизированных паховых, аксиллярных, подчелюстных,: пара-аортальных лимфоузлов и селезенки на агар Аль-бими, pH 7,2.
Результаты и обсуиедение
if
У животных контрольной. группы на протяжении всего эксперимента наблюдали генерализованную инфекцию, о которой судили по высокой степени обсемененности бруцеллами всех лимфоузлов и селезенки грызунов. Развитие активного бруцеллезного процесса у мышей приводило к снижению содержания КБ в нейтрофилах периферической крови до 0,91+0,02 на 21-24-е сутки после заражения, при показателе 1,89+0,03 у здоровых зверьков в данном эксперименте.
Введение каждого, из иммуномодуляторов зараженным беспородным белым мышам в режиме монотерапии вызывало заметное увеличение ^количества КБ в нейтрофилах (р<0,05), хотя и не достигало его уровня у здоровых животных. Действие левамизола и глутоксима на содержание КБ' было приблизительно равным, ликопида - более выраженным. Максимальное увеличение КБ наблюдали после введения полиоксидония, их уровень в ней-
трофилах периферической крови достигал 1,35±0,02.
В период эксперимента по изучению сочетанного действия азитромицина и иммуномодуляторов содержание КБ у, интактных зверьков составляло 1,24+0,02, а у животных контрольной группы уровень КБ на 21-24-е сутки после заражения соответствовал 0,61+0,03. При лечении азитромицином и иммунокорригйрующими средствами повышение содержания КБ происходило более интенсивно, чем при введении иммуномодуляторов в режиме монотерапии. Уже после 1-го курса комплексной терапии, на 24-е сутки после инфицирования, содержание КБ значительно увеличилось (р<0,05). Максимальное повышение данного показателя происходило после применения полиоксидония, уровень КБ при этом достиг 0,95+0,03. В динамике эксперимента. увеличение количества КБ наблюдали у зверьков всех групп. По интенсивности влияния на содержа-ние КБ иммуномодуляторы располагались в следующем порядке: левамизол и глутоксим, действие которых было равноценным, ликопид, полиоксидоний. После завершения двух курсов лечения с применением полиоксидония, к 55-м суткам после заражения, содержание КБ в нейтрофилах периферической крови мышей было максимально приближено к их уровню у интактных грызунов (р>0,05).
На фоне интенсивной обсемененности организма зверьков происходило увеличение активности МПО нейтрофилов их периферической крови (2,26+0,03) по сравнению с активностью этого фермента у здоровых животных (1,51+0,03). Введение каждого из иммуномодуляторов мышам приводило к снижению активности МПО. Ликопид в большей степени влиял на активность фермента, чем левамизол. и глутоксим, действие которых оказалось приблизительно равноценным (р>0,05). Максимальное изменение активности МПО происходило под влиянием полиоксидония, й составляло 1,73+0,03.
Проведение комплексной терапии азитромицином с каждым из изучаемых иммунокорригирующих препаратов проводили на фоне активности МПО у здоровых животных - 1,84+0,03, а у зараженных - 2,74+0,03. При этом в динамике наблюдали более выраженное, чем при моновведении иммуномодуляторов, уменьшение активности МПО нейтрофилов периферической крови грызунов. Интенсивность снижения зависела от применяемого иммуномодулятора и была максимально выражена во все сроки исследования в группе животных, получавших в сочетании с азитромицином полиоксидоний. Через 14 сут после окончания 1-го курса лечения с применением полиоксидония (39-е сутки после введения инфекта) активность МПО составляла 1,92+0,03. При лечении с использованием ликопида соответствующий уровень активности фермента наблюдали только через 14 сут после 2-го курса терапии, к 55-м суткам после инфицирования зверьков. Уровень МПО после терапии с добавлением к антибиотику левамизола и глутоксима на 55-е сутки был ещё выше. После проведения 2-го курса лечения с полиоксидонием на 42-е сутки после заражения уровень МПО приближался к активности фермента у интактных мышей (р>0,05), а к 55-м суткам
эксперимента был несколько ниже, чем у здоровых животных, но отклонение от нормы не являлось статистически достоверным.
После введения беспородным белым мышам с генерализованной бруцеллезной инфекцией каждого из изучаемых иммуномодуляторов происходило снижение количества Гл в нейтрофилах периферической крови относительно его исходно повышенного уровня у животных контрольной группы, которые не подвергались лечению (2,15+0,04). Количество Гл у зверьков каждой экспериментальной группы статистически достоверно отличалось друг от друга. Минимальное снижение указанного показателя отмечено после введения глутоксима. Лева-мизол вызывал большее снижение Гл, ликопид был эффективнее левамизола. Максимальное снижение уровня Гл - до 1,6+0,02 наблюдали после введения полиоксидония, однако у здоровых мышей содержание Гл в нейтрофилах крови было достоверно ниже и составляло 1,33+0,04.
Действие глутоксима и левамизола в сочетании с азитромицином на величину содержания Гл в нейтрофилах было равноценным (р>0,05), но уступало влиянию ликопида. Однако после окончания лечения азитромицином в комплексе с глутоксимом, левамизолом или ликопидом количество Гл все-таки превышало уровень его у здоровых мышей. Только после проведения двух курсов лечения с применением полиоксидония, к 55-м суткам эксперимента, содержание Гл в нейтрофилах периферической крови грызунов приближалось к его исходному уровню (р>0,05).
Активность СДГ в лимфоцитах периферической крови мышей контрольной группы на 21 -е сутки после введения инфекта была снижена относительно ее уровня у интактных зверьков (16,4+0,23) и составляла 12,61 ±0,31. Введение экспериментальным животным иммуномодуляторов приводило к заметному увеличению активности фермента. По степени влияния на уровень активности СДГ лимфоцитов иммунокорригирующие препараты располагались в следующей последовательности: левами-зол и глутоксим, ликопид, полиоксидоний. После введения полиоксидония наблюдали максимальное повышение активности исследуемого фермента - до 14,26+0,33.
Проведение комплексной терапии антибиотиком с иммунокорректорами в большей степени изменяло уровень активности СДГ. Уже после окончания 1 -го курса терапии указанный показатель был значительно выше во всех группах зверьков, получавших лечение, чем у животных контрольной группы. Максимально показатель отличался у грызунов, получавших полиоксидоний. В данной экспериментальной группе при-каждом исследовании уровень активности СДГ оказался выше, чем у мышей, получавших только антибиотик иди азитроми-цин в сочетании с каким-либо из оставшихся иммунокорригирующих средств. Непосредственно, после проведения 2-го курса лечения с применением полиоксидония, на 41-е сутки после заражения уровень активности СДГ был выше, чем у животных, получавших ликопид, левамизол или глутоксим, на 55-е сутки эксперимента. У мышей, леченных ази-
тромицином с полиоксидонием, через 14 сут после окончания 2-го курса терапии, на 55-е сутки после введения инфекта уровень активности СДГ соответствовал указанному показателю у интактных зверьков (р>0,05).
Средний геометрический титр специфических антител в крови животных до начала лечения, на 21-е сутки после инфицирования, был низким - 7,93 (+9,3/-8,5 %) в течение эксперимента прогрессивно увеличивался и к 55-м суткам после заражения мышей составлял 388,02 (+13,3/-11,7 %). Введение грызунам левамизола, глутоксима, ликопида или полиоксидония в режиме монотерапии не влияло на величину и динамику титра специфических антител (р>0,05).
Комбинированное лечение, включающее использование азитромицина с каждым из изучаемых иммуномодуляторов, изменяло величину титра антител. В динамике по-прежнему наблюдали нарастание титра. При сопоставлении величины среднего геометрического титра антител в каждой группе животных с данными бактериологического исследования установлена зависимость: чем выше обсе-мененность организма мышей в группе, тем выше средний геометрический титр специфических антител; чем выше эффективность проводимой терапии, тем менее увеличивался в динамике титр антител. При использовании в лечении азитромицина с полиоксидонием через 14 сут после окончания лечения, на 55-е сутки после инфицирования, у (80,3+2,0) % животных бруцеллы не обнаружены, у остальных зверьков обсемененность органов была чрезвычайно низкой - выявлены единичные колонии бруцелл. Титр специфических антител при этом составил 14,22 (+1,21-6,1 %).
В указанные сроки исследования величина уровня лизоцима в легких интактных зверьков колебалась от 19,8+0,23 до 20,6+0,18. У животных контрольной группы на 21-е сутки после заражения количество лизоцима в легких было повышено относительно его содержания у здоровых мышей и продолжало увеличиваться, на 24-е сутки после введения инфекта его уровень составил 30,2+0,31. На 38-е сутки наблюдали угнетение активности фермента, продолжающееся до 41 сут исследования, когда его количество соответствовало 5,75+0,23. Затем содержание лизоцима несколько увеличивалось, но оставалось значительно ниже его уровня у здоровых мышей.
Введение беспородным белым мышам в период генерализации бруцеллезной инфекции каждого из изучаемых иммуномодуляторов как в режиме монотерапии, так и в сочетании с азитромицином приводило к уменьшению накопления лизоцима в легких сразу после 1-го курса лечения, т.е. до 24 сут исследования. В последующий период, когда, несмотря на колебания содержания лизоцима в легких, его уровень у зараженных мышей был значительно ниже, чем у интактных зверьков, иммуномодуляторы в разной степени способствовали увеличению' активности фермента.
Окончание 1-го курса терапии совпадало с началом резкого угнетения активности лизоцима у мышей при генерализованном процессе бруцеллез-
ной инфекции. У всех зверьков, подвергшихся лечению, снижение активности фермента происходило в меньшей степени. Действие иммуномодуляторов было неравнозначно. Наибольшее влияние на уровень лизоцима легких по сравнению с действием других изучаемых иммуномодуляторов оказывал полиоксидоний и в режиме ионотерапии, и в соче-тании с азитромицином. Проведение комбинированного лечения бруцеллеза азитромицином и полиок-сидонием приводило к максимальному повышению активности фермента.
Таким образом, использование левамизола, глу-токсима, ликопида и полиоксидония способствовало наиболее быстрому и полному возвращению к исходному уровню значительно измененных при бруцеллезной инфекции показателей активности микробицидных систем и энергетических процессов клеток периферической крови экспериментальных животных. Указанные иммунокорригирующие, препараты не влияли на величину и динамику. титра специфических антител. Уменьшение нарастания титра происходило под влиянием снижения бактериальной обсемененности организма животных. Известно, что величина, титра специфических антител при бруцеллезе прямо пропорциональна продолжительности фазы размножения бруцелл в клетках организма. По мере угасания инфекционного процесса снижается интенсивность образования антител, титр агглютининов заметно падает [2, 12]. Сокращение фазы генерализации инфекции при проведении эффективной этиотропной терапии приводило к торможению синтеза специфических бруцеллезных антител. Применение иммуномодуляторов влияло на активность лизоцима в легких грызунов при' бруцеллезе, уменьшая степень отклонения уровня фермента, вызванного инфекцией.
Все изучаемые иммуномодуляторы оказывали влияние на показатели неспецифической резистентности организма беспородных белых мышей при бруцеллезе. При этом ликопид оказался более эффективным, чем левамизол и глутоксим. Максимальные изменения факторов клеточного и гуморального иммунитета при активном бруцеллезном процессе наблюдали при применении полиоксидония. Его использование способствовало наиболее быстрому и . полному возвращению, к. исходному уровню содержания катионных белков и гликогена
в нейтрофилах периферической крови, активности миелопероксидазы нейтрофилов и сукцинатдегид-рогеназы лимфоцитов крови, лизоцима в легких мышей. Проведенные исследования свидетельствуют о целесообразности применения всех изученных препаратов - левамизола, глутоксима, ликопида и преимущественно полиоксидония в комплексной схеме лечения людей и животных, больных бруцеллезом.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 1974. -210 с. - 2. Вершилова П.А., Чернышева М.И., Князева Э.Н. Патогенез и иммунология бруцеллеза. - М.: Медицина, 1974. -272 с. - 3. Лили Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969. - С. 339. - 4. Нарциссов Р.П. // Арх. анат. гистол. и эмбриол. - 1969. - Вып. 5. - С. 85-93. -5. Некрасов А.В., Пучкова Н.Г. // Иммунология. - 2002. - № 6. -С. 329-333. - 6. Ойвин И-.А. // Патол. физиол. - 1960. - № 4. -
С. 76-85. - 7. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. - М.: Медицина, 1978. - 126 с. - 8. Пирс Э. Гистохимия / Пер. со 2-го англ. изд. - М.: Изд-во Иностр. лит-ры, 1962,- С. 752. - 9. Соколова Г.Б., Синицин М.И., Кожемякин Л.А., Перкльман М.И. // Антибиотики и химиотерапия. -2002. - Т. 47, № 2. - С. 20-23. - 10. Таран И.Ф„ Швецова Н.М., Сафронова В.М,// ЖМЭИ. - 1993. - № 6. - С. 88-89. - И. Хаитов P.M., Пинегин Б.П. // Иммунология. - 2000. - № 5. - С. 4-7. - 12. Ходжаев Ш.Х., Чернышева М.И. // ЖМЭИ. - 1959. -№ 10. - С. 67-71. - 13. Kaplow L.S. // Blood. -.1955. - N 10. -P. 1023-1029.
O.V.Maletskaya
Dynamics of Immunity Factors in Mongrel White Mice Affected by Generalized Brucellosis Infection and Receiving Immunocorrection Treatment
Stavropol Anti-Plague Research Institute
Levamisolum, gluloxirne, lycopide, and polyoxidonium used in complex treatment of brucellosis facilitated the most rapid and complete restoring of the original level of significantly altered indices reflecting the activity of microbiocidal systems.and energetic processes in peripheral blood cells of mongrel white mice. These immunocorrection preparations produced no effect upon the magnitude-and dynamics of specific antibody titers in the blood of the animals and'changed lysozymal activity in their lungs, thus diminishing the deviation degree of the enzymatic level due to the infection. Polyoxidonium produced the maximal effects on the antibrucellosis immunity factors under, consideration.
Поступила 15.06.04
