CC BY
7
дальнейшей прогрессии фиброза. Нами было инициировано поисковое научное исследование, целью которого стала оценка безопасности аутологичной трансплантации мезенхимальных стромальных клеток (МСК), полученных из жировой ткани (липоаспирата), в комплексном лечении больных циррозами печени (ЦП) различного генеза. Исследуемую группу составили 20 пациентов (7 мужчин и 13 женщин, средний возраст 53,5 года). Этиологические факторы цирроза представлены: вирусной (45%, В с дельта-агентом, n=2, и С, n=7) и невирусной этиологией (55%) ЦП. У 4 пациентов ЦП был обусловлен токсическим воздействием, у 5 — первичным билиарным циррозом, у 2 — криптогенным ЦП. В соответствии с классификацией ЦП по Child-Pugh пациенты распределились поровну в классах А (5-6 баллов) и В (7-8 баллов). Средний балл по шкале MELD составил 9,8. Всем пациентам была проведена липоаспирация (объём жировой ткани в среднем 100 мл) с последующим выделением стромально-васку-лярной фракции и культивированием последней в стандартных условиях в течение 14 дней с целью получения МСК. Клинико-лабораторное обследование пациентов проводилось до начала терапии с мониторингом состояния больных через 6-12 мес. после окончания лечения. Всем пациентам однократно вводили аутологичные МСК (в среднем 12,94х10л6). Введение мСк хорошо переносилось пациентами и не сопровождалось развитием каких-либо побочных эффектов и серьезных нежелательный явлений. Из 12 пациентов, обследованных через 6-12 мес., половина пациентов (6 человек) ответили на проводимую терапию в виде уменьшения/ стабилизации балла по шкале MELD, у остальных балл по MELD увеличился. Ответившие пациенты не отличались от пациентов оппозитной группы ни по этиологии, ни по тяжести ЦП, в то же время были значимо старше (55,5 и 48 лет, p<0,05). В настоящее время мониторинг пациентов продолжается. Полученные данные согласуются с имеющимися немногочисленными сообщениями [1] и позволяют сделать предварительный вывод о том, что применение МСК, полученных из клеток жировой ткани пациентов с циррозом печени различной этиологии, является безопасным и потенциально перспективным методом для стабилизации или улучшения функции печени.
Литература:
1. Sakai Y., Fukunishi S., Takamura M. et al. Regen Ther. 2021. V.
18. P. 97-101.
ВЛИЯНИЕ МОДЕЛИРОВАНИЯ МИКРОГРАВИТАЦИИ НА МАТРИСОМ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК IN VITRO
И.В. Живодерников, Д.К. Матвеева, А.Ю. Ратушный, Л.Б. Буравкова
ГНЦ РФ Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, Россия
e-mail: kordait-2213@yandex.ru
Ключевые слова: микрогравитация, внеклеточный матрикс, мезенхимальные стромальные клетки.
Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) являются мультипотентными предшественниками клеток, участвующих в ремоделировании костной ткани и продуцирующих внеклеточный матрикс. Костная ткань претерпевает негативные изменения в условиях микрогравитации, и причиной таких изменений являются гравитационная чувствительность клеток. Целью данной
работы было изучить матрисом МСК при моделировании некоторых эффектов микрогравитации.
МСК из жировой ткани человека 3-5 пассажей после достижения монослоя разделялись на 2 группы: статический контроль и группа с моделированной микрогравитацией на random positioning machine (RPM). После 10-су-точного воздействия для анализа молекул различных групп матрисома использовали методы гистологической окраски с помощью красителей Sirius Red и Fast Green, ПЦР в реальном времени, дот-блоттинга и мультиплексного анализа секретома.
Полуколичественная оценка продукции основных структурных белков корового матрисома выявила изменения в их содержании: снижение коллагеновых и повышение неколлагеновых компонентов ВКМ после экспозиции на RPM. Также повысилась экспрессия генов тенасцита (TNC) и тромбоспондинов (THBS1, THBS2, THBS3), что может провоцировать ослабление клеточной адгезии к матриксу и приводить к ухудшению минерализации и остеогенной дифференцировки МСК.
Анализ содержания протеаз ВКМ в кондиционированной среде МСК выявил повышение секреции метал-лопротеиназ (MMP-1, -2, -3) и катепсинов A, B, D при 10-суточном моделировании эффектов микрогравитации по сравнению со статическим контролем. При этом на транскрипционном уровне было продемонстрировано снижение экспрессии генов, кодирующих молекулы ингибиторов протеаз (TIMP-1 и TIMP-3).
Исследование цитокинов и факторов роста в кондиционированной среде после 10-суточной экспозиции на RPM показало сдвиг секретома МСК в провоспали-тельный сектор: Была повышена секреция провоспа-лительных цитокинов, таких как VEGF, IL-8, IL-12, GROa (CXCL1), MIG (CXCL9) и M-CSF (CSF-1).
Таким образом, моделирование эффектов микрогравитации вызывает активацию протеолитических процессов в МСК, снижение содержания коллагеновых белков в ВКМ МСК и повышение секреции провоспалительных цитоки-нов. В совокупности данные изменения могут обуславливать некоторые механизмы негативных изменений в костной ткани космонавтов во время космического полёта.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ N 19-29-04026.
ДИНАМИЧЕСКАЯ РОЛЬ FOXP3 + TREG В РАЗВИТИИ СЕПСИСА ПРИ SARS-COV-2 И ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ CAR-TREG В ПРОФИЛАКТИКЕ ОСЛОЖНЕНИЙ
О.А. Жукова1, М.В. Бычинин1, И.М. Калугин3, С.М. Юсубалиева4, Г.М. Юсубалиева1 2
1 ФНКЦ ФМБА России, Москва, Россия
2 Инситут молекулярной биологии РАН им. В.А. Энгельгардта, Москва, Россия
3 Первый МГМУ им. Сеченова, Москва, Россия
4 НАО Медицинский Университет «Астана», Нур-Султан, Казахстан
e-mail: oksana.saprikina82@mail.ru
Ключевые слова: коронавирусная инфекция (COVID-19), Т-регуляторные клетки, сепсис.
Коронавирусная болезнь 2019 года (COVID-19) приводит к развитию тяжелой пневмонии, острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), полиорганной недостаточности, сепсиса и летального исхода. Регуляторные Т-клетки (FOXP3 +Tregs) играют важную роль в поддержании
иммунного гомеостаза и могут участвовать в подавлении воспаления, вызванного коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2). В данном исследовании проводилась оценка FOXP3 + Treg у пациентов с COVID-19, выявление взаимосвязи между тяжестью заболевания, развитием сепсиса и изменением количества Treg. В настоящее время остается дискуссионным вопрос об изменении доли и абсолютного количества Tregs при инфицировании SARS-CoV-2.
Для исследования патофизиологических изменений, приводящих к развитию сепсиса при COVID-19 ретроспективно были проанализированы лабораторные биомаркеры острофазовых показателей (СРб, ПКТ), показателей ОАК (лейкоцитов), цитокинов (IL-6), маркера риска образования тромбозов Юдимер), витамина Д, ранее существовавшим сопутствующим заболеваниям [гипертония, диабет, сердечно-сосудистые заболевания, хронические заболевания легких, ожирение и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Возраст, пол, расовая принадлежность и/или ранее существовавший иммунитет могут объяснять неоднородность пациентов с COVID-19 и влиять на исходы заболевания (Brodin P. 2021). Различия в статусе Treg могут быть связаны с гетерогенностью COVID-19. Так что имеет смысл сосредоточиться на смене FOXP3 +Tregs у больных COVID-19 различной степени тяжести. Пациенты проходили терапию в отделении интенсивной терапии (ОИТ) ФНКЦ ФМБА в период с апреля 2020 года по январь 2021 года (189 человек в возрастном диапазоне от 28 до 93 лет). FOXP3 + Tregs имеют решающее значение для поддержания иммунной толерантности (Sakaguchi S., 2008).
Среди умерших пациентов с COVID-19, поступивших в ОИТ, были значительно высокие уровни ПКТ, D-димера, СРБ, IL-6, лейкоцитов, наблюдался дефицит витамина Д и выраженная лимфопения по сравнению с теми, кто выжил. Лимфопения со сниженным количеством CD4 + и CD8 + Т-клеток является очевидным симптомом у пациентов с тяжелой формой COVID-19. Количество Т-клеток и CD4+CD25+aFOXP3+Treg отрицательно коррелировало с концентрацией ИЛ-6 в сыворотке/ Все пациенты на момент поступления в ОРИТ имели повышенный прокальцитонин (ПКТ > 0,05 нг/мл), что говорит о вероятности развития сепсиса.
Основная стратегия в терапии с помощью CAR-Treg связана со способностью избирательно связываться с тканеспецифичными аутоантигенами (Zhang Q, Lu W, Liang CL, Chen Y, Liu H, Qiu F, et al. 2018). Было показано, что терапия CAR-Treg хорошо работает в различных доклинических моделях, включая ЭАЭ, колит и экспериментальную аллергическую астму (Blat D,2014, Skuljec J, 2018, Chen W.A., 2020); при трансплантации почки (ClinicalTrials. gov Identifier: NCT04817774). ^особнос^ CAR-Treg вызывать иммунологическую толерантность обеспечивает их потенциальное применение в лечении SARS-CoV-2.
РАЗРАБОТКА НОВОГО ПРЕПАРАТА — ГЕПАТОПРОТЕКТОРА И ОЦЕНКА ЕГО ЦИТОПРОТЕКТОРНЫХ И РЕГЕНЕРАТИВНЫХ СВОЙСТВ
Н.А. Забокрицкий
Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения РАН, Екатеринбург, Россия
e-mail: pharmusma@rambler.ru
Ключевые слова: биогепатопротектор, гепатоциты, цито-протекторное действие, регенерация.
Основой нового гепатопротекторного препарата, обладающего полифункциональным механизмом действия, позволяющего эффективно восстанавливать угнетенные функции печени, с одновременной нормализацией иммунологических показателей, является входящий в его состав активный биокомпонент — про-биотические бактерии рода Bacillus subtilis, которые при введении в организм продуцируют комплекс БАВ (антибиотики, протеолитические, амилолитические и др. ферменты, иммуноглобулины, а также цитокины, интер-лейкины, витамины, протеины, аминокислоты и другие активные вещества). Эти БАВ оказывают как местное, так и общее иммуномодулирующее действие, нормализуют клеточный и гуморальный иммунитет.
Целью работы являлось изучение защитного действия БАВ стерильного фугата культуры пробиотических микроорганизмов В. subtilis ВКПМ В-9909 на культуру выделенных гепатоцитов при моделировании у них токсического поражения. Работа проводилась с использованием перевиваемой линии клеточной культуры Л-41, позволяющая оценивать токсичность различных субстратов на культурах клеток и выдерживающая токсическое воздействие в разных концентрациях. На первом этапе исследований были определены максимальная нетоксическая доза стерильного фугата (0,1%) и минимальная токсическая доза CCl4 по отношению к клеткам культуры Л-41 (500 мкг/мл-1). На следующем этапе было изучено и доказано цитопротек-торное действие БАВ, входящих в состав фугата штамма В. subtilis В-9909 по отношению к клеткам линии Л-41. На модели токсического поражения культуры выделенных гепато-цитов было показано цитопротекторное и регенеративное действия БАВ в составе фугата штамма В. subtilis В-9909 (выживаемость клеток составила 76% по сравнению с контролем). Результаты исследования пролиферативной активности через 96 ч показывают, что происходит выравнивание относительной предельной плотности культуры клеток Л-41 во всех пробах. Предельная плотность относительно контроля составила 1,04, 1,09 и 1,00, соответственно.
Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что БАВ в составе фугата штамма В. subtilis В-9909 не только обладают выраженным цитопро-текторным действием, но и положительно влияют на регенеративные способности клеток печени, что является значимым фактором для дальнейшего и перспективного использования данного штамма в качестве биокомпонента нового гепатопротекторного регенеративного препарата.
Работа выполнена по теме из Плана НИР ИИФ УрО РАН, № гос. регистрации 122020900136-4.
КОМПОЗИЦИОННЫЕ ГИДРОГЕЛИ НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА И ПОРИСТЫХ ПОЛИЛАКТИДНЫХ МИКРОЧАСТИЦ
Ю.Д. Загоскин1, Н.М. Кузнецов1, А.С. Семкина1 2, А.А. Захаревич1, С.Н. Чвалун1, 2, Т.Е. Григорьев1
1 ФГБУ НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
2 ФГБУН Институт синтетических полимерных материалов им. Н.С. Ениколопова РАН, Москва, Россия
e-mail: kyz993@yandex.ru
Ключевые слова: гидрогели, хитозан, полилактид, пористые микрочастицы, композиционные материалы.
Как пористые полимерные материалы, так и гидрогели уже довольно давно представляют большой интерес в различных областях применения, в том числе в регенеративной
