CC BY
24
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
ИММУНОЛОГИЯ РЕПРОДУКЦИИ
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
РЕГУЛЯТОРНЫЕ РохР3+Т-КЛЕТКИ В ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ ЖИДКОСТИ У ЖЕНЩИН В ЦИКЛАХ ЭКО
Андреева Е.А.1, Хонина Н.А.1, Тихонова М.А.1, Пасман Н.М.2
1ФБГНУНаучно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
2 Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
Большой интерес у репродуктологов к регуляторным FoxP3+T-KieTKaM обусловлен участием этих клеток в индукции толерантности к аллоантигенам плода. При этом регуляторные свойства проявляют как CD4+FoxP3+ клетки, так CD4-FoxP3+ клетки. Учитывая большое влияние различных клеток и факторов в микрокружении преову-ляторного фолликула на созревание ооцита, можно допустить участие фолликулярных Т-клеток в созревании фолликулов и ооцитов.
Цель. Исследование содержания различных типов FoxP3+ и FoxP3- клеток в фолликулярной жидкости (ФЖ) женщин, проходивших лечение бесплодия методом ЭКО, и их возможное значение в овуляторном процессе.
Материалы и методы. В исследование вошли 55 женщин с бесплодием, проходивших лечение методом ЭКО. Средний возраст женщин составил 33,6±5,1, длительность бесплодия — 6,9±4,4 лет. Пациенты подписывали информированное добровольное согласие на проведение иммунологического исследования. Образцы ФЖ забирали во время трансвагинальной пункции яичников, центрифугировали (2000 об/мин), затем полученные клетки криоконсервировали (-80°С). Индекс оплодотворения (ИО) рассчитывали по формуле: ИО = кол-во оплодотворенных ооцитов/кол-во зрелых ооцитов. Относительное содержание различных субпопуляций Т-клеток определяли методом проточной цитофлюориметрии (FACSCalibur) с использованием меченных монокло-нальных антител. Статистическую обработку данных проводили при помощи программы Statistica 6.0.
Результаты. Оценка эффективности ЭКО показала, что наступление клинической беременности ассоциировано с меньшим количеством фолликулов и меньшим содержанием ооцитов, характеризующихся более высоким индексом оплодотворения (0,8±0,09% vi 0,7±0,06% у женщин с отрицательным результатом ЭКО; pu < 0,05). Исследование ФЖ у женщин при стимуляции суперовуляции выявило наличие в ней FoxP3+ клеток как в популяции CD4+ (CD4+FoxP3+), так и CD4- (CD4-FoxP3+) Т-клеток. При этом FoxP3+ клетки выявлялись как среди CD4+CD25+, так и CD4+CD25- клеток. Анализ взаимосвязи различных субпопуляций Т-клеток с количеством фолликулов и ооцитов
показал, что меньшее число фолликулов ассоциировалось (на уровне тенденции) с более высоким содержанием CD4-FoxP3+клеток. Более того, меньшее число зрелых ооцитов выявлялось у женщин с более высоким количеством как CD4-FoxP3+ клеток (10,7±2,8% ^ 3,1±1,6%; рп < 0,01), так и CD4+FoxP3+ (4,0±0,9% vs 2,1±0,6%; рп < (3,01). При этом между содержанием ооцитов и CD4-FoxP3+Т-клеток отмечалась умеренная, но достоверная корреляционная зависимость (г = -0,36; р < 0,05). Ретроспективный анализ показал, что наступление и прогрессирование беременности ассоциировалось с более низким содержанием CD4+CD25-FoxP3+ клеток. На это указывают достоверные различия между количеством CD4+CD25-FoxP3+ клеток у женщин с клинической и биохимической беременностью (3,0±0,3% vs 8,0±1,7%; рп < 0,01) и между группами с клинической беременностью и отрицательными исходами ЭКО (3,0±0,3% vs 7,9±1,5%; рп < 0,05).
Заключение. Впервые показано, что в ФЖ женщин, проходивших стимуляцию суперовуляции методом ЭКО, содержатся различные субпопуляции регуляторных FoxP3+Т-клеток, которые могут оказывать влияние на различные этапы овуляторного процесса и эмбриогенеза. При этом можно полагать, что CD4+FoxP3+и CD4-FoxP3+ клетки оказывают влияние на этапах созревания фолликулов и ооцитов, а CD4+CD25-FoxP3+ клетки на процессы эмбриогенеза.
ДИФФЕРЕНЦИРОВКА В-ЛИМФОЦИТОВ И ПРОДУКЦИЯ АУТОАНТИТЕЛ ПРИ ЭНДОМЕТРИОЗЕ
Анциферова Ю.С., Малышкина А.И., Абдуллаева Л.Х., Красильникова А.К.
ФГБУ«Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» Министерства здравоохранения РФ, Иваново, Россия
Введение. Иммунные механизмы играют важную роль в патогенезе эндометриоза, одного из наиболее распространенных гинекологических заболеваний. Наряду с изменением активности клеток врожденного иммунитета, при эндометриозе многие авторы отмечают признаки аутоиммунных нарушений, в том числе усиление продукции аутоантител различной природы. Однако вопрос о значимости аутоантител в патогенезе эндометриоза до конца еще не решен. В ряде работ не было выявлено взаимосвязи между титром аутоантител и стадией эн-дометриоза. Были получены противоречивые данные о специфичности аутоантител, выявляемых у пациенток с эндометриозом. До сих пор не изучены механизмы, приводящие к выработке аутоантител, нет данных о характере функционирования В-лимфоцитов при данном заболевании.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Цель и задачи. Целью исследования было установить взаимосвязь между особенностями активации и диффе-ренцировки В-лимфоцитов и содержанием аутоантител в периферической крови и перитонеальной жидкости пациенток с эндометриозом различной степени тяжести для уточнения механизмов развития аутоиммунных нарушений при данном заболевании.
Материалы и методы. Было проведено обследование 59 пациенток с эндометриозом и бесплодием (из них 36 женщин с эндометриозом 1-2 степени и 23 женщины с эндометриозом 3-4 степени) и 25 здоровых фертиль-ных женщин (контрольная группа). Материалом для исследования служили периферическая кровь и пери-тонеальная жидкость. Фенотип В-лимфоцитов (CD20+, CD19+, CD19+CD27+, CD19+CD27-, CD19+CD20-CD38+, CD20+CD5+, CD20+CD86+) оценивали методом многоцветной проточной цитометрии. Содержание аутоантител (анти-гистоновых, антилопа РеИишёа ^Р), анти-овариальных, анти-фосфатидил-этаноламин IgG, анти-фосфатидил-холин IgG и анти-Ье1а-2-гликопротеин IgG антител) и sCD30 определяли методом ИФА.
Результаты. У всех пациенток с эндометриозом вне зависимости от степени его тяжести в крови и перитоне-альной жидкости было выявлено снижение количества CD27+ В-клеток памяти и увеличение содержания плазматических CD19+CD20-CD38+ клеток, уровня наивных CD27- и активированных CD86+ клеток в популяции CD19+ лимфоцитов. При этом у женщин с распространенными формами эндометриоза изменения дифферен-цировки В-лимфоцитов на локальном уровне были более выражены, чем при эндометриозе 1-2 степени. Кроме того, у женщин с эндометриозом 3-4 степени в перитоне-альной жидкости отмечалось повышение концентрации растворимой формы молекулы CD30, сдвигающей баланс регуляции ТЫ/ТЪ2 типов иммунного ответа в сторону усиления активности гуморальных реакций. Оценка продукции аутоантител при эндометриозе не выявила увеличения частоты встречаемости диагностически значимых титров антител изученной специфичности. В то же время в крови пациенток с эндометриозом различной степени тяжести было отмечено статистически значимое повышение концентрации анти-овариальных антител, а при эндометриозе 1-2 степени — увеличение содержания ан-ти-гистоновых антител как в крови, так и в перитонеаль-ной жидкости. Проведение корреляционного анализа показало, что при эндометриозе 1-2 степени в крови отмечалась положительная корреляционная взаимосвязь между уровнем анти^Р антител и содержанием В-1 лимфоцитов, а в перитонеальной жидкости уровни анти^Р и анти-овариальных антител прямо коррелировали с количеством наивных CD27-В-лимфоцитов. Кроме того, в перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом 1-2 степени была выявлена отрицательная корреляционная связь между содержанием анти^Р антител и уровнем активированных CD20+CD86+ клеток. При эндометриозе 3-4 степени было выявлено меньше, чем при эндометриозе 1-2 степени корреляционных взаимосвязей между содержанием аутоантител и показателями, характеризующими состояние В-лимфоцитов. Как в крови, так и в перитонеальной жидкости при распространенных формах эндометриоза отмечалась отрицательная взаимосвязь между уровнем анти-фосфатидил-холин IgG антител и наивных В-клеток.
Заключение. Таким образом, для пациенток с эндоме-триозом характерен сдвиг системной и локальной диф-
ференцировки В-лимфоцитов в сторону увеличения пула наивных клеток и повышения содержания плазматических клеток. Эти изменения, по-видимому, ведут к изменению репертуара продуцируемых антител, в том числе к выработке аутоантител, способных реагировать с антигенами органов репродуктивной системы, что может способствовать развитию бесплодия при данном гинекологическом заболевании.
АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ В ПЕРИТОНЕАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ У БОЛЬНЫХ НАРУЖНЫМ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ
Арипова Т.У.1, Мусаходжаева Д.А.1, Ешимбетова Г.З.2, Азизова З.Ш.1
1 Республиканский научный центр иммунологии Министерства здравоохранения РУз, Ташкент, Узбекистан
2 Ташкентский институт усовершенствования врачей, Ташкент, Узбекистан
В структуре гинекологических заболеваний эндо-метриоз занимает третье место после воспалительных заболеваний половых органов и миомы матки. Она диагностируется у 2-10% женщин, впервые обратившихся к гинекологу, и у 30% больных, нуждающихся в гинекологических операциях. При применении лапароскопии очаги эндометриоза выявляются у 20-50% женщин, страдающих бесплодием неясного генеза. В настоящее время актуальны методы, позволяющие непосредственно оценить состояние локальных клеточных и метаболических процессов в перитонеальной полости. Показана немаловажная роль активности перитонеальных фагоцитов в патогенезе наружного генитального эндометриоза (НГЭ).
Целью исследования явилось изучение кислородзави-симого метаболизма перитонеальных макрофагов в процессе фагоцитоза в перитонеальной жидкости у больных с различной степенью тяжести наружного генитального эндометриоза.
Было обследовано 37 больных в возрасте от 20 до 45 лет с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ), которые составили 3 группы: 1-я группа — 12 больных с легкой степенью тяжести заболевания; 2-я группа — 10 больных с умеренной тяжестью заболевания; 3-я группа — 15 больных с тяжелым течением. Контрольную группу составили 18 здоровых фертильных женщин. Диагноз у всех больных был установлен на основании интраопе-рационного обследования и подтвержден результатами гистологического исследования. Для определения кисло-родзависимой биоцидности перитонеальных макрофагов и нейтрофилов использовали спонтанный и стимулированный НСТ-тест.
Исходные показатели кислородзависимой реактивности макрофагов и нейтрофилов перитонеальной жидкости во всех наблюдаемых подгруппах женщин с НГЭ отражали повышение спонтанной биоцидности по НСТ-тесту по сравнению с группой контроля. В целом, активность спонтанного НСТ-теста, у больных с эндометри-озом была выше, чем у здоровых фертильных женщин (8,3±0,3 и 10,7±0,6 соответственно, р < 0,05). Наиболее значительное увеличение спонтанного НСТ-теста регистрировали у женщин 1-й и 2-й групп (в 1,5 и 1,6 раза соответственно выше контроля). При тяжелом течении НГЭ наблюдалось снижение активности спонтанного НСТ-теста, так что его значения недостоверно превос-
