CC BY
3
Разработанный метод определения 2-этилгексилакрилата с винилаце-татом был проверен на искусственно приготовленных смесях обоих веществ. Для этого были приготовлены искусственные смеси с различным содержанием винилацетата и 2-этилгексилакрилата. Определение производили с использованием градуировочных графиков.
Поглощение винилацетата и дибутилмалеата, а также винилацетата и 2-этилгексилакрилата проводили в 2 последовательно присоединенных поглотительных приборах с пористой пластинкой, заполненных 4 мл этанола, каждый со скоростью 0,2—0,6 л/мин.
Выводы
1. Предложен спектрофотометрический метод определения дибутилмалеата в присутствии винилацетата на длинах волн 245 и 223 ммк и определения 2-этилгексилакрилата в присутствии винилацетата на длинах волн 232 и 223 ммк. Чувствительность определения 3 мкг!мл.
2. Поглощение дибутилмалеата и винилацетата, а также 2-этилгексилакрилата и винилацетата проводится в 2 последовательно присоединенных поглотителях с пористой пластинкой, заполненных этанолом.
Поступила 30/VIII 19S7 г.
УДК 614:576.85.078.1:643.422.4
ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ИНФРАКРАСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ
А. Е. Веришгора, Т. П. Данильчук Киевский научно-исследовательский институт оториноларингологии
Инфракрасная (ИК) спектроскопия используется с 1952 г. для дифференциации и идентификации бактерий как экспресс-метод в многочисленных исследованиях за рубежом, однако заключения о ценности метода для указанных целей противоречивы. Riddle с соавторами, Norris, Т. П. Преображенская с соавторами считают, что этот метод обеспечивает возможность проведения межвидовой, а в части случаев и внутривидовой дифференциации бактерий. Smith отмечает затруднения в связи с необходимостью обеспечения строгой стандартизации условий исследования. Нами установлено, что стафилококк и различные группы стрептококка имеют стабильные ИК спектры, специфика которых определяется характером питательной среды. Но полисахаридные фракции 10 различных видов микробов давали ИК спектрограммы, однозначные по положению полос в спектре (А. Е. Вершигора).
Отечественными авторами к настоящему времени опубликованы 2 обзора и 3 оригинальные работы, посвященные применению ИК спектроскопии в микробиологических исследованиях. Таким образом, метод не нашел широкого применения в медицинской практике в нашей стране.
В нашу задачу входило определить возможность межвидовой дифференциации методом ИК спектроскопии бактерий, используемых в качестве санитарно-показательных микробов при проведении гигиенических и санитарно-эпидемиологических исследований. Мы изучали ИК спектры кишечной палочки (Bact. coli commune), вульгарного протея и синегнойной палочки. По 15 штаммов упомянутых видов бактерий нами было выделено из почвы. Видовая принадлежность выделенных бактерий определена на
основании изучения морфологических, культуральных и биохимических свойств. В качестве подложек использовали пластинки из К1^5-51 (сплав талий йода и талий брома).
Для приготовления препаратов на пластинку КИ5-5 наносили каплю дистиллированной воды и в ней тщательно растирали 1—2 петли соответствующей суточной культуры, выращенной на мясо-пептонном агаре при 37°. Препарат подсушивали при той же температуре 20 мин. Запись ИК спектров производили с помощью спектрофотометра ИКС-14. Методика
Таблица 1
Достоверность различий соотношения оптических плотностей характеристических
полос поглощения
Полосы поглощения Статистические показатели Вид микробов
В. coli commune В. proteus vulgare В. coli commune В. руосу-aneum В. руосу-aneum В. proteus vulgare
3-я и 4-я 4-я и 5-я М±т ±а п М—М, Р М±т ±а п М—М, Р 1,09 ±0.0159 0,0604 15 0,! 4,7 О.Г 0,82±0,014 0,55 15 о,: 13,6 о.о 1,29±0,039 0,149 15 5 1 I 1,11±0,016 0,064 1 15 9 7 5 1,09±0,0I59 0,0604 15 0,' и,: 0,1 0,82±0,014 0,055 15 J 0, 7,ï O.C 0,87 ±0,0115 0,044 15 22 22 >1 0,93±0,006 0,022 15 1 >9 >2 0,87±0,015 0,044 15 0, 10. 0 0,93±0,006 0,022 15 0, 10,! о.< 1,29 ±0,039 0,149 15 42 29 001 1,U±0,016 0,064 15 8 >8 >1
Таблица 2
Достоверность различий значения оптических плотностей характеристических полос поглощения
Статисти- Полосы поглощения
ческий
показа- 5-я
тель 3-я и 4-я 4-я и
В. coli commune
М±т 0,163±0,006 0,150±0,007 0,150±0,007 0,181+0,007
±а 0,025 0,029 0,028
п 15 15 15 15
М—М1 0,013 0,031
/ 1,413 3,131
Р 0,2 0,01
В. proteus vulgare
М±т 0,123 + 0,003 0,096±0,003 0,096 + 0,003 0,08+0,004
±а 0,0122 0,0124 0,0124 0,017
п 15 15 15 15
М—М1 0,027 0,008
г 6,428 1,6
р 0,02 0,1
В. руосуапеит
М±т 0,206±0,003 0,179 + 0,001 0,179+0,001 0,222 + 0,004
±а 0,0117 0,0062 0,0062 0,019
п 15 15 15 15
М—Мг 0,027 0,043
/ 8,709 10,48
Р 0,001 0,01
настройки прибора и записи спектрограмм опубликована нами ранее совместно с В. А. Храновским.
Получены следующие результаты. В спектрограммах изучавшихся видов бактерий 5 основных полос поглощения И К лучей — в области 1650, 1540, 1390, 1235 и 1070 см—1, соответствующих наличию в клеточном микробном материале определенных химических групп и веществ: С=0, С=1М, С=Н нуклеиновых кислот и полисахаридов (Ьеуте с соавторами). Первые 2 полосы по оптической плотности у всех 3 видов бактерий были однозначны. Различия между видами выявлялись в значениях оптических плотностей для 3, 4 и 5-й полосы поглощения. Так, в ИК спектрограммах кишечной палочки 5-я полоса поглощения интенсивнее 4-й и 3-й, тогда как в спектрограммах вульгарного протея наиболее интенсивна 3-я полоса, а 4-я и 5-я почти однозначны. Характерная особенность ИК спектров си-негнойной палочки — нарастание оптических плотностей от 3-й до 5-й полосы поглощения.
Таблица 3 «
Оптическая плотность 3, 4 и 5-й полосы поглощения инфракрасных лучей (в максимуме)
Вид микробов
в. coli commune В. Proteus vulgare В. pyocyaneum
№ штамма полоса поглощения № штамма полоса поглощения № штамма полоса поглощения
3-я 4-я 5-я 3-я 4-я 5-я 3-я 4-я 5-я
27 0,178 0,159 0,204 39 0,131 0,092 0,086 13 0,174 0,194 0,208
28 0,163 0,157 0,195 51 0,131 0,097 0,086 14 0,181 0,194 0,208
24 0,145 0,124 0,164 20 0,125 0,114 0,097 2 0,174 0,215 0,237
20 0,190 0,183 0,218 30 0,114 0,097 0,081 10 0,170 0,181 0,204
9 0,131 0,110 0,143 53 0,125 0,092 0,076 12 0,175 0,198 0,221
10 0,187 0,170 0,191 57 0,125 0,092 0,086 16 0,188 0,214 0,224
11 0,136 0,120 0,144 56 0,137 0,114 0,102 11 0,181 0,201 0,222
16 0,134 0,116 0,155 3 0,114 0,071 0,069 28 0,181 0,222 0,244
17 0,190 0,165 0,206 33 0,149 0,114 0,108 29 0,174 0,215 0,229
15 0,126 0,108 0,140 31 0,119 0,076 0.066 27 0,187 0,215 0,222
8 0,187 0,181 0,201 25 0,117 0,095 0,088 26 0,174 0,208 0,222
1 0,187 0,181 0,203 4 0,118 0,094 0,092 5 0,181 0,201 0,208
3 0,187 0,181 0,201 5 0,113 0,097 0,095 1 0,187 0,207 0,222
4 0,174 0,168 0,208 8 0,136 0,115 0,106 30 0,187 0,201 0,208
2 0,137 0,125 0,143 49 0,097 0,081 0,076 24 0,174 0,222 0,244
Для определения постоянства характера спектрограмм и наличия достоверных различий в значении отдельных полос поглощения мы обработали полученные материалы статистически (табл. 1 и 2). Как показано в табл. 1, различия в значении характеристических полос статистически достоверны, что указывает на достаточную стабильность оптических плотностей отдельных полос поглощения для каждого из изучавшихся видов. В то же время видно, что отличительным признаком ИК спектрограмм кишечной и синегнойной палочек может быть соотношение 4-й и 5-й полосы, а в спектрограммах протея — соотношение 3-й и 4-й полосы. Для выявления различий в спектрограммах 3 изучавшихся видов бактерий статистически обработаны соотношения оптических плотностей характеристических полос поглощения, т. е. соотношения 3-й и 4-й, 4-й и 5-й полосы (табл. 3). Различия эти статистически достоверны, что обеспечивает надежную дифференциацию изучавшихся видов бактерий. Стабильность спектрограмм для одного и того же вида бактерий иллюстрирует рисунок (а, б, в)\ там же (см. рисунок, г) показано различие в спектрограммах кишечной и синегнойной палочки и протея.
Как видно из рисунка и таблиц, различия в количественном содержании отдельных химических групп для одного и того же вида микробов и различия в количественном содержании однозначных химических групп,
определяющихся методом ИК спектроскопии, у 3 изучавшихся видов бактерий, несмотря на некоторые колебания, все же достаточно стабильны и статистически достоверны.
Таким образом, санитарно-показательные бактерии — кишечная палочка, вульгарный протей и синегнойная палочка — могут быть дифференцированы по спектрам поглощения инфракрасных лучей.
a f ё г
ИК спектры бактерий а — кишечная палочка, штаммы: 1— штамм Ks 1; 2— штамм Ks 4; 3— штамм Ns 3; б— вульгарный протей, штаммы: 4— штамм Ks 20; 5— штамм № 51; 6 — штамм № 53; в — сине-гнойная палочка, штаммы: 7 — штамм № 27, 8 — штамм Ks 29; 9 — штамм Ks 1; г: 10 — кишечная палочка — штамм Ks 1; 11 — вульгарный протей — штамм Ks 51;
12 — синегнойная палочка — штамм Ks 27.
ЛИТЕРАТУРА
ВершигораА. Е., ХрановскийВ. А. Мжробюл. ж., 1967, № 6, с. 523. — Вершигора А. Е. Там же, 1968, № 4, с. 321. — Он ж е. Ж. ушн., нос. и горл, бол., 1968, № 1, с. 90.— Преображенская Т. П., А л т у х о в а Л. Б., Д о р о-ж и н с к и й В. Б. и др. Микробиология, 1966, № 1, с. 96. — Lev i пе S., S t е -venson H.J. R., Chambers L. A. et al. J. Bact., 1953, v. 65, p. 10. - Norrie К. P., J. Hyg., 1959, v. 57, p. 325,— Randall H. M. et al. J. opt. Soc. Am., 1953, v. 43, p. 1068.— Riddle J. N. et al. J. Bact., 1956, v. 72, p. 34.
Поступила 27/11 1968 г.
УДК 576.8+576.851.25].07:543.422.4
О ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИНФРАКРАСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ КАК МЕТОДА ИДЕНТИФИКАЦИИ
И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Г. П. Калина, В. Г. Митерева и И. Н. Титова
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Инфракрасная (ИК) спектрофотометрия как метод быстрой и облегченной идентификации микроорганизмов широко рекламировалась в начале 50-х годов. Но уже в конце 50-х—начале 60-х годов наступило отрезвление, и те же авторы, которые пропагандировали этот метод, вынуж-
4 Гигиена и саннтаряя № 3
49
