CC BY
32
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ, СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА, ПРОФИЛАКТИКА
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КЛЕЩЕВОГО ВИРУСНОГО ЭНЦЕФАЛИТА И ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА НА ТЕРРИТОРИИ РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ
В.И. Прометной, С.Ю. Водяницкая, Л.М. Веркина
ФГУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора
Одной из важных особенностей семейства Flavi-шШае является наличие выраженных антигенных перекрестов между его представителями, в том числе между вирусами серокомплекса клещевого энцефалита и вирусами, передаваемыми комарами и москитами. Наблюдаемое в настоящее время широкое распространение клещевого вирусного энцефалита, увеличивающееся проникновение возбудителя в регионы на Юге России, где регистрируется лихорадка Западного Нила, делают проблему дифференциальной серодиагностики этих инфекций весьма актуальной.
Одним из наиболее специфичных серологических методов, позволяющих дифференцировать инфекции, вызываемые разными флавивирусами, является реакция нейтрализации, для проведения которой используют парные сыворотки, полученные в острую фазу заболевания и в период выздоровления. Для идентификации ин-фицированности населения, в том числе флавивирусной этиологии, в последнее время все чаще применяют ИФА, с помощью которого определяют способность сыворотки больного взаимодействовать с иммунодоминантными антигенами вирусов этого семейства. В качестве дифференциального критерия используют коэффициент позитивности (КП) - отношение величины оптической плотности (ОП) исследуемой сыворотки к значению ОП отрицательного контрольного образца.
Цель работы - дифференциальная серодиагностика инфицирования здорового населения возбудителями лихорадки Западного Нила и клещевого вирусного энцефалита на территории Ростовской области.
Материалы и методы. В работе использованы образцы сывороток крови доноров, имеющие отрицательные результаты на ВИЧ-инфекцию и вирусные гепатиты. Доноры в период забора материала не имели клинических проявлений или подозрений на инфекционное заболевание, состояние здоровья в каждом конкретном случае удостоверялось врачом-терапевтом при осмотре. Сыворотки отбирались в четырех районах (Ве-селовский, Неклиновский, Песчанокопский, Тарасов-ский) и трех городах (Ростов-на-Дону, Зерноград, Черт-ково) Ростовской области в 2009-2010 гг. Образцы крови исследовали на наличие антител к возбудителю лихорадки Западного Нила (ЛЗН) и клещевого вирусного энцефалита (КВЭ).
Сыворотки хранились при температуре -24 °С, число циклов замораживания-оттаивания не превышало двух на образец. Обнаружение антител к вирусам ЛЗН и КВЭ проводили с использованием тест-систем для ИФА «ВектоНил - ^ G», «ВектоВКЭ - ^ G» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), «ИФА-КЭ - ^ &> (ЗАО «Эко-
лаб», Москва), «ДС-ИФА-АНТИ-ВКЭ^» (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород).
Результаты и обсуждение. Исследование сывороток крови доноров показало наличие инфицирован-ности населения возбудителями клещевого вирусного энцефалита и лихорадки Западного Нила.
Полученные результаты разделены на три группы. В первую вошли сыворотки крови, реагирующие только с гомологичным антигеном к ЛЗН и КВЭ, удельный вес которых в структуре положительных результатов составил 80,0 %. Во вторую включены сыворотки крови, имеющие перекрестные реакции с антигенами тест-систем «ВектоНил - ^ G» и «ИФА-КЭ - ^ &>, их удельный вес составляет 16,7 %. Третью составили сыворотки крови доноров, одновременно реагирующие с антигенами тест-систем «ВектоНил - ^ G», «ИФА-КЭ - ^ G» и «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ-G», удельный вес которых в числе положительных результатов занимает 3,3 %.
В первой группе антитела к ЛЗН с использованием «ВектоНил - ^ G» обнаружены в 23 сыворотках, что составляет 38,3 %. Антитела к КВЭ с использованием «ВектоВКЭ - ^ G» идентифицированы в 10 сыворотках, удельный вес которых составляет 16,7 %. При использовании «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^» гомологичные результаты получены в 13 сыворотках, или 21,7 %. При анализе результатов, полученных с использованием «Векто-ВКЭ - ^ G» и «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^», установлено, что из 23 положительных результатов только в одном случае, что составляет 4,3 %, обнаружены антитела к двум антигенам. На основании сравнения оптической плотности двух реакций выявлено, что при использовании «ВектоВКЭ - ^ G» показатель оптической плотности превышал результаты, полученные с антигеном «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^», в 4,3 раза. Учитывая результаты наших предыдущих исследований, это дает основание считать позитивной реакцию с диагностикумом «ВектоВКЭ - ^ G». Далее установлено, что антитела с помощью «ВектоВКЭ - ^ G» обнаруживались среди доноров г. Зер-нограда и Песчанокопского района области, при использовании «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^» также выявлялись на вышеуказанных территориях. Остается неизвестной причина различного реагирования сывороток крови к различным антигенным препаратам по обнаружению антител к КВЭ. Из изложенного следует, что для достоверной и полной оценки ситуации по инфицированию населения возбудителем КВЭ на данном этапе работы целесообразно при исследовании сывороток крови использование двух проверенных в экспериментальных условиях диагностических препаратов, так как использование только одного диагностического препарата
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
может на 40,0-60,0 % сократить информативность проводимых исследований.
Во вторую группу вошли сыворотки крови, реагирующие одновременно с диагностикумами «ВектоНил -^ G» и «ИФА-КЭ-^ G», удельный вес таких сывороток составил 16,7 %. При анализе оптической плотности полученных результатов установлено, что она колебалась от 1,16 до 10,3, на основании чего 10 положительно реагирующих сывороток к двум антигенам распределены в следующем соотношении: семь отнесены к числу сывороток, имеющих более высокую оптическую плотность к ЛЗН, в трех случаях - к КВЭ, у которых оптическая плотность превышала значения к «ВектоНил -^ G» в 1,2 - 1,9 раза.
Третью группу составили две сыворотки крови, при тестировании которых выявлены положительные результаты к трем используемым антигенным препаратам. Используя оптическую плотность положительных реакций, установлено, что в одном случае результат реакции с «ИФА-КЭ-^ G» превосходил оптическую плотность с «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^» в 3,5 раза, с «ВектоНил - ^ G» - в 2,7. Это дало основание отнести данную сыворотку положительно реагирующей с «ИФА-КЭ-^ G» на КВЭ. В другом случае оптическая плотность с «ВектоНил - ^ G» превышала показатель с «ИФА-КЭ - ^ G» в 2,6 раза, с «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^» - в 8,6 раза. Следовательно, данная сы-
воротка отнесена к положительно реагирующим с антигеном ЛЗН.
При оценке 60 позитивных результатов серологических исследований сывороток крови доноров антитела к возбудителю клещевого вирусного энцефалита обнаружены в 48,3 % случаев, к возбудителю лихорадки Западного Нила - в 51,7 %. В целом при анализе материала по семи административным территориям Ростовской области инфицированность населения к КВЭ составила 4,73 %, ЛЗН - 5,05 %, при этом установлена высокая статистическая достоверность полученных результатов (р < 0,001).
При анализе коэффициента позитивности выявлено, что средняя величина КП для сывороток, учтенных как положительно реагирующих с «ВектоНил - ^ G», составила 37,7, с «ИФА-КЭ - ^ G» - 15,7 и «ДС-ИФА-Анти-ВКЭ^» - 15,9. Указанные показатели позитивности подтверждают правомерность проведенной дифференциации полученных результатов.
Таким образом, нами предложены новые подходы для оценки дифференциальной диагностики полученных результатов серологических исследований, имеющих выраженные антигенные перекресты, а также использование не менее двух антигенных диа-гностикумов для достоверной и полной оценки ин-фицированности населения возбудителем клещевого вирусного энцефалита.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ НА ТЕРРИТОРИИ РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ
С.Ю. Водяницкая, Л.М. Веркина, В.И. Прометной, А.И. Иванова, Г.Д. Бочкова*, И.В. Шуликова*, М.Л. Куриленко, Н.Г. Иванова
ФГУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, *ГУЗ «Станция переливания крови» Ростовской области
Для Ростовской области арбовирусные инфекции продолжают оставаться актуальными в связи с продолжающейся регистрацией заболеваемости и летальности по Крымской геморрагической лихорадке (КГЛ), увеличением числа случаев заболевания лихорадкой Западного Нила (ЛЗН). Малоизученным аспектом является циркуляция возбудителя клещевого вирусного энцефалита (КВЭ) на территории области.
Сходство лихорадок, вызываемых арбовирусами, с ОРВИ и, как следствие, позднее обращение населения за медицинской помощью, приводящее к утяжелению заболевания, а также настоятельные требования медицинского персонала лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) о верификации сезонных менингитов и менингоэнцефалитов явились основой для проведения серологических исследований населения области.
Цель работы - изучение инфицированности населения возбудителями КВЭ, ЛЗН, КГЛ и расшифровка лихорадок неясной этиологии у больных ЛПУ г. Ростова-на-Дону.
Материалы и методы. В работе использованы образцы сывороток крови доноров, имеющих отрица-
тельные результаты на ВИЧ-инфекцию и вирусные гепатиты, собранных специалистами ГУЗ «Станция переливания крови» Ростовской области в 26 административных районах и 8 городах Ростовской области в 2009-2010 гг.; сыворотки крови больных с клинически сходными проявлениями арбовирусных инфекций, доставленных специалистами ФГУЗ «РостНИПЧИ» Роспотребнадзора из инфекционных и неврологических отделений ЛПУ г. Ростова-на-Дону в 2009 г. На лихорадку Западного Нила исследовано 909 сывороток, на КВЭ - 820, на КГЛ - 818. Сыворотки хранились при температуре -24 °С, число циклов замораживания-оттаивания не превышало двух на образец. Обнаружение антител к вирусам КВЭ, КГЛ и ЛЗН проводили с использованием тест-систем для ИФА «ВектоКрым-КГЛ - ^ G», «ВектоНил - ^ G», «ВектоВКЭ - ^ G» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), «ИФА-ВКЭ - ^ G» (ЗАО «Эколаб», Москва), «ДС-ИФА-АНТИ-ВКЭ^» (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород).
Результаты и обсуждение. Исследование сывороток показало наличие инфицированности здорового населения возбудителями КВЭ, КГЛ и ЛЗН. У боль-
