CC BY
103
- Аграрный вестник Урала № 3 (121), 2014 г. - <
Ветеринария
УДК 636
ДИАГНОСТИКА ЦИРКОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ СВИНЕЙ
О. Г. ПЕТРОВА,
доктор ветеринарных наук, профессор, И. М. ДОННИК,
доктор биологических наук, профессор, академик Россельхозакадемии, ректор, Уральский государственный аграрный университет
(620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, д. 42; тел.: 8 (343) 371-33-63),
А. Г. ИСАЕВА,
кандидат биологических наук, доцент,
Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии
(620142, г. Екатеринбург, ул. Белинского, д. 112а),
Ю. Г. КРЫСЕНКО,
доктор ветеринарных наук, профессор, Ижевская государственная сельскохозяйственная академия
(426069, г. Ижевск, ул. Студенческая, д. 11)
Ключевые слова: диагностика, цирковирусная инфекция, эпизоотическая ситуация, клинические признаки, результаты лабораторных исследований, свиньи.
Диагноз на цирковирусную болезнь свиней ставят на основании трех критериев: наличие клинических признаков болезни и результатов патологоанатомического вскрытия павших животных; эпизоотической ситуации в хозяйстве и регионе, с учетом вероятности заноса инфекции: завоз животных или кормов из неблагополучных по ЦВС хозяйств, вероятные контакты через транспорт и т. д.; результатов лабораторных исследований: иммуногистохимия в лимфатических узлах (золотой стандарт); гибридизация in situ (золотой стандарт). Эти реакции сложны, являются дорогостоящими, в Российской Федерации не применяются. Иммуноферментный анализ — обнаружение вирусного антигена, выявление антител; ПЦР — быстрый, чувствительный высокоспецифичный метод. Несмотря на недостаток данных об эпизоотологии заболевания, известно, что частота обнаружения вируса ЦВС-2 с помощью серологических методов остается высокой. Диагноз затруднен из-за схожести заболевания с гемофилезным полисерозитом, пастереллезом, другими вирусными заболеваниями. На основании клинических признаков, увеличения числа животных с их проявлением, обнаруженной при патологоанатомическом вскрытии генерализованной форме лимфаденопатии, желтухи, наличия признаков грануломатоза в печени, почках и ЖКТ можно поставить предположительный диагноз. Подтверждают его, выявляя вирусный антиген в мазках или тонких срезах ткани в специфических реакциях с моноклональными антителами, выявляя вирусную ДНК методом ДНК-гибридизации in situ. Также для выявления вирусной ДНК в свежих или обработанных формалином тканях используется ПЦР с использованием проб, специфических к PCV-II. Особенность цирковирусной инфекции в том, что выявление вирусной ДНК без применения других методов диагностики может дать ошибочно положительный диагноз. Рекомендуется комбинировать метод ПЦР с методом выделения вируса, проведением иммуногистохимического анализа на наличие вирусного антигена или гибридизацию in situ на определение ДНК вируса в тканях.
DIAGNOSTICS OF CIRCOVIRUS INFECTION OF PIGS
0. G. PETROVA,
doctor of veterinary sciences, professor,
1. M. DONNIK,
doctor of biological sciences, professor, academician of Russian academy of agricultural sciences, rector, Ural state agricultural university
(42 K. Libknehta Str., 620075, Ekaterinburg; tel: +7 (343) 371-33-63),
А. G. ISAEVA,
candidate of biological sciences, associate professor,
Ural scientific research veterinary institute of Russian academy of agricultural sciences
(112A Belinskogo Str., 620142, Ekaterinburg),
YU. G. KRYSENKO,
doctor of veterinary sciences, professor, Izhevsk state agricultural academy
(11 Studencheskaya Str., 426069, Izhevsk)
Keywords: diagnostics, circovirus infection, epizootic situation, clinical signs, laboratory results, pigs. Circovirus disease diagnosis of pigs is put on the basis of three criteria: the presence of clinical signs of disease and the results of autopsy of dead animals; epizootic situation in the economy and in the region, taking into account the probability of infection: transfer of new animals or feed from disadvantaged households by PCV, probable contacts through transport and etc.; laboratory results: immunohistochemistry in lymph nodes (gold standard), hybridization in situ (gold standard). These reactions are complex, costly, and are not applied in the Russian Federation. Immune-enzyme analysis is a viral antigen detection, antibody detection, PCR is a rapid, sensitive and highly specific method. Despite the lack of data on epizootiology of the disease, it is known that the frequency of detection of PCV-2 virus using serological methods remains high. Diagnosis is difficult because of the similarity of the disease with haemophilus polyserositis, pasteurellosis and other viral diseases. A presumptive diagnosis can be put based on clinical signs, increase of animals number with their manifestation, generalized form of lymphadenopathy detected at autopsy, jaundice, signs of granulomatous in liver, kidneys and gastrointestinal tract. It is confirmed by identifying a viral antigen in smears or thin slices of tissue, specific reactions with monoclonal antibodies, detecting viral DNA by DNA-hybridization in situ. Also, to detect viral DNA in fresh or formalin-treated tissue PCR is used using specific for PCV-II probes. Circovirus infection feature is that the viral DNA detection without the use of other diagnostic methods can give a false positive diagnosis. It is recommended to combine PCR with a virus isolation method, immunohistochemical analysisto reveal a viral antigen, or hybridization in situ to determine the viral DNA in tissues.
Положительная рецензия представлена И. А. Шкуратовой, доктором ветеринарных наук, директором Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии.
333^»— Аграрный вестник Урала № 3 (121), 2014 г. щ%ф
Ветеринария
Несмотря на недостаток данных об эпизоотологии заболевания, известно, что частота обнаружения вируса ЦВС-2 с помощью серологических методов остается высокой.
Диагноз на цирковирусную болезнь свиней ставят на основании трех критериев:
1) наличие клинических признаков болезни и результатов патологоанатомического вскрытия павших животных;
2) эпизоотической ситуации в хозяйстве и регионе, с учетом вероятности заноса инфекции: завоз животных или кормов из неблагополучных по ЦВС хозяйств, вероятные контакты через транспорт и т. д.;
3) результатов лабораторных исследований:— иммуногистохимия в лимфатических узлах (золотой стандарт);
— гибридизация in situ (золотой стандарт).
Эти реакции сложны, являются дорогостоящими, в Российской Федерации не применяются.
— иммуноферментный анализ — обнаружение вирусного антигена, выявление антител;
— ПЦР — быстрый, чувствительный высокоспецифичный метод.
Диагноз затруднен из-за схожести заболевания с гемофилезным полисерозитом, пастереллезом, другими вирусными заболеваниями.
На основании клинических признаков, увеличения числа животных с их проявлением, обнаруженной при патологоанатомическом вскрытии генерализованной форме лимфаденопатии, желтухи, наличия признаков грануломатоза в печени, почках и ЖКТ можно поставить предположительный диагноз. Подтверждают его, выявляя вирусный антиген в мазках или тонких срезах ткани в специфических реакциях с моноклональными антителами, а также выявляя вирусную ДНК методом ДНК-гибридизации in situ. Также для выявления вирусной ДНК в свежих или обработанных формалином тканях используется ПЦР с использованием проб, специфических к PCV-II.
Однако, особенность цирковирусной инфекции в том, что выявление вирусной ДНК без применения других методов диагностики может дать ошибочно положительный диагноз. В связи с этим рекомендуется комбинировать метод ПЦР с методом выделения вируса, проведением иммуногистохимического анализа на наличие вирусного антигена или гибридизацию in situ на определение ДНК вируса в тканях.
Диагностика методом ПЦР, благодаря своей высокой специфичности и высокой чувствительности, позволяет быстро выявить наличие возбудителя, установить правильный диагноз, даже если это латентно протекающая форма болезни, контролировать эффективность схемы лечения.
Тест-система предназначена для обнаружения цирковируса свиней II-го типа (ЦВС-2) методом ПЦР в реальном времени в образцах сывороток крови и органах больных животных, сперме, в инфицированных культурах клеток.
Анализ по определению цирковируса свиней II-го типа включает выделение ДНК и регистрацию специфического фрагмента ДНК с помощью ПЦР в реальном времени.
Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют ДНК-зонд (короткий одноцепочечный фрагмент ДНК размером 26
нуклеотидов, синтезированный химическим путем), комплементарный внутреннему участку — фрагменту ДНК цирковируса свиней II-го типа. К зонду присоединены два химических соединения или две молекулы: флуоресцентная метка и гаситель флуоресценции. В ходе ПЦР происходит разрушение зонда, разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к появлению свечения. Регистрируя интенсивность свечения, можно узнать о ходе реакции без дополнительной стадии — электрофореза.
Существенным преимуществом является то, что регистрация флуоресценции происходит в закрытой пробирке, то есть полностью исключается контаминация продуктами ПЦР.
Тест-система позволяет дифференцировать цир-ковирус свиней II-го типа от цирковируса свиней 1-го типа, который является контаминантом клеточных линий и не приводит к патологии у животных.
В России ЦВС-2 был впервые обнаружен в 2000 г. Цирковирусная инфекция была установлена у свиней во многих из обследованных хозяйств РФ. В то же время неизученным оставался широкий круг проблем, связанных с этой инфекцией: степень распространения цирковирусов среди домашних свиней и диких кабанов, генетическое разнообразие вируса, циркулирующего на территории России, вовлеченность ЦВС-2 в различные формы инфекционной патологии свиней. Обусловлено это было тем, что отсутствовали, либо были несовершенны, методы диагностики цирковирусной инфекции.
На данный момент в РФ разработан метод обнаружения и типирования цирковирусов свиней, основанный на мультиплексной ПЦР. Изучена связь между различными формами инфекционной патологии свиней и наличием ЦВС; проведен филогенетический анализ изолятов ЦВС-2, циркулирующих в свиноводческих хозяйствах и дикой фауне РФ.
Определение генетического разнообразия полевых изолятов ЦВС-2, выявленных в свиноводческих хозяйствах Российской Федерации, а также выяснение филогенетических различий генома ЦВС-1, обнаруженных в различных перевиваемых клеточных культурах, являлось одной из задач наших исследовании.
Для проведения нуклеотидного секвенирования использовали специфические праймеры, рассчитанные на участок Сар-генов ДНК ЦВС-1 и ЦВС-2, используемые в данной работе.
Филогенетических анализ и построение дендро-грамм, характеризующих степень гомологии исследованных участков генома, проводили с использованием программы «Mega version 3.1».
Согласно проведенным исследованиям, ЦВС-1 был обнаружен в интактных перевиваемых культурах клеток РК-15, SK-6, ПСГК и ПСГК-60. При проведении сравнительного анализа все выявленные последовательности ЦВС-1 образовывали один общий кластер. Тем не менее, данная группа не являлась строго обособленной от других известных штаммов и изолятов вируса, так как нами не было отмечено большого уровня дивергенций в составе данного участка гена. Выявленные в ходе исследований изоляты циркови-руса свиней 2-го типа относились к нескольким кластерам. Однако генетическое разнообразие ЦВС-2 не опосредовано географическим ареалом распространения вируса.
Аграрный вестник Урала № 3 (121), 2014 г. - <
Ветеринария
Получен рекомбинантный капсидный белок ЦВС-2 и разработана на его основе иммуноферментная тест-система для выявления антител к вирусу в сыворотках крови свиней.
Разработанная иммуноферментная тест-система применяется для изучения распространения ЦВС-2 в хозяйствах РФ.
При отборе проб для исследования необходимо соблюдать меры личной безопасности, не допускать обсеменение объектов окружающей среды.
Все материалы (вата, физиологический раствор, аппликатор, пробирки, должны быть стерильными). Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами.
Для диагностики ЦВС-2 берут стабилизированную кровь от подозрительных животных, сыворотку крови, сперму от хряков-производителей, кусочки органов (легкие, средостенные лимфатические узлы, селезенка, почки, печень).
Цельную стабилизированную кровь отбирают в объеме 1-1,5 мл в стерильные шприцы или пробирки с 3 %-м раствором ЭДТА из расчета 1 : 5.
Желательно использовать одноразовые системы взятия крови.
Закрытую пробирку или шприц с кровью несколько раз переворачивают для тщательного смешивания стабилизатора с кровью.
Для получения сыворотки в стерильные шприцы или пробирки без антикоагулянта отбирают кровь в объеме 4-5 мл. Желательно использовать одноразовые системы взятия крови. Шприц или пробирку помещают в теплое место на 1,5-2 часа для отделения сыворотки крови, которую затем сливают в пробирку, охлаждают до 2-8 °С и в течение 24 часов транспортируют в лабораторию. Для более длительного хранения, образцы замораживают при температуре не выше -20 °С.
Сперму, полученную от хряков-производителей, охлаждают до 2-8 °С и в этот же день транспортируют в лабораторию. Допускается разовая заморозка и хранение материала при температуре не выше -16 °С в течение 30 дней.
Образцы патологического материала весом 1-15 г помещают в стерильные флаконы, герметично закрывают их резиновыми пробками и кладут в полиэтиленовый пакет, охлаждают до 2-8 °С и в этот же день транспортируют в лабораторию.
Допускается разовая заморозка и хранение материала при температуре не выше -16 °С в течение 30 дней. Материалы доставляют в лабораторию в день отбора или на следующий день, в запечатанном термосе со льдом. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается.
Донозологическая диагностика цирковирусной инфекции свиней. По данным А. И. Бутенкова (2010), до-нозологическую диагностику цирковирусной инфекции свиней можно использовать в качестве метода расчета вариабельности морфологических показателей крови.
При этом используют показатели индексов напряжения по методу вариабельности сердечного ритма с целью диагностики напряжения и истощения адаптационных механизмов организма, развития стрессогенного иммунодефицита и прогнозирования вероятности развития
У больных синдромом мультисистемного истощения поросят в естественных условиях вирус ЦВС-2 выделяется из следующих органов: легкие, лимфатические узлы, селезенка и миндалины.
Существует мнение, что ЦВС-2 сначала поражает миндалины и лимфатические узлы или тимус, а затем распространяется по всему организму с током крови. Существует два противоположных мнения о репликации вируса. Одни авторы считают, что вирус инфицирует лимфоциты и реплицируется в них, в частности, в клетках, другие полагают, что репликации в лимфоцитах не происходит.
Исследования с использованием потоковой цито-метрии дают основание полагать, что ЦВС-2 вероятно не инфицирует «спокойные» (resting) лимфоциты in vivo, однако было доказано инфицирование моноцитов и макрофагов.
Оба типа вируса ЦВС-1 и ЦВС-2 обнаруживаются в тканях поросят, больных СПМИС, несмотря на то, что никакой корреляции концентраций того или иного вируса с клиническим проявлением заболевания выявлено не было. Многие авторы считают, что тяжесть СПМИС зависит также от адаптационных возможностей животных.
Снижение адаптационных возможностей организма сопровождается ростом специфических патологических изменений, проявляющихся в виде разнообразных заболеваний. Принципиальное различие между здоровым и больным организмом состоит в том, что в первом случае гомеостаз сохранен, во втором — нарушен. Способность организма адаптироваться к условиям окружающей среды резко уменьшается еще до нарушения гомеостаза. В состоянии неудовлетворительной адаптации он обладает уже настолько сниженными функциональными резервами, что даже небольшие нагрузки могут нарушить его неустойчивое равновесие со средой.
Из функциональных состояний, пограничных между нормой и патологией (между удовлетворительной адаптацией и срывом адаптации), лишь состояние неудовлетворительной адаптации может быть названо предболезнью в клиническом понимании этого слова. Вместе с тем предболезнь имеет не только клиническое, но и физиологическое толкование. С точки зрения донозологической диагностики в предболез-ни следует различать две стадии. Первая стадия — с преобладанием неспецифических изменений над специфическими, когда гомеостаз еще сохранен и на первый план выступает повышенная активность регуляторных механизмов, благодаря чему и сохраняется неустойчивое равновесие со средой. Вторая стадия протекает с преобладанием специфических изменений над неспецифическими, то есть на первый план выступают конкретные проявления болезни, определенные симптомы и синдромы.
Весь смысл донозологической диагностики заключается в том, что она позволяет прогнозировать развитие болезни еще до того, как появляются ее признаки. Основными прогностическими критериями являются адаптационные возможности организма, в результате снижения которых он переходит последовательно от удовлетворительной адаптации к состоянию напряжения адаптационных механизмов и затем к неудовлетворительной адаптации. Оценить риск развития заболевания можно на основе измерения
Аграрный вестник Урала № 3 (121), 2014 г. - < JJJf
Ветеринария
степени напряжения регуляторных систем с использованием различных методик, в том числе и математического анализа сердечного ритма. Способность регуляторных систем мобилизовать необходимые функциональные резервы, обеспечить «физиологическую меру» защиты организма от стрессорных воздействий позволяет сохранять гомеостаз и поддерживать состояние удовлетворительной адаптации.
Переход от нормы к патологии, от здоровья к болезни происходит постепенно, по мере снижения адаптационных возможностей организма, по мере перехода от напряжения регуляторных систем к их перенапряжению и истощению. Индивидуальные траектории от нормы к патологии редко имеют линейный характер. При использовании результатов донозологических исследований могут быть построены математические модели перехода от нормы к патологии с учетом функциональных резервов организма и адаптационных возможностей. Вариантами таких моделей являются используемые в алгоритмах донозологической диагностики уравнения регрессии и дискриминантные
При СПМИС наблюдаются значительные изменения в органах и тканях. Так, в крови и лимфоидных тканях происходит изменение соотношения числа лимфоцитов (содержание которых сильно понижается) к числу моноцитов и нейтрофилов (количество которых увеличивается). Их соотношение у больных животных может составлять 60-70 % нейтрофилов и 30-40 % лимфоцитов, а у здоровых оно обратное. В то же время общее количество лейкоцитов остается неизменным. При этом у животных в острой фазе отмечены случаи анемии.
При иммуногистохимическом исследовании лим-фоидной ткани отмечали поражения лимфоузлов, миндалин, Пейеровых бляшек, селезенки и тимуса. В ряде случаев базофильные внутриплазматические включения, содержащие ЦВС-2, обнаруживаются в клетках гистиоцитного происхождения. Может иметь место также спорадический мультифокальный коагулирующий некроз, а также другие тканевые изменения: гепатит различной степени, лимфоцит-ные и лимфогистиоцитные инфильтрации в почки, кишечная атрофия с вариантами слущивания и/или дегенерации клеток эпителия, обширные поражения легких. Часто выявляются уплотнения верхушечных долей, вызванные вторичной 1-й бактериальной инфекцией. В тяжелых случаях имеют место альвеолярные кровоизлияния. У заболевших животных наблюдают пневмонию, от многоочаговой лимфоги-стиоцитной до рассеянной гранулематозной интер-стициальной, часто сопровождаемой присутствием гигантских аномальных клеток.
У поросят иммуносупрессия связана с репликацией вируса и его способностью распространять-
ся на гепатоциты и Купфферовы клетки, также как и на дендритные клетки и макрофаги. В основном CD8+ клетки ответственны за цито-токсический ответ. В результате цирковирусной инфекции изменяется уровень лимфоцитов в периферической крови, особенно снижается количество CD4+, CD8+, DP (double-positive) клеток. Хотя, по данным других авторов, уровень CD4+ клеток снижается и у поро-сят-отъемышей без СПМИС. Ряд авторов описывают снижение уровней Т- и В-клеток у инфицированных поросят, что зависит от типа лимфоидиой ткани и интенсивности репликации вируса.
Предполагается, что гибель В-лимфоцитов приводит к иммуносупрессии при патоцитологии сохранившихся макрофагов, которые являются источником вируса при перемещении по организму.
Существуют противоречивые данные о способности цирковируса образовывать апоптозы. Имеются сведения о возможности возникновения апоптозов в лимфоидной ткани клинически здоровых и больных поросят с признаками СПМИС в зависимости от стадии болезни и тяжести гистологических изменений. У клинически здоровых поросят в лимфоидной ткани процесс апоптоза и пролиферации находится в балансе, поддерживается стабильная популяция клеток. Если не возникает РСУ-опосредованный апоп-тоз, снижающаяся клеточная пролиферация у больных СПМИС поросят может быть основной причиной снижения количества клеток в лимфоидной ткани. Альтернативная теория предполагает другое объяснение изменений в популяции лимфоцитов.
Считают, что гибель фагоцитов обусловлена вирусом и более поздним запуском клеточного метаболизма.
Более поздние исследования с экспериментальным заражением поросят, изолированных от других животных, подтвердили теорию и дали основание полагать, что развитие СПМИС связано с уровнем титров вируса в сыворотке крови. В эксперименте у 6 из 16 зараженных поросят развился СПМИС, вирус был обнаружен во всех органах и тканях. У поросят с клиническими признаками СПМИС отмечался высокий уровень титра вируса во всех тканях. Нужно отметить, что антитела к вирусу были обнаружены у большинства зараженных животных на 14-й день и 4-й месяц после инфицирования. У поросят с клинической картиной СПМИС антитела не были обнаружены в течение 28 дней после инфицирования. Результаты исследований показали, что развитие СПМИС может зависеть от количественного аспекта распространения вируса по тканям и выработки антител. Большинство последующих исследований связывают тяжесть проявления СПМИС с накоплением вируса в лимфоидной ткани и печени, а использование иммуностимуляторов отягощает течение болезни.
Литература
1. Прудников С. И., Шкрылев А. Н., Колобаев А. И., Димов С. К., Духовский А. А., Андреев Л. Б. Цирковирусная инфекция свиней и проблемы ее профилактики // Ветеринария. 2010. № 11. С. 15.
2. Меньшиков А. В., Крысенко Ю. Г., Трошин Е. И. Серологический мониторинг и роль цирковирусной инфекции второго типа при синдроме послеотъемного мультисистемного истощения // Проблемы инновационного развития агропромышленного комплекса : материалы Всерос. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Ижевск, 2009. С. 96-98.
^JJJ. - Аграрный вестник Урала № 3 (121), 2014 г. - <^SS^
_Ветеринария
3. Крысенко Ю. Г., Новых А. А., Кассина Н. В. Сравнительный анализ эпизоотической ситуации по вирусным респираторным инфекциям // Современные проблемы аграрной науки и пути их решения : материалы Всерос. науч.-практ. конф. Ижевск, 2006. С. 44-46.
4. Меркушева В. В., Пестрикова О. А. Адаптационные реакции и резистентность организма чистопородных и помесных свиней : материалы науч.-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 2001. Ч. 2. С. 261-262.
5. Орлянкин Б. Г., Алипер Т. А., Непоклонов Е. А. Инфекционные респираторные болезни свиней // Ветеринария. 2005. № 11. С. 3.
6. Орлянкин Б. Г., Мишин А. М. Цирковирусные болезни свиней // Свиноводство. 2010. № 5. С. 50-53.
7. Матвеева М. В., Уша Б. В., Крюковская Г. М., Виолин Б. В. Оценка морфологии эритроцитов после введения Профолола // Ветеринария Кубани. 2013. № 5. С. 17-19.
8. Джаилиди Г. А., Шевченко А. А., Черных В. О., Черных О. Ю. Клинические признаки и патоморфологические изменения при африканской чуме свиней в Краснодарском крае // Ветеринария Кубани. 2013. № 5. С. 5-7.
References
1. Prudnikov S. I., Shkrylev A. N., Kolobaev A. I., Dimov S. K., Duhovskiy A. A., Andreev L. B. Circovirus infection of pigs and problems of its prevention // Veterinary Medicine. 2010. № 11. P. 15.
2. Menshikov A. V., Krysenko Yu. G., Troshin E. I. Serological monitoring and the role of the second type of circovirus infection in postweaning multisystemic wasting syndrome // Problems of innovative development of agroindustrial complex : materials of scientific-practical. conf. of young scientists and specialists. Izhevsk, 2009. P. 96-98.
3. Krysenko Yu. G., Novykh A. A., Kassina N. V. Comparative analysis of epizootic viral respiratory infections // Modern problems of agricultural science and their solutions : materials of All-Russian scientific and practical conference. Izhevsk, 2006. P. 44-46.
4. Merkusheva V. V., Pestrikova O. A. Adaptation reaction and organism resistance of purebred and crossbred pigs : materials of science and industrial conference on topical issues of veterinary and animal science. Kazan, 2001. P. 2. P. 261-262.
5. Orlyankin B. G., Aliper T. A., Nepoklonov E. A. Infectious respiratory diseases of pigs // Veterinary Medicine. 2005. № 11. P. 3.
6. Orlyankin B. G., Mishin A. M. Circovirus disease of pigs // Pig-breeding. 2010. № 5. P. 50-53.
7. Matveeva M. V., Usha B. V., Kryukovskaya G. M., Violin B. V Rating RBC morphology after Profolola introduction // Veterinary of Kuban. 2013. № 5. P. 17-19.
8. Dzhailidi G. A., Shevchenko A. A., Chernykh V. O., Chernykh O. Yu. Clinical signs and pathomorphological changes by African pig fever in the Krasnodar region // Veterinary of Kuban. 2013. № 5. P. 5-7.
