CC BY
108
DOI 10.24411/2074-5036-2020-10015 УДК 619:616.995.1:59.018:592:636.12 Ключевые слова: личинка, паразитическая нематода, лошадь Key words: larva, parasitic nematode, horse
Гаврилова Н. А.1, Белова Л. М.1, Логинова О. А.1, Миролюбов А. А.2, Ситникова Р. С.1
ДИАГНОСТИКА СТРОНГИЛИДОЗОВ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ У ЛОШАДЕЙ
DIAGNOSTICS OF THE GASTRO-INTESTINAL STRONGYLIDOSES IN HORSES
'ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» Адрес: 196084, Россия, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5
Saint Petersburg State Academy of Veterinary Medicine Address: 196084, Russia, Saint Petersburg, Chernigovskaya str., 5 2ФГБУН «Зоологический институт Российской академии наук» Адрес: 199034, Россия, Санкт-Петербург, Университетская наб., 1
Zoological Institute of the Russian Academy of Sciences Address: 199034, Russia, Saint Petersburg, Universitetskaya emb., 1
Гаврилова Надежда Алексеевна, д. вет. наук, профессор кафедры паразитологии им. В. Л. Якимова.
E-mail: nadezhda.gavrilova65@mail.ru
Gavrilova Nadezhda Alekseevna, Doctor of Veterinary Science, Professor of the Dept. of Parasitology.
E-mail: nadezhda.gavrilova65@mail.ru Логинова Ольга Александровна, канд. вет. наук, ассистент кафедры паразитологии им. В. Л. Якимова.
E-mail: loginova_spb@bk.ru Loginova Olga Aleksandrovna, PhD of Veterinary Science, Assistant of the Dept. of Parasitology.
E-mail: loginova_spb@bk.ru Миролюбов Алексей Александрович, м. н. с., лаборатория по изучению паразитических червей и протистов.
E-mail: aal_mirol@inbox.ru Miroliubov Aleksei Aleksandrovich, junior researcher, Laboratory of parasitic flat worms andprotists.
E-mail: aal_mirol@inbox.ru Ситникова Раиса Сергеевна, аспирант кафедры паразитологии им. В. Л. Якимова.
E-mail: sitnikova_rayush@mail.ru Sitnikova Raisa Sergeevna, post-graduate student of the Dept. of Parasitology. E-mail: sitnikova_rayush@mail.ru
Аннотация. Копроовоскопическими исследованиями лошадей, содержащихся в конно-спортивном клубе Ломоносовского района Ленинградской области, установлена экстенсивность инвазии стронгилидами органов пищеварения 60,8 % и интенсивность инвазии средней степени (от 67,2±5,1 до 165,2±3,3 яиц в 1 г фекалий). Световой микроскопией при помощи микроскопа «Микмед-6» (ЛОМО, Россия) проведена идентификация культивированных личинок стронгилид по морфологическим признакам. Установлена принадлежность стронгилид к двум родам - Cyathostoma и Delafondia. Для идентификации личинок рода Delafondia учтено число кишечных клеток, гофрированность, длина пищевода, соотношение длины тела к длине хвостового конца. Сканирующей электронной микроскопией на оборудовании центра коллективного пользования «Таксон» подтверждена принадлежность личинок к роду Cyathostoma, определен участок прикрепления хвостового конца у личинки, который у ряда культивированных личинок может отсутствовать. При обнаружении личинок деляфондий у спортивных лошадей следует давать осторожный прогноз их дальнейшего использования в спортивной карьере, так как сформированные в сосудах брюшной полости тромбы и аневризмы приводят к развитию геморрагического инфаркта, и эти тромбы и аневризмы при преодолении препятствий лошадьми могут вызывать ущемления и завороты кишечных петель с последующим их разрывом.
Summary. Due to coproovoscopic studies of horses kept in the equestrian sport club in the Lomonosovsky district of the Leningrad region, it was found that gastro-intestinal strongylids infestation prevalence rate was 60.8 % and infection intensity was moderate (from 67.2 ± 5.1 to 165.2 ± 3.3 eggs per 1g of feces). By means of light microscopy using a "Mikmed-6" microscope (LOMO, Russia) we carried out identification of cultured Strongylid L3 larvae based on their morphological characters. Obtained strongylids belong to two genera - Cyathostoma and Delafondia. To identify the larvae of the Delafondia sp. we must take into account the number of its intestinal cells, corrugation, length of the esophagus, and the ratio of its body length to the length of its caudal end. Scanning electron microscopy performed on the equipment of the Taxon Collective Use Center allowed us to confirm that the larvae cultured belong to the genus
Cyathostoma, and to determine the attachment site for the tail end of the larva, which may be absent in a number of cultivated larvae. Once Delafondia larvae are detected in sports horses, a careful prediction of their further use in a sports career should be given, since blood clots and aneurysms formed in the vessels of the abdominal cavity lead to the development of hemorrhagic infarction, which when horse jumps over the barrier, can cause entanglements and inversion of intestines, followed by their rupture.
Введение
Несмотря на изменившиеся условия содержания лошадей и усовершенствованные методы диагностики гельминтозов, немато-дозы (в частности, стронгилидозы желудочно-кишечного тракта), по ряду причин остаются распространенными инвазиями как в Российской Федерации, так и во всем мире [1, 2, 5, 8]. Способствует их широкому распространению то, что животные, находящиеся преимущественно на стойлово-выгульном содержании на мелких и средних конефермах, в конно-спортивных клубах, выпасаются ежегодно на одних пастбищах на протяжении длительного времени. Бесконтрольное перемещение лошадей между различными кон-но-спортивными клубами также способствует заносу и распространению инвазии [2, 6]. Проведение дегельминтизации препаратами, содержащими действующие вещества из одной химической группы, приводит к формированию у паразитов резистентности. Так, с появлением устойчивости у паразитических нематод к бензимидазольным препаратам, основной группой антигельминтиков в коневодстве стали макроциклические лак-тоны, которые уже в последние годы не дают желаемого терапевтического эффекта [3, 5, 7, 8]. Дегельминтизация проводится в большинстве случаев без учета биологии возбудителей, что способствует формированию и сохранению инвазионных стадий гельминтов во внешней среде.
По литературным данным у лошадей зарегистрировано 63 вида стронгилид, относящиеся к 21 роду и двум п/сем. Strongylinae и Cyathostominae (Trichonematinae). По своему патогенному влиянию на организм хозяина они составляют одну из наиболее экономически важных групп паразитов. Из стронгилид особенно патогенными являются представители таких родов, как: Strongylus, Alfortia, Delafondia, Cyathostoma (Trichonema), которые опасны в имагинальной и ларвальной
стадиях развития [5, 9]. Длительный период миграции личинок стронгилид в различные органы и ткани приводит в ряде случаев к необратимым последствиям, что важно учитывать при эксплуатации лошадей, особенно спортивного профиля. Так, последствия миграции личинок стронгилид рода Delafondia нередко приводят к формированию тромбов, спаек в брюшной полости, что может привести к летальному исходу при активной физической нагрузке, особенно у конкурных лошадей.
Целью наших исследований стало определение родовой принадлежности стронгилид лошадей, принадлежащих конно-спортивно-му клубу, расположенному в Ленинградской области, для прогноза использования животных в спортивной карьере.
Материалы и методы
Свежевыделенные фекалии лошадей были собраны от 23 особей, содержащихся в конно-спортивном клубе (КСК), расположенном в д. Дятлицы Ломоносовского района Ленинградской области. Каждую пробу фекалий делили на две части. Одну часть пробы фекалий исследовали модифицированным методом Дарлинга с использованием универсальной флотационной жидкости [1]. Вторую часть подвергли культивированию с целью получения личинок третьей стадии. Микроскопическое исследование осадка на предмет обнаружения личинок гельминтов проводили по методике, усовершенствованной О. А. Логиновой и Л. М. Беловой [10].
Для подсчета яиц в 1 г фекалий использовали счетную камеру, разработанную Л. И. Ми-гачевой и Г. А. Котельниковым (1987). Число яиц, выявленных в одной ячейке, при сильной интенсивности инвазии умножали на коэффициент 60 (в расчете на объем 30 мл), при слабой - на расчетный коэффициент 38 [4].
Идентификацию личинокстронгилид проводили по морфологическим признакам, включая
длину пищевода, форму и количество кишечных клеток, длину хвостового конца. Световую микроскопию методом светлого поля проводили при помощи микроскопа «Микмед-6» (ЛОМО, Россия). Съемку осуществляли при помощи зеркальной фотокамеры 5D Mark II (Canon, Япония) и оптико-механического адаптера (ЛОМО, Россия). Определение линейных размеров проводили в программе ImageJ с предварительной калибровкой по объект-микрометру ОМП (ЛОМО, Россия).
Морфологические исследования с использованием сканирующего электронного микроскопа были выполнены на оборудовании центра коллективного пользования
«Таксон» (http://www.ckp-rf.ru/ckp/3038/) [«Taxon» Research Resource Center (http:// www.ckp-rf.ru/ckp/3038/)]. Подготовку личинок выполнили путем погружения их в жидкость Буэна с последующей отмывкой в спиртах возрастающей чистоты и финальной промывкой в ацетоне. После проведения сушки в критической точке на аппарате CPD-2 (Hitachi, Япония) на личинок нанесли слой платины при помощи ионного на-пылителя IB-5 (Eiko Engineering, Япония). Сканирующую электронную микроскопию осуществляли в рамках тем государственных заданий № АААА-А17-117030310322-3 и AAAA-A19-119020690109-2 в лаборатории
Рис 1. Личинка L3 рода Cyathostoma (Trichonema): А - общий вид личинки, головной конец обращен вправо (1-8 -кишечные клетки; П - пищевод; ХКЛ - хвостовой конец личинки; ХКЧ - хвостовой конец чехлика), светлополь-ная световая микроскопия, ув. х20 (по объективу); Б - общий вид личинки (ЛЖ - лотеральный желоб), сканирующая электронная микроскопия; В - увеличенный головной конец личинки (РО - ротовое отверстие, окруженное тремя губами; РС - ротовые сосочки), СЭМ.
по изучению паразитических червей и протестов ЗИ РАН при помощи микроскопа Quanta SEM 250 (Thermo Fisher Scientific, США). Изображения получены в программе XT Microscope Control.
Результаты исследований
У 14 лошадей (экстенсивность инвазии 60,8 %) различных пород: арабская, латвийская, русский рысак, полукровная спортивная, вестфальская, англо-рысистая, арабо-та-ганская, а также беспородных, в возрасте от 12 месяцев до 17 лет, гельминтоовоскопиче-ским методом установлена средняя степень инвазии стронгилидами органов пищеварения (от 67,2±5,1 до 165,2±3,3 яиц в 1 г фекалий). Все обнаруженные в фекалиях яйца были овальной формы, размером от 72 до 95 мкм, серого цвета, с тонкой двухконтурной оболочкой, на стадии морулы с бластоме-рами. Дифференцировать яйца стронгилид органов пищеварения достаточно сложно, так как они имеют схожие морфологические характеристики. Определяли род стронгилид органов пищеварения лошадей по строению инвазионных личинок (L3) гельминтов.
У 14 лошадей были обнаружены личинки длиной до 0,5 мм, имеющих прямой, тонкий, шиловидный хвостовой конец чехлика. Соотношение тела личинки к хвостовому концу составляло 1,5:1. Кишечник личинки имел 8 клеток треугольной формы. Пищевод
был длинный и узкий, несколько расширен в задней части. По характерным морфологическим признакам были идентифицированы личинки как представители рода Суа1ко$1ота ('ТпеИопвта) (Рис. 1 А).
На микроснимках, полученных при помощи сканирующей электронной микроскопии, хорошо различима гофрированность, длинный хвостовой конец, характерные для циатостомид (Рис. 1 Б). На головном конце паразитической личинки циатостомы ротовой воротник не отделен от остальной части тела, радиальная корона у верхнего его края слабо выражена. (Рис. 1 В)
У 4 животных, кроме личинок трихонем, были выявлены личинки, тело которых было заключено в чехлик с хорошо выраженной гоф-рированностью, с длинным хвостовым концом, составляющим 1/3 часть тела личинки. Пищевод личинки длинный, занимающий 1/4 часть длины тела, кишечник состоял из 16 хорошо различимых кишечных клеток. Возникла необходимость провести дифференциацию личинок деляфондии и стронгилюса. Несмотря на то, что личинка стронгилюса имеет также 16 кишечных клеток, пищевод у нее короткий и занимает 1/8 часть длины тела личинки, чехлик имеет малозаметную гофрированность, кишечные клетки мало различимы и соотношение тела личинки к хвостовому концу составило 2,8:1. На основании анализа полученных данных личинка была отнесена к роду Ве!а/опС1а (Рис. 2).
Рис 2. Общий вид личинки L3 рода Ве1а/опсИа\ 1-16 - кишечные клетки, П - пищевод; ПЗ - половой зачаток; ХКЛ - хвостовой конец личинки; ХКЧ - хвостовой конец чехлика (светлопольная световая микроскопия, увеличение х10 по объективу).
Следует отметить, что в полученном материале были обнаружены личинки, имеющие все характерные морфологические признаки рода Cyathostoma (Trichonema), у которых отсутствовал хвостовой конец (Рис. 3 А-Б).
Анализируя микроснимки, полученные при помощи сканирующей электронной микроскопии, было установлено место крепления хвостового конца к телу личинки, которое в ряде случаев позволяет этой части личинки отделяться (Рис. 3 В).
Обсуждение результатов
Диагностика стронгилидозов органов пищеварения у лошадей проведена гель-
минтоовоскопическими и гельминтолар-воскопическими методами. Флотационные гельминтоовоскопические методы позволили выявить инвазированных животных, установить экстенсивность и интенсивность инвазии, но не дали возможности установить род возбудителя и поставить точный диагноз. Ларвоскопическими методами у лошадей, содержащихся в конно-спортивном клубе в Ленинградской области, были выявлены, а в дальнейшем идентифицированы (по соотношению длины тела и хвостового конца, количеству кишечных клеток, длине пищевода) личинки стронгилид, принадлежащие к двум родам - Cyathostoma и Delafondia.
Рис 3. Личинка L3 рода Cyathostoma (Trichonema): А - общий вид личинки с отсутствующим хвостовым концом (П - пищевод, ПЗ - половой зачаток; КК - кишечные клетки), светлопольная световая микроскопия, ув. х20 (по объективу) ; Б - увеличенный фрагмент каудальной части личинки (КК - кишечная клетка; ХК - хвостовой конец), световая микроскопия с освещением сверху, ув. х40 (по объективу); В - увеличенный фрагмент каудальной части личинки (ЛЖ - латеральный желоб; МКНЧХ - место крепления нитевидной части хвоста), СЭМ.
Необходимо помнить, что после алиментарного попадания инвазионных личинок в организм животных и проникновения в стенку слепой и ободочной кишок происходит формирование узелка, который сохраняется до 1,5-2 месяцев («узелковый колит»). После двукратной линьки в узелке личинка выходит в просвет кишки, разрывая оболочку, открывая «ворота инфекции», что сопровождается клиническими симптомами колик.
Личинки циатостом были обнаружены как с длинным хвостовым концом, так и с отсутствующим хвостовым концом. Сканирующая электронная микроскопия дала возможность установить участок прикрепления хвостового конца к телу личинки и понять, как происходит его открепление.
Для идентификации личинок рода БеШ/оп&а важно учитывать не только число кишечных клеток (может варьироваться от 16 до 32), но и такие морфологические особенности, как: выраженная гофрирован-ность, длина пищевода, соотношение длины тела к длине хвостового конца.
При обнаружении личинок деляфондий у спортивных лошадей следует давать осторожный прогноз их дальнейшего использования в спортивной карьере, особенно для конкурных лошадей. Так как при алиментарном проникновении в организм животных личинки проникают с током крови в брыжеечные артерии, внедряются в толщу стенки сосудов и нарушают целость их внутренней и средней оболочки, происходит замещение мускульных волокон средней оболочки соединительной тканью. В результате понижается эластичность стенок артерий и образуется аневризма. Вокруг паразитов формируются тромботические наслоения, резко суживающие или даже полностью закупоривающие артерию, вследствие чего происходит расстройство кровообращения. Нередко при тромбозе крупных сосудов брыжейки отрываются эмболы, засоряющие или полностью закупоривающие мелкие артериальные сосуды. Сужение брыжеечных артерий ведет к падению кровяного давления и к уменьшению скорости продвижения крови в капиллярах, что, в свою очередь, содействует накоплению углекислоты в тканях соот-
ветствующего участка кишечника и к расширению капилляров. В результате развивается гиперемия слизистой оболочки кишечника и возникают кровоизлияния. При образовании коллатерального кровообращения эти нарушения могут вскоре восстановиться до нормы. Если же расстройство питания тканей кишечника кровью усиливается, то на определенном участке кишечника образуется геморрагический инфаркт, приводящий к омертвлению ткани. При преодолении препятствий лошадьми могут образовываться ущемления и завороты кишечных петель с последующим их разрывом.
Заключение
Копрологическими исследованиями, проведенными гельминтоовоскопическими методами, была установлена экстенсивность и интенсивность стронгилидной инвазии у лошадей, содержащихся в КСК, находящемся в д. Дятлицы, Ломоносовского района Ленинградской области. Важной частью диагностических исследований является культивирование личинок стронгилид, так как оно позволяет идентифицировать возбудителя инвазии, поставить точный диагноз. Определение родовой принадлежности стронгилид позволяет проследить возможные последствия патогенного действия возбудителя и провести корректировку степени физических нагрузок для спортивных лошадей. Изучение морфологии личинок циатостом с помощью сканирующей электронной микроскопии дополняет сведения о строении стронгилид.
Список литературы
1. Белова Л. М. Новая универсальная флотационная жидкость для комплексных лабораторных исследований / Л. М. Белова, Н. А. Гаврилова, Д. Н. Пудовкин [и др.] // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2012. № 4/1. С. 15-17.
2. Бундина Л. А. Влияние вновь завозимых лошадей на распространение гельминтозов в коневодческих хозяйствах / Л. А. Бундина // Российский парази-тологический журнал. 2012. №2. С. 51-54.
3. Кузьмина Т. А. Резистентность циатостомин лошадей к бензимидазольным препаратам / Т. А. Кузьмина, Е. А. Негруца, Г. М. Двойное, А. В. Березовский // Труды ВИГИС. Т. 38. М., 2002. С. 189-194.
4. Мигачева Л. Д. Методические рекомендации по использованию устройства для подсчета яиц гельмин-
тов / Л. Д. Мигачева, Г. А. Котельников // М., 1987. Вып. 48. С. 81-83.
5. Робинсон Э. Болезни лошадей. Современные методы лечения / Э. М. Робинсон. М.: «Аквариум», 2007. 1007 с.
6. Kusmina T. A. Application of the diagnostical deworming method for the horse intestinal helmints investigation / T. A. Kusmina, V. A. Kharchenco, A. I. Starov, G. M. Dvonis // Вестник зоологии. 2004. Т. 38. № 5. С. 67.
7. Lassen B. Anthelmintic resistence of ivermectin and pyrantel in Estonian horses / В. Lassen, S. M. Petrola // J. Helminthol. 2014. №9. P. 1-4.
8. Lester H. E. Anthelmintic efficacy against cya-thostomins in horses in Southern // England / H. E. Lester, J. Spanton, C. H. Stratford [et al.]. Vet Parasitol. 2013. № 197 (1-2). P. 189-196.
9. Lichtenfels J. R. Illustrated identification keys to strongylid parasitis (Strongylidae: Nematoda) of horses, zebras and asses (Equidae) / J. R. Lichtenfels, V. A. Kharchenko, G.M. Dvojnos // Veterinary Parasitology. 2008. T. 156. № 1-2. P. 4-161.
10. Loginova O. A. New method for larvae and small nematodes immobilization / O. A. Loginova, L. M. Belova, N. A. Gavrilova // Bulgarian Journal of Veterinary Medicine. 2017. № 20. P. 366-369.
DOI 10.24411/2074-5036-2020-10016 УДК 619:616
Ключевые слова: сезонная активность, иксодовые клещи, кровососущие членистоногие
Key words: seasonal activity, ixodid ticks, blood-sucking arthropods
Никанорова А. М.
ОСОБЕННОСТИ СЕЗОННОЙ АКТИВНОСТИ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ ЧАСТИ РУССКОЙ РАВНИНЫ
FEATURES OF SEASONAL ACTIVITY OF IXODID TICKS IN THE CENTRAL PART OF THE RUSSIAN PLAIN
ФГБОУ ВО Калужский филиал РГАУ «Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева» Адрес: 248007, Россия, Калужская обл., г. Калуга, ул. Вишневского, д. 27
Kaluga branch of Moscow Agricultural Academy named after K.A. Timiryazev Adress: 248007, Russia, Kaluga Region, Kaluga, ul. Vishnevsky, d. 27
Никанорова Анна Михайловна, кандидат биологических наук, доцент кафедры ветеринарии и физиологии животных. E-mail: annushkanikanorova@gmail.com
Nikanorova Anna Mikhailovna, PhD of Biological Sciences, Associate Professor of the Department of Veterinary Medicine and Animal Physiology. E-mail: annushkanikanorova@gmail.com
Аннотация. В фауне России представлено около 55 видов иксодовых клещей, которые являются опасными паразитами-кровососами. Они наносят большой вред животноводству, здоровью людей. Клещи опасны не только укусами, а способностью переносить, размножать и служить резервуарами возбудителей многих опасных зоонозных болезней. Поддерживаются природные очаги трансмиссивных инфекций и инвазий. В Калужской области, которая находится в Центральной части Русской равнины, иксодовые клещи представлены двумя видами: Dermocentor reticulatus и Ixodes ricinus. Ежегодно в области фиксируются случаи заболеваний животных анаплазмозом, бабезиозами, а среди людей боррелиозом. Необходимость контролировать и ежегодно проводить исследования на каждой конкретной территории диктуется самой проблемой.
В статье приведены данные сезонной активности иксодовых клещей в Калужской области с закономерными пиками в результате десятилетних наблюдений.
Первые находки иксодовых клещей приходятся на первую-вторую декады марта, затем происходит постепенное нарастание активности до второй декады мая. Первый пик идет на спад постепенно, заканчивается ко второй-третьей декаде июня. Второй пик значительно слабее первого, но так же ярко выражен и начинается в первой декаде августа, так же, как и первый пик, постепенно нарастает, достигает своего апогея к первой-второй декаде сентября, затем наблюдается общий постепенный спад активности. Последние находки иксодовых клещей стандартно приходятся на первую декаду октября.
