Научная статья на тему 'Диагностика коагулянтов волчаночного типа у женщин'

Диагностика коагулянтов волчаночного типа у женщин Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
1396
219
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
АНТИФОСФОЛИПИДНЫЙ СИНДРОМ / АНТИТЕЛА К ФОСФОЛИПИДАМ / ИММУНОГЛОБУЛИН КЛАССА IGG / ANTIPHOSPHOLIPIDS SYNDROME / ANTIBODIES TO PHOSPHOLIPIDS / IMMUNOGLOBULIN IGG

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Назирова Анна Анатольевна, Малышева Елена Владимировна, Гулин Александр Владимирович

Полноценная диагностика антифосфолипидного синдрома должна базироваться на иммунологическом определении титра антител к отрицательно заряженным фосфолипидам (кардиолипину, фосфотидилсерину, фосфотидилинозитолу, фосфотидиловой кислоте) и к связанным с фосфолипидными мембранами гликопртеинам β-гликопротеину-I и аннексину-V. Одновременно должны определяться в плазме крови антикоагулянты волчаночного типа. Определение лишь отдельных из указанных параметров не может считаться достоверным для постановки диагноза.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Назирова Анна Анатольевна, Малышева Елена Владимировна, Гулин Александр Владимирович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

DIAGNOSIS OF ANTICOAGULANTS OF FEMALE LUPUS TYPE

High-grade diagnostics antiphospholipide syndrome should be based on immunological definition tytre antibodies to negatively charged phospholipids (cardiolipine, phosphotidilseryne, phosphotidiliozitole, sulfuric acid) and attached to phospholipid membranes glycoproteins β-glycoprotein-I and anti-phosphatidylserine-V. Simultaneously anticoagulants lumpus type should be defined in plasma of blood. The definition of only separate from the specified parameters can't be considered authentic for diagnosis statement.

Текст научной работы на тему «Диагностика коагулянтов волчаночного типа у женщин»

УДК 618.3

ДИАГНОСТИКА КОАГУЛЯНТОВ ВОЛЧАНОЧНОГО ТИПА У ЖЕНЩИН

© А.А. Назирова, Е.В. Малышева, А.В. Гулин

Ключевые слова: антифосфолипидный синдром; антитела к фосфолипидам; иммуноглобулин класса IgG. Полноценная диагностика антифосфолипидного синдрома должна базироваться на иммунологическом определении титра антител к отрицательно заряженным фосфолипидам (кардиолипину, фосфотидилсерину, фосфотидили-нозитолу, фосфотидиловой кислоте) и к связанным с фосфолипидными мембранами гликопртеинам - Р-гликопротеину-1 и аннексину-У. Одновременно должны определяться в плазме крови антикоагулянты волчаночно-го типа. Определение лишь отдельных из указанных параметров не может считаться достоверным для постановки диагноза.

Одной из причин, инициирующих ухудшение репродуктивного здоровья женщин, считается антифосфолипидный синдром (АФС), который проявляется в группе аутоиммунных нарушений и характеризуется появлением значительного количества антител в сыворотке крови к фосфолипидам (АФА) и к связанными с ними гликопротеинами: Р-2-гликопротеином-1 и аннек-сином^, а также протромбином [1].

Другой важной характеристикой этого синдрома является нарушение ряда параметров свертываемости крови - развитие гипокоагуляции в различных т. н. фосфолипидзависимых тестах, выполняемых на бедной тромбоцитами плазме (БТП). Эта гипокоагуляция, которая обозначается как наличие в плазме крови антикоагулянтов волчаночного типа (АВТ), устраняется или становится значительно менее выраженной при добавлении к БТП эмульсии нормальных фосфолипидных мембран, полученных из разрушенных тромбоцитов, либо эритрофосфатида [2-3].

Мы неоднократно сталкиваемся с тем, что диагноз АФС ставится лишь на основании одного антикардио-липинового теста без определения антител к другим фосфолипидам и без выявления эффектов т. н. «волча-ночных антикоагулянтов». Между тем известно, что антикардиолипиновый тест, несомненно, являющийся наиболее «ходовым» и стандартизированным, обладает сравнительно низкой специфичностью, поскольку кар-диолипин является компонентом лишь мембран внутриклеточных органелл, содержится в большом количестве в плазме здоровых людей, будучи в ней заблокирован другими компонентами [4], и бывает положительным не только при АФС, но и при других видах патологии [5]. В силу этого, антикардиолипиновый тест при всей своей высокой стандартизации и воспроизводимости должен дополняться другими методами иммунологической диагностики (определением титра антител к фосфатидилсерину, фосфатидилинизатолу, фосфатидной кислоте), а также к связанным с этими фосфолипидами гликопротеинам (Р-2-гликопротеину-1, аннексину^ и/или протромбину).

Выявление эффектов волчаночного антикоагулянта также требует использования полного комплекса пред-

ложенных для этого фосфолипид-зависимых скрининговых и подтверждающих методик, прошедших апробацию в многоцентровых исследованиях [6]. К сожалению, в большинстве отечественных работ, посвященных АФС, в т. ч. и выполненных в крупных научных центрах, мы не встречаем такой четко построенной идентификации эффектов АВТ, без чего диагностика этого синдрома не может считаться достаточно обоснованной [7-8].

Волчаночный антикоагулянт (ВА) относится к иммуноглобулинам класса и представляет собой гетерогенную группу антител против отрицательно заряженных фосфолипидов. Свое название он получил в связи с тем, что оказывает влияние на фосфолипидза-висимые коагуляционные тесты и впервые был выявлен у больных с СКВ. Уровень волчаночного антикоагулянта в плазме в норме - 0,8-1,2 усл. ед. Наличие ВА у больных можно заподозрить при необъяснимом удлинении АЧТВ, коагуляционных тестов со змеиным ядом, времени рекальцификации и в меньшей степени про-тромбинового времени при всех других нормальных показателях коагулограммы. ВА обычно обнаруживают по удлинению у больных АЧТВ, при этом они не имеют выраженных проявлений кровоточивости, в то же время у 30 % из них может развиваться тромбоз, т. е. имеется парадоксальная реакция - удлинение АЧТВ и развитие тромбоза [3, 5].

Механизм возникновения тромбоза у больных с ВА точно не установлен, однако известно, что антитела к фосфолипидам снижают продукцию простациклина эндотелиальными клетками за счет ингибирования фосфолипазы А-2 и протеина S и, таким образом, создают предпосылки к тромбообразованию [2].

Цель исследования: определение прогностического значения волчаночного антикоагулянта применительно к оценке антифосфолипидного синдрома у женщин, имеющих отягощенный акушерский анамнез.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для исследования была отобрана группа из 132 женщин, имевших в анамнезе привычное невынашива-

ние беременности, у которых после проведения гинекологического, гормонального, бактериологического и генетического исследований причина нарушений в репродуктивной системе оставалась неясной.

Средний возраст обследованных составил 28,14 + 0,71 лет (от 20 до 43 лет). 87 (66 %) из них имели в анамнезе повторные регрессирующие беременности и самопроизвольные выкидыши и в I и во II триместрах беременности, 25 (19 %) - замершую беременность, 8 (6 %) - внематочную беременность, у 12 (9 %) женщин отмечалось бесплодие.

В качестве контрольной группы были обследованы 40 фертильных женщин.

Методом иммуноферментного анализа на диагностических тест-системах фирмы “Orgentec” определяли суммарную концентрацию антител к кардиолипину, фосфатидил-серину, фосфатидил-инозитолу и фосфа-тидиоловой кислоте класса IgG. Использовали диагностическое лабораторное оборудование для иммунного анализа Sanofi Diagnostics Pasteur, Франция - США: “BIO-RAD LABORATORIEES, INC”. Уровни титров АФА выражали в международных единицах, согласно инструкции фирмы-производителя [5].

Одновременно определяли в плазме крови анткоа-гулянты волчаночного типа (АВТ): люпус-чувстви-тельное АПТВ (ВА+) и протромбиновый тест с разведенным ядром гюрзы (лебетоксовый). Все включаемые в эту группу исследования выполняли на бедной тромбоцитами плазме (БТП) на коагулометре «Тромб» Использовали реактивы фирмы «Технология - стандарт».

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета статистических программ Statistika, включая методы параметрического и непараметрического анализа (t - критерий Стьюдента, коэффициент корреляции по Спирмену). Достоверными считались различия при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Средний уровень IgG в контрольной группе к суммарным антителам [КЛ+ФС+ФИ+ФК] составил 2,96 ± ± 0,17 ед./мл. Уровень IgG - АФА в сыворотке крови женщин с отягощенным акушерским анамнезом был достоверно более высоким (р < 0,001) по сравнению с контрольной группой и составил 12,7 ± 1,3 ед./мл.

Также были выявлены достоверные различия (р < 0,001) содержания в плазме крови анткоагулянтов волчаночного типа (АВТ): люпус-чувствительное

АПТВ (ВА+) и протромбиновый тест с разведенным ядром гюрзы (лебетоксовый).

Определние ВА набором «Экспресс-Люпус-тест» является оригинальным скрининговым вариантом, основанным на сравнительной оценке результатов в плазме больного активированного парциального тром-бопластинового времени (АПТВ) с двумя реагентами: высокочувствительными к ВА (АПТВва+) и низкочувствительными к ВА (АПТВва-). Наличие в плазме ВА ведет к сравнительно большему удлинению времени свертывания в тесте с АПТВва+, чем с АПТВва--реагентом. Показатели времени свертывания у больного в отношении контрольной плазмы выражаются через отношение NR, которое количественно оценивает гипокоагуляционный эффект. В норме у здоровых людей показатель NR в среднем равен 0,79-1,19 ед. Если

МЯ равен или превышает 1,3 ед., то определяют наличие волчаночного антикоагулянта.

Средний уровень МЯ в плазме крови пациенток контрольной группы составил 0,89 ± 0,01 ед. У женщин с отягощенным акушерским анамнезом выявлено достоверное (р < 0,001) повышение уровня МЯ, которое в среднем составило 1,46 ± 0,11 ед. Обнаружена достоверная прямая корреляция между уровнями - АФА и средним уровнем МЯ в плазме крови (г = 0,56; Р < 0,01)

Коагулаза яда гюрзы (лебетокс) осуществляет запуск свертывания крови путем активации фактора X в присутствии ионов кальция и фактора У. Это действие усиливается фосфолипидным компонентом (плазменными фосфолипопротеидными мембранами). При дефиците фактора X время свертывания в лебетоксовом тесте (ЛЕТ) удлиняется, а при дефиците фактора VII, в отличие от протромбинового теста, коагуляционный эффект лебетокса не ослабляется. Совпадение результатов ЛЕТ в исследуемых и контрольных образцах плазмы (разница во времени свертывания не более 3 с) говорит об отсутствии дефицита фактора X, У, II и I. Удлинение времени свертывания по ЛЕТ (в сравнении с контролем) более чем на 3 с свидетельствует о возможном дефиците факторов X, У, II и I.

В контрольной группе среднее время составило 2,32 ± 0,04 с. Среднее время исследуемой группы достоверно (р < 0,001) превысило показатели контрольной группы и составило 3,17 ± 0,26 с. Отмечена прямая корреляция между - АФА и временем свертывания по ЛЕТ (г = 0,43 прир < 0,01).

ВЫВОДЫ

Полученные результаты подтверждают материалы других авторов о связи между гиперпродукцией антител к кардиолипину, а также к другим мембранным фосфолипидам (фосфатдилсерину, фосфатдилинозито-лу, фосфатидиловой кислоте) и развитием АФС. Уровни фосфолипидзависимых антител в группе женщин с отягощенным акушерским анамнезом являются более достоверно высокими, чем у контрольной группы. Мы подчеркиваем необходимость определения при АФС не только антикардиолипиновых антител, но и титра антител к другим мембранным фосфолипидам (фосфат-дилсерину, фосфатдилинозитолу, фосфатидиловой кислоте).

Следует иметь в виду, что при достаточно полном иммунологическом обследовании значительная часть случаев АФС (по разным данным 35-60 %) остается нераспознанной, если одновременно не определяется в плазме крови антикоагулянты волчаночного типа. Из скрининговых тестов наиболее доступны следующие: люпус-чувствительное АПТВ (ВА+) с разведенным ядром гюрзы (лебетоксовый). Уровень МЯ в плазме крови и время свертывания по ЛЕТ во второй группе были достоверно более высокими, чем в первой.

В связи с этим считаем целесообразным обследование на АФС женщин, имеющих отягощенный акушерский анамнез. Своевременное проведение профилактических мероприятий позволит избежать развития акушерской патологии, а также снизить перинатальную заболеваемость и смертность.

ЛИТЕРАТУРА

1. Агаджанова А.А. Основные подходы к комплексной терапии АФС

в клинике невынашивания // Акушерство и гинекология. 1999.

№ 3. С. 6-11.

2. Баймурадова С.М. Особенности течения и ведения беременности с гестозами и генетическими формами тромбофилии: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2002.

3. Баркаган З.С., Цывкина Л.П., Цеймах И.Я. Способ диагностики антифосфолипидного синдрома: патент на изобретение № 2104550 от 10.02.1998 г. РФ.

4. Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемо-

стаза. М.: Ньюдиамед, 1999. 217 с.

5. Баркаган З.С., Момот А.П., Цывкина Л.П. Принципы лабораторной диагностики антифосфолипидного синдрома // Клинически-лабораторная диагностика. 2000. № 3. С. 47-51.

6. Бондарь О.Е. Если у мамы антифосфолипидный синдром // Медицинская газета. 2001. № 58. С. 12-18.

7. Гениевская М.Г., Макацария А.Д. Антитела к фосфолипидам и невынашивание // Вестн. Рос. асс. акуш.-гин. 2000. № 1. С. 44-46.

8. Макацария А.Д., Раскуражев А.Б., Мищенко А.Л., Табаков Е.В. Вопросы патогенеза, диагностики и терапии осложнений беремен-

ности, связанных с циркуляцией волчаночного антикоагулянта. М., 199З. С. б-88.

Поступила в редакцию 1б ноября 2011 г.

Nazirova A.A., Malysheva E.V., Gulin A.V. DIAGNOSIS OF ANTICOAGULANTS OF FEMALE LUPUS TYPE

High-grade diagnostics antiphospholipide syndrome should be based on immunological definition tytre antibodies to negatively charged phospholipids (cardiolipine, phosphotidilseryne, phos-photidiliozitole, sulfuric acid) and attached to phospholipid membranes glycoproteins - P-glycoprotein-I and anti-phosphatidylserine-V. Simultaneously anticoagulants lumpus type should be defined in plasma of blood. The definition of only separate from the specified parameters can't be considered authentic for diagnosis statement.

Key words: antiphospholipids syndrome; antibodies to phospholipids; immunoglobulin IgG.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.