CC BY
27© Коллектив авторов, 2014
Диагностическое значение определения факторов ангиогенеза и показателей цитокинового состава в сыворотке крови и моче у пациентов с системной склеродермией
А.П. РЕБРОВ, Д.А. ПАТРИКЕЕВА, Н.Б. ЗАХАРОВА, О.Г. КАРПОВА, А.Н. ОКСЕНЬЧУК
ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Минздрава России, кафедра госпитальной терапии лечебного факультета, ЦНИЛ
Diagnostic value of the determination of angiogenic factors and cytokine composition parameters in the serum and urine of patients with scleroderma systematica
A.P. REBROV, D.A. PATRIKEEVA, N.B. ZAKHAROVA, O.G. KARPOVA, A.N. OKSENCHUK
Central Research Laboratory, Department of Hospital Therapy, Faculty of Therapeutcs, V.I. Razumovsky Saratov State Medical University, Ministry of Health of Russia
Резюме
Цель исследования. Изучение взаимосвязей концентрации интерлейкинов (IL) 1 в, 6, 8, 10, белка—хемоаттрактанта моноцитов 1-го типа (МСР-1), а-фактора некроза опухоли (а-ФНО), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в сыворотке крови и моче и клиническими особенностями системной склеродермии (ССД).
Материалы и методы. В исследование включили 51 пациента с достоверным диагнозом ССД. Концентрацию интерлейкинов, а-ФНО, МСР-1, VEGF в сыворотке крови и моче определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты. У пациентов с ССД отмечено повышение концентрации провоспалительных цитокинов и VEGF как в сыворотке крови, так и моче по сравнению с аналогичными показателями у лиц группы сравнения. Выявлены взаимосвязи уровней VEGF, провоспалительных цитокинов и длительности заболевания, клинической формы, клинических проявлений ССД. Заключение. Повышение уровня VEGF в сыворотке крови у пациентов с ССД можно рекомендовать для оценки выраженности дисфункции эндотелия. Оценка концентрации IL-6 в сыворотки крови может применяться для определения степени прогрессирования склероза, МСР-1 — для определения степени активности фиброзирующего альвеолита. Количественный анализ уровней IL-6, IL-8 и VEGF в моче у больных ССД можно использовать для оценки тубулоинтерстициального воспаления, прогноза формирования интерстициального фиброза.
Ключевые слова: системная склеродермия, фактор роста эндотелия сосудов, цитокины.
Aim. To study the associations of the concentration of interleukins (IL) 1в, 6, 8, 10, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), tumor necrosis factor-а, vascular endothelial growth factor (VEGF) in the serum and urine with the clinical features of scleroderma systematica (SDS).
Subjects and methods. The investigation enrolled 51 patients with a valid SDS diagnosis. The serum and urinary concentrations of interleukins, TNF-а, MCP-1, and VEGF were measured by solid-phase enzyme immunoassay.
Results. The patients with SDS were found to have higher serum and urine concentrations of proinflammatory cytokines and VEGF than in the comparison group. There were relationships between the levels of VEGF and proinflammatory cytokines and the disease duration, clinical forms, and clinical manifestation of SDS.
Conclusion. Higher serum VEGF levels in patients with SDS may be used to estimate the magnitude of endothelial dysfunction. Estimation of serum IL-6 concentrations may be employed to determine the degree of sclerosis progression; that of MCP1 for the activity of fibrosing alveolitis. Quantitative analysis of urinary IL-6, IL-8, and VEGF levels in patients with SDS may be used to evaluate tubulointerstitial inflammation and to predict the development of interstitial fibrosis.
Key words: scleroderma systematica, vascular endothelial growth factor, cytokines.
АД — артериальное давление ДЭ — дисфункция эндотелия ЖЕЛ — жизненная емкость легких ИМТ — индекс массы тела
МСР-1 — белок—хемоаттрактант моноцитов 1-го типа ОФВ1 — объем форсированного выдоха за 1-ю секунду СДЛА — систолическое давление в легочной артерии
ССД — системная склеродермия
ФА — фиброзирующий альвеолит
фЖЕЛ — форсированная жизненная емкость легких
1Ь — интерлейкин
УБОР — фактор роста эндотелия сосудов а-ФНО — а-фактор некроза опухоли
Системная склеродермия (ССД) — хроническое аутоиммунное заболевание соединительной ткани, которое характеризуется генерализованной микроангиопатией, фиброзом кожи и внутренних органов [1]. Гистологическими признаками ССД являются периваскулярные ин-
фильтраты и уменьшение плотности капилляров, которым может предшествовать чрезмерное накопление белков внеклеточного матрикса [2].
Снижение плотности капилляров при ССД приводит к снижению скорости кровотока, ишемии тканей и кли-
ническим проявлениям заболевания, например к развитию дигитальных язв [3]. Ишемия тканей способствует образованию новых кровеносных сосудов из ранее сформированной капиллярной сети. При ССД это может приводить к структурной перестройке микроциркуляторного русла и генерализованной прогрессирующей васкулопа-тии, которая запускает каскад тяжелых и необратимых последствий поражения внутренних органов.
Ангиогенез включает пролиферацию и миграцию эн-дотелиальных клеток и реконструкцию капиллярной сети и представляет собой сложный многоступенчатый процесс, находящийся под строгим контролем индукторов и ингибиторов ангиогенеза [4]. В норме уровень индукторов и ингибиторов ангиогенеза сбалансирован и ангиоге-нез в здоровых тканях не происходит.
Одним из наиболее важных факторов, обеспечивающих жизнедеятельность эндотелия, является фактор роста эндотелия сосудов — VEGF (vascular endothelial growth factor). Он способствует пролиферации эндотелия, стимулирует трофические функции, служит главным регулятором физиологического ангиогенеза, рассматривается в качестве медиатора дисфункции эндотелия (ДЭ) [5, 6]. Основным фактором, который стимулирует ангиогенез, является гипоксия [7, 8]. Известно, что гипоксия способствует накоплению факторов, индуцируемых гипоксией, — HIF (HIF-1a и HIF-1ß) [9]. Эти факторы проникают в ядро клетки, связываются с соответствующим ответственным участком и изменяют транскрипцию многих генов, в том числе генов VEGF [10]. В результате увеличивается экспрессия индукторов ангиогенеза, включая VEGF. В тот момент, когда действие индукторов ангиогенеза превышает действие ингибиторов, эндотелиальные клетки переходят из обычного «дремлющего» состояния в активное и происходит «включение ангиогенеза» [11]. В своем исследовании B. Maurer и соавт. [12] выявили, что при ССД высокие уровни VEGF в сыворотке крови индуцируют развитие фиброза и недостаточность ангиогенеза.
В последние годы уделяется большое значение определению ангиогенных факторов и цитокинов в сыворотке крови и моче при различных заболеваниях — ревматических, атеросклерозе, опухолях [13, 14]. В ряде работ при ССД отмечено повышение в сыворотке крови таких маркеров, как VEGF, белка—хемоаттрактанта моноцитов 1-го типа (МСР-1), a-фактора некроза опухолей (ФНО), интерлейкинов (IL) 1ß, 6, 8, 10, которые играют важную роль в патогенезе васкулопатии [15, 16].
По данным некоторых исследований, повышение уровня цитокинов и факторов роста в моче наблюдается при таких заболеваниях, как хронический пиелонефрит, сахарный диабет, хронический гломерулонефрит [17]. Следует отметить, что в литературе мы не обнаружили исследований, посвященных определению содержания ци-токинов в сыворотке крови и моче у пациентов с ССД и их
Сведения об авторах:
Патрикеева Дарья Андреевна — асс. каф. госпитальной терапии лечебного факультета
Захарова Наталия Борисовна — д.м.н., проф., зав. ЦНИЛ Карпова Ольга Георгиевна — асс. каф. госпитальной терапии лечебного факультета
Оксеньчук Александра Николаевна — асс. каф. госпитальной терапии лечебного факультета
взаимосвязей с клиническими проявлениями заболевания, поражением почек, тяжестью органных поражений, клинической формой, активностью заболевания.
Цель работы — изучить взаимосвязи концентрации интерлейкинов (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10), а-ФНО, VEGF, МСР-1 в сыворотке крови, моче и активности заболевания, клинической формы, характера течения, клинических проявлений ССД.
Материалы и методы
В исследование включили 51 пациента с ССД, находившегося на стационарном лечении в ревматологическом отделении ГУЗ «Областная клиническая больница» (Саратов) в период c февраля по июнь 2013 г. ССД соответствовала диагностическим критериям ССД Американской ревматологической ассоциации (1980) и/или диагностическим критериям ССД, разработанным Н.Г. Гусевой и соавт. [18]. В группу сравнения вошли 32 добровольца, сопоставимых с больными ССД по полу, возрасту, индексу массы тела (ИМТ), уровню артериального давления (АД), показателям липидного состава крови. Средний возраст пациентов с ССД составил 53,9+10,8 года, средний возраст лиц группы сравнения — 49,9+7,2 года.
Для количественного анализа биомаркеров образцы крови у пациентов и лиц группы сравнения брали натощак, в утренние часы из локтевой вены с использованием систем для забора крови Vacuette с активатором свертывания крови и разделительным гелем. Первую порцию утренней мочи в объеме не менее 100 мл собирали в специальные стаканы с крышками. Предварительно в емкость для забора мочи вносили 20 мкл раствора ProClin 300 («SUPELCO», США). Аликвоты сыворотки крови и мочи разливали в пробирки с крышками типа Eppendorf емкостью 2 мл и хранили до проведения исследования при температуре —25 °С.
Концентрацию интерлейкинов (IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10), VEGF, а-ФНО, МСР-1 в сыворотке крови и моче обследуемых пациентов и лиц группы сравнения определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа, используя соответствующие наборы реагентов ЗАО Вектор-Бест (Новосибирск).
Выполняли следующие исследования: объективное обследование с расчетом ИМТ; измерение АД с расчетом среднего АД; общий анализ крови; общий анализ мочи; биохимическое исследование крови с определением общего холестерина, креатинина в сыворотке крови по Яффе на биохимическом анализаторе Hitachi 912 с использованием реагентов фирмы «DiaSys»; С-реактивный белок высокочувствительным фотометрическим турбидиметрическим методом с применением реагентов DiaSis на автоматическом анализаторе крови Hitachi; у некоторых больных исследовали суточную протеинурию, проводили пробу Не-чипоренко.
Эхокардиографию выполняли на комплексе Acuson 128 XP/10, использовали М-модальный режим, двумерный (В) режим, режимы импульсной и постоянноволновой допплерогра-фии в стандартных эхокардиографических позициях. Систолическое давление в легочной артерии (СДЛА) оценивали при регистрации транстрикуспидального потока в постоянноволновом допплерографическом режиме. Определяли максимальную скорость потока трикуспидальной регургитации, по которой с помощью модифицированного уравнения Бернулли рассчитывали систолический транстрикуспидальный градиент давления. Легочную гипертонию констатировали при СДЛА >36 мм рт.ст.
Всем пациентам выполнили рентгенологическое исследование кистей, стоп, органов грудной клетки; отдельным пациентам — высокого разрешения компьютерную томографию органов грудной клетки.
Контактная информация:
Ребров Андрей Петрович — д.м.н., проф., зав. каф. госпитальной терапии лечебного факультета; 410012 Саратов, ул. Большая Казачья, 112; тел./факс: +7(845)249-1437; e-mail: andreyrebrov® yandex.ru
Для оценки функции внешнего дыхания с помощью спирографа Micro GP (Англия) проводили спирографию с пробой с бронхолитиком и определением жизненной емкости легких (ЖЕЛ), форсированной жизненной емкости легких (фЖЕЛ), объема форсированного выдоха за 1-ю секунду (ОФВ1), ОФВ1/ фЖЕЛ.
Для оценки выраженности уплотнения кожи применяли модифицированный счет G. Rodnan. Выделяли диффузную, лимитированную и перекрестную формы ССД. Для оценки активности ССД рассчитывали индекс активности Valentini (European Scleroderma Study Group, 2001) [19].
Учитывали особенности лечения пациентов: D-пеницил-ламин принимали 40% пациентов, глюкокортикостероиды — 79%, нестероидные противовоспалительные препараты — 48%, альпростадил — 9%, базисные препараты — 21% больных (из них 6% получали метотрексат, 10% — 4-аминохинолиновые препараты, 3% — азатиоприн, 2% — микофенолата мофетил).
Статистическую обработку данных проводили с использованием программ Microsoft Office Excel 2010 («Microsoft Corp.», США) и Statistica 8.0 («StatSoft Inc.», США). Характер распределения данных оценивали графическим методом и с использованием критерия Шапиро—Уилка. Описание признаков, которые имеют нормальное распределение, представлено в виде M±SD, где М — среднее арифметическое, SD — стандартное отклонение; для признаков с распределением, отличным от нормального, результаты представлены в виде Ме [Q1; Q3], где Me — медиана, Q1 и Q3 — первый и третий квартили. Для обработки данных, имеющих нормальный тип распределения, использовали параметрические методы: i-критерий для независимых группировок, парный i-критерий. При характере распределения данных, отличном от нормального, применяли непараметрические методы: критерий Манна—Уитни, критерий Вальда—Вольфовица, критерий х2, критерий Вилкоксона, критерий знаков. При сравнении более двух независимых группировок использовали методы дисперсионного анализа: параметрический дисперсионный анализ для нормально распределенных данных и ранговый анализ вариаций Крускала—Уоллиса для данных с распределением, отличным от нормального. Для оценки взаимосвязи отдельных показателей использовали корреляционный анализ с расчетом параметрического коэффициента Пирсона или непараметрического коэффициента корреляции Спирмена. Значения показателей считали достоверными при p<0,05.
Результаты
Клиническая характеристика обследованных больных ССД представлена в табл. 1. Показатели цитокинового состава и VEGF в сыворотке крови и моче у больных ССД и лиц группы сравнения показаны в табл. 2. У пациентов с ССД отмечено повышение концентрации VEGF и провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-8, MCP-1) как в сыворотке крови, так и в моче по сравнению с аналогичными показателями у лиц группы сравнения. Уровни противовоспалительных цитокинов (IL-10 и IL-1ß), а также а-ФНО в сыворотке крови и моче пациентов с ССД находились в пределах нормы и были даже ниже, чем у лиц группы сравнения. Это может быть связано с длительным течением заболевания, хроническим характером воспаления при ССД, проведением иммуносупрессивной терапии (глюкокортикостероиды, D-пеницилламин).
Для определения содержания провоспалительных цитокинов и VEGF в крови и моче у пациентов с ССД в зависимости от длительности заболевания выделены соответствующие группы больных. В 1-ю группу включены больные ССД c длительностью заболевания от 1 года до 5 лет, во 2-ю группу — с длительностью ССД от 5 до 10 лет, в 3-ю группу — с длительностью более 10 лет (табл. 3).
Таблица 1. Клиническая характеристика больных ССД
Показатель Значение
Возраст, годы 53,9+10,8
Женщины, % 92,7
Мужчины, % 7,3
Длительность заболевания, годы 10,4+10,1
Диффузная форма, % 32
Лимитированная форма, % 44
Оуег1ар-синдром, % 24
Минимальная степень активности, % 35,4
Умеренная степень активности, % 52,1
Высокая степень активности, % 12,5
Хроническое течение, % 80
Синдром Рейно, % 93,8
Дигитальные язвы/рубчики, % 29,8
Остеолиз ногтевых фаланг, % 17,4
Кальциноз, % 11
Поражение суставов (артрит), % 86
Полиартритический вариант артрита, % 52
Периартрит с развитием контрактур, % 14,6
Поражение легких, % 82
ФА, % 28,6
Миокардиофиброз, % 52,1
Перикардит, % 26,7
Поражение желудочно-кишечного тракта, %_87,7
Примечание. ФА — фиброзирующий альвеолит.
Таблица 2. Показатели цитокинового состава и VEGF в сыворотке крови и моче у больных ССД и лиц группы сравнения
Биомаркер, пг/мл ССД («=51) Группа сравнения («=32)
В сыворотке крови
IL-1ß 1,39+1,28 5,4+4,3**
IL-6 7,38+9,68 2,9+1,96*
IL-8 6,66+6,41 7,1+3,6
IL-10 1,25+0,87 2,65+1,32**
а-ФНО 1,01+0,04 2,73+1,9*
VEGF 88 (27,7; 302,4) 45,4 (39,05; 60,25)*
MCP-1 225,7 (142,7; 634,5) 60,3 (39,2; 109,4)**
В моче
IL-1ß 1,96+2,77 2,5+0,9**
IL-6 8,28+7,74 3,35+2,03*
IL-8 12,3 (6; 25,37) 8,7+13,9*
IL-10 1,2+0,2 4,1+1,35**
а-ФНО 1,23+0,24 2,6+1,13*
VEGF 195,5 (75,2; 396,3) 33 (18,8;41)**
MCP-1 172,1 (82,5; 496,5) 253 (156,2; 287,6)
Примечание. Здесь и в табл. 3—8 различия показателей в сравниваемых группах достоверны (* — p<0,05, ** — p<0,001).
У больных ССД различной длительности заболевания отмечено достоверное повышение уровня MCP-1 в сыворотке крови, VEGF в сыворотке крови и моче, IL-6, IL-8 в моче по сравнению с показателями лиц группы сравнения. Наибольшее повышение уровня цитокинов и VEGF выявлено в моче при длительности заболевания от 5 до 10
Таблица 3. Состояние цитокинового состава и УЕСР у больных ССД в зависимости от длительности заболевания
Биомаркер, пг/мл 1—5 лет («=16) 5—10 лет («=18) более 10 лет («=17) Группа сравнения (« 32)
В сыворотке крови
1Ь-6 8,23+10,3 6,5±7,3 5,06±9,1 2,7+1,7
1Ь-8 8,7±5,9 5,8±6,3 6,3±8,5 6,9±3,3
МСР-1 243,2 (172; 1045)* 172,1 (119; 273)* 174,3 (110; 340)* 60,8 (39,2; 109)
УБОБ 196,2 (68; 307,3)** 71,6 (29; 226) 42,9 (18,6; 190) 48,3 (41; 65)
В моче
1Ь-6 9,4±10,1 8,9±5,6* 4,9±8,3 3,2+1,8
1Ь-8 17,9 (6; 32,7) 22,5 (7,4; 55,4)* 8,4 (3,9; 15,1)* 7,2+10,8
МСР-1 280,4 (78,9; 550) 163,8 (117; 251) 132,1 (80,7; 229) 179,4 (141; 260)
УБОБ 104 (64,8; 371)** 305,1 (209; 399)** 90,4 (42; 222,1)* 34,6 (19,8; 44)
Таблица 4. Состояние цитокинового состава и УЕСР у больных ССД в зависимости от клинической формы
Биомаркер, пг/мл
Больные ССД
диффузная («=16)
лимитированная (п=22)
перекрестная (п=13)
Группа сравнения, (п=32)
В сыворотке крови
1Ь-б 9,1+11,6 5,2+8,5 11+11,6* 2,7+1,7
1Ь-8 7,8+6,3 5,5+5,2 9,3+8,9 6,9+3,3
МСР-1 243,2 (135; 916,7)** 172,1 (120; 634,5)** 372,4 (86; 1069)* 60,8 (39,2; 109)
УБОБ 105,5 (10; 365) 70 (27,4; 231) 219,4 (30,5; 455) 48,3 (41; 65)
В моче
1Ь-6 11,2+10,6 5,5+7,6 8,9+6,1* 3,2+1,8
1Ь-8 6,5 (2,2; 32,7)* 13+10,03** 45,2 (9,1; 91,7)** 7,2+10,8
МСР-1 198 (78,9; 550) 132,1 (67,6; 292) 228,6 (153; 424) 179,4 (141; 260)
УБОБ 175,8 (59,2; 371)** 140,2 (70; 263,6)** 317,7 (142;482)** 34,6 (19,8; 44)
Таблица 5. Состояние цитокинового состава и УЕСР у больных ССД в зависимости от степени активности
Биомаркер, пг/мл Больные ССД
низкая («=17) умеренная («=25) высокая («=9) Группа сравнения (« 32)
В сыворотке крови
1Ь-6 9,3+11,6 9,2+10,9 2,1+1,4 2,7+1,7
1Ь-8 8,2+8,5 6,6+5,7 9,6+6,6 6,9+3,3
МСР-1 172,1 (156; 634,5)** 225,7 (152,2; 779)** 135 (114; 1045)* 60,8 (39,2; 109)
УБОБ 61,4 (27,7; 160) 174,1 (10; 479)** В моче 307,3 (196; 365)** 48,3 (41; 65)
1Ь-6 6,9+8,7 8,2+7,1 9,6+15,1 3,2+1,8
1Ь-8 11,3 (8,2; 38,14)* 10,8 (3,9; 29) 8,8+8,2 7,2+10,8
МСР-1 163,8 (82,5; 279) 183,1 (96,3; 619,4) 280,4 (79; 496,5) 179,4 (141; 260)
УБОБ 200,7 (75,2; 356,5)** 264,2 (78,8; 472)** 93,6 (59,2; 104)* 34,6 (19,8; 44)
лет. Определена тенденция к различию между больными ССД по уровню УБОБ в моче («=25; Л=2; р=0,09). Обращает внимание, что при увеличении длительности заболевания уровень УБОБ в моче снижается.
Для определения взаимосвязей цитокинов и УБОБ в сыворотке крови и моче у пациентов с ССД в зависимости от клинической формы заболевания выделены следующие группы: 1-я группа — больные с диффузной формой ССД, 2-я группа — пациенты с лимитированной формой, 3-я группа — больные с перекрестным синдромом (табл. 4).
У пациентов с ССД вне зависимости от клинической формы заболевания отметили повышение уровня МСР-1 в сыворотке крови, УБОБ и 1Ь-8 в моче по сравнению с таковыми у лиц группы сравнения. У больных с переТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ АРХИВ 5, 2014
крестной формой ССД уровень МСР-1 в крови, УБОБ и 1Ь-8 в моче в большей степени превышал аналогичные показатели у лиц группы сравнения, чем у пациентов других клинических групп. Несмотря на установленные различия по уровню УБОБ в моче больных и здоровых лиц, уровни УБОБ в сыворотке крови в указанных группах были сопоставимы.
Для определения взаимосвязей уровня цитокинов и УБОБ у пациентов с различной степенью активности ССД выделены 3 группы пациентов: с низкой, умеренной и высокой степенью активности (табл. 5).
У пациентов с различной степенью активности выявлено повышение уровня МСР-1, УБОБ в сыворотки крове и УБОБ в моче по сравнению с показателями группы
Таблица 6. Состояние цитокинового состава и VEGF у больных ССД при наличии и отсутствии ФА
Биомаркер, пг/мл без ФА («=35) ФА («=16) Группа сравнения (« 32)
В сыворотке крови
IL-6 6,3+7,4 13,2+15,6* 2,7+1,7
IL-8 6,2+6,8 10,5+5,9 6,9+3,3
MCP-1 172,1 (118,6; 472)** 980,9 (258; 1118)**# 60,8 (39,2; 109)
VEGF 80,8 (30,5; 365)* 105,5 (10; 196,2) 48,3 (41; 65)
В моче
IL-6 8,8+8,7 6,9+6,8 3,2+1,8
IL-8 8,5 (5; 32,7)** 17,9 (6; 38,1)* 7,2+10,8
MCP-1 155,5 (82,5; 305) 280,4 (172; 1048) 179,4 (141; 260)
VEGF 175,8 (75; 269,5)** 356,5 (104;412,2)** 34,6 (19,8; 44)
Примечание. # — p=0,01 для различий между показателями MCP-1 сыворотки крови больных ССД с ФА.
Таблица 7. Состояние цитокинового состава и VEGF у больных ССД при наличии миокардиофиброза
Биомаркер, пг/мл
ССД
без миокардиофиброза («=25)
миокардиофиброз («=26)
Группа сравнения («=32)
IL-6 IL-8 MCP-1 VEGF
IL-6 IL-8 MCP-1 VEGF
9+8,8* 8,6+7,9 258,3 (156; 642)** 118,9 (30,5; 365)*
8,1+7 18,8 (2,2; 73)** 170,2 (79; 278,8) 295,9 (175,8; 412)*
В сыворотке крови
7,8+12,6 6,1+5,1 205,8 (114; 917)* 105,5 (27,1; 307,3)
В моче
8,3+10 8,5 (6,5; 17,9)* 244,4 (108,7; 602,7) 104 (59,2; 269,5)**
2,7+1,7 6,9+3,3 60,8 (39,2; 109) 48,3 (41; 65)
3,2+1,8 7,2+10,8 179,4 (141; 260) 34,6 (19,8; 44)
сравнения. В сыворотке крови наибольшее повышение уровня УБОБ констатировано при высокой степени активности, в моче — при умеренной. Статистически значимых различий между группами больных по уровню УБОБ не получено.
Проведен анализ уровня цитокинов и УБОБ при наличии и в отсутствие ФА у больных ССД (табл. 6). У больных ССД без убедительных данных, подтверждающих ФА, выявлено достоверное повышение уровня МСР-1 в сыворотке крови, 1Ь-8 и УБОБ в моче по сравнению с аналогичными показателями у лиц группы сравнения. У больных ССД с ФА уровни 1Ь-8, УБОБ в моче были значительно выше, чем у лиц группы сравнения и у больных ССД без ФА, а уровень МСР-1 в крови у больных с ФА — достоверно выше уровня МСР-1 у больных ССД без ФА (рис. 1).
При проведении непараметрического корреляционного анализа выявлены взаимосвязи уровня 1Ь-б в сыворотке крови и ОФВ1 (=—0,6; _р=0,01), уровня МСР-1 в крови и ОФВ1 (/=—0,5; _р=0,02).
Проведена оценка уровней цитокинов и УБОБ в крови и моче при наличии или в отсутствие у больных мио-кардиофиброза (табл. 7). У пациентов с ССД без указания на миокардиофиброз выявлено повышение уровня МСР-1 и УБОБ в крови, ГЬ-8 и УБОБ в моче по сравнению с показателями у лиц группы сравнения. У больных ССД при наличии миокардиофиброза уровень МСР-1 в сыворотке
крови и 1Ь-8 в моче значительно выше, чем у больных без миокардиофиброза. Отмечено, что у больных ССД с мио-кардиофиброзом уровень УБОБ в мочи ниже, чем у пациентов без миокардиофиброза.
У больных ССД без указания на наличие или отсутствие перикардита по сравнению с лицами группы сравнения выявлено повышение уровня МСР-1 и УБОБ в крови, 1Ь-8 и УБОБ в моче (табл. 8). Однако у пациентов с ССД при наличии перикардита уровни УБОБ в крови и моче значительно ниже, чем у больных ССД без перикардита (рис. 2).
Обсуждение
В исследовании у пациентов с ССД мы выявили достоверное повышение уровня УБОБ как в сыворотке крови, так и в моче по сравнению с лицами группы сравнения. Повышение уровня данного ангиогенного фактора у больных ССД может быть использовано для оценки ДЭ.
У пациентов с ССД установлено существенное повышение уровня провоспалительных цитокинов в крови и моче (ГЬ-6 и МСР-1 в крови; ГЬ-6 и ГЬ-8 в моче), что может указывать на участие данных цитокинов в системном воспалении. Наибольшее повышение уровня МСР-1 в сыворотке крови, 1Ь-8 в моче отмечено при перекрестной форме ССД, что, вероятнее всего, обусловлено сочетанием нескольких нозологических форм, высокой активно-
Рис. 1. Уровень MCP-1 в сыворотке крови у больных ССД с наличием и в отсутствие ФА.
1-я группа — пациенты без ФА (и=35), 2-я группа — пациенты с ФА (п=16). * — р=0,01.
1400 1200
| 1000 | 000
| 600
&
£ 200 о
-200
□
*
1 1-г |
Нет Еса
ПерПиарДя*
Мейж*
Рис. 2. Уровень VEGF в сыворотке крови у больных ССД при наличии и в отсутствие перикардита.
1-я группа — пациенты без перикардита (и=33), 2-я группа — пациенты с перикардитом (п=18). * — р=0,05.
Таблица 8. Состояние цитокинового состава и VEGF у больных ССД при наличии перикардита
Биомаркер, пг/мл
ССД
без перикардита (n=33)
перикардит (n=18)
Группа сравнения (n=32)
В сыворотке крови
IL-6 8±11,2 8,8+9,7 2,7+1,7
IL-8 6,5+5,5 9,2+9,6 6,9+3,3
MCP-1 205,9 (139; 1069)** 224,5 (119,5; 472)* 60,8 (39,2; 109)
VEGF 242,6 (77,6; 365)** 28,8 (10; 55,2) 48,3 (41; 65)
В моче
IL-6 7,5+7,8 8,9+11,3 3,2+1,8
IL-8 12,3 (6; 25,4)** 9,3 (5; 32,7)* 7,2+10,8
MCP-1 172,1 (82,5; 496,5) 190,4 (108,7; 244,4) 179,4 (141; 260)
VEGF 179,6 (104; 370,8)** 125,5 (52; 269,5)** 34,6 (19,8; 44)
стью воспалительного процесса и полиорганностью поражения. Мы полагаем, что установленная в настоящем исследовании ассоциация ФА со значительным повышением уровня MCP-1 в сыворотке крови объясняется тем, что MCP-1 характеризует выраженность инфильтрации тканей моноцитами. Повышение уровня IL-6 в сыворотке крови при ССД может регулировать функцию Т- и В-клеток и стимулировать развитие склероза тканей [20]. Определение концентрации IL-6 в сыворотке крови можно использовать для оценки степени активности воспаления, тяжести заболевания, прогноза и эффективности терапии [20].
В моче мы выявили достоверное повышение уровня провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-8) по сравнению с показателями у лиц группы сравнения. Повышение уровня IL-6, IL-8 в моче, с одной стороны, приводит к активации воспалительной реакции в интерстициальной ткани, а с другой — способствует формированию гемоди-намических и метаболических нарушений на уровне почечных канальцев, мезангиоцитов клубочков [21]. В результате повреждаются стенки сосудов, изменяется тонус сосудистого русла и усугубляется ишемия почечной паренхимы, которая стимулирует секрецию VEGF. Однако, по данным H. Gerber и соавт. [22], при хронических заболеваниях почек уровень VEGF снижается, что связано с высокой степенью тубулоинтерстициального воспаления и макрофагальной инфильтрацией.
G. Red и соавт. [23] выявили, что в стареющей почке снижается пролиферация эндотелия, что связано с дефектом ангиогенеза. Данный факт подтверждается и в нашем исследовании — при длительности заболевания более 10 лет уровень VEGF снижается. Кроме того, при высокой степени активности воспалительного процесса отмечается прогрессивное снижение уровня VEGF в сыворотке крови и моче, что, вероятнее всего, связано с прогресси-
рующим снижением числа капилляров, обусловленное длительным воспалительным процессом. Мы полагаем, что при наличии миокардиофиброза и перикардита также отмечается снижение уровня УЕОБ в сыворотке крови и моче, что связано как с высокой степенью воспалительного процесса, так и нарушением экспрессии рецепторов УЕОК
Заключение
У пациентов с ССД выявлено повышение уровня УЕОБ и цитокинов в сыворотке крови, что свидетельствует о выраженности ДЭ. Повышение уровня УЕОБ и цитокинов в моче может указать на вовлечение в воспалительный процесс тубулоинтерстициальной ткани почек при ССД. В прогрессировании заболеваний почек имеет большое значение потеря сосудов микроциркуля-торного русла, что связано с дисбалансом экспрессии ангиогенных факторов в почечной ткани. Учитывая выявленные изменения уровней ангиогенеза и цитокинов в крови и моче у пациентов с ССД, можно предполагать, что дальнейшие исследования в этом направлении позволят получить новые данные и определить, где, когда, у каких категорий больных наиболее рационально проводить исследования. Например, изучение уровней УЕОБ и цитокинов в сыворотке крови можно использовать для оценки выраженности ДЭ, исследование концентрации 1Ь-6 в сыворотки крови — для оценки активности, тяжести и прогноза заболевания, а концентрация МСР-1 — для оценки степени активности воспаления при ФА. Определение уровней 1Ь-6, 1Ь-8 в моче у больных ССД может быть рекомендовано для оценки выраженности тубулоинтерстициального воспаления, а уровня УЕОБ в моче — для прогнозирования формирования интерстициального фиброза.
ЛИТЕРАТУРА
Liakouli V., Cipriani P., Marrelli A. et al. Angiogenic cytokines and growth factors in systemic sclerosis. Autoimmun Rev 2011; 10 (10): 641—646.
Furst D.E., Clements P.J. Pathogenesis, fusion. In: Furst DE, Clements P.J., editor. In Systemic sclerosis. Baltimore, MD: Williams & Wilkins 1996; 275—284.
3. Matucci-Cerinic M., Generini S., Pignone A. New approaches to Raynaud's phenomenon. Curr Opin Rheumatol 1997; 544: 9—14.
4. Dhanabal M, Sethuraman N. Endogenous angiogenesis inhibitors as therapeutic agents: historical perspectives and future direction. Recent Patients Anticancer Drug Discov 2006; 1 (2): 223—236.
5. Stannard A.K., Khurana R., Evans I.M. et al. Vascular endothelial growth factor synergistically enhances induction of E-selectin by TNF-a. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2007; 27: 494—502.
6. Zachary I., Mathur A., Yla-Herttuala S., Martin J. Vascular protection: a novel nonangiogenic cardiovascular role for VEGF. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2000; 20: 1512—1520.
7. Folkman J. A new link in ovarian cancer angiogenesis: lysophos-phatidic acid and vascular endothelial growth factor expression. J Natl Cancer Inst 2001; 93 (10): 734—735.
8. Grosjean J., Kiriakidis S., Reilly K. et al. Vascular endothelial growth factor signalling in endothelial cell survival: a role for NF kappa B. Biochem Biophys Res Commun 2006; 340: 984—994.
9. Михайленко Д.С., Григорьева М.В., Землякова В.В. и др. Моле-кулярно-генетические нарушения в гене VHL и метилирование некоторых генов-супрессоров в спорадических светло-клеточных карциномах почки. Онкоурология 2010; 2: 32—36.
10. Auguste P., Lemire S., Larrieu-Lahargue F. et al. Molecular mechanism of tumor vascularization. Crit Rev Oncol Hematol 2005; 54 (1): 53—61.
11. McMahon G. VEGF receptor signaling in tumor angiogenesis. Oncologist 2000; 5 (11): 3—10.
12. Maurer B., Distler A., Suliman Y.A. et al. Vascular endothelial growth factor aggravates fibrosis and vasculopathy in experimental models of systemic sclerosis. Ann Rheum Dis 2013; doi: 10.1136/ annrheumdis-2013-203535.
13. Folkman J. Clinical applications of research on angiogenesis. New Engl J Med 1995; 333 (26): 1757—1763.
14. Folkman J., Klagsburn M. Angiogenic factors. Science 1987; 235: 442—447.
15. Алекперов Т., Тимченко А.В., Насонов Е.Л. Фактор некроза опухоли альфа при системной склеродермии. Клин мед 2003; 12: 4—7.
16. Ingegnoli F., Trabattoni D., Sarasella M. et al. Distinct immune profiles characterize patients with diffuse or limited systemic sclerosis. Clin Immunol 2003; 108 (1): 21—28.
17. Чеботарева Н.В., Бобкова И.Н., Козловская Л.В. Нефрол и диализ 2006; 1: 26—35.
18. Гусева Н.Г. Системная склеродермия. В кн.: Насонова В.А., Насонов Е.Л. Ревматология. Национальное руководство. М: ГЭОТАР-Медиа 2008: 447—466.
19. Valentini G., Della Rossa A., Bombardieri S. et al. European multicentre study to define disease activity criteria for systemic sclerosis. II. Identification of disease activity variables and development of preliminary activity indexes. Ann Rheum Dis 2001; 60 (6): 592—598.
20. Muangchant C, Pope J.E. The significance of interleukin-6 and C-reactive protein in systemic sclerosis: a systematic literature review. J Rheumatol 2012; 39 (6): 1120—1124.
21. Strutz F, Okada H, Neilson E.G. Clin Exp Nephrol 2001; 5: 62—74.
22. Kang D.H., Anderson S, Kim Y.G. Impaired angiogenesis in the aging kidney: Potential role of VEGF and TSP-1 in renal disease. Am J Kid Dis 2001; 37: 601—611.
23. Reed M.J., Corsa A., Pendergrass W. et al. Neovascularization in aged mice: delayed angiogenesis is coincidient with decreased levels of transforming grow factor betal and type I collagen. Am J Pathol 1998; 152: 113—123
Поступила 26.11.2013
