CC BY
27
УДК 579. 835.8.097.5
© Е.В. Камнева, А.Р. Умерова, В.Н. Левитан, Н.В. Камнева, 2010
Е.В. Камнева, А.Р. Умерова, Б. Н. Левитан, Н.В. Камнева
ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ИНФОРМАТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ ИФА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ HELICOBACTER PYLORI ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ
ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава»
У 41 больного язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки и у 20 больных язвенной болезнью желудка, а также у 12 здоровых лиц пониженного питания (контрольная группа) определялось наличие антител к Helicobacter pylori с помощью 4-х тест-систем ИФА. Статистически достоверные расхождения результатов по данным 4-х тест-систем ИФА были обнаружены только у лиц пониженного питания. У больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки и язвенной болезнью желудка расхождения результатов были значительными (46% и 40% случаев, соответственно), но не достигали статистической достоверности; следовательно, каждая из четырех тест-систем ИФА может быть использована для диагностики хеликобактериоза, связанного с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки или язвенной болезнью желудка.
Ключевые слова: диагностика, иммуноглобулины, Helicobacter pylori, язвенная болезнь.
E.V. Kamneva, A.R. Umerova, B.N. Levitan, N.V. Kamneva
THE DIAGNOSTIC INFORMATION OF DIFFERENT TEST-SYSTEMS OF IFA FOR ESTIMATION OF HELICOBACTER PYLORI IN ULCER DISEASE
41 patients with ulcer disease of duodenal intestine and 20 patients with ulcer disease of the stomach and 12 healthy persons with decreased nutrition (control group) were examined for determination of presence of antibodies to Helicobacter pylori with the help of 4 test-systems IFA (immunoferment analysis). Statistically proved differences of results were found out only in persons with decreased nutrition.
The examined groups of patients with ulcer disease had significant differences (46%, 40% of cases), every of 4 test-system IFA could be used for diagnostics of Helicobacteriosis connected with ulcer disease.
Key words: immunoglobulins, Helicobacter pylori, ulcer disease, diagnostics.
Самым распространенным серологическим методом диагностики инфекции Helicobacter pylori (Hp) является метод иммуноферментного анализа (ИФА) [7, 8, 9]. Поскольку Нр-инфекция является хронической и ослабление инфекции невозможно, то положительные серологические тесты у нелеченых пациентов указывают на наличие текущей инфекции, и, несмотря на то, что уровень антител в процессе эрадикации падает, серологическая реакция остается положительной в течение ряда лет [1, 5, 7].
Очень часто при использовании нескольких тест-систем ИФА для определения антител к Нр результаты оказываются противоречивыми или неоднозначными, трактовать их в отношении конкретного больного оказывается очень трудно, поэтому встает вопрос: будут ли также неоднозначны результаты ИФА по определению антител к Нр (иммуноглобулинов G, иммуноглобулинов A, недифференцированных по классам иммуноглобулинов), если анализировать целые группы больных, проводя статистическую обработку результатов?
Материалы и методы. Набор больных проводился рандомизированно, по мере поступления больных в стационар; одним из требований рандомизации было участие в исследовании только мужчин, так как контрольную группу (лица пониженного питания) составили только мужчины. Набор во все группы был прекращен, когда в одной из трех групп появились статистически достоверные различия между результатами тест-систем. Сформировались следующие группы: 1) из больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДК), возраст от 18 до 77 лет; 2) из больных язвенной болезнью желудка (ЯБЖ), возраст от 18 до 70 лет; 3) из лиц пониженного питания (контрольная группа), средний индекс массы тела и его стандартное отклонение 17,2 ± 0,8, возраст от 17 до 24 лет.
Численность групп составила: ЯБДК - 41 больной, ЯБЖ - 20 больных и 12 лиц пониженного питания. ИФА проводился с помощью четырех тест-систем: 1) «ХеликоБест-антитела», недифференцированные по классам иммуноглобулины, («ВекторБест», Россия); 2) «IgG Helicobacter pylori» («BiohitPic», Финляндия); 3) «IgG Helicobacter pylori» («Viro Immun», Германия); 4) «IgA Helicobacter pylori» («Viro Immun», Германия). При поступлении в стационар всем обследуемым проводилось эндоскопическое исследование с взятием гастробиоптатов для проведения ПЦР ^agA ген) и определения количества микробных тел Нр по Христенсену. Для поиска статистических различий между результатами тест-систем ИФА применяли непараметрический метод повторных сравнений с использованием критерия Фридмана (xr2); для поиска статистических различий между группами по частоте обнаружения микробных тел Нр и сagA гена Нр применяли метод множественных сравнений с использованием критерия Крускала-Уоллиса (Н). Найденные значения х2 и Н считались достоверными при р<0,05.
Результаты. Использование четырех тест систем ИФА привело, как и ожидалось, к неоднозначности результатов в отношении части обследуемых (табл. 1).
Таблица 1
Доля пациентов (выраженная в процентах), у которых результаты четырех тест-систем ИФА были неоднозначными
ЯБДК ЯБЖ Лица с недостаточностью питания
«2 и 2» 17% 10% 25%
«1 и 3» 29% 30% 42%
Суммарно 46% 40% 67%
Примечание: «2 и 2» означает, что две тест-системы дали положительный результат, а две -отрицательный; «1 и 3» означает, что одна тест система дала положительный результат, а три -отрицательный (или наоборот: одна - отрицательный, а три - положительный)
Статистически достоверные различия между результатами четырех тест-систем раньше появились у контрольной группы (лица пониженного питания), что можно было ожидать уже из процентного соотношения: 67% - у лиц с недостаточностью питания, при 46% - у больных ЯБДК и 40% - у больных ЯБЖ. У больных ЯБДК и ЯБЖ результаты четырех тест-систем ИФА дали более близкие между собой значения, которые не достигли статистически достоверных различий. В то же время обсемененность слизистой оболочки желудка микробными телами Нр и наличие са§А-гена в гастробиоптатах были приблизительно одинаковыми во всех трех группах (рис.1 и рис.2).
Обсуждение результатов. Антральный хеликобактерный гастрит является непременным атрибутом больных язвенной болезнью, и есть сведения, что концентрация антихилекобактерного 1§0 в сыворотке крови хорошо коррелирует с плотностью обсемененности Нр антрального отдела и активностью там хронического гастрита [10], но есть, напротив, данные, что корреляция между уровнем антихеликобактерных антител в крови и плотностью колонизации Нр отсутствует [11].
В настоящем исследовании в гастробиоптатах обсемененность микробными телами Нр и обнаружение са§А гена были приблизительно одинаковы во всех трех группах пациентов, но по иммунологическим тестам в группе лиц пониженного питания были обнаружены статистически достоверные различия между результатами четырех тест-систем, а поскольку речь шла о лицах, не имевших клинических и эндоскопических признаков язвенной болезни,
но, как оказалось, являющихся носителями Нр и еа§Л гена, такое наблюдение было расценено нами как отсутствие сформированного иммунного ответа на Нр.
30 25 20 15 10 5 0
□ Нр+ ■ Нр-
ЯБДК
ЯБЖ
Лица с недостаточностью питания
Рис. 1. Обнаружение микробных тел Нр по Христенсену в гастробиоптатах в трех группах пациентов; по оси ординат показано количество пациентов; статистически достоверных различий между группами не выявлено: Н (критерий Крускала-Уоллиса) = 8,372, р =0,079
□ cagA+ ■ cagA-
±
ЯБДК
ЯБЖ
Лица с недостаточностью питания
Рис. 2. Обнаружение cagA гена в гастробиоптатах в трех группах пациентов; по оси ординат показано количество пациентов; статистически достоверных различий между группами не выявлено: Н (критерий Крускала-Уоллиса) = 7,212, р = 0,125
В настоящее время для ИФА в качестве антигена применяют препараты термической инактивации или ультразвуковой дезинтеграции Нр. При использовании этого метода в общем титре антител наиболее ценным является определение уровней ^О- и ^А-антител к Нр [3], хотя известно, что подавляющая часть плазмоцитов в слизистой оболочке людей,
инфицированных Нр, секретирует иммуноглобулины класса G [4, 6]. При вышеуказанном методе получения антигена сам феномен значительного расхождения результатов иммунологических тестов (как при анализе больных в группах, так и в отношении индивидуального больного), вероятно, связан с антигенным разнообразием циркулирующих штаммов Нр, в том числе, и штаммов, используемых для производства антигена [2].
Выводы. Метод обнаружения антител к Нр с использованием нескольких тест-систем ИФА у больных ЯБДК и ЯБЖ дал весьма высокий процент расхождения результатов (46 и 40%, соответственно), но эти расхождения не были статистически достоверными, притом, что в контрольной группе расхождения достигали статистической достоверности. Данный факт означает, что для диагностики хеликобактериоза, связанного с ЯБДК и ЯБЖ, могут в равной степени использоваться и тест-системы для определения IgG, и для IgA, и для недифференцированных классов иммуноглобулинов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Исаков В.А., Цодиков Г.В. Серологические методы диагностики инфекции Helicobacter pylori: показания к применению и перспективы использования // Клин. лаб. диагностика. - 2000. - № 1. - С. 38-41.
2. Камнева Н.В., Горбачева А.П., Жуховицкий В.Г. Сравнение аналитических возможностей шести тест-систем для серологической диагностики хеликобактериоза // 5 Съезд Научого Общества Гастроэнтерологов России и XXXII сессия ЦНИИ гастроэнтерологии: материалы съезда. - М.: Анахарсис, 2005. - С. 87-88.
3. Серебрянская М.В. Прогностическая значимость выделения Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью // Клин. медицина. - 1994. - Т. 72, № 6. - С. 40-42.
4. Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Гладилина М.В. [и др.]. Содержание антител к Helicobacter pylori при болезнях органов пищеварения // Экспер. и клин. гастроэнтерология. - 2006. - № 1. - С. 52-58.
5. Маев И. А., Зайратьянц О.В., Кучерявый Ю.А. Helicobacter pylori: эпидемиология, диагностика, основы эрадикационной терапии: Учебно-методическое пособие ВУНМЦ МЗ РФ. - М., 2000. - 60 с.
6. Царегородцева Т.М., Серова Т.Н. Диагностическое и прогностическое значение показателей гуморального иммунного статуса при заболеваниях органов пищеварения // Экспер. и клин. гастроэнтерология. - 2007. - № 2. - С. 93-99.
7. Шептулин А.А., Киприанис В.А. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori: основные положения согласительного совещания «Маастрихт-3» // Рос. журн. гастроэнт., гепатол., колопроктол. - 2006. - Т. 16, № 2. - С. 88-92.
8. Atherton J.C. Non-endoscopic tests in the diagnosis of Helicobacter pylori infection // Aliment. Pharmacol. Ther. - 1997. - Vol. 11, Suppl. 1. - P. 11-20.
9. Laheij R.J., Straatman H., Jansen J.B. [et al.]. Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: a review // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol. 36, № 10. - P. 2803-2809.
10. Kreuning J., Lindeman J., Biemond I. [et al.]. Relation between IgG and IgA antibody titres against Helicobacter pylori in serum and severity of gastritis in asimptomatic subjects // J. Clin. Pathol. - 1994. - Vol. 47,
№ 3. - P. 227-231.
11. Chen T.S., Li F.Y, Chang F.Y. [et al.]. Immunoglobulin G antibody against Helicobacter pylori: Clinical implications of levels found in serum // Clin. and Diagnostic Laborat. Immunol. - 2002. - Vol. 9, № 5. - Р. 1044-1048.
Камнева Елена Вадимовна, аспирант кафедры клинической фармакологии и фитотерапии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава», Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел.(8512) 44-74-96, e-mail: [email protected]
Умерова Аделя Равильевна, кандидат медицинских наук, заведующая кафедрой клинической фармакологии и фитотерапии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава»
Левитан Болеслав Наумович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой факультетской терапии с эндокринологией ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава»
Камнева Наталия Вячеславовна, доктор медицинских наук, доцент кафедры пропедевтики внутренних болезней с курсом ревматологии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава»
