Действие пробиотиков на лекарственную устойчивость микобактерий туберкулеза Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

ПРЕПАРАТЫ

УДК 576.8.06:576.825.211:615.7.779.9

ДЕЙСТВИЕ ПРОБИОТИКОВ НА ЛЕКАРСТВЕННУЮ УСТОЙЧИВОСТЬ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА

\Лазовская А.Л.,1Воробьева З.Г.,2Гришина Н.В.

1 ГНУ Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук, г. Н. Новгород

2 ГУЗ НО «Противотуберкулезный диспансер Канавинского р-на г. Н. Новгорода»

Пробиотики споробактерин и бактисубтил обладают антагонистической активностью в отношении клинических штаммов микобактерий туберкулеза. Степень антагонистической активности или индекс блокирования роста зависят от типа пробиотика и исследуемого клинического изолята. Из 20 штаммов лекарственно-устойчивых микобактерий, подвергшихся действию споровых пробиотиков in vitro, у 16 появилась чувствительность к одному, двум, трем, четырем или к пяти лекарственным препаратам.

Ключевые слова: пробиотики, споробактерин, бактисубтил, микобактерии туберкулеза

у J

Одной из важнейших проблем лечения туберкулеза людей во всем мире является полирезистентность (ПР) штаммов М.tuberculosis. Причиной ПР штаммов является неоконченные курсы специфического лечения, неправильное лечение больного монопрепаратами и, наконец, как первичное заражение ПР штаммами, так и реинфекция в процессе тесного контакта в лечебных учреждениях с больными, носителями ПР штаммов [4]. В литературе есть немногочисленные упоминания о необходимости включения пробиотиков для борьбы с дисбактериозом кишечника в программу лечения больных туберкулезом людей, но ни антагонистическая активность (АА) пробиотиков по отношению к клиническим штаммам микобактерий, ни влияние пробиотиков на их лекарственную устойчивость (ЛУ) не изучались.

Целью настоящей работы является изучение АА споровых пробиотиков по отношению к свежевыделенным туберкулезным штаммам и исследование влияния пробиотиков in vitro на их лекарственную устойчивость.

Материалы и методы

Было изучено 20 лекарственно-устойчивых штаммов от 20 больных туберкулезом людей. Видовую принадлежность штаммов исследовали культурально-биохи-мическими и хемотаксономическими методами [1,2]. Устойчивость к лекарственным препаратам проверяли

в соответствии с Приказом №109 от 21.09.03. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в РФ». Посевным материалом от больных служила мокрота, деконтаминированная NALC-NaOH. Посевы образцов мокроты проводили на среды Левенштейна-Иенсена и Финн-2. В качестве споровых пробиотиков использовали бактисубтил (B.cereus 1Р5832) и споробактерин (B.subtilis 534). Изучение АА пробиотиков на основе споровых культур проводили с применением стерильных нативных фильтратов и гретых культур пробиотиков, наслаиваемых на обычные яичные среды [3,5]. Выращивание штаммов микобактерий проводили при температуре 37 °С в течение 25 дней. Индекс блокирования роста (ИБР) изучали путем вычисления отношений числа колоний, выросших на контрольной среде без пробиотика, к числу колоний, выросших на среде с пробиотиком. Максимумом ИБР считали число 10.

Результаты и обсуждение

По результатам видовой идентификации все 20 штаммов принадлежали к М.tuberculosis. Как видно из таблицы, АА четырех препаратов двух споровых пробиотиков неоднозначна и зависит от типа пробиотика, от штамма микобактерий и от типа препарата, полученного из пробиотика (т.е. стерильный фильтрат или гретая культура).

-декабрь 2009 г.

Результаты изучения индекса блокирования роста микобактерий туберкулеза препаратами на основе споровых культур

Таблица

п/п

О S ё

1. Рах-нЮ.В.

2. Гор-в А.А.

3. Сл-в С.Н.

4. Ег-в А.Н.

5. Бат-вА.В.

6. Сип-в А.А.

7. Гор-в М.Е.

8. Мал-в СЛ.

9. Вор-в C.B.

10. Кр-о В.Л.

11. Лег-в А.А.

12. Уж-ва Г.А.

13. Мас-вИ.В.

14. Чет-нГ.А.

15. Куб-нА.М.

16. Рум-ва Н.В.

17. Пау-на Е.Б.

18. Бол-вВ.Ю.

19. Сл-в В.П.

20. Ос-наИ.В.

Ц

a

2002 2006 2003

2003 2008 2008 2008 2008

2005

2006 2002

2007

2005

2004 2002

2008

2006

2007

2008 2007

s з

X S

ils

S * 2 g

S 0> D-

£ i© л

!§§■ si

о

7 ПР 7ПР

8 ПР 6 ПР 5 ПР 5 ПР

4 ПР

3 ПР

5 ПР

4 ПР

6 ПР

6 ПР

7 ПР

5 ПР

2 ПР ЗПР 5 ПР 1 ПР

3 ПР 7 ПР

Бактисубтил стерильный фильтрат

PCP

9 13 3

3

10 7 0 0 о 2

4 2 7 2 0 2

5 3 0 0

ИБР

4.2

4.3 1,1 6

7.5 3

1

2.6 3

7.5

4.3 10 6 3

5

2.4 10 10

6

6,7

Бактисубтил гретая культура

PCP

2 3 0 0 7 7 0 0

3 2

4 2

5 4 0 0 3 О О О

ИБР

1 3 1

1,5 7,5 1 1 1 6 3

1.7

7,5 1,2 6

3.8 3

4,3 5

1,5 1

Споробактерин стерильный фильтрат

Споробактерин гретая культура

PCP

11

13

7 7 10 0 о о о

7 7 2 2 О О 5 О О О

ИБР

2,2 4,3

3

4,3 1

4

3,8

5

5

6 2 1 3

7,5 3 6

3,3 2 5

PCP

2 О 3

3

4

4 О О О О 2 2

5 О О О 3

о о о

ИБР

1,9 3

1,5 2 3 3

1,3 1 10 2,5 6 10 7,5 1

7,5 1,5 3,3 6,7 7,5 6,7

Рч

M S

2.3 3,7

1.7 3,1 5,6 2,0

1.8 2,1 6

4,5 4,5

7.4 4,0 3,3 6,0

2.5 5,9 6,3 4,3 4,9

Примечание: ИБР - индекс блокирования роста PCP - разница сроков роста - исследование не проводили

ПРЕПАРАТЫ

Индекс блокирования роста (ИБР) у 20 штаммов колебался от 1 до 10, причем клинические изоляты по среднему значению ИБР можно было условно разделить на три группы: ИБР от 5 до 7 (6 штаммов), ИБР от 3 до 4 (9 штаммов), ИБР от 1 до 2 (5 штаммов). Другим интересным показателем явилось отставание в росте культур на средах с препаратами пробиотиков по сравнению с контролем (разница сроков роста - PCP). Показатель PCP колебался от 0 до 13 дней. На рисунке представлены результаты изучения лекарственной чувствительности

изолятов, выращенных на средах со стерильным фильтратом и гретой культурой споробактерина и бактисубти-ла. На оси ординат показаны проценты от 20 штаммов, восстановивших чувствительность к определенным лекарственным препаратам. У 16 из 20 штаммов микобакте-рий восстановилась чувствительность к одному, двум, трем, четырем или пяти лекарственным препаратам.

Известно, что в состав фильтратов пробиотичес-ких препаратов входит большое количество различных бактериоцинов. Считается, что штаммы с множе-

Рисунок 1-4.

Восстановление чувствительности к лекарственным препаратам у 20 клинических изолятов под действием бактисубтила и споробактерина.

Бактисубтил - стерильный фильтрат

%

40 30 20

10 0

Рис. 1

п п п п

2 3 4 5

6 7 8 9 10 11

Антибактериальные препараты

Бактисубтил - гретая культура

%

30 20 10 0

— —

П п п

2 3 4 5

Рис. 2

6 7 8 9 10 11

Антибактериальные препараты

1

1

Споробактерин - стерильный фильтрат

%

30 20 10 0

п П п п п п

Рис. 3

23456789 10 11

Антибактериальные препараты

Споробактерин - гретая культура

%

30 20 10 0

п П п п п

1 2 3 4 5 6

Рис. 4

7 8 9 10 11

Антибактериальные препараты

1

Примечание: 1 - стрептомицин 10 мкг/мл; 21 — стрептомицин 25 мкг/мл; 31 - изониазид 1 мкг/мл; 41 — изониазид 10 мкг/мл; 51 - канамицин 30 мкг/мл; 61 - этамбутол 2 мкг/мл; 71 - рифампицин 40 мкг/мл; 81 - этионамид 30 мкг/мл; 91 — офлоксацин 2 мкг/мл; 101 — капреомицин 30 мкг/мл; 101 — ПАСК (парааминосалициловая к-та) 1 мкг/мл.