CC BY
24
Лечение и профилактика
УДК 619:616.995.1-085
ДЕЙСТВИЕ ОВОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА «БИНГСТИ» НА КЛЕТОЧНЫЕ МЕМБРАНЫ ЖЕЛТКА ЯИЦ КУР
М. Ю. СЕРЕГИН аспирант
Ростовский государственный строителъныйуниверситет,
344022, г. Ростов-на-Дону, ул. Социалистическая, 162, e-mail: michael_seregin@mail.ru
Изучено влияние овоцидного препарата «Бинг-сти» на перекисное окисление липидов мембран высших позвоночных в модельной системе липопротеидов куриного желтка. Определены параметры железоини-циированной хемолюминесцеиции и уровень малонового альдегида. Наиболее существенные изменения параметров хемолюминесцеиции получены при использовании смеси различных концентраций овоцидного препарата «Бингсти» с ионами двухвалентного железа. Наиболее заметные изменения уровня малонового диальдегида в липопротеидах желтка установлены при использовании препарата «Бингсти» и смеси максимальной биоэффективной концентрации (0,02 мл препарата/мл желтка) и ионов двухвалентного железа. Овоцидный препарат «Бингсти» не оказывает влияние на перекисное окисление липидов в липопротеиновых компонентах мембран высших позвоночных.
Ключевые слова: хемолюминесценция, малоновый альдегид, липопротеиды, клеточные мембраны, куриный желток, препарат «Бингсти».
В последнее время при проведении мероприятий по обеззараживанию объектов окружающей среды отдается предпочтение методам, основанным на применении овоцидных препаратов растительного происхождения [4]. К таким препаратам относится «Бингсти», производимый из ювенильной формы паслена клубненосного. Высокий эффект дегельминтизации достигается уже через 8 ч после ввода препарата в объект (сточные воды, их осадки, почва) и при минимальных дозах (10-6 г/л) [1]. Биохимическая активность препарата еще не изучена. В частности, не исследовано его влияние на перекисное окисление липидов (ПОЛ), воздействие на липопротеиновые компоненты мембран высших позвоночных в стандартных модельных системах биохимических исследований, что делает невозможным прогнозирование экологического риска от его применения и присвоения ему класса опасности. В качестве консерванта использован бензоат натрия в концентрации от 0,01 до 0,03 % по массе.
Целью данной работы было исследование свойств препарата «Бингсти» в стандартной модельной системе биохимических исследований - липопротеидах (ЛП) куриного желтка [2, 6]. В качестве показателей уровня свободнора-дикальных процессов и ПОЛ были выбраны параметры железоинициирован-ной хемилюминесценции (ХЛ) и уровень малонового диальдегида (МДА) в исследуемых образцах [2].
104_
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
Материалы и методы
Исследования проводили трехкратно. Определяли параметры, характеризующие ранние этапы хемилюминесценции: величина фонового свечения, быстрой вспышки, амплитуда максимального свечения, а также показатели интенсивности процесса в целом: суммарный выход квантов (светосумма) и пиковое нарастание интенсивности свечения биопробы ^а) при диапазоне концентраций: 10-3 Стах (производное биоэффективной концентрации), биоэффективная концентрация Стах (0,02 мл препарата/мл липопротеидов), не-разведенный препарат (1мл препарата/мл желтка), смеси различных концентраций препарата с ионами Бе+ : Бе+ + Стах и Бе+ + неразведенный препарат. При определении уровня МДА в липопротеидах желтка использовали следующие концентрации препарата «Бингсти» и бензоата натрия: 10-3 Стах, Стах, Бе+2 + Стах и Бе+2+неразведенный препарат; бензоат N 10-6 Стах, бензоат N 10-3 Стах, бензоат N 0,2 Стах, смесь Бе + бензоат N 10-3 Стах.
Исследование ХЛ проводили по методике Шерстнева [2]. Определяли интенсивность ХЛ при добавлении ионов двухвалентного железа (Бе2 ) и препарата «Бингсти». Исследовали фоновое свечение (фон, люкс) сразу после ввода компонента, высоту быстрой вспышки (Ь, мм), ранний этап ХЛ, амплитуду максимального свечения (1тах, Гц), поздний этап ХЛ, светосумму ^ш), суммарный выход квантов свечения, tga - скорость нарастания интенсивности свечения [2]. Исследование уровня МДА в липопротеидах желтка проводили по методике Владимирова [1].
ЛИ желтка получали по методике Котерова [3]. Исследовали активность препарата «Бингсти»: биоэффективную концентрацию (0,2 Стах и 10-3 Стах/мл желтка); неразведенный препарат (0,02 мл /мл желтка); смесь биоэффективной концентрации и железа (0,02 мл/мл желтка + 1мМ Бе 2/ л); смесь картофельного сока и железа (0,02 мл/мл желтка +1 мМ Бе+2/л). В качестве молекулярного прооксиданта использовали железо Бе+2 в виде Бе804 (1 мМ/л).
Уровень МДА определяли при воздействии препарата «Бингсти» и бензоата натрия. Исследовали биоэффективную концентрацию Стах (0,1 мл препарата + 4,9 мл физраствора). Статистический анализ данных осуществляли с помощью программы StаtgrаpЫcs.
Результаты и обсуждение
При исследовании железоинициированной ХЛ установлено, что показатель фонового свечения сразу после ввода компонента при использовании неразведен-ного препарата составил 2,19, что на 9,5 % больше, чем в контроле (табл. 1). Более значимые данные фонового свечения отмечали при использовании смеси Бе 2 + Стах и Бе+2 + неразведенный препарат - 2,70 и 2,94 соответственно или на 35 и 46 % больше по сравнению с контролем (Р < 0,05). Высота быстрой вспышки на раннем этапе ХЛ при нанесении неразведенного препарата составила 4,42, что на 43 % больше показателя контроля. Существенные различия данного показателя по сравнению с контролем были при использовании смеси Бе+2 + Стах и Бе+2 + неразведенный препарат - 5,33 и 6,44 (72,5 и 108,4 %). Показатель амплитуды максимального свечения на позднем этапе ХЛ при применении неразведенного препарата составил 5,21, что на 6,1 % больше контроля, а при использовании смеси Бе+2 + Стах и Бе2+ + неразведенный препарат - 7,54 и 6,44 или на 53,5 и 31,2 % превышал контроль. Показатель суммарного выхода квантов свечения при использовании неразведенного препарата составил 17,81, что на 4,9 % меньше контроля и при применении смеси Бе 2 + Стах и Бе+2 + неразведенный препарат - 23,83 и 21,29 или на 27,3 и 13,72 % больше контроля. Показатель скорости нарастания интенсивности свечения при использовании неразведенного препарата составил 0,45, что на 95,6 % больше контроля и при применении смеси Бе+2 + Стах и Бе+2 + неразведенный препарат - 0,41 и 0,30 или на 78,3 и 30,4 % больше контроля.
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
Таблица 1
Изменение параметров железоинициироваиной ХЛ в ЛП куриного желтка при исследовании активности препарата «Бингсти»
Показатель Контроль 10-3 с ^тах с ^тах Неразведенный препарат Бе+2 + Г ± ^ ' ^тах Бе+2 + неразведенный препарат
М±т % ОТ контроля М±т % ОТ контроля М±т % ОТ контроля М±т % ОТ контроля М±т % ОТ контроля
Бои 2,00±0,06 2,60± 0,41 30,0* 2,26± 0,28 13,0 2,19± 0,09 9,5 2,70± 0,42 35,0* 2,94± 0,35 46,0*
Н 3,09±0,24 4,15± 0,24 34,4 4,41± 0,69 42,7 4,42± 0,47 43,0 5,33± 0,17 72,0* 6,44± 0,97 108,4
1тах 4,91±0,31 4,15± 0,24 - 15,5 5,51± 0,79 12,2 5,21± 0,87 6,1 7,54± 1,29 53,5* 6,44± 0,97 31,2
8т 18,72±0,9 16,04± 0,57 - 14,3 22,81± 1,5 21,8 17,81± 1,1 - 4,9 23,83± 2,0 27,3 21,29± 1,1 13,72
гяа 0,23±0,04 16,04± 0,57 117 0,50± 0,02 34,8 0,45± 0,02 95,6 0,41± 0,03 78,3 0,30± 0,01 30,4
* - различия с контролем достоверны при Р < 0,05.
106
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
Исследование уровня МДА в ЛП куриного желтка показало, что при вводе овоцидного препарата «Бингсти» наиболее существенные изменения были получены при использовании неразведенного препарата и смеси нераз-веденного препарата и биоэффективной концентрации Стах с ионами двухвалентного железа. При использовании неразведенного препарата уровень МДА в ЛП желтка снизился на 64 % по сравнению с контролем и составил 2,877±0,055 нмоль/л; при использовании смеси Бе+2 + Стах уровень МДА превысил контрольные показатели на 405 % и составил 3,06±0,13 (Р < 0,05); при использовании смеси Бе2++ неразведенный препарат уровень МДА в ЛП желтка в 3,74 раза был выше по сравнению с контролем и составил 2,88±0,05 нмоль/л (Р < 0,05).
При вводе бензоата натрия в систему желточных ЛП установлено, что наиболее существенные изменения уровня МДА получено при использовании смеси Бе + 10-3 Стах бензоат № - 1,19±0,03 (Р < 0,05) что в 12,12 раз превосходило показатели контрольной группы (1,16±0,03). Также значительное изменение уровня МДА было получено при использовании 0,2 Стах -0,538±0,016, что в 4,91 раза превосходило контрольные значения. Изменения уровня МДА в желточных ЛП, полученные при использовании других концентраций бензоата, были несущественны (табл. 2).
Таблица 2
Изменение уровня МДА в ЛП куриного желтка при исследовании активности бензоата натрия
Показатель Контроль Бензоат Na 10-6 г Бензоат Na 10-3 г max Бензоат Na 10-6 0 2 С max Fe + Бензоат Na 10"3 Г max
M±m % от контроля M±m % от контроля M±m % от контроля M±m % от контроля
Уровень МДА (нмоль) 0,09± 0,01 0,10± 0,01 11,1 0,5± 0,02 22,2 0,54± 0,02 4,91 3,06± 0,13 11,73
Полученные результаты свидетельствуют о том, что овоцидный препарат «Бингсти» и бензоат натрия в дозах 10-6 и 10-9 г/л не оказывают влияние на свободнорадикальные процессы и перекисное окисление липидов в модельной системе ЛП куриного желтка, следовательно, не оказывает канцерогенное и мутагенное воздействие на высших позвоночных, и может быть отнесен к малоопасным химическим соединениям (4 класс опасности). Это подтверждается результатами предыдущих исследований [2, 5].
В связи с тем, что воздействие компонентов препарата наблюдалось сра-зу после ввода в систему, о чем свидетельствует изменение величины фонового свечения и быстрой вспышки, то вероятен другой механизм воздействия на желточные ЛП [1, 6]. В состав сока ювенильной формы паслена клубненосного входят сапониноподобные вещества: азотсодержащие аналоги сапонинов (соласодин и томатидин); азотсодержащие стероиды (соланидин). Эти соединения хорошо растворимы в воде и обладают высокими поверхностно активными свойствами [3]. Вероятно этим обусловлено детергентное воздействие препарата «Бингсти» на ЛП желтка.
Использование малоопасных биогенных овоцидных препаратов позволит уменьшить загрязненность объектов окружающей среды (почва, сточные воды и их осадки) возбудителями гельминтозов.
Литература
1. Владимиров Ю.А., Арчакое A.M. Перекисное окисление липидов в биомембранах. - М: Наука, 1972. - 252 с.
_107
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
2. Грибова О.А. Научное обоснование технологии производства и применения растительных препаратов для дегельминтизации инвазированных объектов окружающей среды: Автореф. дис. ... канд. тех. наук. - Новочеркасск, 2003.- С. 1-4.
3. Красилъникова Л.А., Авксенътъева О.А., Жмурко В.В., Садовниченко Ю.А. Биохимия растений. - Ростов-на-Дону: Феникс, Харьков: Торсинг, 2004. - С. 179-180.
4. Малышева Н.С. Экологический мониторинг и профилактика паразитарных болезней в Центрально-Черноземмной зоне Российской Федерации: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. - М., 2006. - С. 27-28.
5. Серпокрылов Н.С., Грибова О.А., Гримайло Л.В. и др. Средство для обеззараживания сточных и водопроводных вод от яиц гельминтов. Патент № 2162823 РФ, 7 С 02 F 1/50. - Заявл. 15.10.1999.
6. Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К., Владимиров Ю.А. Активированная нильским синим железоиндуцированная хемилюминесценция желточных ли-попротеидов // Биофизика. - 1995. - Т. 40, Вып. 3. - С. 531-533.
The action of ovocyd preparation «Bingsti» on cellular membranes of eggs yolk of hens
M.J. Seregin
The results of the investigation of chemoluminescence's intense and malonic dialdehyde level in chicken egg's lipoproteins system witness about absence of ability of the «Bingsti» preparation's substances and natrium benzoate in 10-6 dozen to influence on peroxide lipid oxidation process in cell membranes of high vertebrates.
Keywords: chemoluminescence, malonic aldehyde, lipoproteids, cellular membranes, chicken yolk, preparation «Bingsti».
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
