CC BY
10
Вестник Ка^НЖУ №3-2018
УДК 615.451.16:582.769
М.К. Койлыбаева1, Т.О. Устенова1, Д.Ж. Батырбаева2, Ж.С. Алибаева2, К.К. Мустафина3
Акционерлш цогам «¥лттыц медициналыц университетi» 1Фармация MBKme6i, ««Фармацияныц уйъмдастырълуы, басцарылуы жэне экономикасы жэне клиникалыц фармация» кафедрасы 2Fылыми клинико-диагностикалыц зертхана, 3Жалпы медицина мектеб1, «Микробиология, вирусология жэне иммунология» кафедрасы
ПРОБИОТИГ1 БАР КОЛЛАГЕНД1 МЕМБРАНАЛАРДЫН, МИКРОБИОЛОГИЯЛЬЩ
БЕЛСЕНД1Л1Г1Н АНЬЩТАУ
K,азipгi тацда медицина саласында адам агзасында биохимиялыц жэне mypAÍ патологиялыц ypdícmepdí цалпына KeAmipemÍH жэне патогендi микроагзаларга царсы биологиялыц белсендi заттарды бвлетiн сапрофиттi микрофлораны цолданудыц жаца depeKmepi аныцталуда. Bacillus туцымдастыгыц бактериялары сан алуан mYpлi жэне eme кец таралган микроагзалар тобына жатады, сонымен цатар эpmYpлi жагдайларга жогары бeйiмдeлуiнe байланысты, топырацта, суда, ауада, тагам eнiмдepiндe, адам агзасында ке^нен таралган. Осы мацсатта зерттеу жумысыныц объeкmiсi ретнде Bacillus spp. микроагзаларыныц нeгiзiндeгi коллагeндi мембраналардыц микробиологиялыц тазалыгы жэне микробиологиялыц белсендлг аныцталды. TywHÖi свздер: коллаген, bacillus spp., микроагзалар, микробиологиялыц бeлсeндiлiк, микробиологиялыц тазалыц
Kipicne. Заманауи медицинаныц K;a3ipri тацдагы iргелi ма;саттарыныц 6ipi микробиологиялы; белсендшп бар жаца дэршк заттарды iздеу болып табылады. Bacillus туршщ бактериялары табигатта кецшен таралган жэне барлы; жерде кездеседi - суда, ауада, топыра;та жэне азы;-тулж ешмдершде, сонымен ;атар адамныц, жануардыц жэне жэндiктердiц агзаларында. Олар б1р;атар ;унды ;асиеттер жиынтыгына ие: кептеген эр тYрлi антибиотиктердi, сонымен ;атар ферменттердi (трансфераза, гидролаза, липаза), амин ;ыш;ылдарын, акуыздады, дэрумендердi, нуклеотидтердi ендiредi. Бул тYPдiц екiлдерi сырт;ы ортаныц жагдайларына жогары бейiмделгiштiгiмен жэне спора тYзу ;абiлеттерiмен сипатталады. Биопрепараттарды жасау Yшiн Bacillus тYрiнiц бактерияларын пайдалану болашагын багалай отырып, олар бас;а экзогендi микрофлора екiлдерiне Караганда келесi артьщшыльщтарымен ерекшеленедi: патогендi жэне шартты-патогендi бактериялардыц кец спектрiне ;атысты ай;ын антагонистiк белсендiлiгi, агзаныц кептеген ЖYЙелерiнiц физиологиялы; функцияларына жагымды эсер ету^ тiптi Yлкен концентрацияларда макроагза Yшiн осы тYPдiц кептеген екшдершщ зиянсыздыгы; жогары ферментативтiк белсендшп; литиялы; ферменттерге тура;тылыгы жэне осымен непзделген ас;азан-шек жолы бойында жогары емiр CYPуге ;абыеттшп; ендiрудiц технологиялылыгы; са;тау кезiндегi тура;тылыгы; экологиялы; ;аушазд^ь
Зерттеу жумысыныц ма^саты: Цурамында пробиотигi бар коллагендi мембраналардыц микробиологиялы; тазалыгын жэне микроб;а ;арсы белсендiлiгiн аны;тау. Зерттеу эдicтepi мен мэлiмeттepi. Зерттеу объекта ретiнде Bacillus spp. микроагзасы непзшде жасалган коллагендi мембраналар алынды. Микроагзалардыц культуралары Мюллер - Хинтон (Hi-Media, India) агарында есiрiлдi, микробиологиялы; тазалыгы терец, ей ;абатты жэне беткейлж эдiстер бойынша, ал микроб;а ;арсы эсерiнiц тиiмдiлiгiн (белсендiлiгiн) санды диффузия эдiсiмен зерттелдi. Зерттеу жумыстары Б. Атшабаров
атындагы гылыми- клинико диагностикалык лабораторияда жузеге асырылды.
Зерттеу нэтижелерi жэне талдау. Зерттеу аэробты жагдайларда все алатын мезофильдi бактериялар мен сацыраукулактарга санды; зерттеулерiн ЖYргiзуге мумкшдж бередi.
Жалпы микроб санын аныктау Yшiн Петри табакшаларында терец эдiсi, беткейлiк эдiсi бойынша себулер (егулер) ЖYргiзiлдi. Бiрiншi кезецде 85 зерттелетш сынаманыц 10,0 грамын 100,0 мл физикалык ерiтiндiсiнде ерiтiп, тест Yлгiсiн сынамага дайындап алынды.
Терец эдМ бойынша зерттеу: зерттеу Yшiн дайындалган тест Yлгiнi 1,0 мл-дi диаметрi 90,0 мм стерильдi Петри табакшасына куйып, оныц Yстiне ерiтiлген жэне 42,5 ± 2,5°С дейiн салкындатылган коректж агарды 15-20 млден куйып, табакшаны бiркелкi децгейде араластырылды. Бiраз уакыт бвлме температурасында устап катырылды. Беткейлiк эдiс бойынша зерттеу: ертндшщ темпераутрасы 42,5±2,50 С дейiн суытылган коректж агарды 15-20 мл-ден диаметрi 90,0мм, Петри табакшаларына куйылып, кеп^рыдь Зерттелетiн тест Yлгiсi 0,1мл-ден тамызып шпательмен бiркелкi етiп егiлдi, кеп^рыдь Барлык табакшаларды твцкерiп 300 С-тан 350 С температурадагы (200С - 250С дешн сацыраукулактар Yшiн) термостаттарга койылды. Егулерге KYнделiктi бакылау ЖYргiзiлдi. Колония санау 48-72 сагат (алдынала корытынды) жэне 5-шi KYнi (корытынды нэтижесi) ЖYргiзiлдi.
Екi ^абатты эд1с: Балкытылган коректж агарды диаметрi 90 мм стерильденген Петри табакшасына 15-20 мл мвлшерде куйылды жэне кептiрiлдi. Агар бет курга; болуы кажет.
Балкытылган 4 мл корект ортасы бар пробиркаларга (42,5±2,5 0 С сэйкес суытылган) 1 мл зерттелетш сынаманы куйып тез араластырып. Алдында дайындалган Петри табакшасындагы коректж агар Yстiне куйылып, табакша араластырылып кептiрiлдi. Зерттеу нэтижелерi 1 кестеде кврсетыген.
Кесте 1 - Эртyрлi eric эдiстерi бойынша КТБ (КОЕ) саны
Зерттелетiн Yлгi Егу эдiстерi
Терец Беткейлж Екщабатты
Жалпы аэробты мeзофильдi бактериялар
Пробиотиri бар коллагeндi мембраналар 0 0 0
Сацыраукулактар
Пробиотиri бар коллаreндi 0 0 0
мембраналар
Ец ыцтимал сан эдМ (ЕЫС):
Зeрттeлeтiн сынама eрiтiндi рeтiндe дайындалады, ecipy суспензиясын 1:10, 1:100, 1:1000 есебшде эр кайсысы уш
пробиркадан суйылтылады. Осылай уш суйылту Yшiн тогыз пробирка пайдаланылды.
Vestnik KazNMU №3-2018
1мл
1мл
1мл
т
№1 №2
Рыл 9мл
пептон пептон
lrp
зертелепн улп
1:10 (101)
№3
9мл пептон
утилизацияга
№4
9мл пептон
1:100 (102) 1:1000 (103)
Сурет 1
Бацылау
Ег1лген сынамаларды 300 С температурада 5 тэулж бойы инкубацияланды.
Кундел1кт1 пробиркадаты ес1мдерд1 ^адагалап отырды; ескен ес1нд1н1 белплеп ба;ыладык;. Сына; бойынша терт1нш1 пробиркадаты ;орект1 орта таза жэне еспеу ;ажет.
Кесте 2
1,0гр дэр1л1к материалдан микроорганизмдерд1ц ец ы;тимал санына сэйкес келет1н нэтижес1 2 кестеде керсетыген.
Дэр1л1к зат 8су1 бар эрб1р ;атардаты пробиркалардыц саны 1гр-даты ЕЫС
Пробиркадаты препараттын саны г (мл)
0,1 0,01 0,001
Пробиотиг1 бар коллагенд1 мембраналар 0 0 0 3
Зерттелет1н пробиотиг1 бар коллагенд1 мембраналардыц на;ты микроорганизм турлер1н1ц белшуш аны;тау. Диффузия-диагностикалы; ;орект1к орталарга егу. Термостат 370С 24-48сагатк;а, Сабуро агарын 300С - 5 тэул1кке ;ойылды. Инкубациялы; кезецнен соц ескен есшдыер ;аралды. Сынама нэтижес1нде зерттелген материалдарда Enterobacteriaceae (E.coli, Salmonella, Shigella жэне бас;ада шарты патогенд1 микроорганизмдер ) ту;ымдастарына жататын бактериялары, St. аиге^, Candida жэне Ps. аeruginosa бактериялары табылган жо;. Пробиотиг1 бар коллагенд1 мембраналардыц турл1 микробтарга ;арсы белсенд1л1пн аны;тау. Коллагенд1 мембраналардыц микроб;а ;арсы эсер1н1ц ти1мд1л1г1н (белсенд1л1г1н) санды диффузия эд1с1мен зерттелд1.
Диффузия эд1с1-микроб;а ;арсы белсенд1л1г1н аны;тау олардыц микроорганизмдерд1ц есуш тежеуге ;аб1летше нег1зделген. Аны;тау тытыз ;орект1к ортага агардыц диффузиясы ар;ылы тест культураларыныц есу1 то;талган (тежелген) айма;тарыныц елшемдер1н салыстыру ар;ылы жузеге асырылды.
Коллагенд1 мембраналардыц микроб;а ;арсы эсер1н1ц ти1мд1л1г1н багалау уш1н Америкалы; типт1к микроорганизмдер жиынтыгыныц (АТСС) S.aureus АТСС6538, C. albicans АТСС10231 тест - культуралары ;олданылды. Мембраналарды зерттеу ба;ылау тест-культураларымен жасанды турде контаминациялау ар;ылы жург1з1лд1. Жасанды турде контаминациялау ушш 28 - 37°С термостатта 18-20 сагат аралытында ес1р1лген тест-культураларынан суспензия дайындалды. Тест-культуралар суспензиясын дайындау: Эксперимент жасау ушш тэулжтж (18 саг.) тест - культуралары мен 0,9% натрий хлорид1
ерiтiндiсiн пайдалана отырып, S. aureus, C. albicans культураларыннан суспензия дайындап, оларды стандартты 0,5 бiрлiкке жеткiздiк (0,5 Mc Farland). Осы стандарт 0,5 бiрлiкте - шартты турде 1,0мл ерiтiндiде 1,5x108 бактериялык; клеткаларга сэйкес келедi. Стерильдi петри таба;шасына 20,0 мл-дан коректж агары куйылды. Агар кабатыныц калыцдыты аны;таудыц нэтижелерiне эсер етедi, сонды;тан коректж ортаны кврсетiлген мелшерде катац са;тау керек. Крректж орталар ретiнде Сабуро ортасы мен Мюллера Хинтон ортасы колданылды. Кррект орталардыц Yстiне газон эдiсiмен стандарты ластанган тест-культуралары еплдь Петри таба;шаларды 30 минут бойы белме температурасында устап, содан кейш агар ортасына (d = 6 мм) Yнгiршек (лунка) буртыланды, Yнгiршектерi: ортасынан 25,0 мм жэне оныц шетiнен 20,0 мм болатындай бiрбiрiнен тец кашы;ты;та орналасты.
Yнгiршiктердi зерттелетш бактерияга карсы эктрактпен толтырып, оларды 30 минут белме температурасында калдырып, сосын таба;шаларды аудармай термостат;а 28-370С температурада 24-48 сагат койылды. Инкубациялау уа;ытынан кейiн, микробтык; есудiц тежелу айма;тарын милиметрлiк елшеуiштермен, соныц шшде уцгiршектiц диаметрi елшендi. Тежелген айма;тардыц келемiне сэйкес антибактериалды жэне фунгицидтж заттардыц микроб;а карсы эрекеттерi багаланады.
Мунда 15,0мм-ге дейiнгi аймак; сына; микробтыц темен сезгiштiгi, 16,0- 25,0 мм - ай;ын, шамамен 25,0 мм-ден жогары айма; - жогары сезiмталдык;ты бiлдiредi. Пробиотигi бар коллагендi мембраналардыц микроб;а карсы эсерiнiц тшмдшпн зерттеу нэтижелерi 3 кестеде керсетыген.
Кесте 3-Коллагенд1 мембраналардыц микроб;а ;арсы эсер ету белсенд1л1г1
Зерттелет1н материал 8с1мн1ц тежелу айматы
S.aureus АТСС6538 C.albicans АТСС10231
Пробиотип бар коллагенд1 мембрана 28,0 мм 29,0 мм
Цорытынды. Пробиотигi бар коллагендi мембраналардыц «Микробиологиялык; тазалык;» сапа индексi бойынша ЦР МФ (5.1.4.3В санатындагы) дэрi-дэрмектерге койылатын талаптарга сэйкес келетiндiгi аны;талынды. Коллагендi мембраналардыц антимикробтык; эсерiн агарга диффузия
Jínimtiuz ЭСа^ЖМЩ QV? 3-2018 !
арк;ылы in vitro жагдайында зерттелдь Алынган мэлiметтерге сэйкес, зерттелген коллагенд мембраналар S. aureus жэне C. albicans микроагзаларына к;арсы айк;ын белсендыжке ие екенiн кврсеттi.
ЭДЕБИЕТТЕР TI3IMI
1 Feresin G. E., Tapia A. A., Bustos D. A. Antibacterial activity of some medicinal plants from San Juan, Argentina // Fitoterapia.— 2000.— Vol. 71.— P. 429-432.
2 15.04.2015ж. №338 буйрык; "Ык;тимал кзушэт химиялык; жэне биологиялык; заттарды пайдаланатын зертханаларга койылатын санитариялык-эпидемиологиялык талаптар"
3 31.05.2017ж.№357 буйрык; "Денсаулык; са;тау объектiлерiне койылатын санитариялыкэпидемиологиялык; талаптар
М.К. Койлыбаева1, Г.О. Устенова1, Д.Ж. Батырбаева2, Ж.С. Алибаева2, К.К. Мустафина3
АО «Национальный медицинский университет» 1Школа фармации, Кафедра организации, управления и экономики фармации и клинической фармации 2Научно-клиническая и диагностическая лаборатория 3Школа общей медицины, Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОЛЛАГЕНОВЫХ МЕМБРАН С ПРОБИОТИКАМИ
Резюме: на современном этапе в медицинской микробиологии появились новые данные, обосновывающие использование сапрофитной микрофлоры, которая способна в процессе своей жизнедеятельности вырабатывать биологически активные вещества, подавляющие рост патогенных микроорганизмов, и нормализующие различные патологические и биохимические процессы в организме человека. Высокая приспособляемость к различным условиям существования способствуют распространению бацилл в почве, воде, воздухе, пищевых продуктах и других объектах внешней среды. Таким образом целью нашего исследования являлась определение микробиологической активности коллагеновых мембран с пробиотиками. Ключевые слова: коллаген, bacillus spp., микроорганизмы, микробиологическая чистота, микробиологическая активность.
M.K. Koilybayeva1, G.O. Ustenova1, D. Batyrbayeva2, Zh.S. Alibayeva2, K.K. Mustafina3
JSC «National medical university» 1School of Pharmacy, department of Organization, management and economics of pharmacy and clinical pharmacy
2Scientific-clinical and diagnostic laboratory 3School of General Madicine, department of Microbiology, virology and immunology
DETERMINATION OF THE MICROBIOLOGICAL ACTIVITY OF COLLAGEN MEMBRANES WITH PROBIOTICS
Resume: at the present stage in medical microbiology new data justifying the use of saprophyte microflora, which is able to produce during their life of biologically active substances that inhibit the growth of pathogenic microorganisms, and normalizing the various pathological and biochemical processes in the body. High adaptability to different living conditions facilitate the spread of germs in soil, water, air, food and other environmental objects. Thus, the purpose of our study was to determine the microbiological activity of collagen membranes with probiotics.
Keywords: collagen, bacillus spp., microorganisms, microbiological purity, microbiological activity
