CC BY
15
ДЕТЕКЦИЯ МАРКЕРОВ АНГИОГЕНЕЗА В ТКАНИ ПИОГЕННОЙ ГРАНУЛЕМЫ
Гуськова Оксана Николаевна
Канд. мед. наук, доцент, зав. кафедрой патологической анатомии ГБОУ ВПО ТГМУМЗ России, г. Тверь
Скарякина Олеся Николаевна Ассистент кафедры патологической анатомии ГБОУ ВПО ТГМУ МЗ России, г. Тверь
АННОТАЦИЯ
Цель исследования: изучение экспрессии маркеров ангиогенеза в ткани пиогенной гранулемы. Методы исследования: проведен анализ операционного и биопсийного материала 86 пациентов с сосудистыми образованиями. Оценены гистологические и гистохимические особенности строения пиогенной гранулемы с последующим изучением пролифе-ративной активности и ангиогенных медиаторов. Результаты. Выделены два варианта гистологического строения пиогенной гранулемы, имеющие особенности экспрессии факторов роста и пролиферации эндотелиоцитов, которые отражают различия в патогенезе данного образования. Заключение. Установлено, что кровеносные сосуды пиогенной гранулемы имеют структурные и функциональные особенности, отличные от обычной грануляционной ткани.
Ключевые слова: пиогенная гранулема, патогенез, ангиогенез, пролиферация, воспаление, факторы роста, эндо-телиоциты.
ABSTRACT
Objective: to study the expression of markers of angiogenesis in the tissue ofpyogenic granuloma. Methods: analysis of the 86 biopsies with vascular lesions. The histological and histochemical features of the structure of pyogenic granuloma evaluated, followed by the study of proliferative activity and angiogenic mediators. Results. Depending on histological structure we selected two variants ofpyogenic granuloma with particular expression of growth factors and proliferation of endothelial cells, which reflect differences in the pathogenesis. Conclusion. It was found that the blood vessels ofpyogenic granuloma have structural and functional characteristics differ from conventional granulation tissue.
Keywords: pyogenic granuloma, pathogenesis, angiogenesis, proliferation, inflammation, growth factors, endothelial
cells.
Любые тканевые повреждения сопровождаются воспалительной реакцией в виде комплекса сосудисто-тканевых и внутриклеточных изменений, направленных на формирование нового клеточного микроокружения с целью репарации. При этом инициируется спектр молекулярных процессов, которые при неблагоприятных условиях приводят к онкогенезу [7]. В связи с этим особый интерес представляет пиогенная гранулема (ПГ), в отношении которой на сегодняшний день продолжаются споры морфологов о неопластической и/или реактивной (дисрегенераторной) природе процесса на фоне воспаления [10, 11, 12].
Термин «пиогенная гранулема» предложил Gerzel в 1904 году [8]. В настоящее время для ее обозначения па-томорфологи используют различные названия: ботриоми-кома, эруптивная ангиома, гранулематозная капиллярная гемангиома, гемангиома «грануляционного типа», телеан-гиоэктатическая гранулема, гиперпластическая геман-гиома, дольчатая капиллярная гемангиома, гипертрофическая капиллярная гемангиома и т.д. Многообразие перечисленных синонимов свидетельствует об отсутствии единого взгляда на этиопатогенез заболевания и, как следствие, вызывает значительные трудности в классификации, диагностике, тактике лечения и прогнозировании данной патологии.
Целью настоящей работы явилось изучение морфо-и патогенеза пиогенной гранулемы на основании исследования особенностей экспрессии маркеров ангиогенеза и пролиферативной активности клеток.
Проведен клинико-морфологический анализ операционного и биопсийного материала 86 пациентов с пиогенной гранулемой.
Парафиновые срезы толщиной 5мкм окрашивали гематоксилином и эозином, выявление коллагеновых волокон проводили пикрофуксином по ван Гизон. Для одномоментного выявления в ткани ПГ кислых и нейтральных гликозамингликанов применяли комбинацию ШИК - реакции с окраской альциановым синим. В 10 отобранных образцах пиогенной гранулемы провели иммуногистохи-
мическое исследование экспрессии маркеров пролиферации, апоптоза, и неоангиогенеза по стандартной методике на депарафинированных срезах с докраской ядер гематоксилином. В настоящей работе были использованы следующие первичные МКА: MIB1 (Dako) для Ki-67, 124 (Dako) для Bcl-2, C-1 (Santa Cruz Biotech) для VEGF, козьи поликлональные (Santa Cruz Biotech) для COX-2, ß-ФРФ (BioGenex). Результаты окрашивания оценивали с применением светового микроскопа «Leica» (Германия) под увеличением х10, х20, х40 полуколичественным методом. Интенсивность окрашивания выражали в баллах: 0 - отрицательная реакция, 1 - слабая, 2 - умеренная, 3 - выраженная. Количественно оценивали процент позитивных клеток (от 0 до 100%) и содержание их в максимально насыщенных участках с подразделением на градации (0 -до 5%, 1 - 26 - 50%, 3 - 51-75%, 4 - 75% и более). Гистохимический индекс HScore вычисляли путем умножения показателя интенсивности окрашивания (1-3) на полуколичественно оцененную градацию (0-4). Для оценки про-лиферативной активности (ПА) подсчитывали количество Ki-67 положительных клеток. Индекс Ki-67 определяли по формуле: ПА = число Ki-67 положительных клеток х 100/ общее количество клеток. Статистический анализ проводили на персональном компьютере с использованием программы "SPSS" (v13.0. for Windows).
Результаты исследования. По данным проанализированной медицинской документации возраст больных варьировал от 4 до 83 лет, пик заболеваемости (22,1%) пришелся на возрастную группу 41-50 лет. В 58,1% случаев патологическое образование локализовалось на слизистой оболочке полости рта, в 41,9% - на кожных покровах. У женщин ПГ выявлялась в 1,8 раза чаще, чем у мужчин. В группе пациентов с поражением слизистой оболочки преобладали женщины (64,0%), поражение кожи несколько чаще отмечалось у мужчин (58,3%). Наиболее поражаемыми оказались анатомические области, подвергшиеся длительной механической ирритации (нижняя, реже верхняя губа, язык, нос, волосистая часть головы, кисти, стопы и др.). В 5,8% наблюдений имел ме-
сто первично-множественный (синхронный и метахрон-ный) рост ПГ различной локализации: 1) ротовая полость + подбородочная область, 2) верхняя губа + десна, 3) волосистая часть головы + ушная раковина, 4) плечо + кисть, 5) бедро + стопа. У двух пациентов констатирован рецидив патологического процесса. Результаты анкетирования показали, что среди обследуемых прооперированных больных женского пола 3 пациентки оказались беременны и 7 женщин на момент диагностики сосудистого новообразования принимали оральные контрацептивы длительностью от 1 месяца до 3 лет [1].
Макроскопически во всех наблюдениях ПГ имела форму узелка геморрагического вида, плотноэластиче-ской консистенции с экзофитным характером роста. Размеры образования варьировали от 0,2 см до 3,5 см. При малейшей травматизации поверхности новообразования отмечалась кровоточивость, у 46,5% пациентов новообразование было покрыто геморрагической корочкой, у 31,4% больных имело место истончение и изъязвление эпителия, покрывающего опухоль.
Длительный анамнез заболевания (более 3 месяцев) выявлен в 29 случаях (33,3%). Гистологически такие образования были представлены беспорядочным скоплением сосудов артериального и венозного типа с наличием большого числа запустевающих и кавернозно расширенных сосудистых полостей различных размеров и формы, расположенных среди фиброзированной стромы. В стенке артерий отмечено неравномерное распределение и фокальное разволокнение эластических волокон, в сосудах венозного типа наряду с очагами склероза выявлены участки гиперплазии гладкомышечных клеток. Выраженность стромального окружения варьировала от тонких прослоек до крупных очагов плотной фиброзной ткани, богатой сульфатированными гликозамингликанами. Увеличение последних стимулирует процессы дифференци-ровки клеток, снижает их пролиферативную активность, что ведет к фибриллогенезу и склерозированию [5]. В строме отмечена диффузная умеренно выраженная воспалительная инфильтрация, представленная преимущественно лимфоцитами и плазмоцитами с примесью поли-нуклеарных лейкоцитов, эозинофилов и макрофагов.
В 57 наблюдениях (66,3%) давность существования патологического процесса составила менее 3 месяцев. Микроскопически эти образования представляли собой разрастание грануляционной ткани с большим количеством извитых анастомозирующих кровеносных сосудов типа капилляров или синусоидов с расширенными просветами и набухшим эндотелием, часть из которых формировали сосудистые клубочки. Отмечалось сужение просвета капилляров за счет отека и пролиферации эндотелия. Кровеносные сосуды располагались в рыхлой, отечной строме, представленной коллагеновыми волокнами, гли-копротеидами и гликозаминогликанами.
Выявленные особенности строения ПГ и их связь с длительностью существования процесса позволила выделить два гистологических варианта: фиброматозный (с анамнезом заболевания более 3 месяцев) и ангиоматозный (давностью менее 3 месяцев).
Экспрессия молекулярно-биологических
При ангиоматозном варианте в 80,2% наблюдений была отмечена неоднородность покровного эпителия в виде резкого истончения, атрофии и десквамации центральной части поверхности пиогенной гранулемы и выраженной гиперплазии у ее основания с формированием своеобразного «эпидермального воротничка». Неполноценность протективных свойств покровного эпителиального пласта облегчает внедрение в ткань бактериальной микрофлоры, что усиливает развитие в ней воспалительных и некротических изменений с появлением в поверхностных зонах характерных обильных грануляций, создавая условия для персистенции грануляционной ткани.
Одним из условий репарации участка изъязвления является освобождение его от некротических масс для обеспечения контакта «базального» и «стромального» компонентов путем соединения стромальных коллагенов с коллагеном базальной мембраны, выступая в роли взаимных короткодистантных модуляторов дифференци-ровки клеток, а также процессов фибрилло- и ангиогенеза. Задержка репарации эпителиального пласта сопровождается преждевременным склерозом грануляционной ткани, который в свою очередь замедляет эпителизацию и приводит к нарушению продукции медиаторов воспаления и ди-срегуляции воспалительных сигнальных каскадов, инициируя спектр молекулярных процессов, которые при неблагоприятных условиях могут привести к пролифера-тивным, гиперпластическим, онкопластическим процессам [6].
Профиль иммуногистохимических маркеров, экс-прессированных в ткани пиогенной гранулемы, свидетельствовал об активизации биологических механизмов поддержки ангиогенеза и высокой пролиферативной активности как эндотелиоцитов и всех клеточных элементов капиллярной стенки, так и клеток стромального компонента. В зоне ангиоматоза отмечалась выраженная экспрессия Кь67 в эндотелиоцитах, и неравномерная реакция клеточных элементов стромы.
Во всех полях зрения наблюдалась гиперэкспрессия CD-68 в клетках типа моноцитов и макрофагов. В ткани ПГ ангиоматозного варианта строения экспрессия СОХ-2 была умеренно выражена, преобладала в поверхностных слоях и коррелировала со степенью повреждения покровного эпителия (таблица). Фиброматозный вариант ПГ проявил слабо позитивную реакцию клеток эндотелия и стромы к СОХ-2.
Исследование экспрессии VEGF продемонстрировало положительную реакцию, выраженность которой варьировала от умеренной в фиброматозных образованиях до повышенной - в ангиоматозных ПГ. При этом реакция на VEGF была особенно высокой в эндотелиоцитах сосудов капиллярного типа.
Известно, что в процессах ангиогенеза, васкулоге-неза и репарации важную роль играют факторы роста фиб-робластов (ФРФ), стимулирующие миграцию, пролиферацию и дифференцировку клеток [3]. В большинстве наблюдений нами выявлена умеренная экспрессия р-ФРФ, которая не зависела от варианта строения.
Реакция с Вс1-2 была умеренно позитивна (таблица) в клетках базального слоя эпителия и эндотелия сосудов во всех препаратах.
Таблица
Вариант строения ПГ Интенсивность экспрессии фактора
Ю-67 VEGF в-ФРФ Bd-2 COX-2
ангиоматозный 0,98 2,5 1,2 0,38 2,9
фиброматозный 0,45 2,1 2,3 0,21 1,7
Доказано, что во взрослом организме процесс новообразования сосудов может происходить путем как ангио-генеза, так и васкулогенеза и требует тонкой клеточной регуляции [4]. Повышенная пролиферация эндотелиаль-ных клеток совместно с их миграцией через строму и внеклеточный матрикс сопровождается синтезом ангиоген-ных факторов, создавая предпосылки для формирования трубчатых структур и образования новых сосудов. Повышенный уровень воспалительных медиаторов и факторов роста на фоне сниженного апоптоза препятствует межклеточному контакту эндотелиоцитов и способствует развитию сосудистых аномалий.
На основании результатов проведенного исследования установлено, что кровеносные сосуды пиогенной гранулемы в отличие от обычной грануляционной ткани, которая быстро созревает и стабилизируется, имеют структурные и функциональные особенности. Сосудистая сеть ПГ имеет хаотическую организацию с повышенной извитостью и проницаемостью сосудов. Выявленные сосудистые аномалии на фоне избыточной продукции факторов роста формируют условия, благоприятные для патологического неоангиогенеза.
Проведенный клинико-морфологический анализ материала показал, что темп роста ПГ и особенности строения коррелировали с пролиферативной активностью эн-дотелиоцитов. Выявлена зависимость гистологического строения ПГ от длительности существования патологического процесса. Повышенная пролиферативная активность эндотелия может лежать в основе развития рецидивов [3, 9].
Особенности экспрессии маркеров ангиогенных факторов роста отражают сложный патогенез пиогенной гранулемы и объясняют различия в ее морфогенезе.
Используемая литература
1. Доманин А.А., Соловьева О.Н. Расчет диагностической значимости морфологических признаков пиогенной гранулемы и капиллярной гемангиомы // Лечебно-диагностические, морфофункциональные и гуманитарные аспекты медицины - Тверь. -2011.- С.57-59.
2. Киселев В.И., Сидорова И.С., Унанян А.Л., Муйжнек Е.Л. Гиперпластические процессы органов женской репродуктивной. М. :Медпрактика -М, 2010, 484 с.
3. Павлов К.А., Дубова Е.А., Щеголев А.И., Мишнев О.Д. Экспрессия факторов роста в эндотелиоцитах при сосудистых мальформациях.// Бюлетень экспе-рементальной биологии и медицины. - 2009, том 147, №3, с. 341-344.
4. Повещенко О.В., Повещенко А.Ф., Коненков В.И. Эндотелиальные прогениторные клетки и неваску-логенез. //Успехи современной биологии, 2012, том 132, №1, с. 69-76.
5. Соловьева О.Н. Морфологическая верификация пиогенной гранулемы // 100-летие Российского общества патологоанатомов: Материалы Всероссийской конференции памяти О.К. Хмельницкого.- С.Петербург. - 2009. - С.299-301.
6. Скарякина О.Н. Морфогенетические аспекты пио-генной гранулемы // Республиканская научно-практическая конференция с международным участием «Макро- и микроскопическая анатомия органов и систем в норме, эксперименте и патологии», посвященная 100-летию со дня рождения З.И. Ибрагимовой, г. Витебск - 2014, с.200-202
7. Aggarwal, B.B., Shishodia, S., Sandur, S.K., Pandey, M.K., and Sethi, G. (2006) Inflammation and cancer: how hot is the link? Biochem. Pharmacol. 72: 16051621
8. Bragado R., Bello E., Requena L., Renedo G., Texciro E., Alvarez M.V., Castilla M.A., Caramelo С. Increased expression of vascular endothelial growth factor in pyogenic granulomas. // Acta Derm Venereol. - 1999. - № 79. - P. 422-425.
9. Isaza-Guzmán D.M, Teller-Carrero C.B, Laberry-Bermúdez MP, González-Pérez LV, Tobón-Arroyave SI. Assessment of clinicopathological characteristics and immunoexpression of COX-2 and IL-10 in oral pyogenic granuloma. Arch Oral Biol. 2012 May; 57(5):503-12.
10. Freitas T.M. Assessment of angiogenic markers in oral hemangiomas and pyogenic granulomas // Exp Mol Pathol. - 2005. - № 79. - P. 79-85
11. Lin R.L, Janniger C.K. Pyogenic granuloma. // Cutis. -2004. - Vol. 74. - № 4. - P. 229-33.
12. Wauters O., Sabatiello M, Nikkels-Tassoudji N., Choffray A., Richert B., Piérard GE, Nikkels AF Pyogenic granuloma //Ann Dermatol Venereol. -2012.-№ 6.
ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ, ВИДОВОГО СОСТАВА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КОККОВЫХ ПИОДЕРМИЙ, ИХ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ
Демирчян Лидия Гарегиновна, Читанава Тамара Вангельевна
Студентки 3 курса лечебного факультета, г. Краснодар Сиюхова Фатима Шумафовна
Канд. биол наук, доцент кафедры микробиологии г. Краснодар
АННОТАЦИЯ
Проведен анализ обследования 486 пациентов с гнойничковой инфекцией. Изучены видовой состав и резистентность к основным группам антимикробных препаратов. Выявлены следующие формы гнойничковых заболеваний кожи: фурункулёз, гидраденит, вторичная пиодермия у больных хроническим атопическим дерматитом (ХАД) и микробная экзема. Основными возбудителями вторичной пиодермии у больных ХАД являются S.aureus (78%), S.epidermidis (4,0%), смешанные формы S.aureus с S.epidermidis (9,3%). Сравнительная оценка антибиотикорезистентности штамма S.aureus при вторичной пиодермии у больных ХАД за 2013 и 2014 года показала, что мупироцин остается «золотым стандартом» антибактериальной терапии, к рекомендуемым можно отнести оксациллин, цефалотин, тетрациклин, олеандомицин.
ABSTRACT
The analysis among 486patients with a pustular infection were carried out. The specific structure and resistance to basic groups of germicides were examined. The following forms of pustular diseases of skin are revealed: a furunculosis, a
