CC BY
18https://doi.org/10.26442/18151434.2020.3.200137
Оригинальная статья
Детекция диссеминированных опухолевых клеток и их взаимосвязь с популяцией костномозговых лимфоцитов у больных немелкоклеточным раком легкого
Т.М. Джуманазаров1, С.В. ЧулковаН12, Н.Н. Тупицын1, О.А. Чернышева1, А.К. Аллахвердиев34, А.Д. Палладина1, Н.А. Купрышина1, О.П. Колбацкая1, П.В. Кононец1, Б.Б. Ахмедов1, С.С. Герасимов1
1ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; 2ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва, Россия;
3ГБУЗ «Московский клинический научно-практический центр им. А.С. Логинова» Департамента здравоохранения г. Москвы, Москва, Россия;
4ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России, Москва, Россия
Hchulkova@mail.ru
Аннотация
Введение. Детекция диссеминированных опухолевых клеток (ДОК) при солидных опухолях является важной составляющей оценки прогноза заболевания. Поражение костного мозга наблюдается часто. Существуют данные, указывающие на важную роль субпопуляций лимфоцитов костного мозга в процессах гематогенного метастазирования.
Цель. Оценить частоту поражения костного мозга у больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) на основании обнаружения ДОК методом проточной цитометрии, а также их влияние на популяции лимфоцитов костного мозга. Материалы и методы. Исследовали 62 образца костного мозга больных с верифицированным диагнозом НМРЛ: аденокар-цинома (33), плоскоклеточный рак (27), другие виды (2). Методы: морфологический, многоцветная проточная цитометрия. Изучены ДОК, популяции лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD19/CD20, CD16, CD27. Сбор и анализ: FACS Canto II, США, программа Kaluza Analysis v2.1.
Результаты. В костном мозге ДОК (EPCAM+CD45-) были обнаружены у 43,5% пациентов c НМРЛ (в качестве порогового значения приняли 1 клетку на 10 млн миелокариоцитов). Наличие ДОК не коррелировало с размером опухоли, статусом лимфоузлов, стадией опухолевого процесса. ДОК чаще наблюдались при более дифференцированных опухолях (р=0,023). Выявлено достоверное повышение уровня субпопуляций CD16+CD4-NK-клеток (р=0,002), CD27+CD3+Т-клеток (р=0,015) при поражении костного мозга.
Заключение. Установлена возможность детекции ДОК в костном мозге больных НМРЛ, у 43,5% больных НМРЛ в костном мозге выявлены ДОК, при этом их наличие установлено даже при локализованном опухолевом процессе. Более частое поражение костного мозга наблюдалось при высокодифференцированных опухолях. Выявлена взаимосвязь между ДОК и костномозговыми популяциями лимфоцитов: субпопуляции CD16+CD4-, CD27+CD3+.
Ключевые слова: немелкоклеточный рак легкого, костный мозг, диссеминированные опухолевые клетки, Т-клетки, CD3, CD27, CD16, проточная цитометрия.
Для цитирования: Джуманазаров Т.М., Чулкова С.В., Тупицын Н.Н. и др. Детекция диссеминированных опухолевых клеток и их взаимосвязь с популяцией костномозговых лимфоцитов у больных немелкоклеточным раком легкого. Современная Онкология. 2020; 22 (3): 94-99. DOI: 10.26442/18151434.2020.3.200137
Original Article
Detection of disseminated tumor cells and their relationship with a population of bone marrow lymphocytes in patients with non-small cell lung cancer
Temirbek M. Djumanazarov1, Svetlana V. ChulkovaH1,2, Nikolay N. Tupitsyn1, Olga A. Chernysheva1, Arif K. Allakhverdiev3,4, Alexandra D. Palladina1, Natalya A. Kupryshina1, Olga P. Kolbatskaya1, Pavel V. Kononetz1, Bakhrom B. Akhmedov1, Sergey S. Gerasimov1
1Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Moscow, Russia; 2Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russia; 3Loginov Moscow Clinical Scientific and Practical Center, Moscow, Russia; 4Russian Medical Academy of Continuous Professional Education, Moscow, Russia Elchulkova@mail.ru
Abstract
Introduction. Detection of disseminated tumor cells (DTC) in solid tumors is an important component of the assessment of disease prognosis. Bone marrow damage is common. There is evidence indicating an important role for bone marrow lymphocyte subpopulations in hematogenous metastasis.
Aim. To evaluate the frequency of bone marrow damage in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) based on the detection of DTC by flow cytometry, as well as their effect on the population of bone marrow lymphocytes.
Materials and methods. 62 bone marrow samples of patients with a verified diagnosis of NSCLC: adenocarcinoma (33), squamous cell carcinoma (27), other types (2). Methods: morphological, multicolor flow cytometry. Studied DTC, lymphocyte populations CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD16, CD27. Collection and analysis: FACS Canto II, USA, Kaluza Analysis v2.1.
Results. In bone marrow, DTC (EPCAM+CD45-) were found in 43.5% of patients with NSCLC (1 cell per 10 million myelocariocytes was taken as the threshold value). The presence of DTC did not correlate with the size of the tumor, the status of the lymph nodes, and the stage of the tumor process. DTC was more often observed in more differentiated tumors (p=0.023). A significant increase in the level of subpopulations of CD16+CD4-NK-cells (p=0.002), CD27+CD3+T-cells (p=0.015) with bone marrow damage was revealed. Conclusion. The possibility of detecting DTC in the bone marrow of patients with NSCLC was established, in 43.5% of patients with NSCLC in the bone marrow DTC was detected, and their presence was established even with a localized tumor process. More frequent bone marrow damage was observed with well-differentiated tumors. The relationship between DTC and bone marrow lymphocyte populations was revealed: subpopulations of CD16+CD4-, CD27+CD3+.
Key words: non-small cell lung cancer, bone marrow, disseminated tumor cells, T-cells, CD3, CD27, CD16, flow cytometry. For citation: Djumanazarov T.M., Chulkova S.V., Tupitsyn N.N. et al. Detection of disseminated tumor cells and their relationship with a population of bone marrow lymphocytes in patients with non-small cell lung cancer. Journal of Modern Oncology. 2020; 22 (3): 94-99. DOI: 10.26442/18151434.2020.3.200137
Введение
Рак легкого является одним из самых распространенных онкологических заболеваний во всем мире, от которого ежегодно умирают 1,59 млн человек [1]. По данным мировой статистики, только 15% больных имеют локализованный процесс. Немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) составляет 80% случаев и имеет свои нюансы клинического течения, лечения и прогноза. Как известно, на сегодняшний день остро стоит проблема прецизионной диагностики НМРЛ, поскольку такая диагностика позволяет определить индивидуальные подходы в лечении, включая таргетную и иммунотерапию.
На протяжении последних десятилетий одним из перспективных направлений является диагностика гематогенного микрометастазирования в костный мозг, поскольку стало ясно, что основной причиной смерти от рака является метастатическое распространение опухолевых клеток [2, 3]. Уже отработаны методы детекции диссеминиро-ванных опухолевых клеток (ДОК) в костном мозге при разных видах опухолей [4, 5]. Выявлен ряд особенностей, характеризующих ДОК как отдельную популяцию клеток, отличающихся от первичной опухоли и обладающих эпигенетическими и генетическими преимуществами [6]. Установлено, что ДОК, колонизирующие костный мозг, приобретая новые биологические свойства, имеют больший метастатический потенциал. Интересно, что ДОК по своим характеристикам схожи со стволовыми клетками: могут экспрессировать стволовоклеточные антигены [7, 8], обладают пластичностью, способны к самоподдержанию и обратимому состоянию покоя [9], а также проявляют устойчивость к химиолучевому лечению [10].
Показана взаимосвязь между поражением костного мозга и прогнозом заболевания при некоторых солидных опухолях: наличие ДОК в костном мозге является неблагоприятным фактором прогноза общей выживаемости и выживаемости без прогрессирования [11-13]. Установлена значимость ДОК для мониторинга эффективности терапии [14]. Данные исследований при НМРЛ неоднозначны, но имеется указание на важность выявления ДОК и наличие корреляции с прогнозом заболевания [11, 15-17].
Существует несколько исследований, посвященных изучению субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток в костном мозге при злокачественных опухолях. Результаты работы Т.В. Горбуновой свидетельствуют о важной роли субпопуляций Т-клеток, естественных киллеров и TCR-клеток в процессах гематогенного метастазирования при рабдомиосаркоме у детей [18]. Показано, что в костном мозге увеличено содержание эффекторов противоопухолевого иммунитета [19-21]. В недавней работе установлена связь ДОК с субпопуляцией костномозговых СЭ8+ лимфоцитов при раке молочной железы (РМЖ) [12]. Очевидно,
при метастатическом поражении костного мозга включаются определенные механизмы врожденного и приобретенного иммунного ответа с целью контроля над опухолевыми клетками.
Таким образом, имеющиеся на сегодняшний день результаты исследований позволяют утверждать, что диагностика метастатического поражения костного мозга у больных НМРЛ является актуальной задачей и требует всестороннего анализа: изучение закономерностей появления ДОК в костном мозге больных НМРЛ, выявление их биологических особенностей по сравнению с клетками первичной опухоли, а также изучение микроокружения, с целью оценки возможности использования ДОК как потенциальных мишеней в терапии НМРЛ. Последнее открывает новые перспективы прецизионной терапии у данной группы больных.
Цель исследования - оценить частоту поражения костного мозга у больных НМРЛ на основании обнаружения ДОК методом проточной цитометрии, а также их взаимосвязь с субпопуляционным составом лимфоцитов костного мозга.
Материалы и методы
Материалом для исследования послужили образцы костного мозга, которые были получены при стернальной пункции у 62 больных с верифицированным диагнозом НМРЛ, средний возраст которых составил 63 года: 48 (77,4%) мужчин и 14 (22,6%) женщин. Все больные находились на обследовании и получили лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохи-на» с 2018 по 2019 г. По стадиям опухолевого процесса больные распределились следующим образом: IA - 5 (8,1%), IB -13 (21%), IIA - 12 (19,4%), IIB - 9 (14,5%), IIIA - 13 (21%), IIIB -4(6,5%), IV - 6 (9,7%); табл. 1. Наиболее частой гистологической формой была аденокарцинома, установленная в 53,3% (n=33) случаев. У 27 (43,5%) больных диагностирован плоскоклеточный рак и в двух случаях - иные гистологические виды.
Морфологическое исследование препаратов костного мозга включало подсчет миелограммы и поиск ДОК. Имму-нофлюоресцентный анализ выполнялся методом проточной цитометрии (цитометр FACSCanto II, США). В исследовании использованы моноклональные антитела, меченные напрямую флюорохромами (табл. 2). С их помощью в костном мозге изучены ДОК, субпопуляции лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD19/CD20, CD16, CD27. Оценка экспрессии антигенов проведена с помощью программы Kaluza Analysis v2.1 (Beckman Coulter, США).
ДОК выявлялись на основании отсутствия экспрессии панлейкоцитарного антигена CD45 в сочетании с экспрессией ЕРСАМ или KL-1. Анализ проводился среди 20 млн мие-локариоцитов (или все клетки образца), при этом положительными считались случаи при обнаружении не менее 1 клетки на 10 млн миелокариоцитов.
Таблица 1. Распределение больных НМРЛ по стадиям опухолевого процесса
Table 1. The distribution of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) by the stages of the tumor process
Стадия заболевания Относительное число больных, % Абсолютное число больных
IA 8,4 5
IB 20,8 13
IIA 19,2 12
IIB 14,4 9
IIIA 20,8 13
IIIB 6,6 4
IV 9,8 6
Таблица 2. Моноклональные антитела Table 2. Monoclonal antibodies
Антитело Флуоресцентная метка Производитель
CD45 V500-A, V450, PerCP Becton Diskinson, США
EpCAM FITC-А, PE Becton Diskinson, США
KL-1 FITC-A Immunotech, Франция
CD3 APC Becton Diskinson, США
CD4 V450 Becton Diskinson, США
CD8 APC-H7 Becton Diskinson, США
CD19 FITC-A, PE Becton Diskinson, США
CD20 APC-H7 Becton Diskinson, США
CD16 FITC Becton Diskinson, США
CD27 PerCP Becton Diskinson, США
CD2 V450 Becton Diskinson, США
Примечание. Статистическую обработку данных выполняли с использованием пакета IBM-SPSS Statistics v. 18.
Таблица 3. Взаимосвязь между популяциями лимфоцитов костного мозга и ДОК
Table 3. Relationship between lymphocyte populations bone marrow and Detection of disseminated tumor cells (DTC)
Субпопуляции ДОК n M±m Р
CD45+CD3+ отсутствуют 25 70,2±1,7 0,051
присутствуют 16 62,6±3,9
CD27+CD3+ отсутствуют 23 57,4±3,6 0,015
присутствуют 14 70,4±2,8
CD16+CD4- отсутствуют 17 8,1±0,8 0,002
Субпопуляционный состав костного мозга изучался в гейте зрелых лимфоцитов, на основании выраженной экспрессии СЭ45 в сочетании с низкими характеристиками бокового светорассеяния (ББС).
Результаты и обсуждение
По результатам иммунологического исследования костного мозга больных НМРЛ установлено, что его поражение наблюдалось в 43,5% случаев (п=27). По данным мировой литературы, этот показатель варьирует от 22 до 60% в зависимости от методов исследования [22]. В проведенном нами исследовании не было установлено статистически значимой взаимосвязи ДОК-положительного статуса опухоли с ее размером, стадией. Интересно отметить, что наибольшая частота обнаружения ДОК отмечена при 1А стадии - 60,7% (3/5), а минимальная -при 111В - 25,0% (1/4); рис. 1. Большинство ДОК-позитивных случаев наблюдалось при небольших размерах опухоли. В исследованиях германских и японских ученых, напротив, установлена положительная корреляция между размером опухоли и наличием опухолевых клеток в костном мозге [17, 23].
Сравнение гистологического вида опухоли с частотой наличия ДОК в костном мозге установило, что при аденокар-
Рис. 1. Частота поражения костного мозга при НМРЛ в зависимости от стадии. Fig. 1. The frequency of bone marrow lesions in NSCLC depending on the stage.
IA IB IIA IIB IIIA IIIB IV
Рис. 2. ДОК в костном мозге больного Ж. На цитограмме в гейте А ДОК наблюдались на основании яркой экспрессии EPCAM (ось Y) и отсутствия CD45 (ось Х).
Fig. 2. DTC in bone marrow. Patient Zh. On the cytogram in gate A DTC was observed based on the bright expression of EPCAM (Y axis) and the absence of CD45 (X axis).
lUnMtMl CO-4Ï V«SO A ' EPCAM P£ A
CDAV1U*
CAE* Number
All 20 QÛQ ООО A
циноме поражение костного мозга определялось у 45,5% (15/33) больных, а при плоскоклеточном раке - в 37% (10/27) случаев. При высокодифференцированном раке (01) ДОК выявлялись в костном мозге достоверно чаще (р=0,023), что согласуется с результатами исследований, проведенных при НМРЛ зарубежными коллегами [22].
Количество выявленных опухолевых клеток в костном мозге больных НМРЛ было различным и не зависело от стадии. Например, малое количество клеток (не более 5) обнаружено как при наличии метастазов в отдаленные органы (М1), так на более ранних стадиях. В целом число ДОК в образцах костного мозга было низким: у большинства больных не превышало 5 клеток на 10 млн. При пересчете на 1 млн ДОК определялись у 6,5% больных. Максимальное число ДОК в образце было обнаружено у одного больного, у которого установлена Т2аШМ0 стадия. На рис. 2 представлена цитограмма данного образца костного мозга. Как видно из рис. 1, на 20 млн миелокарицитов выявлены 484 опухолевые клетки, характеризующиеся яркой экспрессией ЕРСАМ и отсутствием экспрессии панлейкоцитарного антигена СЭ45. При этом морфологически поражения костного мозга у данного больного не установлено. Следует отметить, что клеточность костного мозга была повышенная (229 тыс/мкл), обращали на себя внимание сниженное количество метамиелоцитов (6,4% при норме 8-15%), сниженный индекс созревания нейтрофилов (0,4 при норме 0,5-0,9) и повышение оксифильных форм нормобластов (7,6% при норме 0,8-5,6%).
Таким образом, в ходе исследования установлена возможность детекции ДОК у больных НМРЛ, частота которых составила 43,5%. Аналогичные проценты ДОК получены и другими авторами [23]. Выявление поражения костного мозга на 1-11 стадиях отражает раннюю гематогенную диссемина-
Рис. 3. Пример выраженной пропорции NK-клеток костного мозга при НМРЛ: а - гейт лимфоцитов; б - в гейте лимфоцитов в координатах CD16/CD4 NK-клетки (CD16+CD4-) составляют 12,3%.
Fig. 3. Example of a pronounced proportion of bone marrow NK cells in patient with NSCLC: a - lymphocyte gate; b - in the lymphocyte gate in the coordinates of CD16/CD4 NK cells (CD16+CD4-) make up 12.3%.
1024
768
| 5pecimen_001_Tube_0D4_Q01-fcs"l
£ 512
256
id ni
CD45 PerCP-Cy5-5-A j Spec ¡me n_OQ 1 _Tu be_003_QD3,f C5~|
Рис. 4. Пример экспрессии CD27 на Т-клетках костного мозга больной НМРЛ: а - гейт CD3+ лимфоцитов; б - в гейте CD3+ лимфоцитов в координатах CD27/CD3 популяция CD27+CD3+ клеток составляет 80,3%. Fig. 3. Example of expression CD27 of bone marrow T cells in patient with NSCLC: a - gate of CD3+ lymphocytes; b - in the gate of CD3+ lymphocytes in coordinates CD27/CD3 population of CD27+CD3+ cells make up 80.3%.
а
10 |o,oo%
б
10 |o ,oo%
I Specimen 001 1 001 .tes I
i vV*./
к?
CCD F*riJlA
80.30Î!
19.7QÏÎ
а
б
цию НМРЛ. Важно отметить, что ДОК достоверно чаще обнаруживаются при более дифференцированных опухолях.
В настоящее время уделяется много внимания изучению субпопуляционного состава лимфоцитов костного мозга. В нескольких работах, посвященных РМЖ, отмечено изменение их пропорции по сравнению с нормой. Е. 8о1отауег и соавт. сравнили субпопуляционный состав лимфоцитов костного мозга доноров и больных РМЖ: оказалось, что количество Т-клеток (СЭ3+) у больных снижено в сравнении с нормой (30,6% против 40,8%; р<0,05) [20]. В другой работе у больных установлено наличие выраженной популяция NK-клеток (СП3-СЭ16+ 15,8%; р=0,028) [21].
Кроме того, по мнению ученых, важным является изучение популяций лимфоцитов у онкобольных как при отсутствии, так и при наличии микрометастазов в костном мозге. Данные нескольких исследований свидетельствуют, что иммуноком-петентные клетки могут играть важную роль в предотвращении развития микрометастатических очагов [24]. Имеются работы, сообщающие об изменении пропорции популяций
лимфоцитов костного мозга у больных при наличии в нем ДОК. Так, уровни субпопуляций СЭ4+, СЭ8+, СЭ56+ достоверно выше в случаях поражения костного мозга [19]. В работе других ученых получены иные данные в отношении СЭ8+ клеток [12]. Уровень СЭ8+ лимфоцитов в костном мозге больных РМЖ был достоверно ниже и составлял 39,2% против 48,1% у больных без поражения костного мозга.
В нашем исследовании при изучении лимфоцитов костного мозга также были обнаружены некоторые особенности. Мы сравнили уровни субпопуляций лимфоцитов в зависимости от ДОК-статуса. Выявленные закономерности касались следующих субпопуляций: СП45+СЭ3+, СП27+СЭ3+, СП2+СЭ3+, СП16+СЭ4- (табл. 3). Как видно из таблицы, среднее содержание СП45+СЭ3+ клеток было ниже у ДОК-позитивных больных, которое составило 62,5% (п=16) против 70,2% (п=25); различия близки к достоверным (р=0,051). Что касается субпопуляции СП16+СЭ4-, то ее преобладание достоверно наблюдалось в группе больных с ДОК-позитивным статусом 15,1% (п=6) и 8,6% (п=16)
(р=0,002), что согласуется с литературными данными. Повышенные уровни NK-клеток наблюдались в исследовании М. Беиегег [19]. Пример выраженной пропорции NK-клеток при НМРЛ (СП16+СЭ4-) представлен на рис. 3.
Далее проводился анализ в гейте зрелых Т-клеток (СЭ3+). Важные данные получены в отношении СЭ27+ клеток. Известно, что молекула СЭ27 играет ключевую роль в активации Т-клеток, обеспечивая проведение кости-муляторного сигнала [25]. Связывание ее с лигандом СЭ70 приводит к усилению пролиферации и дальнейшей диф-ференцировке Т-клеток в эффекторные и клетки памяти [26]. В данной работе значительная пропорция (70%, п=14) субпопуляции СП27+СЭ3+ клеток была обнаружена у больных НМРЛ, имеющих поражение костного мозга (различия достоверны; р=0,015); рис. 4. Означает ли это, что повышение уровня зрелых Т-клеток, экспрессирую-щих СЭ27, является ответной реакцией системы противоопухолевого иммунитета на гематогенное микрометаста-зирование в костный мозг? Служит ли это отражением взаимодействия между ДОК и лимфоцитарными популяциями костного мозга? Возможно, это так и есть, но необходим более подробный анализ в большей когорте больных. Следует отметить, что популяция Т-клеток памяти гетерогенна [25]. Субпопуляции Т-клеток памяти помимо экспрессии СЭ27 могут нести разные антигены, в числе которых перфорины, гранзимы - так называемые эффек-торные Т-клетки памяти [27]. Наличие выраженной субпопуляции СП27+РегГопп+ клеток установлено в недавнем исследовании при раке легкого [28]. Поэтому факт увеличения пропорции субпопуляции СШ7+СП3+ клеток при наличии ДОК в костном мозге обращает на себя внимание
Литература/References
1. American Cancer Society. Cancer Fact and Figures. 2018.
2. Braun S, Vogl FD, Naume B et al. A pooled analysis of bone marrow micrometastasis in breast cancer. N Engl J Med 2005; 353i793-802. DOI: 10.1056/NEJMoa050434
3. Alix-Panabires C, Muller V, Pantel K. Current status in human breast cancer micrometastasis. Curr Opin Oncol 2007; 6:558-63. DOI: 10.1097/CC0.0b013e3282f0ad79
4. Pantel K, Alix-Panabieres C. Bone marrow as a reservoir for disseminated tumor cells: a special source for liquid biopsy in cancer patients. Bonekey Rep 2014; 3: 584. DOI: 10.1038/bonekey. 2014.79
5. Тупицын Н.Н. Костный мозг онкологического больного: стадирование опухолей, ге-мопоэз, иммунная система. Иммунология гемопоэза. 2018; 16 (2): 10-54. [Tupitsyn N.N. Kostnyi mozg onkologicheskogo bol'nogo: stadirovanie opukholei, gemo-poez, immunnaia sistema. Immunologiia gemopoeza. 2018; 16 (2): 10-54 (in Russian).]
6. Маркина И.Г., Тупицын Н.Н., Михайлова И.Н., Демидов Л.В. Гематогенное метаста-зирование опухолей: ключевые моменты и эволюционирующие парадигмы. Иммунология гемопоэза. 2018; 6 (1): 109-32.
[Markina I.G., Tupitsyn N.N., Mikhailova I.N., Demidov L.V. Gematogennoe metastazirova-nie opukholei: kliuchevye momenty i evoliutsioniruiushchie paradigmy. Immunologiia gemopoeza. 2018; 6 (1): 109-32 (in Russian).]
7. Чулкова С.В., Чернышева О.А., Маркина И.Г. и др. Стволовые опухолевые клетки меланомы. Поражение костного мозга. Обзор и представление собственных данных. Вестн. РНЦРР. 2019; 4:182-97.
[Chulkova S.V., Chernysheva O.A., Markina I.G. et al. Stvolovye opukholevye kletki mela-nomy. Porazhenie kostnogo mozga. Obzor i predstavlenie sobstvennykh dannykh. Vestn. RNTsRR. 2019; 4:182-97 (in Russian).]
8. Bartkowiak K, Effenberger KE, Harder S et al. Discovery of a novel unfolded protein response phenotype of cancer stem/progenitor cells from the bone marrow of breast cancer patients. J Proteome Res 2010; 9:3158-68. DOI: 10.1021/pr100039d
9. Ghajar CM. Metastasis prevention by targeting the dormant niche. Nat Rev Cancer 2015; 15 (4): 238-47. DOI: 10.1038/nrc3910
10. Sai B, Xiang J. Disseminated tumour cells in bone marrow are the source of cancer relapse after therapy. J Cell Mol Med 2018; 22:5776-86. DOI: 10.1111/jcmm.13867
11. Pantel K Brakenhoff RH, Brandt B. Detection, clinical relevance and specific biological properties of disseminating tumour cells. Nat Rev Cancer 2008; 8:329-40. DOI: 10.1038/nrc2375
12. Рябчиков Д.А., Безнос О.А., Дудина И.А. и др. Диссеминированные опухолевые клетки у пациентов с люминальным раком молочной железы. Рос. биотерапевтич. журн. 2018; 17 (1): 53-7. DOIl 10.17650/1726-9784-2018-17-1-53-57
[Riabchikov D.A., Beznos O.A., Dudina I.A. et al. Disseminirovannye opukholevye kletki u patsientov s liuminal'nym rakom molochnoi zhelezy. Ros. bioterapevtich. zhurn. 2018; 17 (1): 53-7. DOIl 10.17650/1726-9784-2018-17-1-53-57 (in Russian).]
13. Chernysheva O, Markina I, Demidov L et al. Bone marrow involvement in melanoma. Potentials for detection of disseminated tumor cells and characterization of their subsets by flow cytometry. Cells 2019; 8i 627. DOI: 10.3390/cells8060627
14. Бесова Н.С., Обаревич Е.С., Давыдов М.М. и др. Прогностическое значение диссе-минированных опухолевых клеток в костном мозге больных диссеминированным ра-комжелудка до начала противоопухолевой терапии. Фарматека. 2017; 17(350): 62-6. [Besova N.S., Obarevich E.S., Davydov M.M. et al. Prognosticheskoe znachenie dissemini-rovannykh opukholevykh kletok v kostnom mozge bol'nykh disseminirovannym rakom zhe-ludka do nachala protivoopukholevoi terapii. Farmateka. 2017; 17 (350): 62-6 (in Russian).]
15. Rud AK, Borgen E, Maelandsmo GM et al. Clinical significance of disseminated tumour cells in non-small cell lung cancer. Br J Cancer 2013; 109i 1264-70. DOI: 10.1038/bjc.2013.450
и заслуживает детального изучения, поскольку это может пролить свет на иммунные механизмы контроля длительного персистирования ДОК в костном мозге.
Таким образом, проведенный анализ взаимосвязи между поражением костного мозга и его лимфоцитарными популяциями выявил достоверное повышение уровня субпопуляций СП1б+СП4^К-клеток, СП27+СО3+Т-клеток.
Выводы
В данном исследовании проведена оценка ДОК в костном мозге больных НМРЛ. Установлено, что ДОК при НМРЛ выявляются в 43,5% случаев, при этом даже у больных с локализованным опухолевым процессом. Последнее наблюдение отражает, что гематогенное метастазирование начинается на ранних стадиях развития НМРЛ. Отмечено, что ДОК достоверно чаще обнаруживаются при более дифференцированном раке. Установлена взаимосвязь между ДОК и костномозговыми популяциями лимфоцитов: субпопуляции CD16+CD4-, CD27+CD3+ клеток были достоверно более выраженными у больных с поражением костного мозга. В последних научных исследованиях рассматривается возможность элиминации популяции ДОК посредством усиления иммунного контроля. Привлекательной перспективой является использование антител, нацеленных на CD27 [29].
Конфликт интересов. Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки.
Financing. The study was performed without external funding.
16. Kasimir-Bauer S, Schleucher N, Weber R et al. Evaluation of different markers in non-small cell lung cancer: prognostic value of clinical staging, tumour cell detection and tumour marker analysis for tumour progression and overall survival. Oncol Rep 2003; 10: 475-82. doi.org/10.3892/or.10.2.475
17. Yasumoto K Osaki T, Watanabe Y et al. Prognostic value of cytokeratin-positive cells in the bone marrow and lymph nodes of patients with resected non-small cell lung cancer: a multicenter prospective study. Ann Thorac Surg 2003; 76:194-201. DOI: 10.1016/s0003-4975(03)00130-9
18. Горбунова Т.В., Поляков В.Г., Серебрякова И.Н. и др. Сравнительный анализ суб-популяционного состава лимфоцитов костного мозга у детей при мелкоклеточных саркомах. Иммунология. 2012; 33 (1): 37-44.
[Gorbunova T.V., Poliakov V.G., Serebriakova I.N. et al. Sravnitel'nyi analiz subpopuliat-sionnogo sostava limfotsitov kostnogo mozga u detei pri melkokletochnykh sarkomakh. Immunologiia. 2012; 33 (1): 37-44 (in Russian).]
19. Feuerer M, Rocha M, Bai L. Enrichment of memory T cells and other profound immunological changes in the bone marrow from untreated breast cancer patients. Int J Cancer 2001; 92 (1): 96-105.
20. Solomayer EF, Feuerer M, Bai L et al. Influence of adjuvant hormone therapy and chemotherapy on the immune system analysed in the bone marrow of patients with breast cancer. Clin Cancer Res 2003; 9 (1): 174-80.
21. Мкртчян В.А., Воротников И.К., Чернышева О.А. и др. Взаимосвязь между NK-клетками костного мозга больных раком молочной железы и биологическими особенностями опухоли и эритропоэзом. Онкогинекология. 2019; 3:4-13. [Mkrtchian V.A., Vorotnikov I.K., Chernysheva O.A. et al. Vzaimosviaz' mezhdu NK-kletka-mi kostnogo mozga bol'nykh rakom molochnoi zhelezy i biologicheskimi osobennostiami opukholi i eritropoezom. Onkoginekologiia. 2019; 3:4-13 (in Russian).]
22. Riethdorf S, Wikman H, Pantel K. Biological relevance of disseminated tumor cells in cancer patients. Int J Cancer 2008; 123 (9): 1991-2006. DOI: 10.1002/ijc.23825
23. Pantel K, Izbicki JR, Angstwurm M et al. Immunocytological detection of bone marrow micrometastasis in operable non-small cell lung cancer. Cancer Res 1993; 53:1027-31.
24. Capietto AH, Faccio R. Immune regulation of bone metastasis. Bonekey Rep 2014; 3:600. DOI: 10.1038/bonekey.2014.95
25. Buchan SL, Rogel A, Al-Shamkhani A. The immunobiology of CD27 and OX40 and their potential as targets for cancer immunotherapy. Blood 2018; 131 (1): 39-48. DOI: 10.1182/blood-2017-07-741025
26. DeBarros A, Chaves-Ferreira M, d'Orey F et al. CD70-CD27 interactions provide survival and proliferative signals that regulate T cell receptor-driven activation of human y5 peripheral blood lymphocytes. Eur J Immunol 2011; 41 (1): 195-201. DOI: 10.1002/eji.201040905
27. Mahnke YD, BrodieTM, Sallusto F et al. The who's who of T-cell differentiation: human memory T-cell subsets. Eur J Immunol 2013; 43 (11): 2797-809. DOI: 10.1002/eji.201343751
28. Тупицын Н.Н., Джуманазаров Т.М., Палладина А.Д. и др. Иммунологические показатели костного мозга больных немелкоклеточным раком легкого. Рос. биотерапев-тич. журн. 2020; 2.
[Tupitsyn N.N., Dzhumanazarov T.M., Palladina A.D. et al. Immunologicheskie pokazateli kostnogo mozga bol'nykh nemelkokletochnym rakom legkogo. Ros. bioterapevtich. zhurn. 2020; 2 (in Russian).]
29. Burris HA, Infante Jr, Ansell SM et al. Safety and activity of Varlilumab, a Novel and First-in-Class Agonist anti-CD27 antibody, in patients with advanced solid tumors. J Clin Oncol 2017; 35 (18): 2028-36. DOI: 10.1200/JCO.2016.70.1508
Информация об авторах / Information about the authors
Джуманазаров Темирбек Матчанович - аспирант онкологического отд-ния хирургических методов лечения (торакальная онкология) НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0001-5029-1406 Чулкова Светлана Васильевна - канд. мед. наук, доц., ст. науч. сотр. лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина», доц. каф. онкологии и лучевой терапии ФГАОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова». E-mail: chulkova@mail.ru; ORCID: 0000-0003-4412-5019 Тупицын Николай Николаевич - д-р мед. наук, проф., рук. лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0003-3966-128Х
Чернышева Ольга Алексеевна - канд. мед. наук, доц., ст. науч. сотр. лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина»
Аллахвердиев Ариф Керимович - д-р мед. наук, проф., зав. отд. торакоабдоминальной хирургии ГБУЗ «МКНЦ им. А.С. Логинова», проф. каф. онкологии и паллиативной медицины им. акад. А.И. Савицкого ФГБОУ ДПО РМАНПО. ORCID: 0000-0001-8378-2738
Палладина Александра Дмитриевна - врач, лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Купрышина Наталья Александровна - канд. мед. наук, доц., ст. науч. сотр. лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина»
Колбацкая Ольга Павловна - канд. мед. наук, доц., науч. сотр. лаб. иммунологии гемопоэза НИИ клинической онкологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0001-8493-9012
Кононец Павел Вячеславович - канд. мед. наук, зам. дир. по научной и лечебной работе, дир. НИИ клинической онкологии им. акад. Н.Н. Трапезникова ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0003-4744-6141 Ахмедов Бахром Бахтиярович - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. онкологического отд-ния хирургических методов лечения (торакальная онкология) ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0002-4482-7187 Герасимов Сергей Семенович - д-р мед. наук, ст. науч. сотр. онкологического отд-ния хирургических методов лечения (торакальная онкология) ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина». ORCID: 0000-0002-0833-6452
Temirbek M. Djumanazarov - Graduate Student, Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0001-5029-1406
Svetlana V. Chulkova - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Pirogov Russian National Research Medical University. E-mail: chulkova@mail.ru; ORCID: 0000-0003-4412-5019
Nikolay N. Tupitsyn - D. Sci. (Med.), Prof., Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0003-3966-128Х
Olga A. Chernysheva - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology
Arif K. Allakhverdiev - D. Sci. (Med.), Prof., Loginov Moscow Clinical Scientific and Practical Center, Russian Medical Academy of Continuous Professional Education. ORCID: 0000-0001-8378-2738
Alexandra D. Palladina - physician, Blokhin National Medical Research Center of Oncology
Natalya А. Kupryshina - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology
Olga P. Kolbatskaya - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0001-8493-9012
Pavel V. Kononetz - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0003-4744-6141
Bakhrom B. Akhmedov - Cand. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0002-4482-7187
Sergey S. Gerasimov - D. Sci. (Med.), Blokhin National Medical Research Center of Oncology. ORCID: 0000-0002-0833-6452
Статья поступила в редакцию / The article received: 30.04.2020 Статья принята к печати / The article approved for publication: 16.09.2020
fer
КАЛКВЕНС
(акалабрутиниб) капсулы 100 мг
ДОКАЗАННАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ У ПАЦИЕНТОВ С ДИАГНОЗО!
• Хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ)/ мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (МЛЛ)2
• Рецидивирующая/рефрактерная форма "мантийноклеточной лимфомы (р/р МКЛ)2 J
Wfc А
ь¿а'Лл -
гЦр #
РК # УВЕРЕННОСТЬ м НА ВСЕМ ПУТиГ
'Л
7/и i ^
СНИЖЕНИЕ РИСКА ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЛИ СМЕРТИ В ПЕРВОЙ ЛИНИИ ТЕРАПИИ ХЛЛ1
КАЛКВЕНС" + обинутузумаб v\ в сравнении с обинутузумаб + хлорамбуцил*
0р=0,10 (ДИ 95%: 0,06-0,17), р<0,0001 _
L
"Медиана выживаемости без прогрессирования (ВБП) не была достигнута при применении комбинации препаратов КАЛКВЕНС® + обинутузумаб в сравнении с 22,6 месяца (ДИ 95%: 20-28) при применении комбинации обинутузумаб + хлорамбуцил.2
ДИ - доверительный интервал, ОР - относительный риск.
1. Jeff Р. Sharman et al. Acalabrutinib with or without obinutuzumab versus chlorambucil and obiriututzumab in treatment-naive chronic lymphocytic leukemia: (ELEVATETN): a randomised, controlled, phase 3 trial. Lancet 2020; 395:1278-91.
2. Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Калквенс® (акалабрутиниб). Регистрационное удостоверен иеЛП-0061 72 от 16.04.2020.
Краткая инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Калквенс* (акалабрутиниб). Регистрационный номер: ЛП - 006172 от 16.04.2020. Торговое наименование: Калквенс*.Международное непатентованное наименование: акалабрутиниб. Лекарственная форма: капсулы. Показания к применению: хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); мел ко клеточная лимфоцитарная лимфома (МЛЛ) у взрослых пациентов; мантийноклеточная лимфома (МКЛ) у взрослых пациентов, которые получили, по крайней мере, одну линию терапии. Противопоказания: повышенная чувствительность какалабрутинибу или вспомогательным веществам, входящим в состав препарата; детский возраст до 18 лет. С осторожностью: беременность и период грудного вскармливания, пациенты с нарушением функции печени тяжелой степени тяжести, пациенты с нарушением функции почек тяжелой степени тяжести, а также пациенты, которым требуется проведение диализа. Способ применения и дозы. Хронический лимфоцитарный лейкоз/мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома: 100 мг (1 капсула) 2 раза в сутки в виде монотерапии или в комбинации с обинутузумабом. Мантийноклеточная лимфома: 100 мг (1 капсула) 2 раза в сутки. Интервал между приемом доз должен составлять примерно 12 часов. Капсулы следует проглатывать целиком, запивая водой, приблизительно в одно и то же время суток, независимо от приема пищи. Рекомендуется продолжать терапию до прогрессирования заболевания или развития неприемлемой токсичности. Побочное действие. Наиболее частыми нежелательными лекарственными реакциями (г 20%) различной степени тяжести, отмеченными у пациентов, получавших акалабрутиниб, были инфекция, головная боль, диарея, кровоподтеки, боль в мышцах и костях, тошнота, утомляемость и сыпь. Наиболее частыми (ь 5%) нежелательными лекарственными реакциями ^ 3 степени тяжести были инфекции (17,6%), нейтропения (14,2%) и анемия (7,8%). Особые группы пациентов. У пациентов в возрасте 65 лет и старше не было отмечено клинически значимых отличий эффективности и безопасности по сравнению с пациентами более молодого возраста. Нарушение функции почек. Не требуется коррекция дозы при применении у пациентов с нарушением функции по-чекотлегкой до средней степени тяжести Фармакокинетика и безопасность препарата Калквенс'у пациентов с нарушением функции почек тяжелой степени (рСКФ менее 29 мл/мин/1,73м2),а также пациентов с терминальной стадией почечной недостаточности не изучались. Нарушение функции печени. Пациентам с нарушением функции печени от легкой до умеренной степени тяжести коррекция дозы не требуется Применение препарата Калквенс'у пациентов с нарушением функции печени тяжелой степени не рекомендуется Тяжелые сердечно-сосудистые заболевания. Пациенты с тяжелыми сердечно-сосудистыми заболеваниями не включались в клинические исследования препарата Калквенс" Перед назначением препарата ознакомьтесь, пожалуйста, с полной инструкцией по медицинскому применению. Дальнейшая информация предоставляется по требованию: ООО «АстраЗенека Фармасьютикалз», Российская Федерация, 123112, Москва, 1-й Красногвардейский пр-д, д. 21, стр. 1, тел.: +7 (495) 799 56 99, факс: +7 (495) 799 56 98. Дата утверждения - 16.04.2020. Материал предназначен для специалистов здравоохранения. Имеются противопоказания. Для получения дополнительной информации ознакомьтесь с полной инструкцией по медицинскому применению.
Если Вам стало известно о нежелательной реакции при использовании лекарственного препарата компании «АстраЗенека», пожалуйста, сообщите эту информацию в медицинский отдел компании. Вы можете написать нам по электронной почте Safety.Russia@astrazeneca.com, заполнить веб-форму: https://aereporting.astrazeneca. сот/ или связаться с нами по телефону в (495) 799-56-99, доб. 2560.
ООО «АстраЗенека Фармасьютикалз»
Российская Федерация, 123112, Москва 1-й Красногвардейский пр-д, д. 21, стр. 1 Телефон: +7 (495) 799 56 99 факс: +7 (495) 799 56 98 www. ast raze п еса. г и
CAL_RU-7556. Дата одобрения 17.06.2020. Дата истечения 17.06.2022.
AstraZeneca
