CC BY
139
УДК 579.66
ДЕСТРУКЦИЯ УГЛЕВОДОРОДОВ РАЗЛИЧНЫМИ МОРФОТИПАМИ НЕФТЕОКИСЛЯЮЩИХ АКТИНОБАКТЕРИЙ
UDC 579.66
DESTRUCTION OF HYDROCARBONS WITH VARIOUS MORPHOTYPES OF OIL OXIDIZING ACTINOBACTERIA
Худокормов Александр Александрович к.б.н.
Карасева Эмма Викторовна к.б.н., профессор
Самков Андрей Александрович к.б.н.
Волченко Никита Николаевич к.б.н., ст. преподаватель
Козицын Александр Евгеньевич аспирант
Кубанский государственный университет, Краснодар, Россия
В работе проводили сравнительное изучение углеводородокисляющей активности 8- и Я-морфотипов нефтеокисляющих актинобактерий из коллекции Кубанского госуниверситета. Были отмечены достоверные различия в параметрах роста между 8 и 11-формами нефтеокисляющих актинобактерий. У 8-форм выше максимальная удельная скорость роста, для них характерен широкий спектр деградации углеводородов и высокая степень деструкции поллютантов. В опытах с использованием в качестве субстрата нефти и мазута 8-формы актинобактерий быстрее адаптировались к условиям среды
Ключевые слова: АКТИНОБАКТЕРИИ, КУЛЬТИВИРОВАНИЕ, БИОДЕГРАДАЦИЯ, БИОРЕМЕДИАЦИЯ, МОРФОТИП
Khudokormov Alexander Alexandrovich Dr.Sci.Biol.
Karaseva Emma Viktorovna Cand.Biol.Sci., professor
Samkov Audrey Alexandrovich Cand.Biol.Sci.
Volchenko Nikita Nikolaevich Cand.Biol.Sci., senior lecturer
Kozitsin Alexander Evgenyevich postgraduate student
Kuban State University, Krasnodar, Russia
In this article we have carried out a comparative study of hydro-carbon-oxidizing activity of S-and R-morphological types of oil oxidizing Actinobacteria from the collection of Kuban State University. Significant differences observed in parameters of growth between S- and R-forms of oil oxidizing Actinobacteria. In S-forms it is higher than the maximum specific growth rate, which is typical for a wide range of hydrocarbon degradation and a high degree of degradation of pollutants. In experiments with the use of oil as a substrate and heavy oil S-forms, Actinobacteria quickly adapted to the environmental conditions
Keywords: ACTINOBACTERIA, CULTIVATION, BIODEGRADATION, BIOREMEDIATION, MORPHOTYPE
Крупнейшей проблемой, стоящей перед человечеством, является разрушение естественных экосистем под действием антропогенной нагрузки. Одним из основных фактором давления общепризнанно считается накопление в биосфере всевозможных поллютантов, в том числе сырой нефти и продуктов её переработки. Мощное негативное влияние нефтепродуктов на атмосферу, гидросферу, почвенный покров Земли обусловлен рядом факторов: активным и всё более возрастающим применением углеводородного сырья во всех отраслях
хозяйственной деятельности человека; широким распространением нефтедобывающих, транспортирующих, перерабатывающих и потребляющих предприятий; характерными физико-химическими и токсическими свойствами углеводородов, обусловливающими их низкую биодеградабельность в естественных экосистемах. Микроорганизмы, способные потреблять углеводороды, являются обычными представителями биоценозов почв и водных экосистем. Основными компонентами углеводородокисляющих бактериоценозов являются актинобактерии, такие, как родококки, нокардии, гордонии, артробактерии [1,2]. В хронически загрязненных нефтью почвах родококки составляют 90%. В почвах с низкой степенью нефтяного загрязнения количество родококков снижается и составляет 60-80% [3]. Даже в незагрязненных почвах концентрация
углеводородокисляющих актинобактерий 0,01—0,05% [4]. Шюёососсиз
постоянный и доминирующий компонент микробиоценозов нефтезагрязненных почв. Не меньшим нефтеокисляющим потенциалом характеризуются Оогёоша, ]ЧосагсЦа [3]. Основной экологической ролью родококков является ассимиляция природных и антропогенных газообразных, жидких н-алканов, ароматических углеводородов [5]. Все родококки, выделяемые из углеводородзагрязнённых экосистем, при культивировании на средах с нефтепродуктами максимальную биомассу накапливают при росте на алканах С15 и С16 [6]. Актинобактерии способны усваивать широкий спектр углеводородов, включая и ароматические, имеют высокую скорость роста [7]. Активность актинобактерий в 70 раз превосходит активность других нефтеокисляющих микроорганизмов. Это связано с более крупными размерами клеток и их способностью окислять большие количества н-алканов, чем это необходимо для удовлетворения своих энергетических и конструктивных потребностей. Избыток окисленного н-алкана родококки и артробактерии переводят в нейтральные липиды, тогда как другие нефтеокисляющие микроорганизмы (например, псевдомонады) внутреннего пула
углеводородов не имеют и резервных липидов не образуют. Нефтеокисляющая активность родококков может коррелировать с морфотипом колоний. Так, ранее была показана зависимость способности родококков утилизировать ароматическую фракцию арабской сырой нефти от морфотипа колоний [8,9].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В качестве объектов исследования послужили штаммы нефтеокисляющих актинобактерий S- и R-морфотипов, выделенные из углеводородзагрязнённых объектов и входящие в коллекцию микроорганизмов КубГУ
Штамм Rhodococcus erythropolis В2. Грамположительные коккобактерии. Колонии кремовые округлые, точечные, непрозрачные, поверхность гладкая, край ровный, консистенция маслянистая.
Штамм Rhodococcus sp. J8. Короткие палочки с закруглёнными концами. По Граму окрашиваются положительно. Колонии округлые, точечные, непрозрачные. Поверхность колоний шероховатая, окраска красная, структура однородная.
Штамм Dietzia maris Jl. Мелкие одиночные грамположительные кокки. Образуют округлые, точечные колонии оранжевого цвета. Край колоний ровный, поверхность шероховатая, выпуклая, консистенция сухая.
Штамм Gordonia sp. Z7. Грамположительные изогнутые палочки в виде скоб, дают V-образные структуры. Колонии красно-оранжевые, непрозрачные, шероховатые, край рваный, структура однородная
Штамм Nocardia sp. J2. Одиночные грамположительные палочки с обрубленными концами. Дают округлые, непрозрачные, ярко-розовые колонии с гладкой поверхностью и ровным краем.
Штамм Rhodococcus erythropolis F1. Тонкие, изящные коккобактерии. По Граму окрашиваются положительно. Образуют V-образные структуры. Колонии кремово-розовые, округлые, блестящие, с гладкой выпуклой поверхностью, край
ровный, консистенция маслянистая.
При выборе штаммов руководствовались ранее проведёнными исследованиями, подтверждающими их высокую нефтеокисляюшую активность [10]. Для поддержания культур, наработки биомассы клеток и количественного учета использовали плотную питательную среду - питательный агар (ПА) стандартного состава. Для наращивания биомассы клеток, а также исследования биодеструкции нефтепродуктов использовали жидкую минеральную среду следующего состава (минимальную среду): нитрат калия - 4,0 г, однозамещенный фосфат калия - 0,6 г, двузамещенный фосфат натрия (двенадцати водный) - 1,4 г, сульфат магния - 0,8 г, вода дистиллированная 1 л, раствор микроэлементов стандартный №17 - 1 мл. В качестве субстрата использовали сахарозу, гексадекан или нефтепродукты из ряда: дизельное топливо, нефть, мазут, вносимые в среду в необходимом количестве в зависимости от целей культивирования. Для качественного определения деструкции индивидуальных алканов использовали агаризованную среду того же состава. Культивирование на жидких питательных средах осуществлялось в колбах 100-500 мл на орбитальных качалках при частоте вращения 100-200 об/мин при комнатной температуре.
Остаточное содержание нефтепродуктов в минеральной среде и в нефтесодержащих отходах определяли по стандартной методике при помощи концентратомера КН-2М. Для определения количества жизнеспособных клеток производили посев из кратных разведений на ПА в 3-х повторностях. Чашки термостатировали при 25°С в течение 2-3 суток, после этого проводили подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ) и определяли число КОЕ на 1 г (мл) субстрата. Обработку результатов осуществляли с помощью статистического пакета 81ай8йса 6.0
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Нами было проведено сравнительное изучение активности нефтеокисляющих актинобактерий, выделенных из нефтезагрязнённых почв, почвогрунтов и нефтешламов. В качестве источника углеводородного питания использовали нормальные парафины ряда Сю - Сі8.
При 0,1 %-ной начальной концентрации углеводородных фракций в составе среды (табл. 1) наблюдается интенсивная утилизация всеми исследуемыми культурами актинобактерий в ряду Сі6-Сі8.
Таблица 1 - Степень утилизации (%) отдельных фракций углеводородов исследуемыми штаммами актинобактерий, при начальной концентрации субстрата 0,1%
Штамм Углеводородный субстрат 0,1%
Сю Си Сіз Си Сі5 Сіє Сі7 Сі8
Rhodococcus erythropolis F1 36 33 32 53 73 100 100 98
Rhodococcus erythropolis B2 33 32 31 43 65 100 98 96
Nocardia sp J2 24 32 32 48 73 98 98 97
Dietzia maris Jl 13 13 22 34 53 96 100 91
Gordonia sp. Z7 16 11 19 32 49 92 98 94
Rhodococcus sp J8 27 25 23 27 45 89 94 92
контроль 4 5 3 1 4 2 2 3
При деградации пентадекана наблюдается некоторое различие между S-(Rhodococcus erythropolis FI, Rhodococcus erythropolis B2, Nocardia sp. J2) и R-(Rhodococcus sp. J8, Dietzia maris Jl, Gordonia sp. Z7) культурами. S-формы более полно деградируют исследуемый углеводород. Дальнейшее сокращение углеводородной цепочки приводит к угнетению нефтеокисляющей активности, что следует из невысокого процента деградации углеводородных фракций ряда С 14-С 10. При потреблении этих углеводородов также сохраняется различие в активности между S и R вариантами. Труднее всего R-вариантами потребляются декан и ундекан, степень деструкции, которых не превышает 25%.
При десятикратном увеличении концентрации углеводородов в составе среды также наиболее деградабельными для всех штаммов актинобактерий, используемых
Научный журнал КубГАУ, №92(08), 2013 года в эксперименте, остаются фракции С^-С^ (табл.2)
Таблица 2 - Степень утилизации (%) отдельных фракций углеводородов исследуемыми штаммами
актинобактерий, при начальной концентрации субстрата 1%
Штамм Углеводородный субстрат 1%
Сю Си Сіз Сі4 Сі5 Сіб Сі7 Сі8
Rhodococcus erythropolis F1 35 39 35 50 77 100 98 100
Rhodococcus erythropolis B2 39 37 35 43 69 100 100 100
Nocardia sp J2 28 зо 29 44 68 99 99 92
Dietzia maris Jl 10 8 19 32 54 93 98 90
Gordonia sp. Z7 15 14 21 28 50 95 92 90
Rhodococcus sp J8 19 22 19 24 47 82 80 79
контроль 7 4 3 5 3 4 3 4
Различия в потреблении углеводородов ряда декан - пентадекан между S- и R-формами актинобактерий возрастают по мере увеличения концентрации углеводородного субстрата. Возможно, это связано с различными уровнями синтеза и экскреции биосурфактантов [11]. Общий процент потребления этих фракций углеводородов существенно сокращается для штаммов R. sp. J8, D. maris Jl, Gordonia sp. Z7 и остается практически неизменным для R. erythropolis FI, R. erythropolis В2 и Nocardia sp. J2.
При увеличении содержания углеводородов в сто раз, по сравнению с начальным, токсическое действие на исследуемые культуры начинает сказываться и в ряду гексадекан - октадекан (табл. 3).
Таблица 2 - Степень утилизации (%) отдельных фракций углеводородов исследуемыми штаммами
актинобактерий, при начальной концентрации субстрата 10%
Штамм Углеводородный субстрат 10%
Сю Си Сіз Си Сі5 Сіб Сі7 Сі8
Rhodococcus erythropolis FI 14 13 19 44 59 63 69 74
Rhodococcus erythropolis B2 25 22 21 50 62 75 78 74
Nocardia sp J2 13 12 21 49 55 67 69 73
Dietzia maris Jl 7 7 6 19 33 63 70 62
Gordonia sp. Z7 10 11 12 23 зо 54 63 59
Rhodococcus sp J8 11 10 16 22 39 65 63 70
контроль 3 3 5 2 3 3 4 2
Процент деградации этих углеводородов при данной концентрации субстрата уменьшается в среднем на 10-30%. Высокую активность по сравнению с другими культурами сохраняет лишь штамм R. erythropolis В2. По-видимому, при увеличении концентрации углеводородного субстрата сверх уровней адаптации изучаемых актинобактерий, выделение ими в среду биосурфактантов не оказывает определяющего вклада в процесс потребления углеводородов и снижения их токсического действия на клетку. Степень деградации нефтепродуктов в этом случае детерминируется индивидуальной устойчивостью штамма к токсиканту.
Для дальнейшего исследования углеводородокисляющей способности штаммов и уровня их активности в отношении углеводородов в качестве единственного источника углерода использовали наиболее распространённые поллютанты, такие как сырая российская нефть, топочный мазут М40, дизельное топливо, авиационный керосин, минеральные масла марок М8 и М10 и эмульсол, представляющий собой смесь веретенного масла и высокомолекулярных жирных кислот. Субстрат вносился, как и в предыдущем опыте, из расчёта 0,1 %, 1% и 10 %. При деградации нефтепродуктов с превалирующим содержанием легких фракций (нефть, дизельное топливо и керосин), наблюдается одинаково высокая нефтеокисляющая активность у всех исследуемых штаммов актинобактерий (табл. 4). Степень деструкции исследуемых субстратов колеблется у разных штаммов от 76 до 96%.
Таблица 4 - Степень утилизации (%) нефтепродуктов и минеральных масел исследуемыми
штаммами актинобактерий, при различной начальной концентрации субстрата
Штамм Углеводородный субстрат 0,1%
Керосин Дизтопл иво Нефть Масло М8 Масло М10 Эмульс ол Мазут
Rh. erythropolis F1 88 97 93 81 80 80 93
Nocardia sp. J2 85 97 96 57 59 73 84
Rh. erythropolis B2 79 84 91 83 78 85 92
Dietzia maris J1 76 89 92 45 39 59 77
Gordonia sp. Z7 76 88 82 47 44 63 83
Rhodococcus sp. J8 78 94 94 39 42 64 73
контроль 5 6 9 5 8 2 3
Углеводородный субстрат 1%
Rh. erythropolis FI 87 95 96 84 87 82 86
Nocardia sp. J2 89 90 92 59 63 65 82
Rh. erythropolis B2 79 88 86 78 84 80 91
Dietzia maris J1 69 73 78 50 41 45 68
Gordonia sp. Z7 79 86 72 37 42 29 61
Rhodococcus sp. J8 55 71 75 43 41 50 73
контроль 3 5 2 2 5 4 3
Углеводородный субстрат 10%
Rh. erythropolis FI 63 76 63 56 51 56 59
Nocardia sp. J2 49 51 48 47 43 34 45
Rh. erythropolis B2 50 59 65 52 57 51 52
Dietzia maris J1 36 44 31 32 34 19 22
Gordonia sp. Z7 33 39 34 30 22 14 26
Rhodococcus sp. J8 34 36 34 35 29 18 29
контроль 2 2 3 3 4 2 2
При переходе к минеральным маслам или нефтепродуктам, содержащим большее количество высокомолекулярных углеводородов (эмульсол и мазут), более высокую активность показывают штаммы, выделяющие поверхностно-активные вещества. Наиболее показательны в этом плане штаммы Я. егуЙнюроНБ В2 и Я. егуЙнюроНБ Б1, проявляющие наряду с нефтеокисляющими свойствами способность к продукции биосурфактантов [12], чем объясняется наивысшая степень деградации ими всех высокомолекулярных углеводородов. При однопроцентной концентрации углеводородов в среде вновь, как и в опыте с индивидуальными углеводородами, происходит разделение штаммов на две четко обособленные группы. У актинобактерий, выделяющих экзополисахариды (Б-формы), нефтеокисляющая активность по отношению ко всем используемым в эксперименте углеводородам существенно выше, у Я - форм. Обособленность групп Б- и Я-культур в нефтеокисляющей активности сохраняется. В целом же, возросшая концентрация нефтепродуктов не оказала угнетающего воздействия на исследуемые штаммы актинобактерий.
Внесение в питательную среду 10% углеводородов в качестве источника углерода вызвало уменьшение нефтеокисляющей активности у штаммов R. sp. J8, D. maris Jl, G. sp. Z7 в два-четыре раза (см.табл. 4). Штаммы R. erythropolis F1 и R. erythropolis В2 сохранили высокое сродство к углеводородному субстрату, несмотря на его концентрацию. Деструкция ими углеводородного субстрата не опускалась ниже 50%. Возникшая разобщённость между исследуемыми актинобактериальными штаммами сохранилась и при 10%-ной концентрации углеводородов. Выраженная разница была между штаммами, выращенными на труднодеградируемых субстратах, содержащих высокомолекулярные углеводороды. Угнетённость штаммов была ниже, чем при использовании индивидуальных углеводородов в аналогичной концентрации, что связывается нами с гетерогенностью используемых субстратов. В этом случае ни один из компонентов сложного углеводорода не достиг концентрации, достаточной для оказания существенного ингибирующего воздействия. Самым труднопотребляемым субстратом оказались минеральные масла вне зависимости от их марки. К их активной деструкции были способны лишь два штамма R. erythropolis F1 и R. erythropolis В2, что даёт возможность эффективного использования данных культур как индивидуально, так и в составе консорциумов при ликвидации загрязнения субстрата минеральными маслами или их компонентами. Общий процент деструкции эмульсола был несколько выше, что может объясняться наличием в его составе высокомолекулярных жирных кислот, за счёт которых происходило начальное интенсивное накопление микробного пула. Достоверные отличия между S- и R-морфотипами в потреблении углеводородов и минеральных масел сохранялись при любой концентрации поллютанта.
Таким образом, нами была определена степень потребления индивидуальных углеводородных фракций, наиболее часто встречающихся в качестве поллютантов минеральных масел, а также установлены различия в активности между исследуемыми штаммами актинобактерий, проявляющиеся в неоднозначной
реакции на пониженные и повышенные концентрации нефтепродуктов, содержащих в своём составе легкие и тяжелые фракции.
Для оценки возможности использования штаммов в процессах биоремедиации субстратов, загрязнённых различными углеводородами, проводили изучение скорости роста культур при использовании различных нефтепродуктов в качестве источников углерода. В качестве источников углеродного питания, нами было решено использовать гексадекан (как субстрат, содержащий лёгкие углеводородные фракции), топочный мазут М 40 (как субстрат, содержащий преимущественно тяжелые углеводородные фракции) и сырую российскую нефть (содержащую как легкие, так и тяжелые фракции углеводородов и являющуюся наиболее распространённым загрязнителем окружающей среды) (рис. 1).
0,3 -)
0=25 -
Рисунок 1- Максимальные удельные скорости роста культур актинобактерий при культивировании на различных субстратах
Сравнение удельных скоростей роста показывает, что при любом источнике углеводородного субстрата Б-формы бактерий проявляют более высокую скорость
роста по сравнению с Я-формами. Для всех исследуемых культур максимальная удельная скорость роста была отмечена на среде с гексадеканом, наименьшая удельная скорость роста отмечена на среде с мазутом. Исключение составляет штамм Шюёососсш егуЛгороНБ В2, для которого удельные скорости роста при культивировании на среде с нефтью и мазутом были одинаковы, а также культура ]ЧосагсЦа Бр. 32, для которой удельная скорость роста на среде с мазутом была выше, чем в аналогичной среде с нефтью.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В процессе культивирования были отмечены достоверные различия в параметрах роста между Б и Я-формами нефтеокисляющих актинобактерий. У Б-форм выше максимальная удельная скорость роста, для них характерна более быстрая адаптация к новому субстрату. В опытах с использованием в качестве субстрата нефти и мазута Б-формы актинобактерий быстрее адаптировались к условиям среды. Таким образом, при проведении работ по биоремедиации целесообразно использовать штаммы Шюёососсиз егуШгороНз В2 и ]ЧосагсЦа Бр. Л, относящиеся к Б-формам, как обладающие высокой скоростью роста при различных концентрациях углеводородов с различной длиной цепи и фракционным составом.
Список литературы
1. Гирич И.Е., Малахов А.А., Гавриш Е.Ю., Карасева Э.В. Таксономическое разноообразие углеводородокисляющей микрофлоры в нефтезагрязненных почвах Краснодарского края // Экобиотехнология: борьба с нефтяным загрязнением окружающей среды. Пущино, 2001. С. 24-27
2. Коронелли Т.В., Дермичева С.Г., Ильинский В.В., Комарова Т.Н., Поршнева О.В. Видовая структура углеводородокисляющих бактериоценозов экосистем разных климатических зон //Микробиология. 1994. Т. 63, № 5. С. 917-922.
3. Малахов А.А., Гирич И.Е., Нечитайло Т.Ю., Карасева Э.В. Роль нефтеокисляющей микрофлоры в биоремедиации почв и почвогрунтов, загрязненных нефтью // Экология-2000: Мат. межд. научно-практич. конф. Москва, 2000. С. 23-24
4. Oberbremer A., Muller-Hurtig R. Aerobic stepwise hydrocarbon degradation and forPhmation of biosurfactants by an original soil population in a stirred reactor // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1989. V. 31. P. 582-586.
5. Makula R., Finnerty W.R. Microbial assimilation of hydrocarbons, fatty acids derived from normal alkanes // J. Bacteriol. 1986. V. 95. P. 2102-2107.
6. Бердичевская M.B. Особенности физиологии родококков разрабатываемых нефтяных залежей//Микробиология. 1989. Т. 58. № 1. С. 60-65.
7. Barbeau С., Deschenes L., Karamanev D., Comeau Y., Samson R. Bioremediation of pentachlorophenol-contaminated soil by bioaugmentation using activated soil // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1997. V. 48. P. 745-752.
8. Wakayama Y, Nakajima M, Murooka H. Isolation and characterization of S and R strains of Nocardia sp. CF222. Bull Coll Agric Vet Med Univ. 1980;V37. P.99-105.
9. Noriyuki Iwabuchi, Michio Sunairi, Hirosi Anzai, Mutsuyasu Nakajima, Shigeaki Harayama Relationships between Colony Morphotypes and Oil Tolerance in Rhodococcus rhodochrous Appl. Environ. Microbiol. 2000 November; 66(11): 5073-5077.
10. Карасева Э.В., Гирич И.Е., Худокормов А.А., Алешина Н.Ю., Карасёв С.Г. Биоремедиация черноземной почвы, загрязненной нефтью // Биотехнология. -2005. -№ 2. -С. 67-72.
11. Волченко Н.Н., Карасёва Э.В. Скрининг углеводородокисляющих бактерий - продуцентов поверхностно-активных веществ биологической природы и их применение в опыте по ремедиации нефтезагрязненной почвы и нефтешлама // Биотехнология. -2006. -№ 2. -С. 57-62.
12. Карасёва Э.В. Волченко Н.Н, Худокормов А.А., Самков А.А., Карасёв С.Г., Батина Е.В., Самкова С.М. Нефтеокисляющий штамм Rhodococcus erythropolis В2 как основа создания биопрепарата для ликвидации углеводородных загрязнений и рекультивации земель //Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. - 2012. - № 83. - С.154-167
References
1. Girich I.E., Malahov A.A., Gavrish E.Ju., Karaseva Je.V. Taksonomicheskoe raznooobrazie uglevodorodokisljajushhej mikroflory v neftezagijaznennyh pochvah Krasnodarskogo kraja // Jekobiotehnologija: bor'ba s neftjanym zagijazneniem okruzhajushhej sredy. Pushhino, 2001. S. 24-27
2. Koronelli T.V., Dermicheva S.G., Il'inskij V.V., Komarova T.N., Porshneva O.V. Vidovaja struktura uglevodorodokisljajushhih bakteriocenozov jekosistem raznyh klimaticheskih zon // Mikrobiologija. 1994. T. 63, № 5. S. 917-922.
3. Malahov A.A., Girich I.E., Nechitajlo T.Ju., Karaseva Je.V. Rol' nefteokisljajushhej mikroflory v bioremediacii pochv i pochvogruntov, zagijaznennyh neft'ju // Jekologija-2000: Mat. mezhd. nauchno-praktich. konf. Moskva, 2000. S. 23-24
4. Oberbremer A., Muller-Hurtig R. Aerobic stepwise hydrocarbon degradation and forPhmation of biosurfactants by an original soil population in a stirred reactor // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1989. V. 31. P. 582-586.
5. Makula R., Finnerty W.R. Microbial assimilation of hydrocarbons, fatty acids derived from normal alkanes// J. Bacteriol. 1986. V. 95. P. 2102-2107.
6. Berdichevskaja M.V. Osobennosti fiziologii rodokokkov razrabatyvaemyh neftjanyh zalezhej // Mikrobiologija. 1989. T. 58. № 1. S. 60-65.
7. Barbeau C., Deschenes L., Karamanev D., Comeau Y., Samson R. Bioremediation of pentachlorophenol-contaminated soil by bioaugmentation using activated soil // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1997. V. 48. P. 745-752.
8. Wakayama Y, Nakajima M, Murooka H. Isolation and characterization of S and R strains of Nocardia sp. CF222. Bull Coll Agric Vet Med Univ. 1980;V37. P.99-105.
9. Noriyuki Iwabuchi, Michio Sunairi, Hirosi Anzai, Mutsuyasu Nakajima, Shigeaki Harayama
Relationships between Colony Morphotypes and Oil Tolerance in Rhodococcus rhodochrous Appl. Environ. Microbiol. 2000 November; 66(11): 5073-5077.
10. Karaseva Je.V., Girich I.E., Hudokormov A.A., Aleshina N.Ju., Karasjov S.G. Bioremediacija chernozemnoj pochvy, zagrjaznennoj neft'ju // Biotehnologija. -2005. -№ 2. -S. 67-72.
11.Volchenko N.N., Karasjova Je.V. Skrining uglevodorodokisljajushhih bakterij - producentov poverhnostno-aktivnyh veshhestv biologicheskoj prirody i ih primenenie v opyte po remediacii neftezagrjaznennoj pochvy i nefteshlama // Biotehnologija. -2006. -№2. -S. 57-62.
12. Karasjova Je.V. Volchenko N.N., Hudokormov A.A., Samkov A.A., Karasjov S.G., Batina E.V., Samkova S.M. Nefteokisljajushhij shtamm Rhodococcus erythropolis B2 kak osnova sozdanija biopreparata dlja likvidacii uglevodorodnyh zagijaznenij i rekul'tivacii zemel' //Politematicheskij setevoj jelektronnyj nauchnyj zhumal Kubanskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. - 2012. - № 83. -S.154-167
