CC BY
71
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2015 БИОЛОГИЯ Вып* 3
УДК 579.22
В. П. Коробова'ь'% JL М. Лемкина% Т. В, Полюдова3 d
а Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия ]> Пермский 1 осу дарственный национальный нсследогачельский университет, Пермь, Россия с Пермский национальный исследовательский политехнический университет^ Пермь, Россия d Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д,Н, Прянишникова, 11ермь, Россия
ДЕСТРУКЦИЯ БИОПЛЕНОК КОАГУЛАЗОНЕГАТИВНЫХ СТАФИЛОКОККОВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КАТИОННЫХ ПЕПТИДОВ
В результате проведенных исследований установлено, что бактерии разных штаммов коагулазоне-гативных стафилококков обладают выраженной способностью к образованию биопленок. Динамика роста биопленок бактерий разных штаммов существенно различается. Биопленки, образованные антибиотикочувствительными бактериями, достигают своего максимума через сутки. Пленкофор-мирующий процесс бактерий полирезистснтного штамма развивается более медленно, характеризуется перманентным ростом и достигает максимума лишь на 4 сутки. Предупреждение развития биопленок стафилококков возможно при внесении в среду роста низкомолекулярных антибактериальных катионньтх пептидов - варнернна и хоминина. Как покапали эксперименты, данные пептиды способны не только предупреждать развитие биопленок, но и активно разрушать уже сформированные зрелые биопленки кш1улазонегативных С1ж])илококков,
Ключевые слова: антибиотикорезистентность; биопленки; катионные антибактериальные пептиды; коагулазо-пегативпые стафилококки.
V. P. Korobov1 b % L. М. Lemkina3, Т\ V+ Polyudova" d
a Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Ural Branch, RAS, Perm, Russia Federation b Penn Stale University, Peims Russian Federation
c Perm Notional Research Polytechnic University, Perm, Russia Federation d Perm State Agricultural Academy, Perm, Russia Federation
DESTRUCTION BIOFILMS OF COAGULASE-NEGATIVE STAPHYLOCOCCI BY BACTERIAL CATIONIC PEPTIDES
Pronounced ability of different strains of coagulase-negative staphylococci to form biofilm was found. Dynamics of biofilm growth considerably different among the bacteria of varies strains. Biofilm. formed by antibiotic susceptibility bacteria, reaches its peak after a day. Biofihn formation of multidrug-resistant strains was more slowly process, which is characterized by permanent growth and reaches a maximum only 4 day. Introduction into the growth medium low molecular weight cationic antimicrobial peptides warnerin and hominin can prevent the development of staphylococcal biofilms, These peptides are not only able to prevent the development of biofilm, but also to actively destroy the already formed mature biofilms of coagulase-negative staphylococci.
Key words: antibiotic resistance; biofilms; cationic antibacterial peptides; coagulase-negative staphylococci.
Уникальные биологические особенности бактерий, такие как наличие разнообразных механизмов адаптации к постоянно меняющимся параметрам среды. позволяют их подавляющему большинству сохранять жизнеспособность и поддерживать определенную численность популяции даже в самых экстремальных и агрессивных условиях. Одними из самых значимых адаптивных свойств бактерий является их способность формировать биопленки на грани-
цах раздела фаз, а также быстрое формирование устойчивости к токсичным соединениям и, в частности, к антибиотикам. В настоящее время считается, что эти два чрезвычайно важных процесса взаимосвязаны, поскольку развитие аигибиотикорезистентности бактерий в составе биопленки происходит значительно быстрее [Ляминидр. 2012].
Широкое применение в медицинской практике биоматериалов и искусственных устройств (дре-
С, Коробов В. П., Лемкина Л. М, Полюдова Т. В., 2015
233
нажи, катетеры, сетки, протезы) способствует формированию на их поверхностях бактериальных биопленок и повышает риск распространения инфекции в организме [Псрспанова, 2013]. Заболевания, обусловленные бноматсриал-ассопиированны-ми инфекциями, требуют более тщательного подбора доз антибактериальных препаратов, поскольку минимальные ингибирующие концентрации антибиотиков для бактерий в составе биопленок значительно превышают таковые для планктонных клеток [Frank et al. 2007], Учитывая высокую приспособляемость бактерий к антибиотическим соединениям, наиболее остро стоит вопрос о поиске средств, эффективно препятствующих образованию биопленок и способствующих разрушению зрелых бактериальных пленок, К группе таких соединений, по-видимому, могут быть отнесены антибактериальные катионные пептиды, выделяемые всеми живыми организмами, в том числе, и самими бактериями [Коробов, 2011; Jorge et al, 2012]. Для катиониых пептидов варнерина и хоминина, выделенных из коагулазоиегативных стафилококков, показана высокая эффективность предотвращения адгезии к полистиролу бактерий Staphyio-coccus epidermidis [Eroshenko. Korobow 2015] и Propionibacterium acnes [Полюдова и др. 2015]t
Целью настоящей работы явилось изучение динамики формирования биопленок на поверхности полистирола чувствительными и антибиотикорези-стентными бактериями разных штаммов коагулазоиегативных стафилококков (КНС). а также экспериментальное обоснование возможности применения антибактериальных пептидов варнерина и хоминина для предупреждения плеикообразования и разрушения зрелых биопленок КНС.
Материалы и методы исследования
В качестве объекта исследования использовали ба ктерии коа гулазонегативных стафилококков (КНС): Staphylococcus epidermidis ГИСК 33 (Государственная коллекции патогенных микроорганизмов Государственного научно-исследователь-ского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов, Москва), полученный селекционным путем штамм, устойчивый к ципрофлоксацину S. epidermidis ЗЗ-Cf1 [Коробов и др., 2015]. Кроме того, при скрининге более 1000 клинических штаммов КНС, обладающих резистентностью к антибиотикам, был выделен штамм стафилококков, обладающий устойчивостью к 10 антибиотикам. Штамм получил лабораторный порядковый номер 831. Проведенная процедура идентификации с использованием диагностического набора Staphytest 24 (Lacliema, Чехия), позволила отнести эти бактерии к виду $. xyhsus
Культивирование микроорганизмов проводили на модифицированной жидкой богатой питательной среде Luria-Berta ni (LB), содержащей (г/л):
триптон (Sigma) - 10.0. дрожжевой экстракт (Sigma) - 5.0. KCl -6.4.
Планктонные культуры стафилококков выращивали при 37°С на ротационном шейкере CERTOMAT IS (Sartorius. Германия) при 150 об/мин. Интенсивность роста в жидких культурах оценивали по оптической плотности при длине волны проходящего света 600 им (OD^y,) на спектрофотометре PD-303 (Япония).
Культуры бактерий, выращенные на среде LB до середины лог-фазы, разводили свежей питательной средой до оптической плотности ODsoo 0.015 (Ю7*КОЕ/мл) и вносили по 100 мкл в лунки плоскодонных полистироловых планшетов (Мед-полимер, Россия), Культивирование проводили в течение 15 сут. при 37°С в термостате. Далее планктонные клетки аккуратно удаляли, лунки дважды промывали 200 мкл 10 мМ фосфатного буфера (pH 7.2).
Для оценки влияния антибактериальных пептидов на формирование биопленок, в лунки планшетов одновременно вносили по 90 мкл среды LB с растворенными в ней препаратами варнерина или хоминина в количестве 8-128 мг/мл. После чего добавляли 10 мкл индикаторных бактериальных культур, содержащих I06*КОЕ/мл.
Для изучения влияния пептидов на уже образовавшиеся биопленки растворы варнерина и хоминина в LB вносили в лунки с отмытыми биопленками и культивировали в течение 24 ч. В контрольном варианте биопленки инкубировали с 0 14 М раствором NaCl Затем из лунок планшетов удаляли жидкую часть, лунки промывали фосфатным буфером и подсушивали. Далее для определения биомассы пленок в каждую лунку планшета вносили по 100 мкл 0.1%-ного раствора генцианвио-лета в 0.14 М растворе NaCl, выдерживали 20 мин., затем краситель удаляли, лунки дважды промывали фосфатным буфером, высушивали, и производили экстракцию связавшегося с биопленками красителя 96%-ным этанолом (100 мкл на лунку) в течение 20 мин. Количественную оценку этанольных экстрактов осуществляли на микропланшетном спектрофотометре Benchmark Plus, (Bio-Rad. США) при длине волны 570 им.
Для определения жизнеспособности клеточных элементов окрашивание биопленок проводили тет-разолием с использованием системы Cell Proliferation Assay в соответствии с инструкцией фирмы (Promega, США). В каждую лунку на отмытые от среды биопленки бактерий вносили по 100 мкл воды, добавляли 20 мкл реакционной смеси и инкубировали 4 ч. при 37°С. Интенсивность окраски измеряли на микропланшетном спектрофотометре Benchmark Plus (Bio-Rad; США) при длине волны 490 нм.
Постановку антибактериального теста проводи-
ли методом серииных разведений в стерильных иммунологических планшетах (Медполимер. Россия), В лунки планшетов вносили по 100 мкл среды LB, не содержащей KCl. В первую лу нку ряда вносили 100 мкл исследуемого раствора антибактериальных пептидов и готовили серию двукратных разведений. Затем в каждую лунку вносили по 10 мкл суспензии бактерий, содержащей Ю^КОЕ/мл (в качестве инокулятов использовали клетки лог-фазы роста).
При подсчете минимальных подавляющих концентраций (МПК) пептидов для разных бактерий, учитывали их известное значение МПК для бактерий S. epidermidis ГИСК 33, составляющее 0.25 мкг/мл (как для варнерина, так и для хоминина). При расчете количеств пептидов необходимых для подавления роста антибиотикорезистентных бактерий, учитывали максимальное разведение, при котором наблюдалось отсутствие роста через 16-18 ч. инкубации и сравнивали с разведеним, инги-бирующим рост S, epidermidis ГИСК 33.
Определение антибиотикорезистентности проводили дискодиффузионным методом согласно Методическим указаниям [МУК, 2004]. Для постановки тестов использовали бактерии лог-фазы
роста и диски, пропитанные стандартными растворами антибиотиков (НИЦФ, Россия). Чувствительность к антибиотикам определяли по диаметру зон подавления роста колоний исследуемых бактерий,
Повторность всех экспериментов трехкратная. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью компьютерной программы Microsoft Excel 2000 (Microsoft Inc., 1999). рассчитывая среднее арифметическое значение и стандартное отклонение.
Результаты и обсуждения
Диско-диффузионный метод определения анти-ö иоти кочу вот в ите л ь н ост и исследуемых штаммов показал, что бактерии штамма S. epidermidis ГИСК 33 обладают высокой чувствительностью ко всем изученным антибиотикам, кроме клиндами-цина (табл. 1).
Бактерии S. epidermidis 33 Cf проявляли устой-чивось к ципрофлоксацину и новобиоцину. а бактерии полирезистентного клинического штамма S. xy/osus 831 были устойчивы к 10 антибиотикам, но обладали низкой чувствительностью к амикацину, оксациллину и ципрофлоксацину (табл. 1).
Таблица I
Антибиотикочувствителыгость бактерий исследуемых штаммов КНС (диаметр зон подавления роста, мм)
Антибиотик S. epidermidis 33 S. epidermidis 33 Cf S. xyiosus 831
Амикацин 26±02 27±0.3 19±0.2
Бензилпенициллин 45±0.32 44±0,4 0
Ванкомицин 21±02 20±0,2 0
Гентамицин 22±0Л 20±0.2 9±0Л
Канамицин 15±0,2 16±0.1 0
Клиндамицин 0 28±0.2 28±0.2
Линкомицин 21±0.2 25±().2 20=Ы1.2
Линезолид 33±0.4 32±0.3 зо=ю.з
Меропенем 36±0.4 36±0,4 9±0Л
Новобиоцин 15±0,3 0 24=1=0,2
Оксациллин 21=1=0,2 20±0,2 16=1=0,2
Рифампицин 32=1=0,3 35±0,4 33=Ю,3
Рокситромицин 29=1=0,3 30±0,3 0
Фузидин 24=1=0,2 23±0,2 30=1=0,4
Цефазолин 33±0.3 35±0,3 0
Цефалексин 30±0.3 34±0,4 0
Цефаклор 24±0.3 26±0,2 0
Ципрофлокса цин 25±0.3 0 14±0,2
Эритромицин 27±0.3 26±0.3 0
р<0.05 (уровень значимости t-критерия Стьюдента).
Изучение чувствительности планктонных культур исследуемых стафилококков к катионным пептидам варнерину и хоминину [Коробов и др. 2010. 2014] показало, что минимальная подавляющая концентрация (МПК) пептидов значительно различается для разных штаммов. Из представленных
данных ВИДНО, что наибольшей чувствительностью к катионным антибактериальным пептидам обладали бактерии вида .5. ер? Легт ?<}?$, а с приобретением устойчивости к ципрофлоксацину незначительно снижалась чувствительность ЛИШЬ к кати-онному пептиду хоминину . При действии на поли-
резистентный штамм 5. ху1оьш 831 варнерин и сниженной ч>"вствительности этих бактерий к дан-хоминин проявляли активность при значительно ным соединениям (табл. 2). больших концентрациях, свидетельствующих о
Таблица 2
Минимальная подавляющая концентрация антибактериальных катионнмх пептидов для исследованных штаммов КНС (мкг/мл)
Пептид $ери1егткИ5 ГИСК 33 6'. ер!<1еп?1йИ5 ГИСК 33 X лт/аш^ 831
СГ
Варнерин 0.25 0.25 1000
Хоминин 0.25 0.5 1000
При изучении способности бактерий формировать биопленки на поверхности полистирола было показано, что динамика роста биомассы пленок и количества живых клеток в них различаются у разных штаммов.
Биомасса пленок бактерий 5 ерШетшШ ГИСК 33, и численность живых клеток в них достигали максимума уже через 24 ч, При дальнейшем культивировании наблюдалось снижение обоих показателей. Важно отметить, что на фоне постепенного падения биомассы пленок происходило резкое снижение содержания в них жизнеспособных ¡слеток (рис. I).
Рис. 1. Динамика роста биопленок X ер!Лептах ГИСК 33:
А - число живых клеток в биопленке; В -биомасса пленки
Несколько иная картина динамики развития биопленок была характерна для бактерий X ер1с1егт1£Нх ГИСК 33 С?", устойчивых к ципроф-локсацину, В этом случае максимумы биомассы пленок и количества живых клеток в них также достигались уже через сутки. При дальнейшем культивировании наблюдалось резкое снижение биомассы пленок, однако, количество живых клеток в них продолжало возрастать (рис. 2).
Снижение биомассы пленок бактерий & ер}-¿¡егткИх ГИСК 33. возможно, было связано с истощением питательных веществ в среде и разрушением полисахар и дного матрикса собственными литическими ферментами, которые присутствуют в клеточных стенках данного штамма стафилококков [Коробов и др.. 2010].
Формирование биопленок бактериями полирезистентного штамма 5 ху!озиз 831 происходило более длительное время (рис. 3), Максимальных значений биомасса пленок достигала лишь на 3^1-е сут, культивирования. Следует отметить, что перманентный рост биопленок 5' ху/озш 831. характеризовался двумя фазами увеличения их биомассы и содержания жизнеспособных клеток - фазой быстрого роста (1 сут.) и фазой стабилизации этих показателей (2-4 сут,),
оь4П оо,
Рис. 2. Динамика роста биопленки Я. ерикгт&ь ГИСК 33 С С
А - число живых клеток в биопленке. В -биомасса пленки
сутки
Рис. 3. Динамика роста биопленки
А - число живых клеток в биопленке, Б -биомасса пленки
Для определения влияния варнерина и хомини-на на способность бактерий к образованию биопленок. одновременно с инокулумом в питательную среду добавляли эти антибактериальные пептиды. Согласно полученным данным, наличие в среде роста стафилококков варнерина или хоми-нина. приводило к значительному уменьшению биомассы пленок (рис. 4) и количества жизнеспособных бактериальных клеток в сформированных в течение 1 сут. биопленках (рис. 5).
З.ерЖгт \<Из 33 5.ер\йегтуИз 33 Су 5. ху1а$из 331
Рис. 4. Формирование биомассы пленок стафилококков в течение суток в присутствии катионных пептидов
суточных пленок исследованных штаммов КНС. так и жизнеспособность их клеточных элементов значительно снижаются.
Таким образом, результаты экспериментов свидетельствуют о том. что использованные в работе катионные пептиды проявляют свое действие и на сформированных бактериальных пленках, снижая их общую биомассу и количество живых клеток.
OD 570 3,5 •
2,5 -
1,5
0,5
□ Контроль
kn
оХомошн
Jen
¡1
3.€р^егт:сЬз 33 3.фк1епп\<Ьа 33 С/г & х^овиз 831
Рис. 6. Разрушение биомассы суточных биопленок стафилококков при действии катионных пептидов
OD490
3,5
2.5 2 1.5 1
0,5
□ Контроль ■ Варнерип □Хокиннн
S.epjdenrndis 33 S.epidemidis 33 Cfr S. yylceus 83!
Рис. 5. Количество живых клеток в биопленках стафилококков, выращенных в течение суток в присутствии катионных пептидов
Важным практическим аспектом полученных результатов является факт ингибирования процесса пленкообразования полирезистентных бактерий клинического изолята S xylosus 831.
Однако известно, что бактерии в составе биопленок имеют повышенную выживаемость в присутствии антибактериальных веществ, поэтому важно было исследовать влияние низкомолекулярных катионных пептидов на сформировавшиеся в течение суток биопленки использованных в работе штаммов стафилококков. Влияние низкомолекулярных катионных пептидов на зрелые биопленки было обнаружено после их инкубации с пептидами в течение суток.
Из представленных на рис. 6 и 7 данных видно, что при наличии в среде пептидов как биомасса
¿'.йртйНвгАю<£$ 33 ¿.ерШетпаЛк ху*.0£ия 831
Рис. 7. Изменение количества -живых клеток при действии катионных пептидов на суточные биопленки стафилококков
Результаты проведенного исследования позволяют сделать следующие выводы:
1. Изученные штаммы коагулазонегативных стафилококков 6'. ерикгтиИь ГИСК 33, 5. ер'к1ег-тШ$ ГИСК 33 Cf и хуЬьия 831 обладают выраженной способностью к образованию биопленок. Динамика формирования клеточных и неклеточных компонентов биопленок бактерий исследуемых штаммов существенно различается.
2. Присутствие в среде роста низкомолекулярных катионных пептидов варнерина и хоминина подавляет развитие биопленок бактерий всех исследованных штаммов стафилококков.
3. Бактериальные катионные пептидоы вызывают деструкцию зрелых биопленок КНС, в том числе и полирезистентного клинического штамма & ху1о$и$ 831.
Работа выполнена при поддержке грантов: РФФИ № 14-04-00687. Программ фундаментальных исследований УрО РАН и Министерства образования и науки Пермского края «Международные исследовательские группы». № С-26/632,
Библиографический список
Коробов В.П., Лемкина Л.М., Полюдова Т.В., Аки-меико В.К.. Выделение и характеристика нового низкомолекулярного антибактериального пептида семейства лантибиотиков i i Микробиология. 2010. Т. 79. № 2. С. 228-238. Коробов BAL, Лемкина Л.Al., Полюдова Т.В., Филатова Л. Б., Панъкова Н.В. Активация аутоли-тической активности Staphylococcus epiâermiâis 33 низкомолекулярный! катионным пептидом варнерином // Микробиология. 2010, Т. 79. № 1. С. 133-135. Коробов В Н. Лантибиотики - природные антибиотики широкого спектра действия // Вестник уральской медицинской академической науки. 2011. №4/1. С. 10-11. Коробов В. П., Полюдова Т. В., Л ем кии a Л. XI. Изучение биологических свойств антибиотикорези-Стентных бактерий Staphyíococcus epiâermiâis 33 и их чувствительности к варнерину // Вестник Пермского университета. Серия Биология. 2015. № 1. С. 5-14. Коробов В.П., Полюдова Г.В., Ле.мкика ЛМ. Антибактериальный пептид хоминин KLP-I широкого спектра действия // Патент РФ № 2528055. 2014. Л ямин А, В., Ьоткин К. А., Жесткое А. В. Проблемы в медицине, связанные с бактериальными пленками // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2012. Т. 14. № 4. С. 268-275.
Методические указания МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микро-организмов к антибактериальным препаратам (утв Главным государственным санитарным врачом РФ 04 03.2004).
Перепаиова У С. Значение инфекций, обусловленных образованием биопленок, в урологической практике // Эффективн. Фармакотер. 2013. №
4. С. 18-27.
Полюдова ТВ., Коробов В.П., Зидина fí.XL Сравнительный анализ формирования биопленок бактериями Propîonîhacterium acnés Ас-1450 на нативных И обработанных катионными пептидами поверхностях полистирола // Рос. имму-нол. журнал. 2015. Т. 9. № 2. С. 661-663.
Eroshertko D.V., Korobov V.P. New AMPs from Staphyíococcus spp.. warnerin and hominin. reduce Sîûphyiocococciis epiâermiâis adhésion and biofilm formation // Multidisciplinar}' approacli
for studying and combating microbial pathogens /by ed. A. Mendez-Vilas. - BrownWalker Press. 2015. P. 98-101.
Frank K.L., Reichert E.J., Piper K.E., Patel R. In vitro effects of antimicrobial agents on planktonic and biofilm forms of Staphylococcus lugdimensis clinical isolates // Antimicrob Agents Chemother 2007. №51. P. 888-895.
Jorge P., Lourengo A., Pe retro M.O, New trends in peptide-based anti-biofilm strategies; a review of recent achievements and bioinfonnatic approaches // Biofouling. 2012. Vol. 28, № 10. P. 1033-1061.
References
Korobov V.P.. Lemkina L.M„ Poljudova T.V., Aki-menko V.K. [Isolation and characterization of a new low-molecular antibacterial peptide of family Of lantibiotic.j Aiikrobiotogija. V. 79. N 2 (2010): pp. 228-238. (inRusS.).
Korobov V.P.. Lemkina L.M„ Poljudova TV. Fila-tova LB, Pan'kova N.V. I Activation of autolytic activity of Staphylococcus epidermidis 33 by a low-molecular weight cationic peptide warnerm] Alikrobiofogija. V. 79, N 1 (2010): pp. 133-135. (in Russ.).
Korobov V.P, [Lantibiotics - natural broad-spectrum antibiotics] Vestnik urai'skoi meditsinskoi akademicheskoi nauki. № 4/1 (2011): pp. 10-11. (in Russ ).
Korobov VP., Poljudova T V . Lemkina L,M, [Investigation of biological properties of antibiotic-resistant Staphylococcus epidermidis 33 and its sensitivity to warnerin] Vestnik Permskogo tmi-versiteta Biologija. Iss. 1. (2015): pp. 5-14. (in Russ).
Ljamin A.V,. Botkin E.A., Zhestkov A,V [Methods for detection of biolllms in medicine: opportunities and prospects] Clinical Xficrobiologv and Antimicrobial Chemotherapy. V, 149№4. (2012). P 268-275, (in Russ,),
Methodical instructions. MUK. 4,2.1890-04, Determination of the sensitivity- of micro-organisms to antibiotics, (in Russ,),
Perepanova T.S. [Meaning of infections caused by the formation of biofilms in urological practice] Ehffektivnava farmakoterapiya. N 4 (2013): pp 18-27. (in Russ,),
Polyudova T V, Korobov V.P,, Zidina N.M, [Comparative analysis of Propionibacterium acnes Ac 1450 biofilm formation on native and cationic peptides treated polystyrene surface] Russian journal of immunology. V, 9. N 2 (2015); pp, 661 -663. (in Russ ).
Eroshenko D.V., Korobov VP. New AMPs from Staphylococcus spp.. warnerin and hominin. reduce Staphylococcic us epidermidis adhesion and biofilm formation. Xfultidisciplinary approach for
studying and combating microbial pathogens /by ed. A, Mendez-Vilas. - Brown Walker Press. 2015. pp. 98-101.
Frank K.L., Reiclien E.J.. Piper K.E.. Patel R. In vitro effects of antimicrobial agents on planktonic and biofilm forms of Staphylococcus htgdunensis clinical isolates. Anlimicrob Agents Chemother. N 51 (2007): pp. 888-895.
Jorge P.. Louren^o A., Pereira M.O. New trends in peptide-based anti-biofilm strategies: a review of recent achievemenls and bioinformatic approaches. Bio/outing. V. 28. № 10 (2012): pp. 1033-1061.
Поступила в редакцию l(>.OS,2015
Об авторах
Коробов Владимир Павлович, кандидат медицинских наук, :$ав. лабораторией биохимии развития микроорганизмов ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН 614081, Пермь, ул. Го лева, 13; korobov (ii>, iegm, ru ; (342)2126295 доцент кафедры микробиологии и иммунологии ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614099, Пермь, ул. Букирева. 15 доцент кафедры химии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Пермский национальный исследовательский политехнический университет» 614990, г. Пермь. Комсомольский пр., 29
Лемкина Лариса Марковна, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории биохимии ра звития м икроорганшмов
ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН 614081, Пермь, ул. Голева, 13; l.leHikiHa@iegm.ru; (342)2126295
Полю до ва Татьяна Вячеславовна, кандидат биологических нау к, старший научный сотрудник лаборатории биохимии развития м икроорганизмов
ФГБУН Институ т экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН 614081, Пермь, ул. Го лева, 13; poludova@iegm.ru: (342)2126295 старший преподаватель кафедры экологии ФГБОУ ВО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д.Н, Прянишникова» 614990, Пермь, ул. Петропавловская. 23
About the authors
Korobov Vladimir Pavlovich. candidate of medicine, head of laboratory of biochemistry of microorganisms
Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms. Ural Branch. Russian Academy of Sciences. 13, Goleva str., Perm, Russia, 614081; korobov@iegm.ru; (342)2126295 associate professor of the Department of microbiology and immunology Perm Slate University. 15, Bukirev str.. Penn. Russia, 614990 associate professor of the Department of chemistry and biotechnology
Perm National Research Polytechnic University . 29, Komsomolsky Pr.. Perm. Russia. 614990
Lemkina Larisa Markovna. candidate of medicine, senior scientist of laboratory of biochemistry of microorganisms
Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Ural Branch, Russian Academy of Sciences.
13, Goleva str., Perm, Russia, 614081; l.lemkina@iegm.ru; (342)2126295
Polyudova Tatjana Vjacheslavovna. candidate of biological, senior scientist of laboratory' of biochemistry of microorganisms Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms. Ural Branch, Russian Academy of Sciences.
13, Goleva str., Perm, Russia, 614081;
poludova@iegm.ru; (342)2126295
senior lecturer of the Department of ecology
Perm Slate Agricultural Academy named after
academician D.N. Prianisluiikov.
23, Petropavlovskaia Str., Perm, Russia, 614990
