CC BY
18
и 12 мужчин в возрасте от 26 до 75 лет (сред. 52±13 лет) со стадиями заболевания: II (а-с) — 7 чел., III (а-с) — 23 чел., IV (а) — 2 чел. Контрольную группу составляли 30 условно здоровых доноров. Уровень молекул MICA, ULBP-1 и ULBP-2 в сыворотке крови определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборов реагентов: MICA human ELISA Kit (Abcam, США) и DuoSet ELISA human ULBP — 1 и —2 (R&D Systems, США) по инструкции производителя. Оптическую плотность образцов измеряли при длине волны 450 нм на фотометре ChroMate 4300 (AwarenessTechnology, США). Адоптивную иммунотерапию (АИТ) проводили активированными in vitro (ИЛ-2, ИЛ-15) аутологичными лимфоцитами периферической крови и клеточным продуктом каждые 3—7 дней на протяжении 1—2 месяцев внутрикожно паравертебрально в количестве 20—100 млн. Сывороточное содержание стресс-индуцированных молекул MICA, ULBP-1 и ULBP-2 оценивали до и после окончания курса клеточной иммунотерапии.
Результаты обрабатывали при помощи программ Microsoft Excel 2003 и StatsoftStatistica 6.0. (StatSoft, USA). Данные представляли как среднее ± стандартное отклонение. Использовали t-критерий Стьюдента. Различия считали значимыми при р<0,05.
Результаты. Перед началом АИТ у больных мелано-мой среднее содержание молекул MICA составило 2793,04±2672,18 пг/мл. Содержание MICA более четырех средних нормальных значений наблюдалось у 26,9% больных. В сыворотках крови здоровых доноров белок MICA обнаруживался в минимальных количествах (менее 1000 пг/мл). После проведения АИТ у больных меланомой в среднем данный показатель практически не изменился. Оценивая уровень молекул sMICA у больных с различным исходом заболевания, было показано, что перед АИТ различия между концентрацией MICA в сыворотке крови при прогрессировании заболевания и со стабилизацией процесса не значимы и составили 3267,2±1137,8 пг/мл и 3547,3±1246,7 пг/мл, соответственно. Однако после проведения курса АИТ наблюдалась тенденция к снижению уровня sMICA у больных со стабилизацией процесса в 1,4 раза. Противоположные изменения наблюдались у больных из группы с прогрессированием заболевания. Концентрация sMICA увеличилась в 1,3 раза и значимо отличалась от исходных показателей в группе со стабилизацией процесса (p<0,05).
Оценивая уровень молекул ULBP-1 у больных меланомой, было показано, что он в 2,3 раза выше по сравнению с контрольной группой (p<0,001). Также у больных меланомой не было выявлено случаев отсутствия данных циркулирующих лигандов в сыворотке крови. Большинство пациентов имели концентрацию ULBP-1 превышающую среднее значение в контрольной группе в 93,8% случаев. Концентрация ULBP-1 у пациентов с наличием большой опухолевой массы была несколько выше.
До и после проведения АИТ среднее содержание молекул ULBP-1 в сыворотке крови достоверно не изменялось. Однако при анализе индивидуальных показателей уровня ULBP-1 у различных больных было показано, что существует прямая зависимость между клиническим статусом и изменением концентрации лиганда NKG2D, что диктует необходимость в персонифицированном подходе к оценке данных молекул в сыворотке крови.
Было отмечено, что при уменьшении данного параметра наблюдалась стабилизация процесса или регрессия метастатических образований, при увеличении ULBP-1 зафиксировано
прогрессирование заболевания. Во многих случаях изменение концентрации лигандов NKG2D выявлялись раньше, чем была обнаружена прогрессия заболевания или выявлены метастазы инструментальными методами диагностики. Таким образом, данный лиганд может служить не только маркером наличия злокачественного новообразования, но и пре-диктивным фактором у больных со злокачественными новообразованиями, который появляется в сыворотке крови раньше, чем объективно можно оценить развитие заболевания инструментальными методами исследований. Можно заключить, что обнаружение данного лиганда в больших концентрациях, как и молекул MICA в сыворотке крови, с большой вероятностью может свидетельствовать о наличии опухолевых клеток и развитии меланомы. Данное утверждение нельзя применить к другому лиганду NKG2D белку ULBP-2. В сыворотке крови, как здоровых добровольцев, так и онкологических больных не были обнаружены молекулы ULBP-2 данной аллельной формы. Концентрация молекул ULBP-2 в сыворотке крови всех пациентов кроме одного была равна фоновым значениям. У одного больного меланомой лиганды обнаруживались в следовых количествах (291 пг/мл). У больных с высоким содержанием MICA, отмечался средний и высокий показатель ULBP-1 (более 4 000 пг/мл), однако, когда уровень содержания MICA в сыворотках крови был минимальным (в 38,5% случаев), уровень ULBP-1 достигал высоких значений, в среднем — 6 100,0±2 143,7 пг/мл (при максимальном значении в 9558,3 пг/мл). Установить четкую корреляционную зависимость между уровнем молекул MICA и ULBP-1 на данном этапе не представилось возможным, для этого необходимо проведение дальнейших исследований.
Заключение. Обнаружение в больших концентрациях молекул MICA и ULBP-1 в сыворотке крови больных меланомой, может служить одним из диагностических маркеров наличия онкологического заболевания, и возможно являться показателем прогрессии заболевания. Так как у данных больных прослеживается одинаковая тенденция в увеличении концентрации лигандов NKG2D в сыворотке крови при наличии большой опухолевой массы и прогрессирова-нии болезни.
Молекулы MICA и ULBP-1 могут дополнить спектр имеющихся опухоле-ассоциированных маркеров при диагностике больных меланомой. Данные показатели могут быть использованы для мониторинга прогноза развития заболевания и контроля над увеличением опухолевой массы при иммуно-терапевтических воздействиях.
Сравнительный анализ экспрессии матриксных металлопротеиназ в тканях меланоцитарных новообразований кожи
И. А. Новикова', Е. Ф. Комарова', В. В. Позднякова', М. И. Мак-симова1, М. Г. Ильченко', Е. П. Ульянова', А. О. Гранкина', И. Р. Дашкова', Л.Н. Ващенко'
Место работы: 'ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону e-mail: katitako@gmail.com
Цель. Исследовать тканевую экспрессию металлопротеиназ 2 и 9 типа (ММР-2 и ММР-9) в тканях доброкачественных (ДМНК) — невусы, диспластические невусы и злокачественных меланоцитарных новообразований кожи (ЗМНК). Материалы и методы. В исследование были включены 55 пациентов в возрасте от 21 до 49 лет с меланоцитарными
новообразованиями кожи, из которых 25 больных мелано-мой (T1-3N0-1M0) и 30 — с невусами, включая 15 человек с диспластическими невусами. Иммуногистохимическое исследование проводили с помощью моноклональных антител ММР-2 и ММР-9. Оценку экспрессии маркеров изучали как минимум на 10 случайно выбранных полях зрения. Интенсивность окрашивания оценивали по критериям: 10—25% позитивно окрашенных клеток — слабо позитивная реакция; 26—50% —умеренно позитивная; > 50% — сильно позитивная реакция.
Результаты исследования и их обсуждение. Обнаружена повышенная экспрессия ММР-2 как в группе с ДМНК (30%), так и в группе с ЗМНК (31%). Среди образцов доброкачественных новообразований экспрессия составила: в клетках диспластических невусов — 66,7%, невусов — 14,3%. Разница между группами «диспластический невус — меланома» и «невус — меланома» была статистически не достоверна (р<0,05). Увеличенное накопление ММР-9 выявлено в группе с ДМНК (36,7%), основная доля которых (77,8%) принадлежала диспластическим невусам. Наибольшая экспрессия ММР-9 наблюдалась в клетках ЗМНК — 31,7±3,0% по сравнению с клетками диспластических невусов — 11±1,1% и клетками невусов — 5,3±0,5% (р<0,05). Сильно позитивная интенсивность окрашивания ММР-2 в группе ЗМНК по сравнению с ДМНК выше в 2,5 раза.
Преобладание умеренно позитивной реакции и слабо позитивной наблюдалось в группе с ДМНК в 1,1 раз и 2,6 раз соответственно. Сильно позитивная реакция ММР-9 отсутствовала во всех группах. Умеренно позитивное окрашивание ММР-9 при ЗМНК превышала данный при ДМНК в 1,7 раз. Обнаружено, что в 1,8 раз чаще слабо позитивная интенсивность окрашивания к MMP-9 была характерна для группы с ДМНК. Заключение. Показаны достоверные отличия по уровню экспрессии ММР-9 с динамикой усиления показателя в ряду «невус-диспластический невус-меланома». Более выраженная интенсивность окрашивания обоих ММР (с преобладанием сильно- и умеренно позитивных реакций) была характерна для тканей злокачественных новообразований кожи в сравнении с доброкачественными.
Опыт применения ипилимумаба для лечения пациентов с диссеминированной меланомой кожи в амбулаторной практике
Н. В. Жукова1, Н. Ю. Антимоник', С. И. Кутукова', Н.П. Беляк', С.П. Эрдниев', Н. В. Попова' Место работы: 'Городской клинический онкологический диспансер, Санкт-Петербург, e-mail: natalia-zhukova@yandex.ru
Актуальность. Ипилимумаб — первый препарат показавший увеличение общей выживаемости при терапии метастатической меланомы, который уже сейчас стал стандартом лечения. Его применение в клинических исследованиях у тщательно отобранных пациентов показало возможность достижения длительных эффектов, с одной стороны, и возможность развития серьезных отсроченных осложнений с другой. Оценка возможности применения данного препарата в условиях реальной амбулаторной клинической практики требует дополнительного анализа.
Цель. Провести анализ безопасности и эффективности применения ипилимумаба у больных диссеминированной мела-номой кожи, получавших амбулаторное лечение в рамках программы расширенного доступа к препарату.
Материалы и методы. В программу расширенного доступа включен 31 больной диссеминированной меланомой (12 мужчин и 19 женщин), в возрасте от 39 до 81 года (средний возраст 57 лет), получавших лечение и наблюдение в СПб ГБУЗ ГКОД в период с февраля 2014 по июль 2017 г. Все пациенты до лечения ипилимумабом получили от 1 до 4 (в среднем, 2) линии системной терапии, после которых было зарегистрировано прогрессирование заболевания. Допускалось лечение пациентов с метастатическим поражением головного мозга, их доля составила 26% (8 пациентов). У большинства пациентов на момент начала лечения был ECOG статус 1—28 пациентов (90%), у 3 пациентов (10%) — ECOG 2. Оценка нежелательных явлений проводилась по шкале CTC AE v4.
Результаты. Медиана наблюдения за больными составила 12 (3—38) мес. Медиана времени до прогрессирования заболевания (ВДП) составила 6,0 месяцев (95% ДИ от 5,0 до 7,4). На момент анализа у 6 из 31 пациентов (19%) признаков прогрессирования не выявлено. Медиана общей выживаемости (ОВ) составила 12,0 месяцев (95% ДИ от 10,0 до 17,2). Девять пациентов (29%) живы на момент проведения анализа. На терапии ипилимумабом 6-месячная ОВ составила 87%, одногодичная ОВ — 52%, 18-месячная ОВ — 32%. Осложнения лечения (НЯ) зарегистрированы у 16 пациентов (52%). Наиболее частыми НЯ были: зуд — 23%, слабость 10%, диарея — 10%, гепатит — 6%. Частота развития НЯ 3—4 степени составила около 10%. НЯ, развившихся непосредственно на введении ипилимумаба, зарегистрировано не было.
Заключение. Амбулаторное применение данного препарата безопасно и позволяет достичь результатов, сходных с данными клинических исследований. Терапия ипилиму-мабом не ассоциируется с непосредственными НЯ и не требует наблюдения пациента в условиях круглосуточного стационара.
Анализ герминальных мутаций и полиморфизмов в образцах меланомы и доброкачественных новообразований кожи
И. С. Абрамов',2, Д. О. Фесенко', Л. Г. Гукасян', О. О. Рябая2, М. А. Емельянова', Т. В. Наседкина'
Место работы: 'Институт молекулярной биологии имени В.А. Энгельгардта РАН, Москва, Россия 2ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» МЗ РФ, Москва, Россия e-mail: abriv@bk.ru
Актуальность. Наследственно-обусловленная меланома кожи по данным литературных источников составляет от 5% до 14% всех случаев данного заболевания. Основным геном, мутации в котором обуславливают возникновение наследственной меланомы, является CDKN2A. Также мутации в данном гене могут приводить к возникновению атипичных невусов. Помимо этого, ряд исследований показывают влияние на возникновение меланомы полиморфизмов в гене MC1R. Данный ген принимает участие в синтезе меланина под влиянием УФ-излучения. В настоящем исследовании были выбраны 5 полиморфизмов данного гена, для которых показана наиболее сильная ассоциация с меланомой в других мировых популяциях.
Цель. Анализ мутаций и полиморфизмов генов CDKN2A и MC1R в образцах меланомы кожи и меланоцитарных неву-сов методами таргетного секвенирования и биологических микрочипов.
Материалы и методы. В настоящем исследовании мы анализировали мутации 6 меланоцитарных невусов и 29 клинических образцов меланомы. Геномную ДНК выделяли из свежезамороженной ткани опухоли или парафиновых срезов. Анализ мутаций и полиморфизмов в гене CDKN2A проводили с помощью секвенирования на платформе GS Junior (454/Roche). Анализ полиморфизмов rs1805006 (D84E), rs11547464 (R142H), rs1805007 (R151C), rs1805008 (R160W) и rs1805009 (D294H) в гене MC1R проводили с помощью технологии биологических микрочипов.
Результаты. В меланоцитарных невусах были обнаружены герминальные мутации в CDKN2A A148T, G63R. В образцах меланомы мутации и полиморфизмы в гене CDKN2A обнаружены не были. В двух образцах меланомы были обнаружены полиморфизмы rs1805006 (D84E), rs1805007 (R151C), что согласуется с литературными статистическими данными. Заключение. Дальнейшие исследования с использованием секвенирования могут помочь в поиске новых патогенных мутаций на разных стадиях развития опухоли и новых мишеней для терапии. Также, планируется расширить панель диагностических маркеров для анализа нарушений в генах метаболизма меланина за счет новых полиморфизмов. Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (Грант № 14-35-00107).
Современные показания к первичному эндовитреальному удалению меланомы хориоидеи
А. А. Яровой', И.М. Горшков', Е.Н. Коробов', В. А. Яровая' Место работы: 'ФГАУ МНТК «Микрохирургия глаза им. С. Н. Федорова» МЗ РФ e-mail: egorkorobovi99i@mail.ru
Цель. Представить современный подход к первичному эндо-витреальному удалению МХ на основе метаанализа литературных данных и собственных результатов. Материалы и методы. Поиск публикаций по первичной эндорезекции МХ был осуществлен в базе данных PubMed, SCOPUS, Umedp до мая 2017 г. Для включения статей в анализ были разработаны критерии включения и исключения. Из 96 статей, выявленных при первоначальном поиске, 9 соответствовали критериям и были включены в метаанализ. Количество наблюдений в статьях варьировало от 13 до 71 пациента и составило суммарно в 9 статьях 302 пациента. Наши собственные данные получены на основании 22 пациентов с МХ, которым проведено первичное эндовитреальное удаление опухоли в МНТК МГ в промежуток времени с 2011 по 2017 гг. Из них 12 (54,5%) мужчины и 10 (45,5%) женщин. Возраст больных по данным литературы был от 21 до 87 лет (в среднем 55,5±5,1), 56% пациентов, включенных в исследования, составили мужчины. Возраст наших больных был от 25 до 84 лет (в среднем 55,36±14,05 лет). Высота и максимальный диаметр основания опухоли (МДО) опухоли по данным метаанализа варьировали от 3,9 до 9,8 мм (в среднем 6,9±1,9) и от 8 до 13 мм (в среднем 10,4±1,6) соответственно, по нашим данным — средняя высота опухоли — 8,28 мм (диапазон от 6,0 до 10,3 мм, стандартное отклонение 1,4 мм), МДО — 10,9 мм (диапазон от 6,4 до 16,8 мм, стандартное отклонение 2,9 мм). Максимальная корригируемая острота зрения в дооперацион ном периоде по данным литературы и нашим собственным данным составила: >0,5—47,5% и 54% пациентов, <0,1<0,5—29,7% и 23% пациентов, <0,1—22,8% и 23% пациентов соответственно.
Дексаметазон снижает чувствительность клеток меланомы к цисплатину путем увеличения уровня экспрессии гена PRAME
В.А. Мисюрин', М.А. Барышникова', Д. В. Калениченко2, А.Е. Мисюрина3, Л. А. Кесаева', Ю.П. Финашутина', О. С. Бурова', А. А. Рудакова', А. В. Мисюрин' Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО МГАВМиБ-МВА им К. И. Скрябина, Москва; 3ФГБУ ГНЦ Минздрава России, Москва e-mail: vsevolod.misyurin@gmail.com
Белок PRAME является одним из антигенов, экспрессирую-щихся в меланоме человека. При нокауте экспрессии PRAME клетки меланомы теряют резистентность к цисплатину и некоторым другим цитостатическим препаратам. Согласно данным, полученным Wadelin et al., экспрессия гена PRAME может быть активирована воспалительными сигнальными путями. Мы предположили, что при блокировании данных сигнальных путей уровень экспрессии гена PRAME может быть снижен, благодаря чему чувствительность клеток мела-номы к цисплатину увеличится.
Цель. Изучить воздействие дексаметазона и его комбинации с цисплатином на уровень экспрессии гена PRAME. Материалы и методы. Исследование проводили на клеточной линии меланомы A875, обладающей высоким уровнем экспрессии гена PRAME. В MTT-тесте определили IC50 цис-платина и концентрацию дексаметазона, не оказывающую цитотоксических эффектов на клетки меланомы, а также IC50 комбинации дексаметазон цисплатин. Оценивали изменение уровня экспрессии гена PRAME методом количественной ПЦР в реальном времени в клетках меланомы А875 после инкубации с дексаметазоном, цисплатином (IC50) и декса-метазоном цисплатином (IC50). Для статистического анализа парных измерений использовался критерий Уилкоксона. Результаты. IC50 цисплатина для клеток A875составила 25 мкг/мл. Дексаметазон в исследованных концентрациях не оказывал цитостатического действия на клетки А875. Для дальнейших экспериментов была выбрана концентрация дексаметазона, составляющая 100 мкг/мл. При данной концентрации скорость деления клеток меланомы значимо не изменилась. После инкубирования в течение суток клеток A875 с цисплатином (25 мкг/мл) или дексаметазоном (100 мкг/мл) уровень экспрессии гена PRAME увеличился в 6 и в 1,6 раз, соответственно (p<0,01). После инкубирования A875 с комбинацией цисплатин дексаметазон (25 мкг/мл и 100 мкг/мл) уровень экспрессии PRAME увеличился в 9 раз (p<0,001). Согласно данным MTT-теста, дозировка цисплатина для достижения IC50 должны быть увеличена на 5% при одновременном применении дексаме-тазона (p=0,0117).
Заключение. Уровень экспрессии PRAME при воздействии цисплатина значительно увеличился. Несмотря на возможную зависимость гена PRAME от стресс-индуцированных сигнальных путей, дексаметазон не снижал активность этого гена в клетках меланомы, а даже несколько увеличивал. Возможно, применение дексаметазона при терапии PRAME-по-зитивных больных онкологическими заболеваниями будет приводить к уменьшению эффективности цисплатина.
Биологические и морфологические параллели увеальных меланом
А. В. Балмуханова, Т. С. Телеуова, А. М. Балмуханова Место работы: 'КазНМУ им. С. Д. Асфендиярова, КазМУНО e-mail: bav_med@mail.ru
