CC BY
35
УДК 615-076.7
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛИНИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ ПАРОДОНТОПАТОГЕНОВ К КЛЕТОЧНОМУ СОКУ ПИХТЫ
Олесов Е.Е., Калинина А.Н., Лашко И. С., Царев В.Н., Олесова В.Н.
ФГБУЗ «Клинический центр стоматологии ФМБА России», Москва, Россия (123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 15, к. 1), e-mail: kc@stomfmba.ru
Лечебные мероприятия, базирующиеся на элиминации микрофлоры путем профессиональной гигиены рта, включают противомикробные медикаментозные средства. До настоящего времени актуален поиск эффективных антисептических средств для лечения заболеваний пародонта. В компании «Солагифт» (г. Томск) разработаны субстанции из хвойной зелени деревьев для наружного применения, среди которых привлекает внимание с позиций возможного использования для лечения заболеваний пародонта биоэффективный клеточный сок пихты. По данным компании, препарат проявляет противовоспалительную и противовирусную активность.
Цель: микробиологический анализ чувствительности пародонтопатогенов к клеточному соку пихты. Проведено микробиологическое исследование чувствительности клинических изолятов пародонто-патогенов к клеточному соку пихты по критериям: изменение фазы адаптации (лаг-фаза), изменение фазы геометрического роста, амплитуда пика фазы геометрического роста, длительность стационарной фазы, срок отмирания культуры. В исследование взяты типичные пародонтопатогены Streptococcus constellatus, Staphylococcus aureus, Fusobacterium nucleatum и Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Установлено, что в присутствии клеточного сока пихты параметры клеточной культуры всех пародонтопатогенов значительно тормозятся из-за снижения активности изученных микробов. Относительно Staphylococcus aureus особенно выражено влияние, поскольку рост этого микроба полностью подавлялся. Полученные сведения позволяют предложить клеточный сок пихты для изучения в клинических условиях.
Ключевые слова: пародонтопатогены, сок пихты, микробиология.
SENSITIVITY OF CLINICAL ISOLATES OF PERIODONTOPATHOGENIC MICROORGANISMS TO THE FIR CELL SAP
Olesov E. E., Kalinina A. N., Lashko I. S., Tsarev V. N., Olesova V. N.
«Clinical centre of dentistry, Federal medical and biological Agency of Russia», Moscow, Russia (123098, Moscow, Gamalei St., 15/ 1), e-mail: kc@stomfmba.ru
Therapy measure based on the elimination of microflora through occupational oral hygiene includes antimicrobial drugs. The search for effective antiseptic agents for treatment of periodontal diseases is still relevant. The Solagift company (Tomsk) has developed substances from coniferous trees for external applications. Among them bioeffective cell SAP of a silver fir attracts attention as a potential medicine in treatment of periodontal diseases. The company states the drug has antiinflammatory and antiviral activity.
The study aims at a microbiological analysis of susceptibility of periodontopathogenic microorganisms to the cell SAP of silver fir.
Susceptibility of clinical isolates of periodontopathogenic microorganisms to the fir cell SAP has been studied taking into account the following criteria: change in the adaptation phase (lag-phase), change in the geometric growth phase, the peak amplitude of the geometric growth phase, the duration of the stationary phase, the period of bacterial die-away. Typical periodontal pathogens, such as Streptococcus constellatus, Staphylococcus aureus, Fusobacteriumnucleatum and Aggregatib acteractinomycetemcomitans were taken for the study. It has been stated that presence of fir cell juice significantly decrease the activity of the microbes, especially Staphylococcus aureus, as the growth of this microbe was completely inhibited. The data obtained allow us to suggest the fir cell SAP for studying in a clinical setting.
Key words: periodontopathogenic microorganisms, fir juice, microbiology.
Основной причиной воспаления тканей десны считается патогенное воздействие пародонтопатоген-ной микрофлоры рта [1-4]. Лечебные мероприятия, базирующиеся на элиминации микрофлоры путем профессиональной гигиены рта, включают противомикробные медикаментозные средства. До настоящего времени актуален поиск эффективных антисептических средств для лечения заболеваний пародонта.
В компании «Солагифт» (г. Томск) разработаны
субстанции из хвойной зелени деревьев для наружного применения, среди которых привлекает внимание с позиций возможного использования для лечения заболеваний пародонта биоэффективный клеточный сок пихты. По данным компании, препарат проявляет противовоспалительную и противовирусную активность.
Цель исследования: микробиологический анализ чувствительности пародонтопатогенов к клеточному соку пихты.
Материалы и методы
В Научно-исследовательском медико-стоматологическом институте (НИМСИ) МГМСУ им. А.И. Евдокимова проведено микробиологическое изучение чувствительности пародонтопатогенов к хвойным препаратам на примере биоэффективного клеточного сока пихты. Использованы следующие клинические изоляты микроорганизмов: Streptococcus constellatus; Staphylococcus aureus; Fusobacterium nucleatum; Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Выделение и культивирование выделенных штаммов проводили в соответствии со стандартным протоколом [5, 6]. В данной статье представлено изучение препарата в разведении 1:5. Критерии сравнения: изменение фазы адаптации (лаг-фаза), изменение фазы геометрического роста, амплитуда пика фазы геометрического роста, длительность стационарной фазы, срок отмирания культуры.
Основой для проведения исследования являлась автоматическая система культивирования микроорганизмов в режиме реального времени - биореактор «Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия).
Результаты исследования
По результатам культивирования клинического изолята A. Actinomycetemcomitans с соком пихты лаг-фаза в контроле длилась до 27 часов. Ускорение бактериального прироста продолжалось в течение 8 часов, что ознаменовало начало логарифмической фазы роста (ускоренный рост на промежутке 27-36 часов) (рис. 1). Экспоненциальная фаза роста, характеризуемая максимальной скоростью деления бактерий, в контрольном образце отмечалась на промежутке с 36 часа (0,54 Mcf) до 48 часа (6,00 Mcf). В данной фазе рост клеток происходит с постоянной удельной скоростью, т.е. единица микробной биомассы в единицу времени увеличивается на одну и ту же величину. Однако в первой половине этой фазы деление клеток опережает их рост, клетки мельчают, но во второй половине скорости роста и деления клеток уравновешиваются. На протяжении всей экспоненциальной фазы клетки продолжают сохранять высокую физиологическую активность, свойственную молодым популяциям. Изменение оптической плотности на данном временном промежутке составило более 5,00 Mcf. Фаза торможения или замедленного роста, характеризуемая в период линейного роста постоянной скоростью прироста биомассы (числа клеток), была достаточно продолжительной - с 48-78 часов культивирования, с выходом в стационарную фазу культивирования с показателем 7,23 Mcf (78 час). Соотношение отмирающих, вновь образующихся и покоящихся клеток становится стабильным. Прироста биомассы не наблюдается. Средний показатель стационарной фазы составил 7,20±0,05 Mcf. Значительное удлинение фазы адаптации отмечалось в образце с разведением концентрата 1:5. Ускорение бактериального прироста началось только с 48 часа культивирования, что почти на 18 часов позже, чем в контрольном образце. Фаза ускоренного роста также была длиннее, чем в других образцах, и выход культуры в экспоненциальный рост был отмечен только к 73 часу культивирования. Продолжительность лаг-фазы - 25 часов, максимальный показатель - 5,12 Mcf. Средний показатель в стационарной фазе - 5,25±0,05 Mcf, что на 27% меньше, чем в контрольном образце.
actinomycetemcomitans.
«S 6
И W
0 6 12 18 24 30 36 42 48 58 68 78 88 98 108128148168 Время (час)—» C- -■ C+ —1=5 —в—1:10 —М 1:15
б)
F. nucleatum.
О с
ч
0
0 6 12 18 24 30 36 42 48 58 68 78 88 98 108128148168 Время (час)—» С- —■- C+ —1:5 —«—1:10 —X—1:15
S. aureus.
S 5 с tO g 11
г * X X X X к %
1 X
1
1
i и
0 2 4 6 8 1012141618 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 Время (час) —С- —•— C+ —*- 1:5 —•—1:10 —» 1:15
S. constellatus.
s с Ё i О I
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 4 Время (час) —«- C- —■— C+ —1:5-е- 1:10 —И—1:15
Рис. 1. Результаты культивирования клинических изолятов A. Actinomycetemcomitans (а), F. Nucleatum (б), S. aureus (в), S. constellatus (г) с клеточным соком пихты.
По результатам культивирования клинического изолята F. Nucleatum с исследуемым препаратом в контрольной пробирке фаза адаптации продолжалась около 36 часов, первые признаки начала бактериального прироста отмечались после 37 часа культивирования с менее выраженной фазой ускоренного роста (39-45 часов). Средний показатель изменения оптической плотности составил 0,22 Mcf (снятие показаний OD - каждые 3 часа). Экспоненциальная фаза роста, характеризуемая максимальной скоростью деления бактерий, в контрольном образце отмечалась с 45 часа (0,45 Mcf) до 73 часа (4,98 Mcf). В данной фазе отмечается высокая скорость бактериального прироста и изменение оптической плотности в среднем на 5,5±0,05 Mcf. Фаза замедленного
8
4
2
0
6
4
2
3
3
2
0
2
1
1
0
роста объединяет две фазы - фазу линейного роста (д = const) и фазу отрицательного ускорения (98-103 час.). Фаза характеризуется в период линейного роста постоянной скоростью прироста биомассы (числа клеток). Затем при переходе в фазу отрицательного ускорения численность делящихся клеток уменьшается. Стационарная фаза характеризуется равновесием между погибающими и вновь образующимися клетками. Факторы, лимитирующие рост бактерий в предыдущей фазе, являются причиной возникновения стационарной фазы. Прироста биомассы нет. Средний показатель стационарной фазы составил 5,4±0,05 Mcf. В разведении концентрата в соотношении 1:5 отмечалось небольшое увеличение адаптивной фазы с моментальным переходом культуры в фазу логарифмического роста. В данных образцах скорость генерации существенно снижена в сравнении с «классической» лаг-фазой, поэтому в данном случае происходит пропорциональное увеличение численности бактериальных клеток - «сбалансированный рост». Необычно быстрое увеличение числа клеток сразу после фазы адаптации, вслед за чем скорость накопления клеток понижается, связано с частичной или полной синхронизацией деления клеток в культуре. Синхронизация культуры наступает в том случае, когда все клетки начинают делиться с почти одинаковой скоростью, при этом зависимость логарифма числа клеток от длительности культивирования приобретает ступенчатый характер в отличие от линейного при обычном асинхронном росте в периодическом режиме культивирования (концентрация исследуемого образца в соотношении 1:5). Средний показатель стационарной фазы в концентрациях 1:10 и 1:5 - 3,44±0,05 Mcf, что на 38% меньше, чем в контрольном образце.
В контрольной пробе S. aureus наблюдали типичный рост бактериальной популяции. Начальная или фаза адаптации составляла 3 часа, после чего ускоренный рост переходил в экспоненциальную фазу и кривая стремительно достигала максимума на 10-й час (2,53 Mcf). Стационарная фаза была непродолжительной и продолжалась на протяжении 5 часов, после чего культура перешла в фазу отмирания. Продолжительность стационарной фазы зависит от состава питательной среды, возраста изначальной культуры, а также от таких процессов, как использование запасных веществ, распад части рибосом и синтез ферментов. По-разному наблюдаемая картина зависит от того, какой именно фактор лимитирует рост бактериальной популяции. Быстрой гибели подвержены лишь очень чувствительные клетки, другие еще долго сохраняют жизнеспособность до тех пор, пока еще есть возможность получать необходимую для этого энергию в процессе окисления каких-либо запасных веществ или клеточных белков. «Урожай» стационарной фазы отмечен средним показателем 2,43±0,05 Mcf. Фаза отмирания характеризовалась стадией ускоренной гибели, без перехода в стадию лаг-отмирания, так как прослеживалась картина, характеризующаяся превышением числа отмирающих клеток над количеством вновь образующихся, и скорость постоянного отмирания клеток не наблюдалась. При концентрации 1:5 прослеживается явное бактериостатическое воздействие исследуемого образца, поскольку роста не наблюдалось вовсе.
Оценка чувствительности микроаэрофильного S. constellatus к исследуемому препарату показала
следующее: фаза адаптации, охватывающая промежуток от момента посева бактерий до видимого начала их роста в контрольной пробирке, продолжалась в среднем до 4 часа культивирования, у сравниваемых образцов было отмечено удлинение данной фазы в среднем на 2-4 часа. Экспоненциальная фаза, характеризующаяся прогрессирующим нарастанием скорости деления клеток, имела достоверные отличия при разведении исследуемого образца в соотношении 1:5. В данном образце отмечался и спад скорости генерации популяций, так и ярко выраженная фаза замедления. Средний показатель на пике стационарной фазы при разведении 1:5 - 1,03 Mcf, что статистически недостоверно в сравнении с контрольным образцом.
Заключение
Присутствие клеточного сока пихты в культуре клинических изолятов изученных пародонтопатоге-нов значительно снижает активность всех микробов по всем критериям, особенно Staphylococcus aureus, рост которого полностью подавлялся.
Литература/References
1. Богачева Н.В., Тунева Н.А. Изучение микробной ассоциации зубодесневых карманов у больных хеликобактериозом // Вятский медицинский вестник. 2018. № 3 (59). С. 85-90. [ Bogacheva N.V., Tuneva N.A. Study of the microbial association of tooth-pocket pockets in patients with helikobacteriosi. Vyatskii meditsinskii vestnik. 2018; 3: 85-90. (In Russ.)]
2. Грудянов А.И. Заболевания пародонта. Медицинское информационное агентство. 2009. 336 с. [Grudyanov A. I. Periodontal disease. Medical information Agency. 2009. 336 p. (In Russ.)]
3. Разина И.Н., Чеснокова М.Г., Недосеко В.Б. Влияние фотодинамической терапии на эпителиально интегрированную микробиоту тканей пародонта при лечении хронического генерализованного паро-донтита // Лазерная медицина. 2014. № 3 (18). С. 1317. [Razina I.N., Chesnokova M.G., Nedoseko VB. Effect of photodynamic therapy on epithelial integrated microbiota of periodontal tissues in the treatment of chronic generalized periodontitis. Lasernaya meditsina. 2014; 3: 13-17. (In Russ.)]
4. Усманова И.Н., Кабирова М.Ф., Хуснариза-нова Р.Ф., Сафиуллина Р.А. Особенности микробного пейзажа полости рта при хроническом гингивите и пародонтите у лиц молодого возраста. Актуальные вопросы стоматологии // Сборник Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора Г.Д. Овруцкого. Казань, 2013. С. 298-301. [Usmanova I.N., Kabirova M.F., Khusnarizanova R. F., Safiullina R.A. Features of the microbial landscape of the oral cavity in chronic gingivitis and periodontitis in young people. Topical issues of dentistry: collection of all-Russian scientific and practical conference dedicated to the 85th anniversary of the birth of Professor G.D. Ovrutsky. 2013. P. 298-301. (In Russ.)]
5. Давыдова М.М., Плахтий Л.Я., Царев В.Н. Методы микробиологического исследования, применяемые в стоматологии // Микробиология, вирусология иммунология полости рта. 2013. С. 223-268. [Davydova M.M., Plakhtii L.Ya., Tsarev V.N. Methods of microbiological examination used in dentistry. Microbiologiya, virusologiya i immunologiya polosti rta. 2013. P. 223-268 (In Russ.)]
6. Царев В.Н., Арутюнов С.Д., Малазония Т.Т. и др. Оценка антимикробного действия фотодинамической терапии на возбудителей некло-стридиальной анаэробной инфекции пародонта в экспериментальных и клинических исследованиях // Клиническая стоматология. 2015. № 4. С. 14-19.
[Tsarev V. N., Arutyunov S.D., Malazonia T.T. et al. Evaluation of antimicrobial action of photodynamic therapy on pathogens of non-clostridial anaerobic periodontal infection in experimental and clinical studies. Klinicheskaya stomatologiya. 2015;4:14-19. (In Russ.)]
УДК 616. 311-07-08-006
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПРЕДРАКОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ РТА
'Пурсанова А.Е., 'Казарина Л.Н., 'Белозеров А.Е., 'Серхель Е.В., 2Казарин А. С., 'Гулян У.Г.
'ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород, Россия (603995, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1), e-mail: pursanova@mail.ru 2Стоматологическая клиника «Saluta», Нижний Новгород, Россия (60300, г. Нижний Новгород, ул. Панфиловцев, 4/В)
Актуальность своевременной диагностики и лечения больных с предраковыми заболеваниями слизистой оболочки рта (СОР) не вызывает сомнения. Одним из факторов, способствующих их развитию, является непереносимость металлов и их сплавов.
Обследовано 100 пациентов с факультативными предраковыми заболеваниями, наиболее распространенной формой является эрозивно-язвенная форма плоского лишая, выявленная у 47 больных. Проведено аутофлюоресцентное, цитологическое, иммунологическое исследование, биопотенциалометрия. Анализ полученных результатов производился при помощи пакета прикладных программ STATISTICA версия 6.0 (StatSoft, USA) и Microsoft Exсel с использованием методов одномерной статистики. В результате исследования у 93,6% пациентов наблюдался болевой синдром, у 40 больных (85,1%) выявлена коморбидная сопутствующая патология. 43 пациента (91,4%) с эрозивно-язвенной формой плоского лишая имели частичную потерю зубов, средние значения индекса КПУ составили 18,4±0,02. Из них у 39 пациентов (90,1%) выявлена непереносимость металлов и их сплавов. Исходные значения разности потенциалов в парах точек «металл-металл», «металл-слизистая оболочка» были выше значений нормы в 10 раз. Выявлено снижение показателей местного иммунитета. В результате лечения отмечено достоверное снижение разности электрохимических потенциалов в обеих парах точек, уменьшение площади эрозивной поверхности в 1,9 раза на 7-е сутки, в 3,6 раза - на 10-е сутки и практически полное заживление на 21 сутки терапии, а также коррекция иммунологических нарушений. Пациентам с плоским лишаем, имеющим металлсодержащие ортопедические конструкции в полости рта, рекомендована биопотенциалометрия, индивидуальный подбор материала для дентальных протезов, комплексная медикаментозная терапия и диспансерное наблюдение.
Ключевые слова: предраковые заболевания, плоский лишай, слизистая оболочка, непереносимость металлов, ранняя диагностика, комплексное лечение.
IMPROVEMENT OF DIAGNOSTICS AND TREATMENT OF PRE-MALIGNANT CONDITION OF THE ORAL MUCOSA
'Kazarina L. N., 'Pursanova A. E., 'Belozerov A. E., 'Serhel E. V., 2Kazarin A. S., 'Gulyan U.G.
1Privolzhsky Research Medical University, Nizhniy Novgorod, Russia (603005, Nizhniy Novgorod , Minin and Pozharsky Square, 10/1), e-mail: pursanova@mail.ru
2Dental clinic «Saluta», Nizhniy Novgorod, Russia (60300, Nizhny Novgorod, Panfilovtsev St., 4/V)
The relevance of timely diagnosis and treatment of patients with pre-malignant condition of the oral mucosa leaves no doubts. One of the factors contributing to its development is metal and alloy intolerance. The article presents the results of complex diagnostics of the oral mucosa pre-malignant condition, which includes autofluorescence, cytological and immunological examination, biopotential oximetry. The analysis of the obtained data was made using STATISTICA version 6.0 (StatSoft, USA) and Microsoft Exel and methods of one-dimensional statistics.
100 patients with a facultative pre-malignant condition (erosive-ulcerative lichen planus in 47 patients) have been examined.
As a result, pain syndrome was observed in 93,6% of the patients, comorbid somatic pathology was revealed in 40 patients (85,1%). 43 patients (91,4%) with erosive and ulcer form had partial loss of teeth, with 39 patients (90,1%) having metal and alloy intolerance. The average index of caries intensity is 18,4±0,02. The reference values of potential difference in «metal-metal», «metal - oral mucosa» were 10 times above the norm. Decrease in local immunity indicators has been revealed. After a proper treatment reliable decrease in a difference of electrochemical potential, reduction of the area of an erosive surface by 3,6 times 10 days later and almost
