ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ПРОТИВОГРИБКОВЫМ ПРЕПАРАТАМ, ПРОДУКЦИЯ БИОПЛЕНОК И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ CANDIDA AURIS, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ГЕМОКУЛЬТУРЫ

Мальчикова А.О.; Хрульнова С.А.; Хабибуллин Н.Р.; Фролова И.Н.; Ветохина А.В.; Клясова Г.А.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Мальчикова А.О.1, Фролова И.Н.1, Молчанова И.В.2, Куцевалова О.Ю.3, Ветохина А.В.4, Клясова Г.А.1

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ CANDIDA SPP. — ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНВАЗИВНОГО КАНДИДОЗА: РЕЗУЛЬТАТЫ 18-ЛЕТНЕГО МНОГОЦЕНТРОВОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

'ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва, 2ГБУЗ «Челябинская областная клиническая больница», г. Челябинск, 3ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону,

4ГБУЗ «Иркутская ордена "Знак Почета" областная клиническая больница», г. Иркутск

Введение. За последние годы возросла доля возбудителей инва-зивного кандидоза (ИК), не чувствительных к антимикотикам.

Цель. Изучить чувствительность к антимикотикам Candida spp., выделенных из гемокультуры и других стерильных образцов.

Материалы и методы. В проспективном многоцентровом исследовании (2005-2022 гг.) было проведено изучение чувствительности Candida spp., выделенных из стерильных образцов от больных с гематологическими заболеваниями и без гематологических заболеваний из 4 центров России. Идентификацию Candida spp. проводили методом MALDI-TOF MS на анализаторе Microflex (Bruker Daltonics, Германия) в отделе микробиологии и антимикробной терапии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) флуконазола, вориконазола, каспофун-гина, анидулафунгина и амфотерицина В определяли методом микроразведений в бульоне RPMI-1640 (Sigma Aldrich, США) согласно рекомендациям Института клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI M27M44S, 2022 г.). Результаты чувствительности интерпретировали согласно критериям CLSI M27M44S и M57S (2022 г.) для всех штаммов, кроме C. auris. Для C. auris использовали критерии Центра по контролю и профилактике инфекционных заболеваний (CDC, 2020 г.). В каждое исследование были включены контрольные штаммы C. parapsilosis ATCC22019 и C. albicans ATCC90028.

Результаты. В течение 18 лет было исследовано 663 Candida spp. (243 от больных с гематологическими заболеваниями, 420 от больных без гематологических заболеваний; 557 из гемокультуры, 106 из других стерильных образцов). Основными возбудителями ИК были C. albicans (n=272; 40,9%), C. parapsilosis (n=148; 22,3%), C. glabrata (n=56; 8,4%), C. krusei (n=45; 6,8%), C. tropicalis (n=44; 6,6%), C. guilliermondii (n=24; 3,6%), C. auris (n=23; 3,5%). В таблице представлена

их чувствительность. Приобретенная резистентность к флуконазолу была выявлена у 84 (12,7%) Candida spp. (24 C. albicans, 23 C. auris, 18 C. parapsilosis, 14 C. glabrata, 3 C. tropicalis, 2 C. guilliermondii), к ворикона-золу — у 59 (8,9%) штаммов (25 C. albicans, 23 C. auris, 4 C. tropicalis, 3 C. krusei, 2 C. parapsilosis, 2 C. guilliermondii). Включая штаммы с природной устойчивостью, резистентными к флуконазолу были 129 (19,5%) Candida spp., к вориконазолу — 115 (17,4%) Candida spp. Приобретенная резистентность к анидулафунгину была определена у 10 (1,5%) штаммов (4 C. guilliermondii, 3 C. parapsilosis, 2 C. glabrata, 1 C. krusei), к кас-пофунгину — у 18 (2,7%) Candida spp. (8 C. guilliermondii, 4 C. krusei, 3 C. parapsilosis, 2 C. glabrata, 1 C. lusitaniae). Было выделено 10 (1,5%) штаммов Candida spp. со значениями МПК амфотерицина В более 2 мкг/мл, среди которых 7 C. auris, 2 C. krusei и 1 C. tropicalis.

Заключение. Приобретенная резистентность Candida spp. определена наиболее высокой к азолам (к флуконазолу 13%, к вориконазолу 9,0%). Резистентность к эхинокандинам не превышала 3% и была детектирована среди C. parapsilosis, C. krusei, C. guilliermondii и C. glabrata. Сохраняется высокая активность in vitro амфотерицина В.

Таблица. In vitro активность азолов, эхинокандинов и амфотерицина В среди Candida spp.

Candida spp. (n)

С.albicans (272)

C.parapsilosis (148)

C.glabrata (56)

C.krusei (45)

C. tropicalis (44)

C. guilliermondii (24)

C.auris (23)

MПK50/M ПK90/% чувствительных штаммов'

Анидулафунгин Каспофунгин

0,008/0,032/99,6

0,125/1/95,9

0,016/0,125/96,4

0,032/0,25/91,1

0,008/0,032/100

1/8/79,2

0,032/2/100

0,016/0,064/100

0,25/0,5/95,9

0,016/0,125/94,6

0,125/0,5/80

0,016/0,64/100

0,5/16/66,7

0,032/2/100

Вориконазол Флуконазол

0,032/0,5/87,1

0,032/0,25/87,2

0,125/2/н.о.

4/32/**

0,125/1/84,4

0,032/0,25/88,6

0,064/0,5/91,7

64/64/0

0,125/4/88,6

0,25/16/84,5

32/64/п.р.

0,125/2/90,9

1/8/91,7

128/128/0

Амфотерицин В

0,25/1/100

0,064/0,5/100

0,25/1/100

0,25/1/95,6

0,064/0,5/97,7

0,125/1/100

1/4/69,6

Примечание: н.о. - не определено, п.р. - природная резистентность, *для амфотерицина В -без приобретенных механизмов резистентности, **чувствительные дозозависимые 75%

i штаммов «дикого» типа.

Мальчикова А.О.1, Хрульнова С.А.1, Хабибуллин Н.Р.1, Фролова И.Н.1, Ветохина А.В.2, Клясова Г.А.1

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ПРОТИВОГРИБКОВЫМ ПРЕПАРАТАМ, ПРОДУКЦИЯ БИОПЛЕНОК И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

CANDIDA AURIS, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ГЕМОКУЛЬТУРЫ

'ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва, 2ГБУЗ «Иркутская ордена

"Знак Почета" областная клиническая больница», г. Иркутск

Введение. Candida auris —— мультирезистентный патоген, частота которого в спектре возбудителей кандидемии возрастает с каждым годом.

Цель. Исследовать чувствительность к противогрибковым препаратам, продукцию биопленок и генетическое разнообразие C. auris, выделенных из крови.

Материалы и методы. В ходе проспективного многоцентрового исследования (2018-2022 гг.) была проведена идентификация 23 штаммов C. auris, выделенных из гемокультуры от больных, находящихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). В анализ включали первый по видовой принадлежности штамм C. auris, выделенный от больного. Все штаммы были идентифицированы методом матрично-активированной лазерной десорбционной ионизационной времяпролетной (MALDI-TOF) масс-спектромет-рии на анализаторе Microflex (Bruker Daltonics, Германия) в отделе микробиологии и антимикробной терапии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) флуконазола, вориконазола, каспофунгина, анидулафунгина и амфотерицина В определяли методом микроразведений в бульоне RPMI-1640 (Sigma Aldrich, США) согласно рекомендациям Института клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI M27M44S, 2022 г.). Результаты

чувствительности интерпретировали согласно критериям Центра по контролю и профилактике инфекционных заболеваний (CDC, 2020 г.). В каждое исследование были включены контрольные штаммы C. parapsilosis ATCC22019 и C. albicans ATCC90028. Определение способности C. auris продуцировать биопленки проводили спектро-фотометрическим методом с использованием соли тетразолия (Sigma-Aldrich, США). Штаммы, имеющие значение оптической плотности от 0,1 и более, оценивали как образующие биопленки, менее 0,1 —— как не способные к формированию биопленок. Регионы ITS, D1-D2 рДНК и ген ERG11 были секвенированы по Сэнгеру. Нуклеотидные последовательности анализировали с помощью программного обеспечения Vector NTI Advance, филогенетический анализ —— MEGA X. Нуклеотидные последовательности регионов ITS, D1-D2 рДНК и гена ERG11 C. auris, принадлежащих разным генетическим линиям, были получены из базы GenBank, NCBI.

Результаты. Всего в анализ было включено 23 C. auris, выделенных из гемокультуры от больных в ОРИТ (1 больной с гематологическим заболеванием, 7 —— с COVID-19, 15 —— без без опухоли системы крови). Чувствительность C. auris к антимикотикам представлена в таблице. Все C. auris были резистентны к флуконазолу и вориконазолу, сохраняли чувствительность к каспофунгину и анидулафунгину. Амфотерицин В был не активен in vitro в отношении 7 (30,4%)

| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2023; ТОМ 68; №2 |

Таблица. Чувствительность Candida auris (критерии Centers for Disease Control

and Prevention - CDC, 2020)

Антимикотик Чувствительные, п(%) Резистентные, п (%) мпк50, мкг/мл мпк90, мкг/мл

Флуконазол 0 23 (100%) 128 128

Вориконазол 0 23 (100%) 64 64

Каспофунгин 23 (100%) 0 0,032 2

Анидулафунгин 23(100%) 0 0,032 2

Амфотерицин В 16 (69,6%) 7 (30,4%) 1 4

штаммов. У всех штаммов C. auris была детектирована способность к формированию биопленок. При анализе нуклеотидных последовательностей регионов ITS, D1-D2 рДНК 100% C. auris были отнесены к южноазиатскому кладу (Clade I). У всех изолятов была выявлена мутация K143R в гене ERG11, которая ведет к формированию устойчивости к азолам.

Заключение. Все штаммы C. auris были выделены из гемокульту-ры от больных в ОРИТ. Эхинокандины проявляли активность in vitro в отношении всех C. auris, в то время азолы были резистентными. Все азолрезистентные штаммы несли мутацию K143 R в гене ERG11. C. auris принадлежали к одной генетической линии —— южноазиатскому кладу (Clade I), широко распространенному по всему миру и характеризующемуся высокой долей содержания изолятов с множественной резистентностью. Продукция биопленок была детектирована у всех C. auris.

Мальчикова А.О., Фролова И.Н., Клясова Г.А. МИКОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИНВАЗИВНОГО АСПЕРГИЛЛЕЗА ЛЕГКИХ У БОЛЬНЫХ ГЕМОБЛАСТОЗАМИ

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, г. Москва

Введение. Микологическая диагностика инвазивного аспергил-леза легких (ИАЛ) включает люминесцентную микроскопию, определение антигена галактоманнан (ГМ) и культуральное исследование.

Цель. Оценить чувствительность разных методов в диагностике ИАЛ у больных с гематологическими заболеваниями.

Материалы и методы. В проспективное исследование были включены больные ФГБУ «НМИЦ гематологии» с гематологическими заболеваниями и ИАЛ (2000—2022 гг.) Все случаи ИАЛ были микологически подтвержденными и включали варианты «доказанный» и «вероятный» (критерии EORTC/MSG, 2020 г.). Индекс оптической плотности (ИОП) ГМ считали положительным при значениях в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) >1,0, в сыворотке крови >0,5, в биоптате легкого >0,5. Культуру Aspergillus spp. получали на среде Чапека или Сабуро с декстрозой. Идентификацию грибов проводили на основании морфологии (de Hoog G.S. et al., 2021) и методом масс-спектрометрии.

Результаты. В течение 23 лет в исследование включили 445 больных с ИАЛ, из них у 434 (97,5%) — «вероятный» ИАЛ, у 11 (2,5%) — «доказанный». Больные ИАЛ имели острый миелоидный лейкоз (n=170, 37,4%), острый лимфобластный лейкоз (n=90, 19,8%), неходж-кинские лимфомы (n=74, 16,3%), апластическую анемию (n=34, 7,5%), множественную миелому (n=28, 6,1%), миелодиспластический синдром (n=20, 4,4%), острый промиелоцитарный лейкоз (n=15, 3,3%), хро -нический миелолейкоз (n=8, 1,8%), другие (n=11, 2,4%). Исследуемыми образцами были: БАЛ у 377 (84,7%) больных, биоптаты легкого —— у 11 (2,5%), мокрота — у 25 (5,6%), сыворотка крови — у 369 (82,9%). Положительные значения ИОП ГМ были определены у 321 (76,2%) из 421 больных ИАЛ, культура Aspergillus spp. — у 221 (53,5%) из 413, септированный мицелий при микроскопии —— у 72 (30,4%) из 237 (таблица 1). Положительный ИОП ГМ определяли достоверно чаще в сравнении с выделением Aspergillus spp. (76,2% против 53,5%, ур<0,001)

Таблица 1. Частота положительных знамений лабораторных тестов длн диагностики ИАЛ у больных с гематологическими заболеваниями

Диагностика ИАЛ Всего

n/N (%)

Положительный ИОП ГМ 321/421 (76,2)*

• Кровь 172/369 (46,6)*

• БАЛ 96/377 (25,5)

• БАЛ+кровь 50/245 (20,4)

• Биоптат легкого 3/11 (27,3)

Культура Aspergillus spp. 221/413 (53,5)*

• БАЛ 186/377 (49,3)

• Биоптат 10/11 (90,9)

• Мокрота 25/25

• Монокультура 209/221 (94,6)

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

• Сочетание 12/221 (5,4)

Септированный мицелий при микроскопии 72/237(30,4)

и микроскопией (76,2% против 30,4%, ^<0,001). Преобладало выделение Aspergillus spp. из образцов в сравнении с выявлением септиро-ванного мицелия при микроскопии (53,5% против 30,4%, ур<0,001). Aspergillus spp. были получены из жидкости БАЛ у 186 (49,3%) из 377 больных, из биоптатов у 10 (90,9%) из 11 (у 1 больного ИОП ГМ — 1,653). У 12 (5,4%) больных были сочетания Aspergillus spp. У 9 (3,8%) из 237 больных при микроскопии был выявлен септированный мицелий без позитивной культуры, но определен положительный ИОП ГМ. В структуре возбудителей ИАЛ доминировали A. fumigatus (40,5%) и A. flavus (22,4%), реже был A. niger (16,4%), таблица 2. Доля редких видов Aspergillus составила 20,7%. Природную резистентностью к азолам имели 2,2% Aspergillus spp. (5 A. calidoustus), к амфотерицину В — 6,5% (7A. nidulans, 4 A. terreus, 3 A. alliaceus, 1 A. ochraceus). Положительные значения ИОП ГМ одновременно в крови и в БАЛ были только у 50 (20,4%) из 245 больных. Частота детекции положительного ИОП ГМ была значимо выше в сыворотке крови (46,6%) в сравнении с жидкостью БАЛ (25,5%), исследованиями одновременно из крови и БАЛ (20,4%) и биоптатом легкого (27,3%), ^<0,001.

Заключение. Для микологической диагностики ИАЛ следует использовать все лабораторные методы, включая микроскопию,

Таблица 2. Этиология ИАЛ

Примечание: n/N - число положительных образцов/всего исследуемых образцов, * - р<0,001.

Вид Aspergillus Всего 232

N(%)

Aspegillus fumigatus 94 (40,5)

Aspegillus flavus 52 (22,4)

Aspegilius niger 38 (16,4)

Aspegillus versicolor 12 (5,2)

Aspergillus sydowii 7(3)

Aspergillus nidulans 7(3)

Aspergillus calidoustus 5 (2,2)

Aspergillus terreus 4(1,7)

Aspergillus alliaceus 3 (1,3)

Aspergillus niveus 2 (0,9)

Aspergillus oryzae 2 (0,9)

Aspergillus spp. 2 (0,9)

Aspergillus ochraceus 1 (0,4)

Aspergillus ornatii 1 (0,4)

Aspergillus Candidus 1 (0,4)

Aspergillus flavipes 1 (0,4)

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Мальчикова А.О., Хрульнова С.А., Хабибуллин Н.Р., Фролова И.Н., Ветохина А.В.