CC BY
21
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
отличающиеся невысоким содержанием специфических иммуноглобулинов и наличием перекрестной активности.
В настоящее время в лаборатории гибридом института сконструированы и широко апробированы диагностические препараты на основе видоспеци-фических моноклональных антител (МКА), которые позволяют выявлять холерные вибрионы О1 и О139 серогрупп в реакциях слайд-агглютинации и прямой иммунофлуоресценции. Сравнительные исследования с аналогичными поликлональными препаратами показали, что моноклональные диа-гностикумы не уступают им по чувствительности, но превосходят по специфичности, и подтверждение тому — отсутствие перекрестных реакций с близкородственными и гетерологичными микробами.
В настоящее время в России не существует коммерчески доступных иммуноферментных микропланшетных наборов для выявления холерного вибриона. Нами проведены работы по конструированию моноклональных пероксидазных конъюга-тов для детекции V. ско1егае О1 и О139 (при наличии в пробе 105—106 м.к.) в прямом варианте планшетного ИФА и ДИА (дот-иммуноанализе), постановка которых занимает 1,5—2 ч. Высокая специфичность конъюгатов подтверждена при испытании их на наборе штаммов холерных вибрионов О1, О139 серо-групп и представителях близкородственных и гете-рологичных микроорганизмов. Совместно с ГНЦ ПМБ (г. Оболенск) разработана моноклональная иммунохроматографическая тест-система (чувствительность — 108 м.к.) для выявления в течение 15 мин V. ско1егае О1, при лабораторных испытаниях которой установлена строгая специфичность в отношении вибрионов О1 серогруппы. Набор высокоспецифичных препаратов будет расширен за счет Инаба- и Огава-специфических МКА, получение которых осуществляется в настоящее время для конструирования се-ровароспецифических диагностикумов.
Таким образом, на сегодняшний день Ростовский противочумный институт подготовил набор высокоспецифичных препаратов, которые проходят государственную регистрацию для последующего внедрения их в практику здравоохранения с целью совершенствования лабораторной диагностики холеры и повышения достоверности серологического анализа.
ПОПУЛЯЦИИ В-КЛЕТОК ПАМЯТИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С
Д.С. Елезов1, Н.А. Арсентьева1, И.В. Кудрявцев2, А.В. Семенов1, Арег А. Тотолян1
1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2ФГУННИИээкспериментальной медицины, Санкт-Петербург
В-клетки могут быть разделены на 5 субпопуляций на основании экспрессии молекул СВ38 и СВ27: транзиторные клетки (СВ38ЬпёИСВ27-), наивные зрелые клетки (СВ38+СВ27-), покоящиеся клетки памяти (С038-С027+), активированные зрелые клетки (С027+С038+) и дубль-негативные клетки (СВ38-СВ27-). Исследование данных субпопуляций может помочь в понимании иммунопатогенеза и формирования иммунологической памяти при хроническом вирусном гепатите С.
Цель работы. Оценка количественного изменения субпопуляций В-клеток периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом С.
Материалы и методы. Объектом исследования служила венозная кровь 29 больных хроническим вирусным гепатитом С, ранее не проходивших лечение, и 27 практически здоровых лиц. Измерение количества клеток в популяциях проводили методом проточной цитофлюориметрии с использованием прибора Navios (Beckman Coulter, США). Для окрашивания лимфоцитов использовали следующие меченные флюорохромами моноклональные антитела: CD38-PE, CD27-PC7, CXCR3-APC, CD19-AF700, CD45-AF750. Переменные сравнивали, используя непараметрический тест Манна—Уитни.
Результаты. Относительное количество транзи-торных В-клеток было снижено в 2 раза по медиане (p < 0,001) в сравнении с группой контроля и составило 2,7% от CD19+ клеток, а относительное количество наивных зрелых клеток — в 1,1 раза (p = 0,025) и составило 54,8%. Относительное количество дубль-негативных клеток было повышено в 1,3 раза (p = 0,034), медиана равнялась 10,4% от CD19+ клеток. Не было выявлено достоверных различий в количестве покоящихся В-клеток памяти и активированных зрелых В-клеток, медианы составили 13,2% и 14,1% соответственно.
Выводы. Выявлено относительное уменьшение менее дифференцированных субпопуляций В-кле-ток — транзиторных и наивных зрелых клеток с достоверным увеличением только дубль-негативной субпопуляции. Таким образом, полученные данные подтверждают, что при хроническом вирусном гепатите С не происходит значительной активации и дифференцировки В-клеток.
ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСАМ СЕМЕЙСТВА HERPESVIRIDAE, ХЛАМИДИЯМ И ТОКСОПЛАЗМАМ У ДЕТЕЙ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ В 2013 г.
К.Д. Ермоленко, Л.Б. Куляшова, А.В. Закревская
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
На сегодняшний день отмечается повсеместная значительная распространенность вирусов семейства Herpesviridae во всех возрастных группах населения. На стабильно высоком уровне находится инфицированность хламидиями и токсоплазмами. Отсутствие точной информации о серопозитивно-сти к данным возбудителям среди детей затрудняет точное прогнозирование развития эпидемического процесса, а также возможное установление наиболее актуальных путей передачи этих заболеваний.
Целью работы явилось изучение частоты выявления антител ко всем вирусам семейства Herpesviridae кроме вируса герпеса 7 типа, а также хламидиям и токсоплазмам среди детей в Санкт-Петербурге.
В период с марта по сентябрь 2013 г. было проведено исследование крови 102 детей. Всего было обследовано 63 ребенка мужского и 49 детей женского пола. В исследование включались дети в возрасте от 2 месяцев до 17 лет, не имевшие клинических проявлений герпетических инфекций.
Методом иммуноферментного анализа у всех детей определялись противовирусные IgG к ВПГ 1/2 типа, а также типоспецифические IgG к ВПГ 1 и ВПГ 2 от-
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
дельно. Помимо этого, выявлялись антитела к ВГЧ 3, ЦМВ, ЭБВ, ВГЧ 6 и ВГЧ 8, а также хламидиям и ток-соплазмам.
Наиболее высокий средний уровень серопо-зитивности среди детей отмечался по отношению к ВГЧ 6 (79%), ЦМВ (56%), ЭБВ (55%) и ВГЧ 3 (44%). Антитела к ВГ 8 типа не были выявлены ни у одного ребенка. Антитела к токсоплазмам и хламидиям определились у 8,8 и 7,8% детей соответственно. IgG к ВПГ 1/2 обнаруживались в 29,4% случаев. В подавляющем количестве случаев выявлялись антитела к ВПГ 1 (28,4%). Серопозитивными к ВПГ 2 были только 1,96% детей, причем у этих лиц одновременно выявлялись и антитела ВПГ 1.
Стоит также отметить, что по сравнению с данными, полученными в предшествующих исследованиях за период с 2006 по 2012 гг., отмечается резкий рост серопозитивности по отношению к ВГЧ 6 (на 31,6%) и ЦМВ (11,3%), в то время как частота выявления антител к ВПГ 1/2 снизилась на 8,7%.
Таким образом, на настоящий момент отмечается высокая частота выявления антител к герпесви-русам хламидиям и токсоплазмам. Отмечается повышение серопозитивности по отношению к ЦМВ и ВГЧ 6. Все это требует пристального внимания врачей по отношению к проблеме диагностики и лечения ГВИ.
ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
А.В. Ершова, О.В. Бердюгина
ФГБУ Уральский НИИ фтизиопульмонологии МЗ РФ, г. Екатеринбург
Поиск способа совершенствования диагностики и повышения эффективности лечения больных туберкулезом сохраняет свою актуальность. В формировании и течении туберкулезного процесса важную роль играет и наличие патогенного штамма микобактерий, и иммунологическая реактивность организма.
Нами оценена фагоцитарная активность лейкоцитов крови у 93 больных различными формами туберкулеза легких, а именно: у больных с туберку-лемами (n = 25), инфильтративным туберкулезом (n = 23), инфильтративным туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью, МЛУ (n = 26), фиброзно-кавернозным туберкулезом, ФКТ (n = 19). Контрольная группа — 25 здоровых человек. Для исследования использованы наборы PHAGOTEST и BURSTTEST (GLYCOTOPE Biotechnology, Германия).
Абсолютное число моноцитов, способных к фагоцитозу, достоверно не отличалось во всех пяти исследуемых группах, относительное их число было снижено. Относительное количество фагоцитирующих моноцитов в группе контроля составило в среднем 74%, у больных этот показатель был снижен и составил в среднем 59% при туберкулемах и 47% — при инфильтративном туберкулезе с МЛУ Та же закономерность наблюдалась при оценке способности этих клеток к окислительному взрыву.
Общее число гранулоцитов возрастало по мере утяжеления процесса. Этот показатель был незначительно повышен при туберкулемах и инфильтра-
тивном туберкулезе — на 6 и 5%, при инфильтративном туберкулезе с МЛУ и ФКТ возрастал уже на 25 и 34% в сравнении с контролем. Число фагоцитирующих гранулоцитов было снижено при инфильтративном туберкулезе на 7%, повышено при ФКТ на 10%. Относительное содержание гранулоцитов способных к фагоцитозу снижалось во всех группах больных по сравнению с контрольной группой. Абсолютное число гранулоцитов, способных к окислительному взрыву снижалось при туберкулемах, но повышалось в трех других группах больных (при ФКТ на 32%). Выводы:
— проточная цитофлюориметрия позволяет оценить степень изменения функционально-метаболической активности фагоцитов у больных тубер -кулезом легких;
— изменение количества клеток, способных к фагоцитозу и окислительному взрыву, связано с тяжестью процесса. Наибольшей величины эти изменения достигают при ФКТ и инфильтративном туберкулезе с МЛУ
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГЕПАТИТА А В НИЖНЕМ НОВГОРОДЕ В СОВРЕМЕННЫЙ ПЕРИОД
А.А. Залесских
ФБУН Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора
В крупном городе европейской части России установлены особенности эпидемического процесса гепатит А-инфекции (ГА), проявившиеся в изменении интенсивности манифестного и латентного компонентов эпидемического процесса (ЭП). Выявлены изменения иммуноструктуры населения к вирусу гепатита А (ВГА). По сравнению с предыдущим годом увеличилась доля серопозитивных лиц с 5 до 24% в индикаторных группах детей 1—4 и 5—9 лет. Рост иммунной прослойки в этих возрастных группах свидетельствует об активизации циркуляции ВГА среди населения Нижнего Новгорода и является неблагоприятным фактором-предвестником периодического подъема.
Изучена информативность определения РНК ВГА в эпидемиологическом надзоре за инфекцией. Установлена целесообразность применения метода ОТ-ПЦР для выявления ВГА при мониторинге водных объектов хозяйственно-бытового назначения. Усовершенствована методика концентрирования ВГА в воде. Показано, что оптимальным является метод фильтрации с применением мембран с положительным зарядом (ММПА+). Генотипирование ВГА, выделенного у больных ГА в 2004—2009 гг., проведено методом прямого секвенирования, для чего подобраны праймеры к вариабельному участку VP1—2A генома ВГА, условия полимеразной цепной реакции (концентрации праймеров, матрицы, смеси нуклеотидов, полимеразы) и программа термоциклирования. Очистку ПЦР продуктов проводили с коммерческим набором реагентов «Axygen», секвенирование — на капиллярном секвенаторе ABI PRIZM.
Выявлена преимущественная (более 90%) циркуляция субтипа IA с единичными определениями субтипов IB (со степенью гомологии 92% к ближайшим депонированным вариантам GenBank) и IIIA.
