CC BY
68
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015
Материалы и методы. Проведено исследование а- и Ь-форм генов локусов НРА-1,—5,—15 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуориметрической регистрацией продуктов в ходе процесса (ПЦР в реальном времени) с помощью наборов реагентов ТромбоГенТест (Россия). Гены локуса НРА-1 определены у 1419 человек, локуса НРА-5 и НРА-15 — у 185 доноров крови и/или ее компонентов, проживающих на территории Кировской области.
Результаты. Установлена частота встречаемости генетических сочетаний, выявление которых у женщин является критерием риска развития АТПН. Генотип НРА-1ЬЬ определен у 1,3 % обследованных, генотип НРА-5аа — 84,5 %, генотип НРА-15аа — 24,7 % человек. Для выявления риска развития АТПН проведен расчет
вероятности несовместимости матери и ребенка по НРА-генотипам по формуле: г=а (Ь + с), где г — генетический риск развития АТПН; а — частота встречаемости «генотипа риска»; Ь, с — другие сочетания генов в данном локусе. Соответственно, риск развития АИТН составляет по локусам НРА-1 — 1,28 %, НРА-5 — 13,1 %, НРА-15-18,5 %.
Заключение. Анализ совместимости НРА-генотипов матери и ребенка является одним из критериев дифференциальной диагностики причин тромбоцитопении у новорожденных. Для постановки диагноза АТПН, наряду с генетическими показателями, необходимо исследовать наличие у матери антител к собственным тромбоцитам и тромбоцитам ребенка.
Головкина Л. Л., Стремоухова А. Г., Пушкина Т.Д., Атрощенко Г. В., Каландаров Р. С., Паровичникова Е. Н.
ФГБУ Гематологический Научный Центр Минздрава России, Москва
ЧАСТОТА ТИПОВ АНТИГЕНА DWEAK СИСТЕМЫ РЕЗУС У РОССИЯН
Введение. Антигены системы Резус имеют большое значение в трансфузиологии ввиду их высокой иммуногенности. В настоящее время установлен широкий полиморфизм генов, кодирующих синтез белковых молекул антигена RhD. Классический антиген D состоит из 36 составных частей (эпитопов). Среди множества его вариантов принято выделять три основных: слабый антиген D — Dweak (его количество на эритроците снижено), парциальный антиген D, у которого отсутствует какой-либо из эпитопов (лица с таким антигеном D могут вырабатывать антитела к отсутствующим у них эпитопам) и DEL. Выявление Dweak представляет большое значение как у доноров, так и у реципиентов для профилактики анти-D аллоиммунизации. Серологические методы определения резус-принадлежности людей, применяемые в обычной практике иммуногематологов, не позволяют идентифицировать тип слабого варианта антигена Dweak. Это можно сделать только с помощью молекулярных методов. Выявление слабых типов антигена D у доноров важно для предупреждения аллоиммунизации D-отрицательных пациентов. Для пациентов это имеет значение в контексте тактики переливания эритроцит-содержащих сред: в практике американских трансфузиологов рекомендовано переливание
реципиентам с Dweak type 1, 2, 3 эритроцитов от D-положительных доноров для экономии резус-отрицательных эритроцитов. Беременным женщинам с теми же типами слабого антигена D не рекомендовано введение антирезусного иммуноглобулина.
Цель работы: выявить частоту типов антигена Dweak и фенотипов антигенов системы Резус у Dweak-положительных лиц среди россиян.
Методы исследования: фенотипирование эритроцитов по системе Резус выполняли в реакции агглютинации на плоскости Цоликлона-ми IgM класса со специфичностями анти-D,— С,— с,— Е. — е. Определение антигена Dweak проводили в реакции солевой агглютинации в планшетах с полными моноклональными антителами анти-D (ЭритротестТМ-Цоликлон анти-D Супер, ООО «Гематолог», Москва) двух серий, непрямой антиглобулиновый тест с неполными моноклональными антителами анти-D двух серий (ЭритротестТМ-Цоликлон анти-D, ООО «Гематолог», Москва) в пробирках и в геле (фирма BioRad, США). Антиглобулиновую сыворотку трех серий применяли для выявления фиксирования неполных анти-D антител после проведенной инкубации на исследуемых и контрольных эритроцитах. Метод полимеразной цепной реакции выполняли с праймерами для выявления ге-
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»
Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.
нотипов системы Резус (RH-TYPE) и вариантов антигена Dweak (Weak D-TYPE) производства фирмы «BAG» (Германия).
Результаты. В 2014 году определение фенотипа эритроцитов системы Резус выполнено у 3205 человек, из них антиген Dweak выявлен у 64 (2 %). Генотипирование для идентификации типов антигена Dweak проведено у 32 человек, у которых выявлено 7 типов Dweak (таблица).
Чаще у обследованных лиц встретились типы Dweak type 3 (46,9 %) и Dweak type 1 (28, 1 %). Остальные 5 типов антигена Dweak имели следующие частоты: Dweak type 2-9,4 %, Dweak type 20-6,25 %, Dweak type 4.2 (DAR), Dweak type 6, Dweak type — по 3,1 % каждый. Dweak-положи-тельные лица чаще имели фенотип Ccee (75 %). Реже встречались фенотипы ССее (9,4 %), ссЕе (6,25 %), ссее (3,1 %).
Таблица.
Частота типов антигена D weak и фенотипов антигенов системы Резус
у D weak-положительных лиц.
Типы антигена D weak Количество Фенотипы
Абс. % CcDwee CCDwee ccDwee ccDw Ee Ccdee
1 9 28,125 9 0 0 0 0
2 3 9,375 1 0 0 2 0
3 15 46,875 13 2 0 0 0
4.2, DAR 1 3,125 0 0 1 0 0
6 1 3,125 1 0 0 0 0
15 1 3,125 0 1 0 0 0
20 2 6,25 0 0 0 0 2
Всего в абс.цифрах: 32 24 3 1 2 2
Всего в % 100 75 9,375 3,125 6,25 6,25
Большой интерес представили два человека, у которых был определен фенотип Ccdee, и только молекулярным методом можно было идентифицировать генотип как Сс Dweak type 20 ee. Можно предположить, что у этих двух людей гаплотипы были Cde/ce Dweak type 20, поскольку у лиц белой расы чаще встречается именно гаплотип Cde. Если это положение верно, то антиген С будет находиться в положении транс и супрессировать экспрессию антигена Dweak type 20.
Заключение. Современные молекулярные методы исследования позволяют идентифицировать редкие аллели генов ИНО, продукты которых выявляются серологическими методами как слабый антиген О. При очень слабой выраженности антигена Dweak вследствие малого количества антигенных детерминант на эритроците или супрессии находящимися в позиции транс антигенами С серологические методы бессильны в его выявлении.
Головкина Л. Л., Пушкина Т.Д., Михайлова Е. А., Паровичникова Е. Н., Савченко В. Г.
ФГБУ Гематологический Научный Центр Минздрава России, Москва
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА НА АНТИГЕНЫ СИСТЕМ HLA И HPA У ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С МНОЖЕСТВЕННЫМИ ТРАНСФУЗИЯМИ ТРОМБОЦИТОВ
Введение. Аллоиммунизация больных затрудняет проведение заместительной трансфу-зионной терапии гемокомпонентами. Образование антител к антигенам систем HPA (Human Platelet Antigens) и HLA (Human Leukocyte Antigens) I класса является иммунологическим осложнением при переливании тромбоцитов.
Известно, что за инициацию гуморального иммунного ответа отвечают HLA II класса. HLA-рестрикция аллоиммунизации недостаточно изучена в трансфузиологии.
Цель работы: изучить ассоциацию. HLA и НРА генотипов с антителогенезом на антигены систем HLA и НРА у гематологических больных
