CC BY
108
уровней сывороточного IgE. Была собрана информация из историй аллергических заболеваний пациентов, включающая случаи атопиче-ского дерматита, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита, астмы. Значительное снижение среднего стандартного отклонения уровня сывороточного IgE было обнаружено у больных аллергическими заболеваниями с ПГГЕ (123,9 ±148,8 МЕ /мл) в отличие от контрольной
группы здоровых (376,2±471,7 МЕ /мл) [р< 0,005] или больных аллергическими заболеваниями без ПГГЕ (544,1±309,1 МЕ /мл) [р< 0,001].
Таким образом, уровень сывороточного IgE не является подходящим диагностическим критерием или показателем эффективности лечения у пациентов с ПГГЕ.
О.Р.
ЧАСТЬ ВТОРАЯ
ПРИЧИНА ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ
Е.Н. Супрун
Научно-клинический консультативный центр аллергологии и иммунологии, Москва
Даже единичные замены аминокислот, лежащие внутри видового антигенного полиморфизма (особенно в системе гистосовместимости), эффективно распознаются с помощью антител. Комбинация достаточно большого числа полиморфных генов обеспечивает биологическую индивидуальность, которая проявляется, в частности, в отторжении тканей, происходящих практически от любого другого индивидуума того же вида. На той же основе, хотя и не всегда, организм распознает «неоантигены», возникающие вследствие мутаций.
Однако требование чужеродности не является абсолютным при определении понятия «антиген». Об этом свидетельствует возможность образования аутоантител, т.е. антител к собственным компонентам организма, аутоантигенам. В тех случаях, когда аутоантигенами являются компоненты тканей, в норме изолированных от
иммунной системы («забарьерные» ткани1), это не нарушает общего принципа чужеродности. В других случаях аутоантитела образуются в ответ на действие чужеродных субстанций, имеющих структурное сродство с аутологичными компонентами; эти антитела перекрестно реагируют с аутоантигенами. Так бывает при стрептококковой инфекции, при которой образуются антитела к микробным полисахаридам, реагирующие с полисахаридами соединительной и эпителиальной тканей. При патологии, затрагивающей иммунную систему, механизмы селекции клонов лимфоцитов и иммунорегуляции, возникает истинная реакция на собственные антитела (например, при системной красной волчанке) [3].
ИММУНОГЕННОСТЬ
Иммуногенность обуславливает способность антигена вызывать иммунный ответ независимо
1 «Забарьерные» органы имеют особым образом устроенные гистогематические барьеры, такие как гематоэнцефалический, гематоофтальмический, гематотестикулярный, гематотиреоидный и гематокохлеарный. Существование этих барьеров делает невозможным контакт иммунокомпетентных клеток с антигенами тканей головного мозга, глаз, семенников, щитовидной железы, внутреннего уха в период эмбриогенеза, когда происходит становление иммунологической толерантности к собственным белкам. Невозможность такого контакта является причиной того, что к антигенам вышеперечисленных «забарьерных» органов не сформировалась иммунологическая толерантность, т.е. в организме существуют клоны лимфоцитов, способные давать иммунный ответ на указанные антигены. В условиях патологии, когда нарушается целостность специализированных гистогематических барьеров, лимфоциты могут проникать в «забарьерные» ткани и взаимодействовать с нормальными их компонентами, инициируя комплекс клеточных и гуморальных иммунных реакций.
26
от его специфичности. Интенсивность иммунного ответа зависит от количества введенного антигена. Например, для грызунов максимальная доза бычьего сывороточного альбумина 10-4 мг, а эндотоксина 10-14 мг. Небольшие концентрации антигена индуцируют синтез высокоаффинных антител, а высокие - образование антител с низкой или средней аффинностью (сродством). С увеличением дозы вводимого антигена повышается выраженность иммунного ответа, но до определенной концентрации. Большие дозы антигена вызывают состояния специфической ареактивно-сти (иммунологической толерантности). Вторичный ответ не только развивается быстрее и длится дольше, но сопровождается образованием антител более высокой аффинности. Причин для такого повышения, видимо, две. Во-первых, в ходе первичного ответа концентрация антигена постепенно снижается, и со временем только клетки с высокой аффинностью будут связывать достаточное для поддержания пролиферации количество антигена. Во-вторых, на этой стадии клетки с высокой частотой мутируют, а любые мутанты с более высокой аффинностью связывают больше антигена и из-за постоянной кло-нальной экспансии подвергаются позитивному отбору. Следует заметить, что ответ на тимусне-зависимые антигены, при котором практически не формируется иммунологическая память и очень редки мутации, не сопровождается образованием антител с повышенной аффинностью.
Таким образом, способность Т-хелперов облегчать реакцию на неполимерные антигены и антигены, не являющиеся поликлональными активаторами, индуцировать клональную пролиферацию, стимулировать переключение классов и, наконец, настраивать иммунный ответ на более высокую аффинность обеспечивает нас системой иммунитета с более сильной, качественной и гибкой реакцией.
Способ введения антигена также является ограничивающим фактором для проявления иммуногенности. Так, например, некоторые бактериальные антигены при непосредственном попадании в желудочно-кишечный тракт не способны преодолеть кислотность желудочного сока, а введенные непосредственно в кровь проявляют сильную иммуногенность. Если при инъекциях антиген вводят парентерально, внутри-
кожно, подкожно или внутримышечно, то это ведет к быстрому контакту с иммунокомпетент-ными клетками. В случае внутривенного введения антигена в реализации иммунного ответа прежде всего участвует селезенка. Часто при внутрикожном введении антигена можно вызвать иммунный ответ, когда при внутривенной инъекции того же количества антигена реакции не наблюдается [1].
Структурно-химические условия иммуногенности
Антигенами могут быть, прежде всего, белки и углеводы. Липиды, нуклеиновые кислоты и другие органические вещества слабоиммуногенны и эффективны лишь в составе комплексных соединений (например, в виде конъюгатов с белками). Использование конъюгатов низкомолекулярных соединений (гаптенов) с белками-носителями, введенное в научную практику К. Landsteiner, сыграло ключевую роль в анализе свойств антигенов. В частности, с помощью конъюгатов было показано, что специфичность антигена определяется преимущественно гаптеном, а иммуноген-ность - белком-носителем. Иммуногенность в значительной степени обусловливается способностью антигена активировать Т-хелперы.
Важнейшим качеством, определяющим имму-ногенность антигенов, является размер молекулы. С повышением молекулярной массы полимерных молекул увеличивается их иммуноген-ность. Исключением являются углеводные антигены, для которых это правило срабатывает лишь до определенного предела. Для углеводов граница между низкой и высокой иммуногенностью располагается на «уровне» молекулярной массы в десятки тысяч: полимер декстрана с массой 52 300 слабоиммуногенен, а с массой 90 700 обеспечивает развитие достаточно сильного иммунного ответа. Для белков пороговый размер молекулы, определяющий появление иммуногенно-сти, ниже, чем для углеводов. Для белков эта граница связана с появлением а-спиральной структуры (7-10 аминокислотных остатков), однако она варьирует в зависимости от конкретного состава, в том числе от способности остатков участвовать в формировании а-спирали. Минимальная описанная молекулярная масса имму-ногена составляет 450 (арсанил-М-ацетил - DL-
тирозин). При переходе от мономерной формы флагеллина (40 000) к полимерной (20 000 000) титры антител возрастают на два порядка.
Помимо формирования определенных структур, от которых зависит иммуногенность (например, а-спирали), размер молекулы важен для увеличения числа антигенных детерминант (эпи-топов), т.е. повышается валентность антигена. С повышением числа идентичных групп иммуно-генность конъюгата растет, даже если его размеры не увеличиваются. Однако после достижения определенной эпитопной плотности дальнейшее возрастание иммуногенности с увеличением числа эпитопов прекращается, и может наблюдаться даже снижение иммуногенности вследствие стерических помех в распознавании детерминант. Естественно, чем больше величина молекулы, тем больше детерминант она может вместить без подобного перенасыщения. Влияние валентности на иммуногенность имеет значение также в связи с разнообразием эпитопов, присутствующих на молекуле. Установлено, что молекула приобретает иммуногенность лишь при условии достаточного разнообразия ее структуры. Так, поли^-лизин иммуногенен только для ограниченного числа животных, например, для некоторых линий морских свинок. Однако введение в состав молекулы боковых цепей или чередование лизина с другими остатками в составе основной цепи делает полимер иммуногенным практически для любых реципиентов.
Давно отмечено, что иммуногенность антигенов зависит от жесткости их структуры, т.е. способности сохранять достаточно определенную конфигурацию, детали которой и являются объектами распознавания лимфоцитарными рецепторами. Стабилизации конформации способствует присутствие ароматических, затяжных, полярных аминокислотных остатков. Так, молекула желатина, утратившая жесткость конфор-мации в результате обработки, практически неиммуногенна, но приобретает это свойство после введения в ее состав ароматических аминокислот. Наоборот, гидрофобные остатки в большом количестве препятствуют формированию альфа-спирали и стабилизации конформа-ции молекул. Чрезмерную гибкость придают полимерам остатки пролина, особенно повторяющиеся. В обоих случаях снижение стабиль-
ности молекул сопровождается ослаблением их иммуногенности.
Существует еще одно свойство антигенов, от которого зависит их иммуногенность: они должны принадлежать к тем классам полимеров, из которых построены организмы высших животных. Так, полипептиды, состоящие из D-амино-кислот, не свойственных позвоночным, неимму-ногенны для этих животных. Полагают, что это связано с затруднениями деградации этих веществ из-за отсутствия необходимых ферментов (частичное разрушение является условием вовлечения в иммунный ответ Т-хелперов, т.е. реализации иммуногенности).
Таким образом, хотя антигены по определению должны быть чужеродны для организма-хозяина, эта чужеродность не должна переходить определенные границы.
Генетические аспекты иммуногенности
Существование генетического контроля иммунного ответа на конкретные антигены показано в разнообразных экспериментах. Так, при иммунизации инбредных морских свинок полимерами ^1у^уз) или конъюгатом динитрофе-нил-поли^^уз свинки одной линии отвечали образованием антител на оба конъюгата, а свинки другой линии не отвечали ни на один из них. Гибридологический анализ показал, что отвечае-мость детерминируется одним доминантным геном. Данные генетических исследований наглядно подчеркивают относительность понятия «иммуногенность» и зависимость иммуно-генности от свойств организма, в который введен антиген. Оказывается, что иммуногенность антигена может зависеть в большей степени от особенностей реакции организма, в который он введен, чем от структуры антигена.
ТОЛЕРОГЕННОСТЬ
При введении антигена может не только отсутствовать иммунный ответ, но и развиваться неотвечаемость, обозначаемая для уровня клетки как анергия, а для уровня организма - как иммунологическая толерантность, т.е. устойчивая неотвечаемость на данный антиген, восприятие его организмом как своего. Толерогенность индуцируется при введении высоких доз белков и полисахаридов; для белков существует также
зона низких толерогенных доз. Из свойств молекулы антигена, способствующих развитию толерантности, наиболее важными являются безагре-гатность и мономерность. К другим свойствам, способствующим проявлению толерантности, относят низкую молекулярную массу и высокую эпитопную плотность.
СПЕЦИФИЧНОСТЬ
Специфичность - это те антигенные способности, благодаря которым антигены отличаются друг от друга. Виды специфичности:
• видовая специфичность, благодаря которой представители одного вида организмов отличаются от особей другого;
• групповая специфичность обуславливает различия среди особей одного вида (изоантиге-ны). Для человеческих эритроцитов, кроме системы АВО, известно более 70 других изо-антигенов, объединенных в 14 изоантигенных систем;
• типоспецифичность - понятие, аналогичное групповой специфичности, но имеющее отношение к микробным антигенам. Например, пневмококки по полисахаридным антигенам делятся на 4 вида;
• гетероспецифичность - это общие для представителей разных видов антигенные комплексы (чаще антигенные детерминанты на различающихся по другим признакам комплексах). Антигены, определяющие человеческую группу крови А, обнаружены у вируса гриппа и некоторых других микроорганизмов;
• функциональная специфичность - антигенная специфичность, связанная с функцией данной органической молекулы. Белки, выполняющие в организме различные функции, имму-нологически различаются, а белки, выполняющие одну и ту же функцию, очень сходны в антигенном отношении;
• стадиоспецифичность - на определенных стадиях эмбрионального развития в тканях есть антигены, которых не было раньше, и нет в тканях взрослых здоровых особей. Например, фетопротеин (раковоэмбриональный антиген)
синтезируется клетками эмбриональной печени, а также опухолевыми клетками при первичном раке печени.
В любой молекуле есть несколько детерминант, или эпитопов2. Для антигенов с монотонной структурой (например, углеводных антигенов) характерны повторяющиеся однотипные детерминанты. Для белков свойственны разнообразные детерминанты, против каждой из которых может быть индуцирована выработка антител, отличающихся по специфичности от антител к другим детерминантам. При этом внутри молекулы устанавливается определенная иерархия детерминант, когда одна из них является доминирующей (явление иммунодоминантности), т.е. в спектре антител, которые образуются при введении этого антигена, преобладают антитела, специфичные к данной детерминанте. После ее искусственного удаления доминирующая роль переходит к другому эпитопу.
Связь специфичности антигенов с относительно небольшими фрагментами их молекулы объясняется самой природой этой специфичности. Она служит отражением особенностей тех структур, которые способны распознавать антиген и связывать его. Такими структурами являются рецепторы лимфоцитов и свободные антитела. Именно соответствие (прежде всего в пространстве) между антигеном и рецептором или антителом, дающее им возможность взаимодействовать с высокой степенью сродства, является материальным проявлением специфичности антигенов. В этом случае размер антигенных детерминант неизбежно должен определяться размерами активных центров антигенсвязывающих рецепторов и антител, поскольку упомянутые активные центры представляют собой впадины, которые могут заполняться антигенной детерминан-той.
Объем детерминант составляет около 2-3 нм3, а протяженность - 2-4 нм. Полипептидная цепь такой длины соответствует 7-15 аминокислотным остаткам (молекулярная масса 600-1000), углеводная цепь - примерно 6 моносахаридным остаткам. Роль остатков в проявлении специфич-
2 Эпитоп или антигенная детерминанта - это поверхностно расположенная химическая группировка антигена, взаимодействующая с активным центром антитела (паратопом).
29
ности эпитопа неодинакова: на долю концевого сахара приходится 39% энергии взаимодействия эпитопа с активным центром антитела, по мере удаления от конца эта доля убывает, и для 6-го остатка она составляет менее 6%.
Следует подчеркнуть относительность границ эпитопов в нативных молекулах, особенно белковых. Не только животные разных видов, но и разные представители одного вида «различают» неидентичные по размерам и составу эпитопы. Анализ специфичности моноклональных антител, продуцируемых гибридными клонами, которые получены на основе клеток селезенки одной мыши, иммунизированной антигеном, свидетельствует о размытости границ эпитопов и наличии целых популяций моноклональных антител к вариантам одного и того же эпитопа. Кроме того, при этом регистрируется разнообразие антител сходной специфичности по сродству к эпитопу, т.е. по степени пространственного соответствия активных центров антител конфигурации эпито-па. Отсутствие жесткого соответствия их конфигураций - важная особенность иммунологической специфичности (особенно при первичном иммунном ответе). Это несоответствие выглядит вполне естественным, так как связывающие структуры формируются без участия с антигеном и поэтому соответствие конфигураций активного центра антител и эпитопа неизбежно является неполным. Формирование этого соответствия завершается в процессе «подгонки» при взаимодействии антигена с антителом. В него вовлекаются как антитела, так и антиген, незначительно изменяющие свою конфигурацию для достижения комплементарности (отсюда роль гибкости структуры в формировании иммунодоми-нантных эпитопов).
Как известно, белковые молекулы имеют развитую пространственную структуру, причем гидрофильные аминокислотные остатки оказываются экспонированными на поверхности белковой глобулы, тогда как другие (преимущественно гидрофобные) скрыты в глубине клубка. В основе взаимодействия антигенов и антител лежит пространственное соответствие конфигураций эпитопа и активного центра антител. Доказано, что в формировании детерминанты имеют значение, кроме линейной последовательности аминокислотных остатков, пространствен-
ные образования, включающие отдаленные друг от друга участки молекулы. Серологически выявляемые антигенные детерминанты белков бывают двух типов - секвенциальные (линейные), по преимуществу концевые, и конформа-ционные. Оба типа детерминант объединяет лишь локализация на поверхности белковой глобулы. Классическим примером конформацион-ной детерминанты является петля в молекуле лизоцима, включающая аминокислотные остатки в положении 60-83, скрепленная дисульфид-ной связью. Разрыв связи ликвидирует эту детерминанту. Линейные и конформационные детерминанты могут «сосуществовать» в одной молекуле. Конформационные детерминанты особенно наглядно демонстрируют важность для серологического (и В-клеточного) распознавания не столько определенных химических соединений, сколько пространственных структур, которые они образуют. Размеры конформацион-ных детерминант варьируют даже в более широких пределах, чем линейных детерминант; они соответствуют 6-17 аминокислотным остаткам. Так, в молекуле миоглобина размер конформа-ционного эпитопа соответствует 6-8, в молекуле бычьего сывороточного альбумина - 10-12 остаткам. Описаны случаи пространственного разобщения частей конформационных детерминант. Как и в линейных детерминантах, в кон-формационных эпитопах значение отдельных остатков может существенно варьировать. Так, в формировании описанной выше петлевой детерминанты лизоцима ключевая роль принадлежит остатку в положении 68. В данном случае проявляется уже упоминавшийся фактор гибкости эпитопа, позволяющей «подогнать» конфигурацию конформационного эпитопа к структуре активного центра антител. Оно реализуется благодаря присутствию в эпитопах остатков, обеспечивающих эту гибкость (например, про-лина).
Несмотря на то, что знания о структурных основах конформационных и линейных эпитопов белков пока далеко не полные, их достаточно, чтобы с высокой долей уверенности прогнозировать, какие участки белковой молекулы окажутся антигенными детерминантами. В первую очередь выбираются участки с высоким соотношением гидрофильных и гидрофобных остатков (условие
локализации эпитопа на поверхности молекулы), а также с аминокислотными остатками, придающими этому участку гибкость. Детерминанты, сконструированные на основе такого расчета (с использованием компьютерных программ), синтезируются и с успехом используются в серодиагностике и для приготовления искусственных вакцин.
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ
В основе реакции антиген-антитело лежит взаимодействие между эпитопами антигена и активными центрами антител, основанное на их пространственном соответствии (комплементар-ности). Реакция протекает в два этапа. На первом этапе происходит взаимодействие как таковое, на втором - видимые его проявления, возникающие вследствие изменения физико-химического состояния компонентов реакции при их комплек-сировании.
Первый этап реакции происходит очень быстро. Взаимодействие эпитопов с активными центрами антител основано на установлении химических связей (нековалентных), не отличающихся от тех, которые возникают между молекулами других типов. В основе этих связей лежат следующие типы сил межмолекулярных взаимодействий:
• электростатические, включающие ионные (между заряженными группами, например, карбоксильными и аминогруппами аминокислотных остатков) и полярные (связанные с формированием диполей);
• водородные (образование водородных мостиков между гидрофильными группами);
• гидрофобные (гидрофобные участки молекул взаимодействуют между собой);
• силы Ван-дер-Ваальса (основанные на взаимодействии электронных облаков).
Все перечисленные выше типы сил взаимодействия проявляются при близком контакте молекул с учетом комплементарности участков молекул антигена и антитела. Известно, что интенсивность электростатического взаимодействия убывает пропорционально квадрату расстояния, а силы Ван-дер-Ваальса - пропорционально расстоянию в седьмой степени. При близком контакте молекул проявляются и силы
отталкивания (в случае несоответствия электронных облаков).
Взаимодействие антигена с антителом обратимо и подчиняется закону действия масс, на основе которого рассчитывают константу равновесия формирования и диссоциации иммунных комлексов. Константа равновесия служит мерой аффинности (сродства) антител. Поскольку аффинность отражает степень пространственного соответствия активного центра антитела и эпитопа, она может служить количественной оценкой специфичности антител по отношению к данному эпитопу. Для ее определения используют метод равновесного диализа и/или графический подход с исчислением координат Скэтчарда. Помимо кинетического подхода к изучению аффинности существует термодинамический подход, основанный на анализе изменений свободной энергии при взаимодействии анти-ген-антитело. Изменение свободной энергии обратно пропорционально логарифму константы аффинности. При использовании высокомолекулярных и поливалентных антигенов измерение аффинности антител осложняется. Для суммарной оценки сродства (функциональной аффинности или авидности) антител используют радиоиммунный или иммунофер-ментный тесты. Оценка функциональной аффинности актуальна при учете эффекта поливалентности антител. Так, каждый активный центр ^М-антител обычно имеет меньшую аффинность по отношению к эпитопам, чем активный центр IgG-антител той же специфичности. Суммарная аффинность (функциональная активность) ^М-антител может оказаться выше вследствие большего числа активных центров. Установлено, что при связывании нескольких различных эпитопов молекулы антигена с соответствующими антителами эффективность (сродство) каждого взаимодействия повышается.
Первый этап взаимодействия антигена с антителом сам по себе не имеет видимых проявлений. Для его обнаружения используют разного рода метки (красители, ферменты и другие). Обычно метят антитела. При связывании антител с материалом, содержащим антиген, на нем удается обнаружить метку. В последние годы широкое распространение получило определение мем-
бранных молекул клеток с помощью монокло-нальных антител, меченных флюорохромами; определение в этом случае осуществляют методом проточной цитофлюорометрии.
Другая группа методов основывается на оценке второго этапа реакции антиген-антитело, проявляющегося в образовании иммунного комплекса с разнообразными физико-химическими и биологическими последствиями. Основное из этих проявлений - формирование преципитата. В основе формирования преципитата лежит бивалентность антитела и поливалентность антигена - теория решетки. При взаимодействии антигена с малым количеством антител формируются комплексы из одиночных пар молекул. Эти комплексы растворимы. По мере увеличения количества антител возникает возможность не только каждой молекуле антитела связывать две молекулы антигена, но и разным молекулам антитела взаимодействовать с одной молекулой антигена. В результате формируется молекулярная решетка, не способная «удержаться» в растворе и формирующая преципитат. Размер решетки и объем преципитата увеличиваются с нарастанием дозы антител (при постоянной концентрации антигена). В зоне эквимолярных соотношений, когда в жидкости над преципитатом не удается обнаружить ни антигена, ни антител, а также при избытке антител объем преципитата максимален. Дальнейшее добавление антител приводит к своеобразной блокаде молекулы антигена: антиген оказывается связанным с обеими валентностями нескольких антител. Это препятствует формированию решетки и сопровождается образованием относительно небольших растворимых комплексов. Преципитация лежит в основе методов радиальной диффузии, имму-ноблотинга3.
Другой подход к регистрации реакции антиген-антитело основан на феномене агглютинации. При взаимодействии частиц, суспендированных в растворе, с антителами происходит перекрестное связывание, которое приводит к формированию агрегатов частиц. Стабильность суспензии частиц, поддерживаемая их взаимным электростатическим отталкиванием, нарушается,
и формируется агглютинат, обнаруживаемый визуально.
Третий подход к выявлению второй фазы взаимодействия антиген-антитело основан на лизисе клеток, с поверхностью которых связались антитела, в присутствии комплемента. Для осуществления реакции лизиса требуется перекрестное сшивание антителами мембранных молекул. Этот подход лежит в основе реакции гемолиза и лимфоцитотоксичности [3].
ВЫВОДЫ
• Антигенами называют макромолекулы (чаще всего белки), способные вызывать иммунный ответ организма при условии их распознавания специфическими рецепторами лимфоцитов.
• Для индукции ответа В- и Т-клеток требуются различные условия и свойства антигена. При индукции гуморального В-клеточного ответа обязательными свойствами антигена являются чужеродность (т.е. отсутствие аналогичных субстанций в реагирующем организме), специфичность (способность распознавать имму-ноглобулиновые рецепторы В-клеток и взаимодействовать с антителами той же специфичности) и иммуногенность (способность вызывать иммунный ответ вне зависимости от его специфичности).
• Степень пространственного соответствия детерминантных групп антигена (эпитопов) и активного центра антител обуславливает силу их взаимодействия, мерой которой является аффинность (сродство).
• Реакция антигенов и антител приводит к формированию иммунных комплексов и сопровождается изменением физико-химических свойств компонентов реакции, что используют в иммунологических исследованиях. ■
ЛИТЕРАТУРА
1. Никулин Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса. - М.: ГЕОТАР-Медиа, 2008. - 375 с.
2. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. - М.: Медицина, 2000. - 430 с.
3. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999. - 464 с.
3 Иммуноблотинг - метод, при котором комплекс белков разделяют электрофоретически, переносят в целлюлозу и «проявляют», осаждая антителами.
