CC BY
17
Научни трудове на Съюза на учените в България-Пловдив. Серия Г. Медицина, фармация и дентална медицина т. XXII. ISSN 1311-9427 (Print), ISSN 2534-9392 (On-line). 2017. Scientific works of the Union of Scientists in Bulgaria-Plovdiv, series G. Medicine, Pharmacy and Dental medicine, VoLXXII. ISSN 13119427 (Print), ISSN 2534-9392 (On-line). 2018.
ПРОМЕНИ В СПЕРМАЛНИ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ СУБ/ ИНФЕРТИЛНИ МЪЖЕ СЛЕД ЛЕЧЕНИЕ С ХРАНИТЕЛНА
ДОБАВКА PAPA® Стоил Томов1*, Радослава Стоянов а2, Иван Дечев1, Пепа Атанасова1, Здравко МиневЗ, Весела Янчева2, Стела Стоянова2 1Медицински Университет, Пловдива 2Пловдивски Университет ЗУниверситетска специализирана болница по акушерство и гинекология "Селена", Пловдив, България
CHANGES IN SPERM PARAMETERS IN SUB/INFERTILE MEN AFTER TREATMENT WITH AAPA DIETARY SUPPLEMENT Stoil Tomovl*, Radoslava Stoyanova2, Ivan Dechevl, Pepa Atanassoval, Zdravko Minev3, Vesela Yancheva2, Stela Stoyanova2 lMedical University, Plovdiv, 2 University of Plovdiv 3University Specialized Hospital of Obstetrics and Gynecology "Selena"
Plovdiv, Bulgaria,
Abstract. Approximately one out of every eight couples, who plan conception, are confronted with issues of infertility. Reproductive problems may be in one partner or both. Male and female infertility have the same influence of unsuccessful rate of conception. In this prior study, a group of men with reproductive problems and proved sub/infertility have taken, for а period of three monts, nutrition supplement PAPA® to improve sperm quality and reproductive efficiency. The results were obtained by computer assisted software for sperm analyses. The sperm parameters that were observed were: sperm concentration, progressive motility of spermatozoa, quantity of normokinetic spermatozoa in whole volume of ejaculate and Kruger strict criteria for morphology. Positive correlation after treatment was observed in all of the studied sperm parameters, as follow to be concluded that the chosen nutrition supplement has a good overall influence on male sub/infertility.
Key words: male infertility, sperm parameters, positive correlation, PAPA, influence
Въвенение: Мъжкият суб/инфертилитет е глобален проблем с все по-нарастваща значимост в последните години. Установено е, че мъжкия суб/инфертилитет се явява между 40-50% като причина при двойки с репродуктивни проблеми и подложени на лечение за безплодие (Oehninger, 2000; Brugh and Lipshultz, 2004). При лечение на мъжки суб/инфертилитет прилагането на хранителни добавки е най-малко инвазивен метод, целящ подобряване на сперматогенезата и морфологичното и физиологично състояние на сперматозоидите. В последните години все по-често се прилагат хранителни добавки с различен състав и количество, като се търси оптималния вариант, който да повлиява най-ефективно върху сперматогенезата и сперматозоидите без да имат странични ефекти. Една от новите съставки, която се предлага на българския пазар от скоро е хранителна добавка
PAPA. Все още не е ясен въпроса за въздействието на тази хранителната добавка върху фyнкционалността на сперматозоидите, още повече, че системни изследвания в тази връзка не да установени.
В настоящото проучване изследваме влиянието на хранителна добавка PAPA® върху спермални показатели при суб/инфертилни мъже.
Материал и методи: В изследването, през последната година, са включени 20 пациенти на възраст от 24 до 50 години с изразен суб/инфертелитет и с неуспехи в опитите за забременяване и лоши спермални анализи, пациенти на УMБAЛ „Свети Георги", клиника по Урология и Обща медицина, както и на андрологичната лаборатория към Ин-витро център, УСБAЛAГ" Селена", Пловдив. Като контроли са включени 10 пациента с нормозооспермия и нормален репродуктивен потенциал, които не са подложени на терапия. Към групата за лечение са изключвани мъже с варикоцеле, урогенитални инфекции, азооспермия и аспермия.
Включените в изследването пациенти са попълнили анкетна карта и са дали писмено съгласие,според изискванията на настоящото законодателство и реда на Наредба № 11 от 17 ноември 2011 за предоставяне на яйцеклетки, сперматозоиди и оплоденияйцеклетки, които не са използвани за създаване на потомство, на научни, учебни и лечебнизаведения в страната и в чужбина за медицински, научни и лечебни цели.
Хранителна дoбaвкa: Приложена е хранителна добавка PAPA®, любезно предоставена от Vital concept Ltd, София, България. Хранителната добавка притежава лиценз за качество и сертификат от BHI -Biohealth International GmbH, Германия. Мъжете включени в изследването са преминали тримесечен курс на лечение с хранителна добавка PAPA®, по време на който, пациентите не са приемали други хранителни добавки и медикаменти.
Дневна дoзa: Дневната доза включва приемане 2 пъти на ден по 1 капсула от хранителната добавка PAPA®. Две капсули съдържат: Л-карнитин (469мг), Л-аргинин (280 мг), Таурин (20 мг), Витамин Е (112,8мг), Глутатионредуктаза (80мг), Селен (26,4мг), Коензим Q10 (16мг), фруктоза (50 мг) и фолиева киселина (800мг).
Спермален анализ: Проведен е спермален анализ чрез използването на компютърно-асистиран софтуер за анализ на данните, CASA(Computer assisted sperm analyser, Microoptic) в андрологична лаборатория към Ин-витро център, УСБAЛAГ "Селена", Пловдив. Проследени са следните спермални показатели: спермална концентрация, прогресивна подвижност, брой на нормокинетични сперматозоиди в целия обем еякулат, праволинейна скорост, криволинейна скорост и морфология по Крюгер. Проведени са и допълнителни тестове за определяне на виталност, зрялост на сперматозоидите и хроматиден интегритет.
Всички проби са събрани след мастурбация, преди полово въздържание в рамките на 3-5 дни (СЗО V, 2010). Пробите са съхранявани при 20-30 0С за около 30 минути до пълно втечняване; 7 от получените проби са отпипетирани в центъра на тестовата камера на Маклер за изчисляване на проследените спермални показатели. За получаване на точна оценка първоначалния анализ се повтори трикратно. За морфология по Крюгер са анализирани и оценени 200 сперматозоида, като препаратите са оцветени с кит Sperm Stain, Microoptic.
Тест за виталист (витално оцветяване с еозин)
Подготвят се нетрайни микроскопски препарати, като се смесват на 5д1 еозин и 5 втечнена спермална проба. Този тест е важна оценка за пациенти с по-малко от 40% прогресивно подвижни сперматозоиди, като се определя жизнеспособните с интактни клетъчни мембрани сперматозоиди, независимо от тяхната подвижност. Наличието на голям брой неподвижни и нежизнеспособни клетки индикира за патология на епидидимиса, докато високия процент живи, но неподвижни сперматозоиди говори за стуктурни дефекти в опашките им (референтни стойности при нормална подвижност = 58 %).
Тест с aнилинoвo синм (тест за зрялост на сперматозоидите):
Оцветяването с анилиново синьо е проведено по протокол (Kim et al., 2013; Tsarevet al., 2009). Тестът показва различия между незрелите сперматозоидни ядра с богати на лизин хистони (оцветени в тъмно синьо и контрастно оцветяване с еозин) и зрелите сперматозоиди с аргинин/цистеин богати протамини и с ниско ниво на лизин (оцветяват в бледо синьо, бледо виолетово). Под светлинен микроскоп се анализират 300 сперматозоида в различни области на всеки препарат с помощта на обектив х100. Процентът на клетките с анормалната хроматинова кондензация се изчислява като съотношението на броя на тъмносини сперматозоиди върху общия брой клетки (референтни стойности > 70%).
Тест с толуидин блу (хроматиден интегритет):
Оцветяването с толуидин блу е проведено по протокол по Kim et al., (2013). Тестът показва структурни изменения в ДНК структурата и нарушения в пакетирането на ядрения материал. Багрилото има висока способност за инкорпориране в увредена хроматинова структура. Под светлинен микроскоп се оценяват 300 сперматозоиди в различни области на всеки препарат с помощта на обектив х100. Незрели сперматозоиди са оцветени тъмно синьо с контрастно оцветяване на еозин. Процентът на клетките с анормалната хроматинова структура се изчислява като съотношението на броя на тъмносини сперматозоиди върху общия брой клетки (референтни стойности > 70%).
Анализиране на резултатите: Резултатите от проследените спермални показатели са представени като средно аритметична стойност от тези за всички пациенти преди и след лечението с хранителната добавка, както и за контролната група, които не са провеждали лечение. За установяване промяната в проценти от получените резултати преди и след проведеното лечение е използвана следната формула: Процентната разлика % ={ ( SP II / SP I) х100 } - 100
където8Р I = резултата преди проведено лечение^Р II = резултата след проведеното лечение;
Резултати: В настоящото пилотно изследване са представени първоначални данни от анализирани резултати при 20 мъже с доказан суб/инфертелитет преди и след проведено лечение с хранителна добавка PAPA®. Пациентите на възраст между 25-30 години съставлявали 20%, между 31-35 години - 30 %,между 36-40 години - 20%, от 41--50 години също 20% и под 25 годишна възраст - 10%. Контролната група мъже са в рамките между 25-35 годишна възраст.
При осредняване на стойностите от проследените спермални показатели за всички пациенти преди и след лечението и установяване промяната в проценти резултатите показаха общо подобрение. Най-висок положителен ефект е установен за морфологията по Крюгер (46.38%), след това са стойностите за прогресивната подвижност (25.12%), следвана от броя на нормокинетични сперматозоиди в еякулата (18.09%), спермалната концентрация (7.66%%) праволинейна скорост (5.59%) и криволинейна скорост (4.08%). Резултатите са представени на фиг 1.
Фиг. 1. Промяна при проследените спермалните показатели в проценти след лечение с хранителна добавка PAPA®.
а С парня л на
КОНЦЕНТРАЦИЯ
■ Лрогресивна п одеиж ноет (At Б}
°:Н<л)м<жинегичмкб оБнн кикулат.
°Л|>9ВОПЦНвЙН9 енороет
□ криволинейна с*орост
□ Морфология
Проследявайки стойностите за виталност на сперматозоидите, зрялост на сперматозоидите и хроматиден интегритет преди и след прилагането на хранителната добавка се установи също общо положителен ефект. Резултатите са представени на фиг. 2. При изчисляване промяната в проценти се забелязва, че хроматидния интегритет се повлиява най- добре в сравнение с виталността и зрелостта на сперматозоидите (фиг. 3). Фиг. 2 . Стойности от допълнителни тестове преди и след лечението с хранителна добавка PAPA
Фиг. 3. Стойности от допълнителните тестове, показващи общото подобрение в проценти под влияние на хранителна добавка PAPA®.
€0.00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0.00%
ВлталкосГ
49,17%
37.1JÍÍ
27,79)4
Зряпост на сг а |] ма то зс и днте
Хроматиден интегритет на сперм атоэодмте
Дискусия: В това пилотно проучване са представени първоначални данни за конкретно въздействие и ефикасност от лечение на мъжки суб/инфертилитет с хранителна добавка PAPA®, която във всяка капсула съдържа девет нутриента (Л-карнитин, Л-аргинин, Таурин, Витамин Е, Глутатионредуктаза, Селен, Коензим Q10, фруктоза и фолиева киселина. Някои автори установяват, че Л-карнитин повлиява положително върху концентрацията, подвижността и общото количество на подвижни сперматозоиди (Schauer I., et al., 2010). Chiba T. и съавтори (1996) подчертават значението на Л-аргинин и Витамин Е най-вече в подобряване подвижността на сперматозоидите. Витамин Е в комбинация със селен повишава нивата на спермална подвижност и морфология (Lenzi A. et al., 1993). Фолиевата киселина подпомага ДНК синтезата и при слаба сперматогенеза ((Lenzi A. et al., 1993).), но при самостоятелна употреба има противоричиви резултати (Netter A. et al., 1981). Важен за ДНК синтезата е и глутатионът и като суплемент има положителен ефект върху
спермалната подвижност и морфология (Bornman MS. et al., 1989). Коензим Q10 е бил потвърден в нарастването на подвижността при мъже с астенозооспермия. (Ross C. et al., 2010). Като имаме предвид получените резултати и тези на посочените автори считаме, че приемането на хранителна добавка PAPA® в дневна доза 2 капсули е подходяща за повишаване спермалните показатели, което ще се отрази и на мъжката оплодителна способност.
Заключение. Лечението на мъжки суб/инфертилитет с хранителна добавка PAPA® в продължение на три месеца е подходящо и оказва благотворно влияние при проследените спермални показатели. Най-високи стойности на подобрение установихме при морфологията по Крюгер 46.38%, и от допълнителните тестове за хроматиден интегритет-49.17%. Необходими са още изследвания за по-детайлно установяване влиянието на хранителната добавка.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Bornman MS, du Toit D, Otto B, et al. Seminal carnitine, epididymal function and spermatozoal motility. South African Medical journal. 1989; 75: 20-21.
2. Brugh VM, Lipshultz LI. 2004. "Male factor infertility". Medical Clinics of North America, 88 (2); 367-85.Doi:10.1016/S0025-7125(03)00150-0. PMID15049583.
3. Chiba T, Takahashi S, Sato N, et al. Fas-mediated apoptosis is modulated by intracellular glutathione in human T cells. Eur JImmunol. 1996; 26: 1164-1169.
4. Kim HS, Kang MJ, Kim SA, Oh SK, Kim H, Ku SY, Kim SH, Moon SY, Choi YM., 2013, The utility of sperm DNA damage assay using toluidine blue and aniline blue staining in routine semen analysis. Clin Exp Reprod Med. 40(1):23-8.
5. Lenzi A, Culasso F, Gandini L, et al. Placebo-controlled, double-blind, cross-over trial of glutathione therapy in male infertility. Hum Reprod. 1993; 8: 1657-1662.
6. Netter A, Hartoma R, Nahoul K. Effect of zinc administration on plasma testosterone, dihydrotestosterone, and sperm count. Arch Androl. 1981; 7: 69-73.
7. Oehninger, S. C., Franken, D.R., Sayed, E., Barroso, G. & Kolm P. 2000.Sperm function assays and their predictive value for fertilization outcome in IVF therapy: a meta-analysis. Human Reproduction Update, 6:160-168.
8. Ross C, Morriss A, Khairy M, et al. Asystematic review of the effect of oral antioxidants on male infertility. Reproductive biomedicine Online. 2010; 20: 711-723.
9. Schauer I, Jost R, lmhof M. Micronutrients as an alternative to fertility treatment in men with subclinical varicocele. Bratislava EAU, 2010; 23.
10. Tsarev I., M. Bungum, A. Giwercman, J. Erenpreisa, T. Ebessen, E. Ernst and J. Erenpreiss, 2009, Evaluation of male fertility potential by Toluidine Blue test for sperm chromatin structure assessment. Hum Reprod, 24(7):1569-74.
11. Wong WY, Merkus HM, Thomas CM, et al. Effects of folic acid and zinc sulphate on male factor subfertility: a double blind, randomized, placebo controlled trial. Fertil Steril. 2002; 77: 491-498.
Corresponding author: stoiltomov57012@gmail.com
