CC BY
12
ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СЛАБОАГГЛЮТИНОГЕННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ
ЖИВОТНЫХ
Слепцов Евгений Семенович
доктор ветеринарных наук, профессор
Винокуров Николай Васильевич
кандидат ветеринарных наук
Федоров Валерий Иннокентьевич
кандидат ветеринарных наук, ФГБНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства, г. Якутск
Альбертян Мкртич Погосович
доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, г. Москва
АННОТАЦИЯ
В статье приведены результаты исследований антигенных иммуногенных свойств слабоагглютиногенной вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, проведенных на лабораторных животных и овцах.
ABSTRACT
The results of studies of the antigenic immunogenic properties weakly agglutinable vaccine against brucellosis farm animals, carried out on laboratory animals and sheep.
Ключевые слова: бруцеллез, диагностика, специфическая профилактика
Keywords: brucellosis, diagnostics, specific preventive
Бруцеллез сельскохозяйственных животных - инфекционная, преимущественно хронически протекающая болезнь, характеризующая снижением продуктивности животных и воспроизводства стада. Возможность заражения людей выдвигает ее в ряд инфекций, имеющих не только экономическое, но и большое социальное значение.
Для специфической профилактики бруцеллеза используют преимущественно живые вакцины из аттенуированных штаммов бруцелл. Кроме того разработаны и неживые вакцины, которые в отдельных регионах достаточно успешно применяют для профилактики бруцеллеза. И те и другие вакцины имеют свои плюсы и минусы. Живые вакцины, не смотря на то, что обладают выраженной иммуногенностью, имеют свойство индуцировать синтез антител, мешающих проводить диагностические мероприятия. Кроме того бру-целлы некоторых вакцинных штаммов могут мигрировать на не привитых животных и вызывать аборты, то есть проявляют себя как эпизоотические штаммы. Обладая остаточной вирулентностью, живые бруцеллезные вакцины представляют определенную опасность для ветеринарных работников и животноводов.
Нами, совместно с сектором хронических инфекций ВИЭВ разработаны и изготовлены лабораторные микросерии слабоагглютиногенной вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных (САВ).
Материал и методы исследований. Определяли культу-ральные, биохимические, тинкториальные и морфологические свойства вирулентного штамма B.abortus 54 и вакцинного штамма B.abortus 19, из них по разработанной методике
получали антиген. Из полученного бруцеллезного антигена готовили опытные микросерии слабоагглютиногенной вакцины САВ на корпускулярном носителе.
Антигенные свойства у полученных препаратов контролировали по образованию антител в динамике. Для их выявления использовали РА, РСК и РБП.
Иммуногенные (протективные) свойства САВ определяли в остром опыте при подкожном заражении привитых животных вирулентной культурой бруцелл в дозе 5 ИД100 для лабораторных животных 10 ИД100 для овец.
Через 30 дней после инфицирования животных убивали, из лимфатических узлов, паренхиматозных органов и костного мозга делали бактериологические посевы на плотные и жидкие питательные среды, в которые добавляли стерильную сыворотку крупного рогатого скота. Наличие в исследуемых органах жизнеспособных бруцелл служило свидетельством прорыва иммунитета. Животное, у которого хотя бы из одного органа выделяли культуру бруцелл данного штамма, считали заразившимся.
Основные биологические свойства слабоагглютиноген-ной вакцины изучали в 2-х опытах. В первом опыте на 34-х морских свинках изучали эффективность данного препарата в сравнении с коммерческими живыми вакцинами. Животных разделили на 7 групп. Морских свинок первых трех групп привили вакцинами из штаммов Rev-1 - B.melitensis (1-я группа), 19 - B.abortus (2-я группа), 82 - B.abortus (3-я группа). Животные 4-й, 5-й и 6-й групп были привиты различными дозами слабоагглютиногенной вакцины (САВ), причем морских свинок 4-й группы реиммунизировали этой
вакциной в той же дозе через месяц после первой вакцинации. Животные 7-й группы - контрольные (не вакцинированы).
Серологические исследования сывороток крови морских свинок проводили в динамике, через 10 и 30 дней после вакцинации. С целью проверки иммунитета у вакцинированных морских свинок, через 3,5 месяца после прививки животных заразили вирулентной культурой из штамма 54 В.аЬо11ш в дозе 25 микробных клеток (5 ИД100).
Второй опыт, по сравнительному изучению слабоаг-глютиногенной вакцины поставлен на 15 овцах. Животных разделили на 5 аналогичных групп по 3 головы в каждой. Животных 1 группы иммунизировали живой вакциной из штамма Rev-1 B.melitensis в дозе 2 млрд.м.к. Животных 2 группы привили живой вакциной из шт. 19 в дозе 40 млрд.м.к. Животных 3 группы иммунизировали и через 45 дней реиммунизировали слабоагглютиногенной вакциной в дозах по 1 мл. Животных 4-й группы привили этой же вакциной в дозе 10 мл. Животные 5-й группы не вакцинированы (контроль). Антигенные свойства вакцин изучали через 10 и 30 дней после иммунизации.
Через 30 дней после вакцинации в РА агглютинирующие антитела у животных первой группы не выявлены, а в группах 2 и 3 - положительная РА установлена у 1-й и 2-х особей соответственно. В РСК животные в 1 и 3 группах не раеги-ровали, а во 2-й группе у всех морских свинок выявлены комплементсвязывающие антитела в титрах 1:10 с оценкой в 2-4 креста. Все животные 3-й группы в РБП не реагировали, а в группах 1 и 2 по этой реакции положительно реагировало по 3 головы.
Убой, патологоанатомическое вскрытие и бактериологическое исследование морских свинок проводили через 30 дней после заражения.
На вскрытии установлено:
- у одной морской свинки из 2 группы - селезенка увеличена, бугристая;
- у всех морских свинок из группы №3 контрольных животных (группа № 7) отмечены глубокие патологоанато-мические изменения - паховые и шейные лимфатические узлы увеличены, геморрагичны, селезенка увеличена (у контрольных животных в 5-10 раз), имеются узелки, печень глинистого цвета, слизистые оболочки желтушны;
- аналогичные изменения отмечены у 2-х животных 5-й и 3-х животных 6-й групп;
С целью проверки иммунитета через 115 дней после вакцинации заразили вирулентной культурой из штамма B.melitensis Н-102.
Убой, патологоанатомическое вскрытие и бактериологическое исследование проводили через 30 дней после заражения.
Результаты исследований и обсуждение
В опыте на морских свинках серологические реакции через 10 и 30 дней после вакцинации отмечались только у животных первых трех групп, привитых живыми вакцинами Таблица 3.
Через 10 дней после вакцинации по РБП в первой группе положительно реагировало 3 головы из пяти и все животные 2-й группы. В РА агглютиирующие антитела выявили у двух животных 1-й группы у трех - из второй группы и у одной морской свинки из 3-й группы. В РСК в этот срок положи-телно реагировало только 1 морская свинка из 2 группы (1:10 +++). У остальных морских свинок комплементсвязы-вающие антитела не выявлены.
Таблица 1
- без патологоанатомических изменений животные 1-й и 4-й групп;
Бактериологическое исследование показало, что в 1-й группе животных, привитых вакциной из штамма Rev-1 B.melitensis, 4 из 5 (80% иммунных) противостояли заражению вирулентной культурой бруцелл.
В группах 2 (привиты вакциной из штамма 19 В.аЬо11ш) и 4 (животные дважды иммунизированы слабоагглютино-генной вакциной) иммунитет установлен у 80% морских свинок.
В группах 5 и 6 (привиты слабоагглютиногенной вакциной) заражению противостояло по 2 животному, т.е. иммунитет установлен у 40% и 50% животных соответственно.
В группе 3 (животные привиты вакциной из штамма 82 В.аЬойш) из 5 морских свинок иммунитет установлен только у одной (20%).
Серологические исследования в РА, РСК, РБП сывороток крови овец через 10 дней после вакцинации выявили положительные реакции у всех 4-х групп подопытных животных (Табл. 4). Причем в РА прореагировали до предельного титра 1:200 (++++) и РСК.
На 30 день после вакцинации все животные также реагировали на бруцеллез, однако титр антител в РА и РСК снизился. Так в 1-й группе титр антител в РА не превы-
Схема опыта по сравнительному изучению слабоагглютиногенной вакцины на овцах
№ гр. Кол-во овец Вид вакцины Доза препарата
1 3 Вакцина из штамма Rev-1 B.melitensis 2 млрд.м.к. в объеме 2 мл.
2 3 Вакцина из штамма В.аЬо11ш 19 40 млрд.м.к. в объеме 2 мл.
3 3 Слабоагглютиногенная вакцина против бруцеллеза животных (САВ) с содержанием бруцеллезного АГ - 0,001 мг/мл 1 мл ревакцинация через 45дн.
4 3 Слабоагглютиногенная вакцина против бруцеллеза животных (САВ) с содержанием бруцеллезного АГ - 0,001 мг/мл 10 мл.
5 3 Не вакцинирована (контроль)
сил 100 МЕ. Только во 2-й группе, привитой вакциной из штамма 19 В.аЬо11ш, титры антител в РА и РСК остались на том же уровнекак и через 10 дней после иммунизации. У 2-х животных 3-й группы агглютинирующие и компле-менсвязывающие антитела выявили в высоких титрах. В двух пробах сывороток крови овец 4-й группы выявлен титр агглютинирующих антител в разведении 1:100++, а в РСК комплементсвязывающие антитела выявлены в низком титре. Через 2 месяца у овец 3-й и 4-й групп, привитых САВ, диагностические титры антител исчезли, в тоже время у животных, привитых живыми вакцинами, антитела сохранялись на прежнем диагностическом уровне.
На вскрытие у всех 15 овец патологоанатомические изменения отсутствовали.
Бактериологическое исследование показало, что все 3 овцы первой группы, иммунизированные живой вакциной из штамма Rev-1 B.melitensis противостояли искуственному заражению (100 % иммунитет).
Две овцы второй группы, привитые живой вакциной из штамма 19 В.аЬойш заразились. При этом от животных выделено всего по одной культуре вирулентного штамма (33,3% иммунитет).
Все 3 овцы 3-й группы, иммунизированные и реимму-низированные слабоагглютиногенной вакциной в дозе 1 мл, противостояли заражению вирулентной культурой (100% иммунитет).
В 4-й группе (овцы привиты слабоагглютиногенной вакциной в дозе 10 мл), искусственному заражению вирулентной культурой бруцелл противостояло 2 животных (66,6% иммунных), от одной овцы выделена одна культура.
Все животные контрольной группы заразились, что говорит о том, что доза заражающего штамма бруцелл Н-102 B.melitensis была взята правильно.
Таким образом, слабоагглютиногенная вакцина против бруцеллеза животных обладает выраженными иммуноген-ными свойствами, в то же время почти не вызывает синтеза специфических бруцеллезных антител, улавливаемых коммерческими диагностикумами. Наибольший эффект от ее использования достигается при двукратной схеме применения, ревакцинация через месяц после первой прививки. Данная вакцина может найти применение в угрожаемых зонах, где необходимо проводить регулярный мониторинг за эпизоотическим состоянием по бруцеллезу северных оленей.
Список литературы:
1. Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. Иммунобиологические свойства слабоагглютиногенной вакцины против бруцеллеза сельскохозяйственных животных // Ветеринария и кормление. - 2013. - № 4. - С. 16-18.
2. Захарова О.И., Слепцов Е.С., Винокуров Н.В. Диагностика бруцеллеза северных оленей методом ИФА на
основе моноклональных антител // Инновационные разработки молодых учёных - развитию АПК: Материалы IV международной конференции, Ставрополь, 2015. - Т.1. - № 8. - С. 420-421.
3. Захарова О.И., Слепцов Е.С., Винокуров Н.В. Применение вакцин из штаммов В.abortus 19 и 82, В.suis 61 для северных оленей при различных методах введения // Инновационные разработки молодых учёных - развитию АПК: Материалы III международной конференции, Ставрополь, 2014. - Т.2. - № 7. - С. 365-368.
4. Слепцов Е.С., Винокуров Н.В., Евграфов Г.Г. Реак-тогенные, антигенные и иммуногенные свойства культуры из шт. B.suis 61 в опытах на морских свинках // Аграрный вестник Урала. - 2015. - № 7 (137). - С. 32-35.
5. Слепцов Е. С., Винокуров Н. В., Евграфов Г. Г. Свойства вакцины из штаммов B.abortus 82 и B.abortus 75/79-АВ в организме северных оленей // Достижение науки и техники АПК. - 2013. - № 4. - С. 72-73.
6. Слепцов Е.С., Винокуров Н.В., Евграфов Г.Г. и др. Изучение абортогенных свойств противобруцеллезной вакцины из штамма B. abortus 75/79-АВ в организме северных оленей // Аграрный вестник Урала. - 2011. - № 4. - С. 26-27.
7. Слепцов Е.С., Винокуров Н.В., Евграфов Г.Г. и др. Иммунологическая реактивность организма северных оленей при повторной реиммунизации вакцинами из штаммов B.abortus 82 и B.abortus 75/79-АВ // Аграрный вестник Урала. - 2011. - № 4. - С. 27-28.
8. Слепцов Е.С., Винокуров Н.В., Устинцева Ю.Ю. и др. Иммуногенность вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82, B.suis 61 для северных оленей при различных методах введения // Аграрный вестник Урала. - 2014. - № 8 (126). - С. 21-22.
9. Слепцов Е.С., Евграфов Г.Г., Винокуров Н.В. и др. Применение живой слабоагглютиногенной вакцины из штамма B.abortus 82 при иммунопрофилактике бруцеллеза северных оленей // Аграрный вестник Урала. - 2015. - № 2 (132). - С. 26-27.
10. Слепцов Е.С., Искандаров М.И., Винокуров Н.В. и др. Предварительные результаты изучения свойств культур из штаммов B.suis 45 и B.suis 245 на лабораторных животных // Вестник Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова. - 2014.
- № 3 (36). - С. 28-31.
11. Слепцов Е.С., Искандаров М.И., Винокуров Н.В. и др. Результаты бактериологических исследований «оленьих культур» из штаммов B.suis 45 и B.suis 245 в организме морских свинок // Инновационные разработки молодых учёных
- развитию АПК: Материалы II международной конференции, Ставрополь, 2013. - Т.3. - № 6. - С. 256-258.
12. Слепцов Е.С., Федоров В.И., Винокуров Н.В. и др. Итоги испытания противобруцеллезной вакцины из штамма В.аbortus 75/79-АВ в организме северных оленей // Аграрный вестник Урала. - 2012. - № 8 (100). - С. 21.
