CC BY
2budgetary educational institution (FSBEI) of higher education (HE) «Kuban State Agrarian University named after I. T. Trubilin»; house 13, Kalinina str., Krasnodar city, Russian Federation, 350044; e-mail: mail@kubsau.ru
DOI: 10.25690/VETPAT.2020.46.82.007 УДК: 619:616.476-022.6: 616-007.23:578.72
Зыбима Т. Н., Пяткина А. А., Мороз Н. В., Кулаков В. Ю., Щербакова Л. О.
БИОЛОГИЧЕСКЕ СВОЙСТВА ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РФ В ПЕРИОД 2017-2019 ГГ.
Ключевые слова: Болезнь Гамборо, атрофия, вирулентность вируса, бурсальная сумка, воспалительный процесс, вирус Гамборо.
Резюме: Задачей настоящих исследований являлось изучение структуры генома и степени патогенного действия (вирулентности) пяти изолятов вируса ИББ (Z/Lub, G/Mar, B/VN, K/Pol и S/Agr), выделенных на птицефабриках РФ. Исследовали структуру фрагмента VP2. В качестве контроля использовали штамм «БГ» с известной структурой данного фрагмента. Выравнивание аминокислотных последовательностей показало, что изоляты G/Mar, Z/Lub и S/Agr имели высокую степень гомологии с контрольным штаммом, однако отличалась от контроля в позиции D279N (остаток аспаргиновой кислоты). Изоляты B/VN и K/Pol в данной позиции были не идентичны указанным трем материалам. Вирулентность изолятов оценивали по показателям заболеваемости, летальности и атрофии бурсы. В качестве контроля использовали известный вирулентный штамм «52/70». Установили, что по отношению к контрольному штамму наибольшую оценку вирулентности имел изолят G/Mar (80,5 %). Следующими были изоляты Z/Lub (55,4 %) и S/Agr (51,4 %). Наименее вирулентными оказались изоляты B/VN (44,3 %) и K/Pol (43,9 %). Отметим, что три наиболее вирулентных изолята были идентичны в позиции D279N. Полученные результаты указывают на возможность определенной связи между структурой генома и фенотипом вируса.
Введение
В промышленном птицеводстве инфекционная бурсальная болезнь (ИББ) является одной из наиболее экономически значимых. Экономическое влияние ИББ складывается из прямых потерь, связанных с летальностью и снижением продуктивности птиц. Кроме этого, обусловленный возбудителем ИББ иммунодефицит, значительно повышает восприимчивость поголовья к другим инфекциям, что приводит к косвенным потерям [1].
Циркулируя в природе, штаммы вируса ИББ эволюционируют, приобретая но-
вые свойства, в том числе увеличивая свою вирулентность. Здесь важно отметить, что, распространяясь в промышленных стадах, даже не высоковирулентные штаммы приносят существенный ущерб [2]. В этой связи исследования патогенного действия и генома природных изолятов вируса ИББ в аспекте оценивания их эпизоотической опасности являются актуальными.
Задачей настоящих исследований являлось параллельное изучение структуры генома и степени патогенного действия (вирулентности) изолятов вируса ИББ, выделенных на птицефабриках РФ.
Материалы и методы исследований
Изоляты вируса ИББ. Вирусные материалы, доставленные из птицефабрик в виде замороженных образцов ткани бурс, изъятых от клинически больных и/или погибших цыплят (таблица 1).
Штаммы вируса ИББ. Штамм «52/70», используемый в качестве вируса - «пробойника» (штамм контрольного заражения) для оценки напряженности поствакцинального иммунитета [3]. Штамм «БГ», паспортизированный как вакцинный, относящийся к «горячим» вариантам [4].
Птица. В качестве подопытных птиц в эксперименты использовали СПФ-цыплят (выведенных из СПФ-яиц) в возрасте 1825 суток. Для исследования каждого вирусного материала использовали отдельную группу птиц, которую содержали в изолированном боксе с автономной системой вентиляции и кормления.
Подготовка вирусных материалов. Вирусные изоляты освежали на СПФ-цыплятах. Из исходных образцов биоматериала на физиологическом растворе го-
товили гомогенаты (20 %), которые осветляли центрифугированием (1000g). Далее материалы пропускали через бактериальный фильтр (0,22 мкм) и вводили цыплятам, перорально в объеме 0,5 см . Через 72 часа инфицированных цыплят подвергали эвтаназии и извлекали бурсы, которые, в виде тканевого гомогената, использовали для дальнейших исследований.
Подготовку штамма «52/70» проводили по аналогии с вирусными изолятами.
Штамм «БГ», адаптированный к развивающимся СПФ-эмбрионам кур, использовали в виде осветленного гомогената тканей эмбрионов.
Проведение эксперимента. Цыплят, разделенных на группы соответственно изучаемым вирусным материалам (п>20), инфицировали перорально, как описано при подготовке материалов. Вирусные изоля-ты и штамм «52/70» были применены в виде 20%-х гомогенатов, штамм «БГ» - в дозе 4 ^ ЭИД50/0,5 см3. Параллельно содержали контрольную группу интактных птиц.
За инфицированными птицами был
Таблица 1. Наименования изолятов и условия их выделения
Обозначение изолята Регион выделения и эпизоотическая ситуация
2/ЬиЬ Кировская обл. Птицефабрика яичного направления. Эпизоотическая ситуация: - у птиц в возрасте 25-35 суток наблюдали превышение технологических норм падежа (от 3,5 до 5,7 % в месяц); - видимых клинических признаков ИББ не установлено: - при патологоанатомическом вскрытии у части птиц обнаружены кровоизлияния на мышцах бедер и воспаление бурсы.
О/Маг Республика Марий Эл. Птицефабрика яичного направления. Эпизоотическая ситуация не известна.
Б/УК Новгородская обл. Птицефабрика яичного направления. Эпизоотическая ситуация не известна.
K/Pol Курская обл. Птицефабрика бройлерного направления. Эпизоотическая ситуация: - наблюдали превышение технологических норм падежа птицы; - видимых клинических признаков ИББ не установлено; - при патологоанатомическом вскрытии у части птиц обнаружены кровоизлияния на границе железистого и мышечного желудочков.
SM.gr Кировская обл. Птицефабрика яичного направления. Эпизоотическая ситуация: - у птиц в возрасте 3—34 суток наблюдали превышение технологических норм падежа (до 0,8 % за месяц); - видимых клинических признаков ИББ не установлено; - при патологоанатомическом вскрытии у части птиц обнаружены признаки воспаления бурсы.
установлен клинический контроль. Регистрировали заболеваемость и летальность. Продолжительность наблюдений составила 12 суток.
Для молекулярно-генетических исследований использовали бурсы, отобранные от цыплят (n=3) через 72 часа после заражения в группах, инфицированных изоля-тами и группе, привитой штаммом «БГ» (данный штамм с известной структурой генома использовали в качестве контрольного).
Для оценки вирулентности изолятов в качестве положительного контроля использовали штамм «52/70». В соответствующих группах цыплят определяли показатели текущей летальности, а также, через 12 суток после заражения, у оставшихся птиц измеряли отношение массы бурсы и массы тела птицы (бурсальные индексы).
Выделение РНК. Для выделения вирусной РНК использовали коммерческий набор с сорбентом Nucleos+TM производства ООО «БиоКом» (г. Москва, Россия).
ОТ-ПЦР и секвенирование. Наличие генома вируса ИББ в образцах биоматериала определяли с помощью ПЦР в режиме реального времени [5]. В случае получения положительного результата проводили ОТ-ПЦР с праймерами на вариабельную область гена VP2 [6]. Секвениро-вание ДНК осуществляли на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3130 (Applied Biosystems, США) согласно методике производителя.
Филогенетический анализ. Сравнительный анализ последовательностей фрагмента гена VP2 проводили с помощью компьютерных программ BioEdit версия 7.0.5.3. (http://www.mbio.ncsu.edu/BioEd-it/bioedit.html). Выравнивание последовательностей осуществляли с помощью алгоритма множественного выравнивания Clustal W
Построение дендрограммы проводили с помощью алгоритма Neighbor-Joining (пакет программ MEGA, версия 3.0.). Полученные нуклеотидные последовательности сравнивали с последовательностями штаммов вируса ИББ, опубликованными в международной базе данных NCBI (http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/).
Эвтаназия. Процедуру эвтаназии проводили путем наркотизации птиц парами трихлорметана.
Оборудование и инструментарий. Все хирургические процедуры выполняли с использованием стандартных инструментов (пинцетов, скальпелей, ножниц).
Для взвешивания объектов массой в диапазоне от 100 до 300 г использовали электронные весы, имеющие точность измерения 0,1 г (например, «OHAUS» SPU 601, Switzerland). Для взвешивания объектов массой до 100 г использовали электронные весы, имеющие точность измерения 0,01 г (например, «GH-120» A&D, Japan).
Растворы и реактивы. Все разбавления вирусных материалов производили на физиологическом растворе. Физиологический раствор - ФС.2.2.0014.15 Натрия хлорид 0,9 %.
Результаты и обсуждение
Молекулярно-генетические исследования. Результаты выравнивания аминокислотных последовательностей фрагмента VP2 исследуемых изолятов относительно штамма БГ, а также дендрограмма их филогенетического сходства с известными штаммами вируса ИББ представлены на рисунках 1 и 2 соответственно.
Рис. 1 показывает, что структура фрагмента VP2 у изолятов G/Mar, Z/Lub и S/ Agr имела высокую степень гомологии со штаммом БГ, однако отличалась от данного штамма в позиции D279N (остаток аспаргиновой кислоты). Полученный результат следует считать важным, поскольку известно, что наследуемые изменения вирусного генома в области VP2 N279D могут существенно влиять на фенотип вируса [7]. Изоляты B/VN и K/Pol в данной позиции были не идентичны указанным трем материалам.
Представленная на рис. 2 дендрограм-ма филогенетического сходства иллюстрирует, что по фрагменту гена VP2 изо-ляты G/Mar, Z/Lub и S/Agr образовали отдельную группу, имеющую родственность со штаммом БГ. При этом изоляты B/VN и K/Pol были более обособленными.
По фрагменту VP1 картина несколько изменилась, изоляты G/Mar и Z/Lub оказались в единой группе со штаммом БГ (имели минимальные взаимные различия). Изолят K/Pol был обособлен, а изолят S/ Agr имел значительную удаленность. Изо-лят B/VN в этом исследовании не участвовал.
Изучение вирулентности изолятов. В течение эксперимента в группах птиц, инфицированных изолятами вируса, штаммом 52/70 (положительный контроль) и в группе интактных птиц (отрицательный контроль) проводили клинические наблюдения. В каждой группе, состоящей из n-числа птиц, регистрировали заболевае-
180 190 200 210 220 230 240 250 260 |----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----|----
БГ LGDPXPAIGIJJPKMVÄTCDSSDRPRVYTITAADDYQFSSQYQAGGVTXTLFSANIDAITSLSIGGELVFQTSVQGLIbGATIYLXGFDGT
СДЬг...................................................................................
S/Agr .....................................................................................
Z/Lab....... .............................................................................
B/VN' ......................».........N.........................................D. . . ......
K/Pol ..........................................T..............V................D. . . ......
270 280 290 300 310 320 330 340 350
I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----
БГ AVTTRAVAANNGLTAGTDNLMPFNIVIPTSEITQPIT£IKI«EIVTSKSGG^^GDQMSWSA£
СУМаг ....... ■ -С - ■ .....................................................................
S/Agr ....... . -D...........................................................................
Z-Liib .........D...........................................................................
ВЛТЧ . -1...........................................................N...... ... ..........
K/Pol .... *.........T................................R ..............................
Рис. 1. Выравнивание аминокислотных последовательностей фрагмента VP2 исследуемых изолятов относительно контрольного штамма «БГ» вируса ИББ
YP1
Z4.ii ъ г G/Mar БГ
- НК46
- \-661
— K/Pol
_,— Cu-1
ri D7S -variant E
|j-52-70
__y-Lukert
T—STC
- S/Agr
-002-73
i-1
001
Рис. 2. Дендрограмма филогенетического сходства исследуемых изолятов и известных штаммов вируса ИББ на основе фрагментов гена VP2 и VP1
мость и летальность. По завершению опыта у выживших птиц оценивали повреждающее действие вируса (атрофию бурсы).
Для каждого тестируемого изолята (¡) по формуле {1} определяли показатель относительной заболеваемости ("I).
R=(,K+-'K) - (lgBI -'K).
{3}
«I = (I - I")/(I+ - I"),
{1}
где: I - заболеваемость в ]-той группе и в группах положительного (+) и отрицательного (-) контролей; 1=С1/п, где С1 - число клинически больных птиц, установленное в данной группе в течение эксперимента.
По аналогии с оценкой "I в подопытных группах по формуле {2} определяли показатели относительной летальности
= (^ - и)/^+ - и), ц {2}
где: Ь - летальность в ]-той и в контрольных группах; L=M/n, где М - число птиц, павших в данной группе в течение эксперимента.
Через 12 суток после инфицирования во всех группах, провели эвтаназию птиц и извлечение бурс. Определили массу каждой птицы г), и массу извлеченной бурсы г). После чего вычислили бурсальный индекс (В1), который представили в логарифмической размерности Таким образом, в каждой группе получили выборку значений ^В1.
В контрольных группах, соответственно <п-числу птиц, сохранившихся на дату завершения эксперимента, вычислили средние логарифмические оценки индексов (<К=(^1вВ1)/>п) и получали величины <К+и>К~
В подопытных группах для каждой птицы формуле {3} определяли относительный коэффициент атрофии бурсы
Таким образом, в подопытной группе получали выборку значений R и определяли среднюю логарифмическую величину («RR = (üR)/>nj). Показателем повреждающего действия изолята считали оценку «С = antilg "Rj.
По формуле {4} вычисляли результирующий показатель относительной вирулентности изолята ("V %).
«Vj=((«ij+«L +»q)/3)xioo. {4}
Величина «Vj представляет собой условную долю патологических изменений в организме птицы, которые произошли в связи с развитием заведомо патогенного вируса в положительном контроле. Полученные в ходе эксперимента оценки «Vj представлены в таблице 2.
Выводы
Использованный при проведении эксперимента методический подход позволил у пяти изолятов вируса ИББ сопоставить строение некоторых участков вирусного генома и фенотип возбудителя.
Выравнивание аминокислотных последовательностей фрагмента VP2 (рис. 1) продемонстрировало идентичность в позиции D279N у изолятов G/Mar, Z/Lub и S/Agr. При этом изоляты B/VN и K/Pol в данной позиции отличались от указанных трех вирусных материалов.
Исследование фенотипа изолятов показало (табл. 2), что наибольшую оценку вирулентности имел изолят G/Mar («VG/ Mar = 80,5 %). Следующими были изоляты Z/Lub («VZ/Lub = 55,4 %) и S/Agr («VS/Agr = 51,4 %). Наименее вирулентными оказались изоляты B/VN («V B/VN = 44,3 %) и K/Pol («V K/Pol = 43,9 %).
Таблица 2. Оценки относительной вирулентности ("V) изолятов вируса ИББ
Исходные величины *Относи-
Относи- Относи- Доля тельная
Изолят Заболева- тельная Леталь- тельная поврежда- вирулент-
емость, заболева- ность, леталь- ющего ность,
I емость, L ность, действия, "V
"I "L "C
Z/Lub 1 1 0 0 0,663 55,4
G/Mar 1 1 0,222 0,700 0,716 80,5
B/VN 0,875 1 0 0 0,456 44,3
K/Pol 0,920 1 0 0 0,398 43,9
S/Agr 1 1 0 0 0,543 51,4
Примечание: * - обозначение дано в формуле {4}
Сопоставляя данные молекулярных исследований и оценки вирулентности изоля-тов, допустимо предположить присутствие определенной связи между структурой генома и фенотипом вируса. В подтверждение этого следует отметить сообщение о том, что замены аминокислотных последовательностей фрагмента VP2, установленные в позиции 279, существенно влияли на вирулентность возбудителя ИББ [7].
Однако во многих публикациях указано, что вирулентному фенотипу вируса свойственны множественные изменения структуры генома [8, 9] в том числе участка, влияющего на активность поли-меразы [10].
Циркулирующая в природе вирусная популяция подчинена давлению биологического отбора, который предполагает селекцию фенотипов, наиболее адаптированных к конкретным условиям. Очевидно, формируясь в неодинаковых условиях, дикие популяции вируса приобретают различные фенотипы [11, 12]. Например, было показано, что из 33 изолятов, выделенных в период с 2009 по 2017 гг. в Калифорнии, 17 образцов имели признаками усиления вирулентности, а 16 образцов были близки к «классическим», в том числе, проявляю-
щим субклиническую форму болезни [13]. Фенотипическое разнообразие природных изолятов вируса наглядно проявляется по признаку летальности, которая может колебаться от 0,2 до 70 % [14]. При этом генетическая неидентичность диких вирусных штаммов наблюдается даже внутри ограниченного региона их обитания [15, 16].
Вопрос о связи структуры генома с фенотипом вируса ИББ остается открытым. Данные обширных генетических исследований [2] демонстрируют эволюцию возбудителя, в результате которой возникло, по крайней мере, семь геногрупп, связанных в основном единством происхождения Генетической обособленности вируса, выделенной на дендрограмме по признаку вирулентности, не представлено.
Однако генотип биологического объекта всегда управляет его фенотипом, и любой фенотипический признак должен быть детерминирован определенной структурной особенностью генома. Полученные в ходе настоящих исследований результаты позволяют считать целесообразным продолжение поиска корреляции между структурой генома вируса ИББ и его функциональным проявлением на уровне организма птицы.
Библиографический список:
1. Джавадов Э. Д. Вирус-индуцированные иммуно-супрессии и способы их предупреждения в промышленном птицеводстве: дис____д-ра вет. наук /
Э. Д. Джавадов. - Москва, 2004. - 52 с.
2. Dey S. Infectious bursal disease virus in chickens: prevalence, impact, and management strategies / S. Dey, D. C. Pathak, N. Ramamurthy, H. K. Maity [et al.] // J. Vet. Med. - 2019. - Vol. 10. - pp. 85-97.
3. Eldaghayes I. Infectious bursal disease virus: strains that differ in virulence differentially modulate the innate immune response to infection in the chicken bursa / I. Eldaghayes, L. Rothwell, A. Williams, D. Withers [et al.] // Viral Immunology. - 2006. - Vol. 19 (1). - pp. 83-91.
4. Борисов А. В. Разработка средств и методов диагностики и специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни: дис. ... д-ра вет. наук / А. В. Борисов. - Владимир, 2000. - 414 с.
5. Методические указания по выявлению генома вируса инфекционной бурсальной болезни с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени / сост. Е. В. Овчинникова, М. И. Шульпин, А. С. Старова, И. А. Чвала // - Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ», 2013. - 10 с.
6. Методика выявления и дифференциации вируса
Гамборо с использованием полимеразной цепной реакции и секвенирования амплифициро-ванных фрагментов генов: методические указания / сост. Л. О. Щербакова, В. В. Дрыгин, А. В. Щербаков, А. В. Борисов // - Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ», 1994. - 8 с.
7. Brandt M. Molecular Determinants of Virulence, Cell Tropism, and Pathogenic Phenotype of Infectious Bursal Disease Virus / M. Brandt, K. Yao,
M. Liu, R. A. Heckert [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75 (24). - pp. 11974-11982.
8. Berg van den T. P. Assessment of genetic, antigenic and pathotypic criteria for the characterization of IBDV strains / T. P. Berg van den, D. Morales, N. Eterradossi, G. Rivallan [et al.] // Avian Pathology. -V 33. - pp. 470-476.
9. Pikula A. Identification and assessment of virulence of a natural reassortant of infectious bursal disease virus / A. Pikula, A. Lisowska, A. Jasik [et al.] // Vet. Res. - 2018. - Vol. 49. 89
10. Gao L. Triplet amino acids located at positions 145/146/147 of the RNA polymerase of very virulent infectious bursal disease virus contribute to viral virulence / L. Gao, K. Li, X. Qi, H. Gao [et al.] // Journal of General Virology. - 2014. - Vol. 95. - pp. 888-897.
11. Linda O. Michel. Classi cation of infectious bursal disease virus into genogroups / Linda O. Michel, Daral J. Jackwood. // Arch. Virol. - 16 July 2017.
12. Tammiranta N. Circulation of very virulent avian infectious bursal disease virus in Finland / N. Tammiranta, C. Ek-Kommonen, L. Rossow, A. Huovilainen // Journal Avian Pathology. - 2018. -Vol. 47. - Issue 5.
13. Stoute S. T. Molecular epidemiology of endemic and very virulent infectious bursal disease virus genogroups in backyard chickens in California, 2009-2017 / S. T. Stoute, D. J. Jackwood, B. M. Crossley, L. O. Michel [et al.] // Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. - 2019. - Vol. 31 (3). - pp. 371-377.
14. Rai S. Phylogenetic analysis of Infectious Bursal Disease viruses according to newly proposed model of classification into geno-groups / S. Rai, A.
Khan, M. Habib, W Ali, M. Salah [et al.] // Journal of Infection and Public Health. - 2019. - Vol. 12. -Issue 3. - pp. 410-418.
15. Hernández M. Detection of Very Virulent Strains of Infectious Bursal Disease Virus (vvIBDV) in Commercial Broilers from Uruguay / M. Hernández, A. Banda, D. Hernández, F Panzera, R. Pérez //
Avian Diseases. - 2006. - Vol. 50 (4). - pp. 624-631. 16. Fernandes M. J. Molecular characterization of Brazilian infectious bursal disease virus isolated from 1997 to 2005 / M. J. Fernandes, I. C. Simoni, M. G. Vogel, R. Harakava [et al.] // Avian Dis. - 2009. -Vol. 53. - pp. 449-454.
1. Dzhavadov E. D. Virus-indutsirovannyie immunosupressii i sposobyi ih preduprezhdeniya v promyishlennom ptitsevodstve [Virus-induced immunosuppression and methods for their prevention in industrial poultry farming]: dis. ... d-ra vet. nauk / E. D. Dzhavadov. - Moskva, 2004. - 52 s.
2-3. Vide supra.
4. Borisov A. V Razrabotka sredstv i metodov diagnostiki i spetsificheskoy profilaktiki infektsionnoy bursalnoy bolezni [Development of means and methods of diagnosis and specific prevention of infectious bursal disease]: dis. . d-ra vet. nauk / A. V Borisov. - Vladimir, 2000. - 414 s.
5. Metodicheskie ukazaniya po vyiyavleniyu genoma virusa infektsionnoy bursalnoy bolezni s ispolzovaniem polimeraznoy tsepnoy reaktsii
v rezhime realnogo vremeni [Guidelines for identifying the genome of the infectious bursal disease virus using the polymerase chain reaction in real time] / sost. E. V Ovchinnikova, M. I. Shulpin, A. S. Starova, I. A. Chvala // - Vladimir: FGBU «VNIIZZh», 2013. - 10 s.
6. Metodika vyiyavleniya i differentsiatsii virusa Gamboro s ispolzovaniem polimeraznoy tsepnoy reaktsii i sekvenirovaniya amplifitsirovannyih fragmentov genov : metodicheskie ukazaniya [Methods for detecting and differentiating the Gumboro virus using polymerase chain reaction and sequencing of amplified gene fragments: guidelines] / sost. L. O. Scherbakova, V V Dryigin, A. V Scherbakov, A. V Borisov // - Vladimir: FGBU «VNIIZZh», 1994. - 8 s.
7-16. Vide supra.
DOI: 10.25690/VETPAT.2020.46.82.007
Zybina T. N., Pyatkina A. A., Moroz N. V., Kulakov V. Yu., Shcherbakova L. O. BIOLOGICAL PROPERTIES OF THE INFECTIOUS BURSAL DISEASE VIRUS ISOLATES IDENTIFIED IN RUSSIAN FEDERATION IN 2017-2019
Key Words: Gumboro disease, atrophy, virulence of the virus, bursa of Fabricius, inflammatory process, Gumboro virus.
Abstract: The objective of the present research was to study the genome structure and the degree of pathogenic action (virulence) of five IBD virus isolates (Z/Lub, G/Mar, B/VN, K/Pol and S/Agr) isolated at poultry in the farms of Russian Federation. The structure of the VP2 fragment was examined. Strain «BG» with the known structure of this fragment was used as a control. The amino acid sequence alignment showed that the isolates G/Mar, Z/Lub, and S/Agr had a high degree of homology with the control strain, but differed from the control at position D279N (aspartic acid residue). The B/VN and K/Pol isolates in this position were not identical to the three materials indicated. The virulence of the isolates was assessed in terms of morbidity, mortality, and bursa atrophy. The known virulent strain «52/70» was used as a control. It was found that in relation to the control strain, the isolate G/Mar had the highest estimate of virulence (80.5 %). The next were isolates Z/Lub (55.4 %) and S/Agr (51.4 %). The least virulent isolates were B/VN (44.3 %) and K/Pol (43.9 %). Note that the three most virulent isolates were identical at position D279N. The results obtained indicate the possibility of a certain relationship between the structure of the genome and the phenotype of the virus. time
Сведения об авторах:
Зыбина Татьяна Николаевна, ведущий биолог лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (904) 593 77 08; e-mail: zybina@arriah.ru
Пяткина Алла Александровна, канд. биол. наук, старший научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (919) 010 82 29; e-mail: pyatkina@arriah.ru
Мороз Наталья Владимировна, канд. вет. наук, заведующая лабораторией профилактики болезней птиц, ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных», мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (900) 480 77 96; e-mail: moroz@arriah.ru
Кулаков Владимир Юрьевич, канд. вет. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский ин-
ститут защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (915) 793 02 62; e-mail: kulakov@arriah.ru
Щербакова Лидия Олеговна, канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник референтной лаборатории вирусных болезней птиц ФГБУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»; мкр. Юрьевец, г. Владимир, Россия, 600900; тел.: +7 (915) 772 67 85; e-mail: scherbakova@arriah.ru
Author affiliation:
Zybina Tat'yana Nikolaevna, the Leading Biologist at the Laboratory of Prevention of Diseases of Birds of the Federal state budgetary scientific Institution (FSBSI) «All-Russian scientific research Institute for the Protection of Animals»; district Yur>evets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (904) 593 77 08; e-mail: zybina@arriah.ru
Pyatkina Alla Aleksandrovna, Ph. D. in Biology, Senior Researcher at the Laboratory of Prevention of Diseases of Birds of the Federal state budgetary scientific Institution (FSBSI) «All-Russian scientific research Institute for the Protection of Animals»; district Yur>evets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (919) 010 82 29; e-mail: pyatkina@arriah.ru
Moroz Natal'ya Vladimirovna, Ph. D. in Veterinary Medicine, Head at the Laboratory of Prevention of Diseases of Birds of the Federal state budgetary scientific Institution (FSBSI) «All-Russian scientific research Institute for the Protection of Animals»; district Yur>evets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (900) 480 77 96; e-mail: moroz@arriah.ru
Kulakov Vladimir Yur'evich, Ph. D. in Veterinary Medicine, Leading Researcher at the Laboratory of Prevention of Diseases of Birds of the Federal state budgetary scientific Institution (FSBSI) «All-Russian scientific research Institute for the Protection of Animals»; district Yur'evets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (915) 793 02 62; e-mail: kulakov@ arriah.ru
Hcherbakova Lidia Olegovna, Ph. D. in Biology, Leading Researcher of the Reference Laboratory for Viral Diseases of Birds of the Federal state budgetary scientific Institution (FSBSI) «All-Russian scientific research Institute for the Protection of Animals»; district Yur>evets, Vladimir city, Russia, 600900; phone: +7 (915) 772 67 85; e-mail: scherbakova@arriah. ru
DOI: 10.25690/УЕТРАТ.2020.57.93.006 УДК 579.6
Леонович О. А., Ишмухаметов А. А., Дзагурова Т. К.
ОПЫТ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ВИРУСНЫХ ШТАММОВ ОТ МИКОПЛАЗМ
Ключевые слова: микоплазма; деконтаминация; ортохантавирусы; вирус Пуумала; Хантаан; До-брава/Белград; вирусные штаммы; клеточные культуры.
Резюме: Серьезной проблемой для производства биопрепаратов в ветеринарной и биофармакологической промышленности, а также для научно-исследовательских лабораторий является загрязнение микоплазменной инфекцией. Ряд трудностей связан с обнаружением и деконтами-нацией микоплазмы из-за ее высокой резистентности к антибиотикам и латентным характером протекания микоплазменной инфекции. Разработка эффективных способов своевременного выявления микоплазм и деконтаминации вирусных штаммов, пассируемых в клеточных
