CC BY
12
SCIENCE TIME
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ РАЦИОНОВ
Струтинский Федор Алексеевич, Тимошко Мария Андреевна, Богдан Виктория Константиновна, Велчю Алена Ивановна, Строкова Валентина Николаевна, Полякова Лилия Димитриевна, Институт физиологии и санокреатологии Академии Наук Молдовы, г. Кишинёв, Молдова
E-mail: nutrivit@yandex.ru
Аннотация. На основе результатов настоящих исследований, проведённых в условиях «in vitro» и «in vivo», доказана целесообразность биологической оценки пищевых рационов, предназначенных для астенического типа конституции. Рекомендовано использование микроорганизмов родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia и Enterococcus как в монокультуре, так и в ассоциации (на примере такой: Lactobacillus acidophilus + Bifidobacterium longum + Escherichia coli + Enterococcus faecium) в качестве биоиндикаторов для экспрессной оценки новых пищевых рационов, предназначенных для поддержания саногенного тела,
Ключевые слова: биологическая оценка, пищевые рационы, биоиндикаторы, астенический тип конституции.
Анализ литературной информации выявил, что существующая концепция питания с каждым годом все больше подвергается критике и требует пересмотра, потому что большинство исследователей считают, что её применение приводит к возникновению и развитию многочисленных патологий и хронических заболеваний, особенно метаболического характера [1-6, 12, 15].
Отмечено, что исследования в области питания должны быть направлены на разработку новых диетологических подходов и мероприятий, направленных на обеспечение оптимального уровня здоровья [15, 22].
Относительно причин возникновения дисфункций и заболеваний, связанных с действием пищевых факторов, существуют различные мнения [9, 10, 19].
Показано, что пищевому фактору принадлежит выполнять определяющую роль в жизнедеятельности организма [16, 20, 21].
I
45
1 SCIENCE TIME 1
Наши ранние исследования выявили, что количественный уровень и видовой состав микробиоценоза кишечника в полной мере зависит от состояния здоровья организма [14, 18, 20-22].
В этой связи сделаны некоторые экспериментальные попытки, направленные на оптимизирование его функциональности с использованием различных специфических пищевых источников. Это, вероятно, происходило благодаря полезным свойствам микрофлоры кишечника (защитной, синтезирующей, регулирующей метаболизма и др.) [7-9, 11, 17].
На основе полученных результатов были предложены и некоторые мероприятия по экспрессной пищеварительной оценки таковых путём определения количественных показателей отдельных представителей кишечного микробиоценоза [8, 21].
Известно, что в схеме питания важная роль принадлежит структуре калорийности, которую определяет количество и качество белков, жиров и углеводов, влияющих на процесс пищеварения [15, 16, 20].
Приведённая информация обосновала целесообразность продолжения исследований в таком направлении относительно вновь разрабатываемых рационов питания специального назначения. Поэтому задача настоящих исследований предусматривала выявить возможность использования различных родов микроорганизмов (представителей микробиоценоза пищеварительного тракта) в качестве биоиндикаторов микробного происхождения для оценки, вновь разрабатываемых пищевых рационов, способствующих поддержать саногенное состояние здоровья организма с определённым типом конституции тела.
Решение такой задачи осуществлялась в несколько этапов и в 19-ти сериях опытов с использованием современных классических методов [13]. В начале потребовалась разработка рационов с различной структурой калорийности, специфической для астенического типа стрессреактивности. В лаборатории «Санокреатологического питания и пищеварения» ИФС АН РМ были разработаны шесть вариантов рационов, в которых доля белка находилась в пределах 8-14, липидов - 25-35 и углеводов - 57-61%. Дифференцированная структура калорийности таких рационов с учётом указанных показателей представлена в таблице 1.
Таблица 1
Структура калорийности новых рационов для астенического типа конституции
Основные показатели, % Варианты рационов
I II III IV V VI
Белки 8 9 10 11 12 14
Жиры 35 33 31 29 27 25
Углеводы 57 58 59 60 61 61
46
1 SCIENCE TIME 1
В дальнейшем для отбора оптимальных биоиндикаторов, оценивающих вновь разработанные пищевых рационы, проводили их испытание по отношению к различным представителям микробиоценоза кишечника (бактериям родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia и Enterococcus).
Исследования в таком направлении осуществлялись в различных методических условиях («in vitro» и «in vivo»). Сначала в 7-и сериях опытов «in vitro» изучалось действие рационов на рост и развитие 6 видов рода Lactobacillus (L. acidophilus, L. helveticus, L. casei, L. coryniformis, L.fermentum и L. plantarum). При этом первая серия опытов служила контролем, потому что посев микробной взвеси бактерий каждого указанного вида лактобацилл осуществлялся по отдельности, т.е. без использования испытуемых пищевых рационов. Серии II-VII были экспериментальными и демонстрировали уровень численности микробных клеток каждого изученного вида бактерий под действием испытуемых рационов, при совместном их культивирования.
Полученные результаты показали, что в контрольной серии численность бактерий этого рода была специфической для каждого вида, а их количественные показатели находилась в пределах 7,38 - 8,58 лог/мл. Данные экспериментальных серий (II-VII) количественные показатели бактерий этого рода показали значительное отличие. Если во второй серии опытов первые три и шестой варианты пищевых рационов способствовали снижению количества живых микробных клеток вида L. acidophilus в среднем на 23,89; 9,67; 28,43 и 0,93 % соответственно, то четвертый и пятый - увеличению на 0,11 и 2,09%. В третьей серии опытов отмечено снижение численности бактерий вида L. helveticus со стороны всех вариантов пищевых рационов за исключением пятого, который способствовал росту их числа на 5,01 %. Следовательно, выявлены три варианта пищевых рационов, представляющих научный интерес. Из них наиболее перспективным оказался пятый вариант, который оказывал стимулирующее действие на процесс размножения всех культивируемых видов бактерий по сравнению контролем (в среднем на: 2,09; 5,01; 0,70; 1,68; 6,03 и 6,77% соответственно II-VII серия опытов).
Таким образом, полученные результаты обосновали целесообразность использования, в качестве биоиндикаторов для оценки качества, вновь разработанных пищевых рационов, всех изученных представителей рода Lactobacillus.
В дальнейшем те же варианты рационов испытывались по отношению к пяти видам бактерий рода Bifidobacterium. Схема опытов была идентичной предыдущей.
Результаты контрольной серии (I) показали, что у изученных видов бифидобактерий выявлен различный количественный уровень. В частности, численность видов B. bifidum, В. longum и В. Infantis достигла уровня в 10,43; 10,30 и 10,38 лог/мл соответственно, а В. adolescentis и В. breve - лишь в 8,85 и 8,54 лог/мл. Это, вероятно, связано с тем, что каждый вид бактерий обладает своим специфическим энергетическим потенциалом размножения, потому что в экспериментальных сериях он различался более заметно и зависел от степени
1 SCIENCE TIME 1
воздействия пищевого фактора. Это подтверждено тем, что первые 3 варианта пищевых рационов оказывали ингибирующее действие на процесс размножения всех видов испытуемых бифидобактерий, численность которых снизилась (в среднем на 19,65; 9,77 и 20,42; на 19,90; 9,51 и 10,67; на 18, 97; 8,47 и 14,35; на 22,82; 13,10 и 25,19; на 20,49; 13,23 и 22,48 %, соответственно во II-VI сериях опытов), а четвертый, пятый и шестой - стимулирующее. Структура калорийности этих вариантов рационов оказывала щадящее действие на процесс роста и развитие всех видов бифидобактерий, что привело к превышению контрольных данных в среднем на 5,33; 6,40 и 4,27; на 3,94; 5,68 и 2,02; на 5,31; 9,03 и 3,95; а так же на 4,09; 7,37 и 2,34%.
Таким образом, доказана целесообразность рекомендации дальнейшего использования вариантов 4,5 и 6 впервые разработанных пищевых рационов для поддержания численности всех культивируемых видов бифидобактерий, но самым перспективным также оказался вариант № 5. Такое заключение аргументировано как поддержанием, так и стимулированием процесса размножения различных видов изученных бактерий по сравнению с контролем.
Ввиду того, что эшерихии также являются представителями кишечного бактериоценоза пищеварительного тракта человека и животных всех возрастных периодов, разработанные варианты пищевых рационов испытывались и по отношению к микроорганизмам рода Escherichia с одним видом (вид E.coli). Для этого проводилась одна серия опытов с семью группами.
Результаты показали, что в контрольной группе численность эшерихий достигла уровня в 8,25 лог/мл, а в экспериментальных группах она варьировала (от 6,32 до 8,46 лог/мл). Одновременно отмечено, что варианты пищевых рационов с № 1 и 4 способствовали стимулированию роста эшерихий, а с № 2, 3, 5 и 6 - подавлению. Поскольку эшерихии представляют условно-патогенную микрофлору, а высокая их численность в кишечнике часто является причиной возникновения его дисфункций, то снижение количественного уровня этих бактерий следует расценивать как положительный факт, выявленный со стороны вариантов 5 и 6 испытанных пищевых рационов, но самое значительное влияние отмечено в четвертой группе, в которой испытывался третий вариант рациона, обеспечивающий подавление роста E. coli на 23,39 %.
Как известно, в составе бактериоценоза пищеварительного тракта входят и стрептококки, среди которых в большем количестве выявлены представители рода Enterococcus. Это и обосновало поиск биоиндикаторов и среди бактерий указанного рода. Исследования в этом направлении проводились в одной серии опытов, включающей 7 групп.
Полученные результаты подтверждают, что культивирование энтерококков в отдельности обеспечивает их размножение до количественного уровня в 8,69 лог/мл, а отвар шести, разработанных пищевых рационов оказывал различное воздействие на процесс их размножения, обеспечивая разный уровень их конечного развития (от 6,17 до 8,77 лог/мл). Следует отметить, что в данной серии опытов пищевые рационы вариантов 1-4 и 6 оказывали подавляющее действие на процесс размножения энтерококков, а 5 - способствовал
1 SCIENCE TIME 1
незначительному росту их численности.
Сравнение полученных результатов с монокультурами позволило выявить разноречивость, полученных данных о численности микроорганизмов облигатных для пищеварительного тракта родов с таковой у факультативных. Если, она соответствовала нормативным данным при воздействии пищевых рационов со структурой, характерной вариантам с номерами 4, 5 и 6 у первых, то у вторых, - с номером 3 (у эшерихий) и 1, 2 и 3 (у энтерококков).
Вероятно, этому способствовала специфическая структура калорийности, разработанных новых рационов.
В результате проведенных опытов в условиях «in vitro» отобраны монокультуры отдельных видов бактерий для включения в составе одной микробной ассоциации. Наиболее перспективными оказались следующие виды: Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Escherichia.coli и Enterococcus faecium. В дальнейшем ассоциация указанных видов бактерий и использовалась для испытания разработанных и изученных ранее пищевых рационов. Эти исследования проводились также в условиях «in vitro». Учитывая, что в пищеварительном тракте все представители его микробиоценоза развиваются в ассоциации, то в дальнейшем обращено внимание на процесс размножения изучаемых видов бактерий при совместном культивировании. В семи сериях опытов при культивировании, указанной ассоциации, как по отдельности, так и совместно с отваром, разработанных пищевых рационов определялась численность бактерий, представителей всех указанных видов (Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Escherichia.coli и Enterococcus faecium), а полученные результаты представлены в таблице 2.
Данные таблицы 2 показывают, что в контрольной серии опытов (I) количественные показатели определяемых бактерий достигли различного уровня (в пределах 6,53-11,63 лог/мл). Культивирование, приготовленной впервые ассоциации микроорганизмов в отдельности позволило установить следующую последовательность её представителей: на первом месте оказался представитель рода Bifidobacterium, на втором - Lactobacillus, на третьем - Enterococcus и на четвертом - Escherichia, составившие 11,63; 9,96; 9,59 и 6,53 лог/мл соответственно.
Полученные результаты в экспериментальных сериях подтверждают факт сохранения очередности родов и отличие в численности от контрольных данных. Это обоснованно результатами воздействия различных вариантов пищевых рационов. Если со стороны вариантов 1-4 отмечено лишь подавление роста всех членов микробной ассоциации, то у 5 и 6 выявлены и случаи стимулирования роста, особенно бифидо-, лактобактерий и энтерококков, выраженное в увеличении их численности соответственно на 2,49; 2,40 и 3,85, а также на 0,85; 2,10 и 1,04 %. Следовательно, культивирование новой микробной ассоциации совместно с отваром разработанных пищевых рационов подтвердило, что получены положительные результаты лишь в шестой и седьмой сериях. Такой вывод основывается на фактах подавления роста эшерихий (условно-патогенных бактерий) и стимулирования роста лакто-, бифидобактерий и энтерококков (не
1 SCIENCE TIME 1
патогенных бактерий).
Таким образом, выявлено, что на основе полученных результатов опытов в условиях «in vitro» следует считать целесообразным рекомендовать к использованию в качестве биоиндикаторов для оценки пищевых рационов следующие виды микроорганизмов Bifidobacterium longum, Lactobacillus acidophilus, Escherichia coli и Enterococcus faecium как по отдельности, так и в ассоциации.
Таблица 2
Численность микроорганизмов представителей облигатных и факультативных родов пищеварительного тракта при культивировании в отдельности и совместно с разработанными пищевыми рационами
Серия опытов Варианты рационов Род бактерий Количество живых микробных клеток в 1мл, десятичные логарифмы (лог/мл) Разница по отношению к контролю, %
I - B 11,63±0,48
- L 9,96±0,45
- Es 6,53±0,55
- En 9,59±0,15
II 1 B 8,38±0,44 -27,94
L 7,17±0,48 -28,01
Es 5,49±0,58 -15,92
En 8,32±0,39 -13,24
III 2 B 9,50±0,52 -18,31
L 8,46±0,45 -15,06
Es 5,82±0,45 -11,02
En 8,38±0,49 -12,61
IV 3 B 8,75±0,45 -25,02
L 7,98±0,30 -19,87
Es 5,88±0,58 - 9,95
En 8,69±0,46 - 9,38
V 4 B 11,34±0,45 - 2,49
L 9,43±0,36 - 5,32
Примечание: Серия опытов: I - контроль (посев микробной взвеси ассоциации бактерий видов Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Escherichia coli и Enterococcus faecium без использования пищевого рациона); II-VII - опытные (посев микробной взвеси шести указанных видов бактерий совместно с отваром шести вариантов испытанных пищевых рационов соответственно):
Роды бактерий: B - Bifidobacterium; L - Lactobacillus; Es - Escherichia; En -Enterococcus.
1 SCIENCE TIME 1
В дальнейшем отобранные варианты рационов подвергались испытанию в опытах на лабораторных животных (крысах линии WISTAR), в условиях «in vivo». Такие исследования были направлены на подтверждение результатов, полученных в условиях «in vitro». Для этого были созданы 4 подопытные группы животных, на которых испытывались 4 варианта пищевых рационов из шести, изученных ранее (табл.1 № 1, 4, 5 и 6). В начале и в конце опытного периода (60 дней) определяли живую массу тела и количественные показатели бактерий, предложенных в качестве биоиндикаторов (принадлежащих родам Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia и Enterococcus).
Полученные результаты представлены в таблицах 3 и 4.
Анализ данных таблицы 3 выявил разную динамику массы тела животных опытных групп. Вероятно, испытуемые пищевые рационы обладали различной переваримостью и усвояемостью пищевых нутриентов.
Таблица 3
Живая масса тела крыс использованных при испытании различных вариантов пищевых рационов
Группа Вес одного животного, г Прирост живой массы тела одного животного, г Отличие,%
В начале опыта В конце опыта
От начала опыта От контрольной группы (I)
I 242,4±17,96 325,2±26,70 82,8 34,15
II 242,8±13,49 356,2±22,58 113,4 46,70 12,55
III 242,0±15,36 368,8±21,60 126,8 52,39 18,24
IV 242,8±12,22 352,6±29,64 109,8 45,22 11,07
Примечание: Группа I - получила вариант № 1; II - вар. № 4; III - вар. № 5 и IV - вар. № 6 пищевых рационов, состав которых представлен в таблице 1.
При этом следует отметить, что первый вариант рационов способствовал наименьшему приросту живой массы тела крыс (82,8 г на одно животное), а 4, 5 и 6 - более интенсивному росту (на 46,70; 52,39 и 45,22 %, соответственно группам II - IV) за период опыта. Следовательно, лучшие результаты получены в третьей группе, т.е. со стороны пятого варианта испытанных пищевых рационов.
1 SCIENCE TIME 1
Таблица 4
Количественные показатели отдельных родов микроорганизмов кишечника у крыс, получавших различные, вновь разработанные пищевые рационы
Количество микробных клеток на 1г содер-
Группы Роды жимого кишечника, десятичные логарифмы Отличие, %
живот- бактерий (лог)
ных В начале опыта В конце опыта От начала опы- От первой
та группы
I B 8,41±0,54 8,96±0,56 + 6,53
L 7,17±0,42 7,44±0,53 + 3,76
Es 5,53±0,30 8,39±0,50 +51,71
En 5,11±0,36 8,65±0,42 +69,27
II B 8,36±0,30 9,58±0,48 +14,59 + 6,91
L 7,69±0,41 8,66±0,45 +12,61 +16,31
Es 5,86±0,41 6,79±0,34 +15,87 -19,07
En 5,50±0,39 6,58±0,48 +19,63 -23,93
III B 8,49±0,41 9,94±0,30 +17,07 +10,93
L 7,59±0,48 8,94±0,45 +17,78 +20,16
Es 5,94±0,45 5,53±0,45 - 6,90 -34,08
En 5,67±0,41 6,63±0,39 +16,93 -23,35
IV B 8,39±0,28 9,43±0,42 +12,39 + 5,24
L 7,38±0,41 8,41±0,36 +13,95 +13,03
Es 5,34±0,15 5,50±0,34 +2,99 -34,44
En 5,23±0,22 6,17±0,41 +17,97 -28,67
Примечание: Группы животных адекватны тем из таблицы 2. Роды бактерий: B - Bifidobacterium; L - Lactobacillus; Es - Escherichia; En -Enterococcus.
Данные таблицы 4 показывают, что все испытанные в условиях «in vivo» пищевые рационы оказали благоприятное действие на изученные представители кишечной микрофлоры. Это видно из её количественных показателей, полученных в конце опыта по сравнению с началом. В качестве подтверждения послужили конечные результаты численности бактерий облигатных для пищеварительного тракта (родов Bifidobacterium и Lactobacillus), которые значительно возросли по сравнению с начальными на 10,93 и 20,16% в третьей, затем на 6,91 и 16,31 % - во второй, а также на 5,24 и 13,03 % - в четвёртой группе. Положительно явилось и снижение численности факультативных родов бактерий (на примере Escherichia и Enterococcus), которая в тех же группах уменьшилась соответственно на 34,08 и 23,35%, затем на 19,07 и 23,93%, а также на 34,44 и 28,67 %.
52
1 SCIENCE TIME 1
Тенденция роста количественных показателей у облигатных и снижения их у факультативных родов микроорганизмов в содержимом кишечника является положительным фактом, а полученные данные как в условиях «in vitro», так и «in vivo», обосновывают целесообразность рекомендовать, изученные роды бактерий в качестве биоиндикаторов для оценки саногенного действия на пищеварительный тракт вновь разработанных пищевых рационов. Это доказано тем, что рацион, испытанный в первой группе показал отрицательное действие, обеспечивая обильное размножение и развитие факультативных условно-патогенных родов микроорганизмов (Escherichia и Enterococcus), потому что отличие их численности по сравнению с началом опыта соответственно возросло в среднем на 51,71 и 69,27%.
Положительными оказались результаты, полученные в группах II-IV, когда численность облигатных бактерий родов Bifidobacterium и Lactobacillus, увеличилась соответственно на 14,59 и12,61; на 17,07 и 17,78; а также на 12,39 и 13,95%. У тех же животных в это же время отмечено снижение численности бактерий, указанных факультативных родов (Escherichia и Enterococcus) на 19,07 и 23,93; на 34,08 и 23,35; а также на 34,44 и 28,67% (соответственно группам II, III и IV).
Таким образом, на основе полученных результатов в различных условиях («in vitro» и «in vivo»), которые были адекватными, доказана целесообразность рекомендации микроорганизмов родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia и Enterococcus, а также созданной на их основе ассоциации Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Escherichia coli и Enterococcus faecium в качестве биоиндикаторов, микробного происхождения для экспрессной оценки новых пищевых рационов, предназначенных для поддержания микробиоценоза кишечника при астеническом типе конституции тела на саногенном уровне. Следовательно, экспериментально установлено, что варианты пищевых рационов, разработанных впервые под № 4, 5 и 6, могут быть рекомендованы в качестве приоритетных для астенического типа конституции, поскольку стимулировали процесс роста и развития использованных биоиндикаторов в пищеварительном тракте опытных животных, и поддерживали массу тела в саногенных лимитах.
Литература:
1. Доклад исследовательской группы ВОЗ. Рацион, питание и предупреждение хронических заболеваний // Всемирная Организация Здравоохранения. Женева. - 1993. - 208 с.
2. Исаев В.А. Физиологические аспекты липидного обмена, ожирения и похудения. - М.: ЗАО «Мир и согласие». - 2008. - 116 с.
3. Исаев В.А. Незаменимые факторы питания и физиологические аспекты их действия в организме человека. Москва: Мир и согласие. - 2010. - 247 с.
4. Исаев В.А. Физиологические аспекты пищеварения и питания. Москва: Акад. стандартизации, метрологии и сертификации. - 2011. - 63 с.
53
1 SCIENCE TIME 1
5. Исаев В. А. Незаменимые факторы питания для поддержания и коррекции нарушенного гомеостаза организма // Рациональное питание, пищевые добавки и биостимуляторы. - 2016. - № 4. - С. 27-32.
6. Исаев В.А., Новикова И.И. Ю.В.Е. Современные основы рационального питания населения. Омск: Омская гуманитар. акад., Новосиб. НИИ гигиены (Роспотребнадзора). - 2017. - 142 с.
7. Ткаченко Е.И., Успенский Ю.П. Питание, микробиоценоз и интеллект человека. СпецЛит. - 2006. - 590 с.: ISBN 5-299-00319-6.
8. Фурдуй Ф.И., Чокинэ В.К., Фурдуй В.Ф. и др. Трактат о научных и практических основах санокреатологии. Том 1. Проблема здоровья. Саокреатология. Потребность общества в её развитии. Типогр. АН РМ, 2016, 228 с. ISBN 978-9975-62-400-8.
9. Dahiya J.P., Hoehler D., Van Kessel A.G., Drew M.D. Dietary encapsulated glycine influences Clostridium perfringens and Lactobacilli growth in the gastrointestinal tract of broiler chickens // J. Nutr. - 2007. - 137 (6). - pp. 1408-1414.
10. Flint H.J., Duncan S.H., Scott K.P., Louis P. Interactions and competition within the microbial community of the human colon: links between diet and health // Environ. Microbiol. - 2007. - 9 (5): 1101-1111.
11. Mountzouris K.C., Tsirtsikos P., Kalamara E. Et al. Evaluation of the efficacy of a probiotic containing Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, and Pediococcus strains in promoting broiler performance and modulating cecal microflora composition and metabolic activities // Poult. Sci. - 2007. - 86 (2). - 309-317.
12. Roman C., Troia D. Alimenta^ia ra^ionala pentru o via^a sanatoasa. Editura doxologia. - 2017. - 264 с.
13. Silva N. et al. Microbiological Examination Methods of Food and Water: A Laboratory Manual. - 2013. - 57 p.
14. Strutinschi Tudor, Timo^ Maria. Impactul factorilor alimentari §i microbieni in sanatatea sistemului digestiv // Sanatate Publica §i Management in Medicina. - 2013. -3 (48): 232-233.
15. Strutinschi Tudor, Timo§co Maria, Velciu Aliona s.a. Influenza ra^iilor alimentare cu diversa structura calorica asupra unor reprezentan^i ai microflorei intestinale condi^ionat patogene // Sanatate Publica §i Management in Medicina. - 2012. - Nr. 5. (44): 138-140.
16. Strutinschi Tudor, Timo§co Maria. Rolul factorului alimentar in men^inerea microbiocenozei intestinale §i sanatatii organismului // Bul. A § M. - 2015. - nr. 2. -pp. 44-49.
17. Timo§co Maria. Stresul §i flora microbiana intestinala. Chi§inau: Tipografia Academiei de §tiin^e a Moldovei, 2005, 172 p.
18. Timo§co Maria, Florea Natalia. Aprecierea rapida a prezen^ei dereglarilor sanatatii sistemului digestiv prin determinarea nivelului cantitativ al unor reprezentan^i ai microflorei intestinale // Sanatate Publica §i Management in Medicina. - 2013. - 3 (48): 233-234.
1 SCIENCE TIME 1
19. Timo§co Maria, Florea Natalia. Dismicrobismul intestinal cauzat de ac^iunea unor factori ai mediului ambiant asupra macroorganismului - consecin^ä negativä in sänätate // Analele §tiin^ifice ale USMF „N. Testemi^anu". 2013. V. 2, № 14. pp. 5460.
20. Velciu Aliona, Timo§co Maria. Starea sänätä^ii §i microbiocenozei intestinale la copii de varsta timpurie postnatalä in dependent de modul de alimentare // Buletin de Perinatologie. - 2013. - 4 (57).
21. Velciu Aliona, Timo§co Maria, Strutinschi Tudor. Presingul microorganismelor din unele genuri condi^ionat patogene asupra macroorganismului in dependent de influen^ä factorului alimentar // Buletin de perinatologie. - 2014. - 3 (63): 35-38.
22. Velciu Aliona, Timo§co Maria. Nivelul numeric al reprezentan^ilor microbieni §i starea sänätä^ii organismului // Buletin de perinatologie. - 2014. - 3 (63): 25-28.
