CC BY
54УДК 632.937.05:635.63+634.75
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОБОВ-АНТАГОНИСТОВ ПРОТИВ КОРНЕВЫХ ГНИЛЕЙ ОГУРЦА И ВИЛТА ЗЕМЛЯНИКИ И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ВИДОВОЙ СОСТАВ МИКРОМИЦЕТОВ ПОЧВЫ
И.И. Новикова*, А.И. Литвиненко**
*Всероссийский НИИ защиты растений, Санкт-Петербург **Санкт-Петербургский государственный аграрный университет
Выявлено существенное влияние интродуцированных штаммов микробов-антагонистов B. subtilis B-10 и М-22 - продуцентов биопрепаратов алирина-Б и гамаира - на динамику численности популяции Fusarium oxysporum Schlecht., а также на видовой состав комплекса почво-обитающих фитопатогенных грибов в ценозах земляники садовой и огурца. В серии модельных опытов штаммы Streptomyces felleus S-8 и Bacillus subtilis B-10 эффективно подавляли популяцию F. oxysporum, причем антигрибное действие внесенных в почву антагонистов более выражено в ризосфере и ризоплане огурца, чем в почве без растений, что свидетельствует о существенной стимуляции образования БАВ, ответственных за антагонистическую активность, корневыми выделениями. Наблюдалось улучшение фитосанитарного состояния почвенного ценоза и эффективное подавление развития корневой гнили и увядания земляники садовой.
Ключевые слова: микробы-антагонисты, биопрепараты, фитопатогенные грибы, Fusarium oxysporum (FOX), биологическая эффективность, интродукция, корневые гнили огурца, увядание садовй земляники.
В основе современной концепции защиты растений лежат представления о необходимости перехода от отдельных приемов и методов к «конструированию» экологически устойчивых агроэкосистем. При этом существенный вклад в обеспечение экологического равновесия должна внести оптимизация системы трофических связей и других факторов саморегуляции биоценозов.
Технологии микробиологической защиты базируются на использовании биологического разнообразия микроорганизмов-антагонистов возбудителей болезней растений, а также гиперпаразитов с полифункциональным типом действия на растения и фитопатогенные микроорганизмы (Жученко, 2009, с. 1037). Главными показателями адаптивности полеводства наряду с ростом урожайности и качества продукции служат оптимизация среды обитания полезных организмов, повышение стрессоустойчивости агроэкосистем (Жученко, 2008, с. 303).
Известно, что они существенно отличаются от других групп микроорганизмов, регулирующих численность популяций вредных организмов в агроэкосистемах (в частности, энтомопатогенных микроорганизмов). В подавляющем большинстве -
это свободноживущие виды, широко представленные в почве, ризо- и филлосфере растений. При высокой плотности популяций микробы-антагонисты обеспечивают устойчивость экологических связей в мик-робиоте растения и способны эффективно защищать его от заражения возбудителями болезней разной этиологии.
Показано, что в пределах любого типа биоценоза с корнями каждого вида растений связаны специфические комплексы почвообитающих организмов: грибы микоризы, ризосферные бактерии, фитофаги - нематоды, насекомые и др. В результате во многих случаях наблюдается выраженная неоднородность распространения почвообитающих микроорганизмов. Это, в свою очередь, определяет состав и численность микроорганизмов, населяющих ризосферу и ризоплану корня и в значительной степени определяющих супрессивность почвы.
Сведения о реальных взаимодействиях микроорганизмов в природных местообитаниях крайне ограничены. Установлено, что интродуцированные в почвенный биоценоз популяции бактерий, в т.ч. актиномицетов, стабилизируются на достаточно высоком уровне, причем на выживание конкретного микроорганизма влияют
Вестник защиты растений, 2, 2011 агрохимический состав почвы, уровень внесения интродуцента и стадия микробной сукцессии, на которой вносится популяция.
В литературе описаны попытки регулирования плотности популяций фитопа-тогенных видов с помощью самых различных микроорганизмов. В частности, колонизация корней растений огурца штаммом Escherichia coli предотвращала развитие корневой гнили, вызванной Pythium ultimum (Roberts et al., 1997). Ризосферные бактерии, продуцирующие антифунгальные антибиотики, с успехом применяли для стабилизации численности фузариевых грибов (Kurek et al., 1994). После внесения штамма-продуцента биопрепарата энатина Bacillus pumilis БИМ В-263 с широким спектром антигрибного действия в стерильную почву, предварительно иноку-лированную Pseudomonas syringae Ш-р-55 и Fusarium culmorum YKM-55043, численность обоих патогенов снижалась при всех испытанных концентрациях, существенно ускорялось развитие проростков ячменя, а их масса увеличивалась на 10-25% (Романовская и др., 2002).
В ряде работ показано существенное взаимное влияние разных видов микроорганизмов в почвенных микробоценозах. Показано, что динамика численности ак-тиномицетов Streptomyces fradiae C-40 и S. lanatus 21-5 при раздельном и совместном внесении существенно различается (Звягинцев и др., 1982; Калинина и др., 1999). Изучение взаимного влияния 5 пар видов, в состав которых входил один из двух штаммов актиномицетов (Streptomyces olivocinereus или S. caeruleus) и трех штаммов бактериальных культур (Rhizobium leguminozarum, Pseudomonas denitrificans или Micrococcus agilis), показало, что на ранних этапах сукцессии отмечались взаимодействия по типу комменсализма (+, 0), а на более поздних - по типу аменсализма (-, 0) (Тригер и др., 1990). Полученные авторами данные свидетельствуют о специфичности взаимодействия микроорганизмов. Например, установлена отрицательная корреляция между численностью популяции B. megaterium и длиной
активных гиф грибов (Калинина и др., 1997).
Штаммы микробов-антагонистов и биопрепараты на их основе с успехом применяются для регуляции плотности популяций многих фитопатогенных видов и фито-санитарной оптимизации агробиоценозов.
Применение биопрепаратов на основе живых культур микробов-антагонистов, активно колонизирующих микробиоту растения и предотвращающих нарастание плотности популяций фитопатоген-ных видов, наиболее эффективно в самом начале онтогенеза растительного организма. Весьма эффективна инокуляция семян штаммами бактерий-антагонистов. Эффективно инокулирование семян томата, огурца, зеленных культур (укропа, петрушки) и клубней картофеля культурами бактерий Bacillus megaterium, Pseudomonas putida и Azotobacter sp. (Сидоренко, 1997). Бактеризация семян повышала их всхожесть, ускоряла развитие рассады, улучшала азотное и фосфорное питание растений, стимулировала развитие корневой системы и способствовала приживаемости рассады. При внесении в грунт конидий штамма F. moniliforme ВКМ-Г-136 обнаружено, что обработанные растения были более устойчивы к фитопатогенам благодаря развитию мощной корневой системы и ее способности «привлекать» и способствовать колонизации микробами-антагонистами ризосферы, что ограничивает или подавляет развитие почвенных патогенов (Сидоренко, 1997).
Виды рода Bacillus входят в число наиболее перспективных для интродукции в микробиоценоз с целью регуляции плотности фитопатогенных популяций. Подавление различных фитопатогенов бактериями рода Bacillus было продемонстрировано на целом ряде болезней овощных культур и картофеля (Centurion et al., 1994; Dolej, Bochow, 1996; Marrone et al., 1999). Японские исследователи также сообщали о значительном влиянии штаммов B. subtilis, выделенных из компостов, на супрессив-ность почвы по отношению к фитопато-генным грибам (Phae et al., 1990).
Новые биопрепараты на основе бацилл (бактофит, фитоспорин, алирин-Б, гамаир и другие) с успехом применяют для борьбы с болезнями сельскохозяйственных культур. Биологические препараты зарекомендовали себя как эффективные, экологически безопасные и альтернативные синтетическим химическим соединениям (Коробкова и др., 1987; Burkhard et al., 1991; Голышин, 1992; Lynch, Crook, 1992; Berdian, 1996; Смирнов и др., 1998). Ряд коммерческих биопрепаратов на основе В. subtilis создан за рубежом (Попов, 1990; Collins et al, 1994).
Другой перспективной группой продуцентов биопрепаратов для защиты растений от болезней являются актино-мицеты. Их использование в практике защиты растений связано с синтезом ряда активных соединений, подавляющих развитие фитопатогенных видов. Есть данные о том, что некоторые виды стрептомицетов, выделенные из ризосферы (Streptomyces cyanoviridi, S. murinus, S. griseoplanus), повышали супрессивность почвы и эффективно сдерживали развитие популяций возбудителей корневых гнилей (Jones, Samac, 1996; Youssef et al., 2001).
В России из препаратов актиномицет-ного происхождения к применению рекомендованы фитобактериомицин и фи-толавин на основе Streptomyces lavendulae. Препараты подавляют бактериальные и грибные заболевания многих сельскохозяйственных культур. На основе S. lavendulae получен также антибиотик лавендотрицин, активный в отношении мицелиальных грибов (Павлюшин, 1990; Литвиненко и др., 1992;). Препараты на основе стрептомицетов применяют и за рубежом. Так, в Японии разработаны препараты бластоцидин-S на основе S. griseochromogenes, эффективный против парши яблони, клястероспориоза плодовых и косточковых культур, серой гнили винограда и земляники, вилта и корневой гнили хлопчатника, пирикуля-риоза риса; касумин на основе S. kasugaensis, эффективный против пири-куляриоза риса, бурой пятнистости томата, бактериальной пятнистости огурца;
полиоксин на основе саедо1, применяемый против фузариоза риса и парши плодовых и семечковых культур (Рзаева, 1992). На основе одного из актиномицетов (£\ griseoviridis) финскими исследователями разработан биопрепарат микостоп, эффективный в защите овощных и зерновых культур от корневых гнилей (БааИкатеп е! а1., 1993). Исследования показали, что клетки штамма в процессе жизнедеятельности образуют нелетучие антибиотики типа кандицидина из класса гептаеновых соединений, что частично объясняет механизм супрессивности в природных условиях.
Эффективность защитного действия штаммов микробов-антагонистов, интро-дуцируемых в почвенный ценоз с целью регуляции плотности популяций фитопатогенных видов, зависит не только от их активности и физиолого-биохимических особенностей, но и от комплекса почвенных биотических и абиотических факторов. В этой связи нами проведены исследования, направленные на изучение основных закономерностей взаимного влияния популяций отобранных штаммов микробов-антагонистов и фитопатогенных микроорганизмов в модельных системах растение-фитопатоген-антагонист, приближенных к естественным условиям, а также в условиях естественных агробиоценозов.
Исходя из обоснованного нами положения о том, что наиболее эффективно фитосанитарную регуляцию могут осуществлять микроорганизмы и их ассоциации, разнообразные как по экологическим стратегиям, так и по составу антибиотиков, в качестве модельных объектов были выбраны штаммы микробов-антагонистов В. зиЫШэ В-10 и felleus Э-8, условные г- и К- стратеги, сочетающие в онтогенезе не только основные типы жизненных стратегий, но и возможности Ь-стратегии, и синтезирующие различные комплексы БАВ. Штамм Б. felleus Б-8 синтезирует антибиотик, который относится к подгруппе основных мак-ролидов типа карбомицина-циррамицина.
Одним из ключевых механизмов, определяющих высокую антагонистическую активность штамма В. шЪЫИв В-10, служит
Вестник защиты, растений, 2, 2011 синтез ряда антибиотиков полипептидной и полиеновой природы (Novikova, Shenin, 1998; Шенин и др, 1995, 2001; Новикова и др., 2002; Новикова, 2005а,б, в).
Цель работы - изучение влияния штаммов микробов-антагонистов В. subtilis В-10 и S. felleus S-8 на динамику популяцион-ной плотности фитопатогенного гриба FOX при разных уровнях начальной плотности патогена в почве в отсутствие
Методика
При изучении влияния антагонистов на динамику численности Fusarium oxysporum (FOX) в модельных системах использованы штамм-продуцент алирина-Б В. subtilis В-10, штамм-продуцент али-рина-С S. felleus 5-8; штамм FOX, выделенный из пораженных корней огурца. Все штаммы хранятся в Государственной коллекции микроорганизмов лаборатории микробиологической защиты растений ВИЗР.
Подготовка субстрата. В качестве субстрата использовали торфогрунт, подготовленный по стандартной методике. Влажность грунта поддерживали на уровне 70% от его полной влагоемкости при температуре 20-22°С.
Подготовка инокулятов. Штамм FOX выращивали на агаризованной среде Чапека в течение 7 суток. Штамм В. subtilis В-10 культивировали в глубинных условиях в колбах Эрленмейера в течение 3 суток на среде следующего состава: меласса -1.5%, кукурузный экстракт - 0.3%, pH до стерилизации 7.8. Штамм S. felleus S-8 культивировали в глубинных условиях в колбах Эрленмейера в течение 5 суток на среде следующего состава: соевая мука - 1%, глюкоза - 1%, NaCl - 0.5%, мел - 0.3%, pH до стерилизации 7.
Подготовка мембранных фильтров. В модельных опытах использован метод мембранных фильтров в модификации Т.М.Лагутиной с соавторами (1992). На мембранные фильтры наносили суспензии микроорганизмов: в контроле - FOX, в опыте - FOX совместно с одним или двумя антагонистами в зависимости от варианта опыта. Титр суспензий антагонистов доводили до 105 спор/мл по стандарту мутности. Суспензии микроконидий FOX с разным титром готовили смывом с 7-суточной культуры с последующим фильтрованием через слой ваты. Титры FOX определяли в камере Горяева.
Во всех сериях экспериментов взаимоотношения популяций микроорганизмов изучали в следующих вариантах: FOX,
FOX + В. subtilis (F+B), FOX + S. felleus (F+S), B. subtilis+ S. felleus (B+S), FOX +B. subtüis+ S. felleus (F+B+S). Чтобы проанализировать влияние корневых выделений растений на проявление антагонистической активности штаммов, на середину фильтра с предварительно нанесенными микроорганизмами
растения, ризосфере и ризоплане огурца в модельных опытах методом мембранных фильтров в модификации Т.М.Лагутиной с соавторами (1992), а также оценка влияния интродуцированных микроорганизмов на видовой состав микроми-цетов в условиях естественных почвенных биоценозов на культурах огурца Fj Эстафета и земляники садовой сортов Боровицкая и Царскосельская.
исследований
помещали семя огурца гибрида ТСХА-77. Мембранный фильтр, на поверхности которого развивалось растение, считали ризосферой.
Проведено три серии опытов с разной начальной плотностью популяции FOX на мембранном фильтре: 103 КОЕ/см2; 5х104 КОЕ/см2; 5х105 КОЕ/см2.
Фильтры, обернутые капроновой тканью, помещали вертикально в подготовленный грунт.
Непосредственно после нанесения суспензии, а затем с определенной периодичностью из торфо-грунта извлекали по 3 фильтра в каждом варианте опыта. Из каждого фильтра вырезали по 3 участка радиусом 0.4 см, которые затем помещали в колбы с 50 мл стерильной воды и ставили на качалку на 30 минут при частоте 160 об/мин. Затем полученные суспензии наносили на поверхность агаризо-ванных питательных сред в чашках Петри в разведениях, оптимальных для определения КОЕ/см2 и подбиравшихся специально в ходе опыта. Плотность популяции штамма В. subtilis В-10 определяли высевом серийных разведений на питательный агар (СПА), штамма S. felleus S-8 - на агаризован-ную среду Чапека с крахмалом, штамма FOX - на агаризованную среду Чапека с сахарозой.
Обработка растений и корней. На 6, 13, 20 и 27 сутки из почвы извлекали по 3 растения и измеряли длину и вес корней от надсемядольного колена до конца корня. Выделение микроорганизмов с поверхности корня проводили по описанной выше методике.
Определение КОЕ в суспензиях: через 4-5 суток инкубации при 28°С учитывали количество колоний и определяли число КОЕ соответствующего микроорганизма по формуле:
их50х10<1_1) N =---'
г2 х 9
где N- титр жизнеспособных клеток (КОЕ/см2 для почвы и ризосферы); п- число колоний; 50- объем дистиллированной воды (мл); х- разведение; г- радиус участка фильтра, см; 9- число участков.
При определении титра жизнеспособных клеток в ризоплане растений производили пересчет по формуле:
N = п х 50 х 10е""4 /mi+m2+m3 _ где N- титр жизнеспособных клеток (КОЕ/г для корней); mi, rri2, тз - массы корней растений, поскольку в данном случае смывы производили не с мембранных фильтров, а с корней.
С целью изучения влияния биопрепаратов на видовой состав почвообитающих фитопатогенных
видов - возбудителей корневых гнилей и увяданий
- в 2006 году был проведен производственный опыт на культуре огурца Fj Эстафета в ангарной зимней теплице площадью 1000 м2 в ТК «Красногорский» Кировской области. В опыте были использованы образцы различных препаративных форм: трихо-дермин П на основе штамма T. viride Т-32 (торфяная форма), глиокладин Таб. на основе штамма T. viride Т-36, алирин-Б Ж и СП на основе штамма Bacillus subtilis В-10, гамаир СП на основе штамма B. subtilis М-22, планриз Ж на основе штамма Pseudomonas fluorescens. Нормы расхода биопрепаратов: для смачивающихся порошков алирина-Б и гамаира - 60 г/га, рабочей жидкости - 1000 л/га, торфяной формы триходермина - 1 г под растение, жидких препаративных форм алирина-Б и планри-за - 0.5 л/м2, таблетированной формы глиокладина
- 1 таблетка под растение.
Образцы жидких и торфяных препаративных форм нарабатывали на базе биолаборатории Кировской СТАЗР, смачивающихся порошков и таб-летированных форм - ЗАО «Агробиотехнология» (Москва). Эталоном служил химический препарат феразим КС (карбедазим 500 г/га).
Перед закладкой опыта проводили отбор почвы в теплице в 10 точках на глубину 0-20 см агрохимическим буром с последующим выделением среднего образца. Через 20 дней после внесения биопрепаратов проводили повторный отбор грунта для изучения изменения видового состава микробиоты. Высев микроорганизмов на питательные среды (МПА для бактерий и среда Чапека для грибов) проводили методом разведения по методике Г.И.Ежова (1981). Для выделения штаммов микроорганизмов 1 г воздушно-сухой почвы заливали 5 мл стерильной воды и встряхивали на качалке в течение 30 минут. После оседания твердых частиц
Вестник защиты растений, 2, 2011 бактериологической петлей рассевали водную суспензию клеток микроорганизмов на поверхность соответствующих агаризованных питательных сред в чашках Петри. Одну петлю рассевали на 2 чашки. Для выделения актиномицетов использовали среду Чапека с крахмалом или глюкозой, грибов - Чапека с сахарозой, бактерий - МПА или СПА. После инкубации в термостате при 25-28°С в течение 2-3 суток для бактерий и 5-7 суток для грибов и акти-номицетов выросшие колонии микроорганизмов пересевали. Для грибов и актиномицетов использовали среду Чапека с крахмалом или сахарозой, для бактерий - СПА или МПА с глюкозой.
Идентификацию микромицетов до рода проводили по культурально-морфологическим признакам с использованием определителей, указанных для каждого рода в специальной литературе (Ainsworth, Bisby, 1995).
Исследования биологической эффективности биопрепаратов и их влияния на видовой состав микроми-цетов-возбудителей корневой гнили и вилта земляники садовой 3-го и 4-го годов выращивания проводили в СПК «Племхоз Тайцы» и учебно-опытном саду СПГАУ на сортах Боровицкая и Царскосельская. В опыте использовали биопрепараты на основе микробов-антагонистов алирин-Б Таб. и гамаир Таб. при норме расхода 2 таб./10 л воды, рабочей жидкости -10 л/100 м2. Суспензию рабочей жидкости в концентрации 0.06 мг/мл по 30 мл вносили под каждое растение методом пролива под корень двукратно (осенью и в период бутонизации весной). Перед закладкой опыта и в течение периода вегетации проводили фи-топатологический анализ погибших растений по описанным выше методам.
Все опыты поставлены в 3-кратной повторно-сти, полученные материалы статистически обработаны методами дисперсионного анализа.
Результаты исследований
Исследования показали, что началь- при низком начальном уровне (103 ная плотность популяции FOX в почве КОЕ/см2) средняя плотность популяции существенно влияет на динамику попу- увеличивалась в течение 7-8 суток инфляционной плотности фитопатогена как в бации, затем начинала снижаться и ста-опытных вариантах, так и в контроле без билизировалась на 11-14 сутки на уровне нанесения антагонистов. Так, в контроле ниже внесения (рис. 1в).
Рис. 1. Влияние микробов-антагонистов B. subtilis и S. felleus на динамику плотности популяции FOX в зависимости от начальной плотности пропагул гриба а- 100000 КОЕ/г; б- 1000000 КОЕ/г; в- 1000 КОЕ/г; 1- контроль; 2- Fusarium + Bacillus; 3- Fusarium + Streptomyces; 4- Fusarium + Bacillus+Streptomyces
При среднем начальном уровне (5х104 КОЕ/см2) плотность популяции FOX не изменялась в течение 7 дней, а затем несколько уменьшалась, также достигая величины ниже уровня внесения (рис. 1а). При высоком начальном уровне (5х105 КОЕ/см2) отмечалась совершенно иная картина: плотность популяции FOX начала резко падать с первых дней инкубирования до 12-14 суток, а затем снижение плотности принимало более плавный характер, но продолжалось до окончания опыта на 24-26 сутки (рис. 16).
Многие микробные популяции способны к стабилизации численности на ненулевом уровне в нестерильной почве (Ко-жевин, 1989).
Мы наблюдали стабилизацию плотности популяции FOX на мембранном фильтре при низком и среднем начальном уровне. Гибель популяции при высоком начальном уровне нанесения конидий на мембранный фильтр, вероятно, обусловлена ее аутоингибированием из-за слишком большой концентрации про-пагул. Подобные феномены (микробный апоптоз, альтруизм и т.д.) известны и активно изучаются (Lipkin, 1995; Олескин и др., 2000).
Результаты опытов ясно свидетельствуют, что микробы-антагонисты существенно влияют на популяцию FOX, причем характер и эффективность воздействия в высокой степени зависят от начальной плотности популяции фитопатогена.
Так, при низком начальном уровне нанесения пропагул гриба (103 КОЕ/см2) плотность популяции фитопатогена резко снижалась практически через 2-3 дня после начала совместного инкубирования во всех вариантах опыта (рис. 1в). Наиболее эффективно популяцию FOX подавлял штамм S. felleus S-8 и оба штамма-антагониста (S. felleus S-8 и B. subtilis B-10) совместно. При среднем начальном уровне нанесения пропагул гриба (5х104 КОЕ/см2) отмечено менее резкое, но непрерывное снижение плотности популяции фитопатогена, также более интенсивное в варианте со штаммом S. felleus
S-8 и особенно существенное в варианте с обоими антагонистами (рис 1а).
Начальная численность пропагул FOX влияла не только на динамику подавления его популяции антагонистами, но и на абсолютную величину популяции фи-топатогена в конце экспериментов.
Так, плотность популяции фитопато-гена на 0-11 сутки экспериментов в серии опытов на низком инфекционном фоне составляла всего лишь 0.5х102 КОЕ/см2, тогда как на среднем инфекционном фоне была выше (103 КОЕ/см2).
В опыте с высокой начальной плотностью FOX в связи с гибелью популяции фитопатогена в контроле выявить влияние антагонистов оказалось невозможным: динамика отмирания популяции во всех вариантах опыта была сходной (рис. 1б).
Для выявления особенностей влияния растительного организма на характер взаимоотношений всех членов экосистемы растение-фитопатоген-антагонист проведены модельные опыты, в которых прорастающее на мембранном фильтре семя огурца позволяло моделировать ризосферу и ризоплану растения.
Начальная плотность пропагул патогена в этой серии опытов находилась, согласно нашей схеме, на среднем уровне и составляла около 104 КОЕ/см2. Изучена динамика плотности популяций штаммов FOX, S. felleus S-8 и B. subtilis В-10, нанесенных на мембранные фильтры раздельно и в разных сочетаниях, в почве без растения, ризосфере и ризоплане растений огурца. Анализ полученных результатов показал, что динамика плотности популяций всех микроорганизмов в разных вариантах опыта существенно различалась, причем ризосфера и ризо-плана растения оказывали значительное влияние на процессы развития популяций микроорганизмов и характер инги-бирования патогена микробами-антагонистами. Так, в контрольном варианте (почва без растений) при данном уровне начальной плотности популяции FOX наблюдалось, как и в предшествующих опытах, плавное снижение плотности пропагул патогена (табл. 1).
Таблица 1. Динамика плотности FOX на мембранных фильтрах в почве без растений
Варианты Плотность популяции (КОЕ/см2) по суткам учета
0 5 7 12 19 26
FOX 4.8x104 3.1x104 3.6x104 1.5x104 1.8x104 7.4x10
FOX + B. subtilis В-10 4.8x104 4.3x104 3.9x104 3.1x104 0.8x104 4.9x10
FOX + S. felleus S-8 4.8x104 6.1x104 8.1x104 2.3x104 3.1x10 2.5x10
FOX + B. subtilis В-10 + S. felleus S-8
4.8x104 1.7x104 2.4x103 5.2x104 2.9x10 6.4x10
В опытах с моделированием ризосферы также отмечено плавное снижение численности пропагул гриба после на-
чального периода стабильной плотности популяции. Однако в ризосфере растения этот процесс шел медленнее (табл. 2).
Таблица 2. Динамика плотности популяции FOX на мембранных фильтрах
в ризосфере огурца
Варианты Плотность популяции (КОЕ/см2) по суткам учета
0 5 7 12 19 26
FOX 4.8x104 4.0x104 6.8x104 9.9x104 3.2x102 2.2x102
FOX + B. subtilis B-10 4.8x104 5.1 x 103 6.1x103 5.2x102 3.3x10 1.50x10
FOX + S. felleus S-8 4.8x104 6.3x103 8.3x103 6.3x102 2.3x102 3.4x102
FOX + B. subtilis B-10 + S. felleus S-8
4.8x104 7.4x102 5.4x102 5.9x102 6.30x10 0.2x10
Оценка плотности популяции гриба в ризоплане огурца на 6 сутки инкубирования показала, что она существенно выше, а последующее ее снижение происходило значительно медленнее, чем в почве и ризосфере (табл. 3). Так, на 12 сутки опыта плотность пропагул FOX в ризосфере была почти в 10 раз, а в ри-
зоплане - практически в 100 раз больше, чем в отсутствие растений. Следует отметить, что в ризоплане существенно более высокая плотность пропагул патогена сохранялась и на 19 сутки опыта, что обусловлено стимулирующим эффектом корневых выделений на популяцию FOX.
Таблица 3. Динамика плотности популяции FOX на мембранных фильтрах _в ризоплане огурца_
Варианты
Плотность популяции (КОЕ/см2) по суткам учета
5
7
12
19
26
FOX 5.5x105
FOX + B. subtilis B-10 -
FOX + S. felleus S-8 1.8x104
FOX + B. subtilis B-10 + S. felleus S-8
2.9x103
6.2x105 5.4x10 8.1x102
7.9x102
9.5x105 4.4x10 3.1x102
7.3x102
4.2x104 8.7x102 7.3x10
2.2x103 5.7x10
Ингибирующий эффект антагонистов отмечен во всех вариантах опыта. В почве без растения он выражен довольно слабо; плотность популяции FOX была существенно ниже, чем в контроле, на 519 сутки опыта в вариантах с внесением штамма S. felleus S-8 и обоих антагонистов одновременно (табл. 1). В ризосфере огурца картина значительно менялась: плотность популяции гриба через 5 суток была в 10 раз меньше в вариантах с вне-
сением штаммов B. subtilis В-10 и S. felleus S-8 по отдельности и в 100 раз ниже при совместном внесении в почву антагонистов (табл. 2). Следует отметить, что ингибирование развития фитопатоге-на отмечалось до 26 дня проведения опыта, причем максимальная антагонистическая активность наблюдалась при совместном внесении антагонистов.
Еще более убедительные результаты, подтверждающие регулирующую роль
Вестник защиты растений, 2, 2011 штаммов антагонистов, получены в вариантах опыта в ризоплане огурца (табл. 3). Уже на 5 сутки после начала совместной инкубации плотность популяции FOX в случае совместного внесения штаммов S. felleus S-8 и B. subtilis В-10 стала на два порядка ниже, чем в контроле. На 19-е сутки опыта численность пропагул гриба в этом варианте опыта была на 3 порядка ниже, чем в контроле. В варианте опыта с внесением штамма B. subtilis В-10 единичные колонии гриба выделялись на питательную среду только на 7 и 12 сутки опыта.
В серии модельных опытов было убедительно показано, что штаммы S. felleus S-8 и B. subtilis B-10 эффективно подавляют популяцию FOX, причем антигрибное действие внесенных в почву антагонистов более выражено в ризосфере и ри-зоплане огурца, чем в почве без растений.
Как показали результаты, в ризосфере огурца антагонисты снижали плотность популяции фитопатогена по сравнению с контролем даже при высокой начальной плотности патогена, хотя и менее эффективно, чем при низкой начальной плотности. Наиболее эффективное ингибирование популяции FOX при интродукции микробов-антагонистов наблюдалось в ризоплане растения огурца. Это может свидетельствовать о существенной стимуляции образования БАВ, ответственных за антагонистическую активность штаммов, в ризосфере корня.
Выявленные нами в модельных опытах закономерности в значительной степени раскрывают особенности взаимодействия микробов-антагонистов и фито-патогенных популяций в почвенных микробиоценозах. Полученные данные объясняют причины высокой биологической эффективности биопрепаратов на основе живых культур микробов-антагонистов, применяемых методами интродукции в агробиоценозы. Тем не менее, качественный состав комплекса фитопатогенных видов и плотность их популяций в естественных условиях, агротехнические особенности возделывания сельскохозяйственных культур и многообразие эколо-
гических условий применения биопрепаратов могут существенно влиять на эффективность подавления распространенности и развития заболеваний. В связи с этим, особый интерес представляет изучение роли интродуцированных микробов-антагонистов в стабилизации фито-санитарного состояния реальных агро-биоценозов, где в развитии инфекционных процессов принимают участие комплексы фитопатогенных видов, включающие грибы и бактерии. В течение ряда лет нами проводилось изучение биологической эффективности биопрепаратов на основе микробов-антагонистов в отношении возбудителей фузариозов различных сельскохозяйственных культур, проявляющихся в виде гнили корней, плодов, семян или в виде трахеоми-козного увядания растений. Особое внимание было уделено изучению влияния интродукции полезной микрофлоры на видовой состав и плотность популяций фитопатогенных микроорганизмов.
Проведенные нами многолетние исследования показали, что биопрепараты алирин-Б и гамаир на основе штаммов B. subtilis B-10 и B. subtilis M-22 в разных препаративных формах эффективны против корневых гнилей и увяданий овощных, зерновых и цветочных культур. Они снижают развитие и распространенность болезней на 65-90% и обеспечивают увеличение урожайности сельскохозяйственных культур на 25-45% (Новикова и др., 2002, 2003).
С целью изучения влияния интроду-цированных в почвенный микробиоценоз штаммов-продуцентов биопрепаратов на видовой состав и динамику популяций фитопатогенных видов - возбудителей корневых гнилей и увяданий была проведена серия полевых мелкоделяночных опытов на культуре огурца и земляники.
Основные заболевания огурца в защищенном грунте - корневые гнили и трахеомикозное увядание. В связи с ограничением использования химических средств защиты растений в закрытом грунте большую актуальность приобретает разработка биологических систем защиты теп-
личных культур от болезней с использованием микробиологических препаратов.
Проведенные на культуре огурца исследования показали, что внесение биопрепаратов алирин-Б, алирин-С и их смеси существенно улучшает фитосани-тарную ситуацию в почвенном микробиоценозе ризосферы (Новикова и др., 1995; Новикова, 2005).
На пропаренном грунте биопрепараты показали высокий защитный и стимулирующий эффект. Их применение увеличило высоту вегетирующих растений на 5-20%, а количество завязей в 1.7-1.9 раза, урожайность при первых сборах огурца была выше в 2.6-2.7 раза, а в целом вдвое превышала контрольную. Биологическая эффективность в отношении корневых гнилей, аскохитоза, альтерна-риоза, белой гнили при применении али-рина-Б и его смеси с алирином-С составила 75-90%, причем защитный эффект
Вестник защиты растений, 2, 2011 сохранялся в течение 1.5 месяцев после обработки. Суммарная прибавка урожая огурца превышала контроль на 23.3-30%. На непропаренном грунте применение смеси алирина-Б и алирина-С привело к снижению распространенности корневых гнилей в начале вегетации на 55-60%, а развития болезни - на 75-80% по сравнению с контролем, при этом защитный эффект сохранялся до конца вегетации, количество выпадов было в 1.7-3.5 раза ниже, чем в контроле. Внесение биопрепаратов в ангарной зимней теплице в ТК «Красногорский» Кировской области в грунт существенно изменило видовой состав микробиоты. Как видно из таблицы 4, наиболее богата микромицетами почва контрольного варианта, где обнаружены представители фитопатогенных родов Fusarium и Rhizoctonia, антагонисты из р. Pénicillium, а также различные виды бактерий, включая актиномицеты.
Таблица 4. Влияние биопрепаратов на видовой состав микромицетов тепличного грунта при выращивании культуры огурца Эстафета (ТК «Красногорский», Кировская обл.)
Грибы Бактерии Актино-
Pénicillium Fusarium (мелкие и (F.oxys-крупные porum и колонии) др.) Bac. Мелкие колонии мицеты
Варианты Rhizoctonia Asper-gillus Tricho-derma subtilis тт Молоч- „ , Чер- Бело-(круп- г но-кре- ного L го ные ко- мового цвета цвета лонии) цвета Розо- Бе-вого лого цвета цвета
Контроль ++ + + ++ +++ ++ ++ ++
Феразим КС (карбедазим, 500 г/л), стандарт ++ + ++ + ++ +++ +
Глиокладин Таб. (T. viride Т-36)
+ + ++ + + +
Триходермин П (торфяная форма) (T. viride Т-32) + +++ + +
Гамаир СП (B. subtilis М-22) + алирин-Б СП (B.subtilis В-10) ++ +++ +
Алирин-Б СП (B. subtilis В-10)
+ +++ + ++
Алирин-Б Ж (B. subtilis В-10) + +++ ++ + +
Планриз Ж (P. fluorescens)
+ +++
Среднее количество колоний на 1 чашку Петри: + единичные колонии, ++ от 5-20 колоний, ++ от 20-50 и более колоний.
Напротив, микробиологический анализ почвы не выявил присутствия фито-патогенных грибов ни в одном из вариантов опыта с внесением биопрепаратов и химического стандарта феразима КС. В
варианте с внесением триходермина П практически полностью доминировал штамм-продуцент биопрепарата (T.viri-de Т-32), то есть были полностью подавлены виды р. Pénicillium и отмечена
Вестник защиты растений, 2, 2011 встречаемость бактерий. Следует отметить, что аборигенные виды р. Trichoderma обнаруживались практически во всех вариантах опыта в очень большом количестве. Таким образом, нами показано, что эффективность использования биопрепаратов в борьбе с корневыми гнилями и увяданием растений огурца в значительной степени обусловлена подавлением популяций фитопато-генных грибов - возбудителей болезней.
Изучение динамики видового состава фитопатогенов, вызывающих корневые гнили и вилт земляники, проведенное в период с 1988 по 2008 гг., выявило существенное изменение состава комплексной инфекции. Согласно литературным данным, основными возбудителями вилта земляники в 1960-1980 гг. на территории России считались штаммы вида Verticillium albo-atrum, реже - Fusarium oxysporum и R. solani (Власова, Кривченко, 1976).
Исследования возбудителей корневой гнили и вилта различных сортов земляники, проведенные в последние годы в хозяйствах Ленинградской области, подтвердили преобладание смешанной инфекции, характеризующейся постоянным изменением видового состава комплекса фитопатогенных грибов в течение 3-4 лет выращивания культуры (Полозова, Лит-виненко, 1991). Впервые из погибших растений был выделен гриб Cylindrocarpon destructens как в виде чистой культуры, так и в составе смешанной инфекции с грибами родов Fusarium и Rhizoctonia.
Исследования 2003 г. в СПК «Племхоз Тайцы» подтвердили наличие комплекса фитопатогенных грибов в погибших растениях земляники. Показано, что корневую гниль вызывали грибы F. verticillioides, F. redolens, F. avenaceum, F. culmorum, R.solani, C. destructens, а увядание - виды V. albo-atrum, Fusarium oxysporum, Phytophthora cactorum (табл. 5). В 20062007 гг. из погибших растений земляники 3-го и 4-го года выращивания, в основном, выделялись виды р. Rhizoctonia, характеризующиеся наличием ловчих ко-
лец, реже - виды P. fragaria и V.albo-atrum, а также комплекс грибов рода Fusarium. В летний период 2008 г. на плантациях земляники 1-го и 2-го года выращивания из погибших растений были изолированы, в основном, грибы рода Cylindrocarpon, реже - представители рр. Fusarium и Verticillium.
Исследования 2006-2007 гг. в учебно-опытном саду СПбГАУ на участке земляники сортов Боровицкая и Царскосельская 3-го и 4-го годов выращивания показали, что биопрепараты на основе микробов-антагонистов алирин-Б Таб. и гамаир Таб. эффективно подавляют возбудителей корневой гнили и увядания земляники и существенно влияют на состав комплекса возбудителей почвенной инфекции.
Таблица 5. Соотношение видов фитопатоген-ных грибов, вызывающих увядание земляники на производственных плантациях (питомник СПК «Племхоз Тайцы», 2003 г.)
1 год 2 год
Возбудители выращивания выращивания
июнь июль июнь июль
Инфекция в чистом виде, %
Verticillium - 13.1 11.1 100
Cylindrocarpon 4.2 - 11.1 -
Fusarium - - 1 -
Rhizoctonia 8.3 - - -
Phytophthora 4.2 - 11.1 -
Инфекция смешанная, . %
Verticillium 16.7 30.3 - -
Cylindrocarpon 25.0 26.1 33.4 -
Fusarium 25.0 13.1 22.2 -
Rhizoctonia 8.3 4.3 - -
Phytophthora 8.3 13.1 11.1 -
Анализ растений земляники, погибших осенью 2006 г. до внесения биопрепаратов, выявил наличие грибов рода Rhizoctonia, P. debarianum, V. albo-atrum, Fusarium (в основном, FOX) и другие микромицеты. В ряде случаев были выделены бактерии в виде сопутствующей инфекции, а также отмечена земляничная нематода.
Результаты оценки влияния осеннего внесения биопрепаратов в почву на по-раженность корневой гнилью и вилтом после перезимовки растений земляники 3-го года выращивания на 4-й год выра-
щивания показали, что наименьшая распространенность вилта и корневых гнилей отмечена в варианте с применением алирина-Б Таб. (табл. 6).
Сорт Царскосельская проявил большую устойчивость к вилту (распространенность 6.6%), чем сорт Боровицкая (13.3%). После однократного осеннего внесения биопрепаратов и перезимовки растений земляники из погибших растений в вариантах с гамаиром Таб. и алирином-Б Таб. был выделен единственный возбудитель болезни - изолят Rhizoctonia sp., характеризующийся наличием ловчих колец.
Таблица 6. Влияние осеннего внесения биопрепаратов алирина-Б Таб. и гамаира Таб. на пораженность земляники садовой корневыми гнилями и вилтом
К-во расте- Распростра-ний после ненность за-
Выпады (%)
Варианты с 29.09.06 г
,г.г.„ перезимовки болевания _по 15.°5.°7 г (%) (%)
Сорт Боровицкая
Контроль Алирин-Б таб. Гамаир Таб.
33.3% 13.3% 16.6
66.7 86.7 83.3
33.3 13.3 16.6
Сорт Царскосельская Контроль 26.7 73.3 26.6 Алирин-Б Таб. 6.7 93.3 6.6 Гамаир Таб. 10.0_900_8.7
Напротив, в контроле в большом количестве присутствовали представители р. Rhizoctonia и Fusarium, P. fragaria, а также сапротрофные бактерии.
Повторное внесение биопрепаратов при той же норме расхода было проведено в период бутонизации растений земляники. При проведении второго учета распространенности и развития болезней из единственного погибшего растения в варианте с алирином-Б был выделен изолят гриба Rhizoctonia sp., а в варианте с гамаиром - изолят гриба Artrobotrys sp. В контроле, в основном, отмечены грибы рр. Rhizoctonia и Fusarium, а также сапротрофные бактерии.
Третий учет погибших растений земляники 4-го года жизни был проведен 24.09.2007 г. (табл. 7).
Результаты учетов за весь период наблюдений свидетельствуют о способности штаммов-продуцентов биопрепаратов
Вестник защиты растений, 2, 2011 эффективно контролировать плотность популяций почвообитающих фитопато-генных видов, что обусловливает высокую биологическую эффективность биопрепаратов алирин-Б и гамаир в подавлении корневых гнилей и увяданий земляники.
Таблица 7. Влияние осеннего и весеннего внесения биопрепаратов алирина-Б и гамаира на пораженность земляники садовой корневыми гнилями и вилтом за период наблюдений с 29.09.06 г. по 24.09.07 г.
Варианты
Выпады (%) за ве-гетацион-ный период 2007 г.
Всего выпадов (%) с 15.09.06 по 24.09.07
Распространенность болезней в конце вегетации (%)
Сорт Боровицкая
Контроль Алирин-Б Таб. Гамаир Таб.
36.6
26.7 30.0
70.0 40.0 46.7
70.0 40.0 46.0
Сорт Царскосельская Контроль 20.0 46.7 46.0 Алирин-Б Таб. 16.7 23.3 23.0 Гамаир Таб._2¿3_33.3_33.0
Анализ литературы и собственные исследования свидетельствуют, что использование микроорганизмов-интроду-центов для подавления плотности популяций почвообитающих фитопатогенных видов - один из наиболее перспективных путей применения биологического метода защиты растений от болезней. Штаммы-продуценты биопрепаратов обладают не только прямым антагонистическим действием на возбудителей болезней за счет комплекса антибиотиков и гидролитических ферментов, но и опосредованно защищают растение за счет фиторегулятор-ной активности и повышения его болезнеустойчивости.
В серии модельных опытов нами убедительно показано, что штаммы S. felleus S-8 и B. subtilis B-10 эффективно подавляют популяцию FOX, причем антигрибное действие внесенных в почву антагонистов более выражено в ризосфере и ризоплане огурца, чем в почве без растений. В ризосфере огурца антагонисты снижали плотность популяции фитопато-гена по сравнению с контролем даже при высокой начальной плотности патогена, хотя и менее эффективно, чем при низ-
Вестник защиты растений, 2, 2011 кой начальной плотности. Наиболее эффективное ингибирование популяции FOX при интродукции микробов-антагонистов наблюдалось в ризоплане растения огурца, что свидетельствует о существенной стимуляции образования БАВ, ответственных за антагонистическую активность штаммов, корневыми выделениями растений.
На культуре земляники садовой ис-
следования показали, что интродукция штаммов микробов-антагонистов В. subtilis В-10 и М-22- продуцентов биопрепаратов алирина-Б и гамаира - существенно влияет на состав комплекса возбудителей почвенной инфекции, улучшает фитосанитарное состояние почвенного биоценоза и эффективно подавляет развитие возбудителей корневой гнилей и увяданий земляники.
Власова Э.А., Кривченко В.И. Методические указания по инвентаризации болезней и микрофлоры культурных и дикорастущих ягодных растений. Л., 1976, 21 с.
Голышин Н.М. Новые средства защиты растений от болезней // Защита растений, 1992, 8, с. 50-54.
Ежов Г.И. Руководство к практическим занятиям по сельскохозяйственной микробиологии: М. Высш. школа, 1981, 271 с.
Жученко А.А. Адаптивное растениеводство (эколого-генетические основы). М., Агрорус, 2008, 1, 814 с.; 2, 1009 с.
Звягинцев Д.Г., Зенова Г.М., Михайлов В.В. Динамика численности и структура видовых популяций актиномицетов - антагонистов в почве // Микробиология, 1982, 51, 2, с. 520-521.
Калинина К.В., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г., Судницын ИИ. Особенности микробных сукцессий в почве в зависимости от уровня влажности // Почвоведение, 1997, 4, с. 518-521.
Калинина К.В., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г. Анализ расписания роста колоний позвоночных бацилл // Микробиология, 1999, 68, 2, с. 232-234.
Кожевин П.А. Микробные популяции в природе. М., МГУ, 1989, 173 с.
Коробкова Т.П., Иваницкая Л.П., Дробышева Т.Н. Современное состояние и перспективы применения антибиотиков в сельском хозяйстве // Антибиотики и медицинская биотехнология, 1987, 8, с. 563-571.
Лагутина Т.М., Воробьев Н.И., Камардин Н.Н. Методические указания по применению мембранных фильтров для изучения экологии микромице-тов в почве (на примере фитопатогенного гриба Verticillium dahliae Kleb.) // СПб, 1992, 49 с.
Литвиненко А.И., Новикова И.И., Седова Е.В., Ключникова В.А. Перспективные антагонисты из родов Bacillus и Streptomyces в защищенном грунте // Защита растений от вредителей и болезней в условиях экологизации сельскохозяйственного производства // СПбГАУ, 1992, c. 46-51.
Новикова И.И. Биологическое обоснование создания и применения полифункциональных биопрепаратов на основе микробов-антагонистов для фи-тосанитарной оптимизации агроэкосистем. Автореф. докт. дисс. СПб, 2005, 47 с.
Новикова И.И. Биоценотическое значение микробов-антагонистов в фитосанитарной оптимизации агроэкосистем // Теоретические основы разработки биологических средств защиты растений, новые отселектированные формы полезных организмов,
Литература
технологии изготовления биологических средств защиты растений и их применения. СПб-Пушкин, 2005, c. 303-332.
Новикова И.И. Биологическое обоснование использования полифункциональных препаратов на основе микробов-антагонистов в защите растений от болезней // Карантин и защита растений, 2005, 2, c. 5-9.
Новикова И.И., Бойкова И.В., Павлюшин В.А., Матевосян Г.Л., Паршин В.Г. Полифункциональные микробиологические препараты для защиты растений / / Информационный бюллетень ВПРС МОББ, СПб, 2002, 33, c. 147-159.
Новикова И.И., Литвиненко А.И., Бойкова И.В. Биологическая эффективность новых микробиологических препаратов алиринов Б и С для защиты растений от болезней в разных природно-климатических зонах // Микология и фитопатология, 2003, 37, 1, с. 92-98.
Новикова И.И., Литвиненко А.И., Калько Г.В. Изучение влияния новых биопрепаратов на основе штаммов микробов-антагонистов на комплекс возбудителей корневых гнилей огурца // Микология и фитопатология, 1995, 29, 6, c. 46-53.
Олескин А.В., Ботвиненко И.В., Цавкелова Е.А. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов // Микробиология, 2000, 69, 3, с. 309-327.
Павлюшин В.А. Основные направления микробиологической защиты растений от болезней. М., 1990, 10 с.
Полозова Н.Л., Литвиненко А.И. Видовой состав грибов возбудителей увядания земляники в Ленин-градскоц обл. Л., 1991, 17 с.
Попов Ф.А. Коммерческие препараты на основе Bacillus subtilis // Защита растений. Минск. «Ураджай», 1990, с. 120-128.
Рзаева С.И. Антибиотики против белой гнили огурца // Защита растений, 1992, 7, c. 25.
Романовская Т.В., Коломиец Э.И., Здор Н.А., Ло-банок А.Г. Биопрепарат энатин с широким спектром антимикробного действия // Прикл. биохимия и микробиол, 2002, 38, 6, с. 669-676.
Сидоренко О.Д. Эффективность бактеризации семян и биокомпоста при выращивании овощных культур и картофеля // Междунар. с.-х. журнал, 1997, 4, с. 53-58.
Смирнов В.В., Сорокулова И.Б., Бережницкая Т.Г., Ваньянц Г.М., Менликиев М.Я., Недорезков В.Д., Минеев М.И., Вахитов В.А., Байгузина Р.М.
Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней. Патент РФ, №2109947, 1998.
Тригер Е.Г., Полянская Л.М., Кожевин П.А. Межмикробные взаимодействия в почве (на примере некоторых популяций стрептомицетов и бактерий) // Микробиология, 1990, 59, 4, с. 688-694.
Шенин Ю.Д., Новикова И.И., Кругликова Л.Ф., Калько Г.В. Характеристика алирина Б, основного компонента фунгицидного препарата, продуцируемого штаммом Bacillus subtilis-10-ВИЗР // Антибиотики и химиотерапия, 1995, 40, 5, c.3-7.
Шенин Ю.Д., Новикова И.И., Каминский Г.В., Иванова И.А. Алириномицин С - новый макролид-ный антибиотик из Streptomyces felleus ВИЗР S-8 // Антибиотики и химиотерапия, 2001, 46, 2, с. 10-16.
Ainworth and Bisby's dictionary of the fungi 8 th ed. /Eds. Hawksworth et al. Cambridge: Univ. Press.
1995, 616 p.
Berdian G. Biologishe Bekampfung ausgewahlter Gemusekrankheiten mittels Trichoderma harzianum // D. Pflanzenschutztag., 23-26 Sept., 1996. Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt. Berlin-Dahlem,
1996, 321, p. 456-457.
Burkhard F., Folker L., Fugmann B. et. al. Antibiotics for plant protection // Chem. Unserer Zeit., 1991, 25, p. 317-330.
Centurion M.A.P., Kimati C., Pereira G.T. Mecanismos de atuacao de antagonistas selecionados para o controle biologico da ferrugem do feijpeiro (Uromyces phaseoli (Reben.) Wint.) / / Cientifica. 1994, 22, 2, p. 174-175.
Collins D., Stevens C., Khan V., Nightengale S. Commercial biopreparations of Bacillus subtilis // Phytopathology, 1994, 4, 10, p. 1114-1119.
Dolej S., Bochow H. Phytosanitare Wirkungen von Bacillus subtilis - Kulturfiltraten im Pathosystem Tomate - Fusarium oxysporum / / Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt.Berlin-Dahlem, 1996, 321, p. 459-463.
Guesler L.J., Yuen G.Y. Evaluation of Stenotrophomonas maltophilia strain C3 for
Вестник защиты растений, 2, 2011 biocontrol of brown patch disease / / Crop protection, 1998, 17, 6, p. 509-513.
Jones C.R., Samac D.A. Biological control of fungi causing alfalfa seedling damping-off with a disease-supressive strain of Streptomyces / / Biological control, 1996, 7, 2, p. 196-204.
Kurek E., Jaroszuk J., Puacz E., Boczula K. Application of bacterial strains producing antifungal antibiotics against Fusarium strains in the rhisosphere of cereals / / Zeszyty nauk. Akad. Roln. Szczecin., 1994, 161, p. 99-100.
Lipkin R. Bacterial chatter. How patterns reveal clues about bacterias chemical communication // Sci. News., 1995, 147, p. 136-141.
Lynch J.M., Crook N.E. Rhizosphere bacteria and their antibiotics as a factors of biological control // Chem. Brit., 1992, 28, p. 42-45.
Marrone P.G., Heins S., Manker D. Biological control of plant fungal infections. Патент США, 6004774, 1999.
Novikova I., Shenin Yu.D. Alirin B and Alirin C -new antifungal antibiotics from Bacillus subtilis and Streptomyces felleus // 1-st Inter. Conf. On Chem. of Antibiotics and related products, 1998, p. 57.
Phae C.G., Sasaki M., Shoda M., Kubota H. Characteristics of Bacillus subtilis isolated from composts suppressing phytopathogenic microorganisms // Soil sci. plant nutrit.,1990, 36, 4, p. 575-586.
Raatikainen O., Tuomisto J., Rosenqvist H. Polyene production of antagonistic Streptomyces species isolated from Sphagnum peat // Agr. Sci. in Finland, 1993, 2, 6, p. 559-560.
Roberts D.R., Dery P., Herbar P.K., Mao M., Lumsden R.D. Biological control of damping-off of cucumber caused by Pythium ultimum with a root-colonization-deficient strain of Escherichia coli // Blackwell Sci., 1997, 145, 8, p. 383.
Youssef Y.A., El-Tarabily K.A., Hussein A.M. Plectosporium tabacinum root rot disease of white lupine and its biological control by Streptomyces species // J. Phytopathol., 2001, 149, 1, p. 29-33.
EFFICACY OF ROOT ROT AND VILT BIOCONTROL BY PESTICIDES ON THE BASIS OF MICROBE-ANTAGONISTS AND THEIR INFLUENCE ON SOIL MICROMYCETE SPECIES COMPOSITION I.I.Novikova, A.I.Litvinenko Results of biological efficacy estimation of introduced microbe-antagonistic strains are presented. The estimation has shown that population density of introduced microbe-antagonistic strains influences on the soil population dynamics of Fusarium oxysporum Schlecht. The species composition of soil living phytopathogenic fungi in cucumber and garden strawberry agrobiocenoses was studied in model experiments. It is shown that the biopreparation application is an effective way of soil living phytopa-thogenic fungi population density regulation.
Keywords: microbe-antagonist, biopreparation, phytopathogenic fungi, introducing, population density, root rot, vilt.
И.И.Новикова, д.б.н., АИ.Литвиненко, к.б.н. [email protected]
