CC BY
16УДК 577.1+591.4/616.311+612-029
DOI http://dx.doi.org/10.5281/zenodo.1240730
Д. К. Косенко, *А. Ю. Усенко, И. К. Новицкая, *И. М. Савицкая, *Е. К. Ткаченко
БИОХИМИЧЕСКОЕ И ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ РЕЗЕКЦИИ ЖЕЛУДКА
Государственное учреждение «Институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Национальной академии медицинских наук Украины», Одесса;
Государственное учреждение «Национальный институт хирургии и трансплантологии им. А. А. Шалимова Национальной академии медицинских наук Украины; Киев
Summary. Kosenko D. K., Usenko A. Ju., Novitskaja I. K., Savitskaja I. M., Tkachenko E. K. BIOCHEMICAL AND GISTOMORPHOLOGICAL STUDY OF THE EXPERIMENTAL ANIMALS ORAL CAVITY MUCOUS MEMBRANE AFTER THE STOMACH RESECTION. - State Enterprise "Institution for dentistry and maxillofacial surgery of National academy of medical sciences of Ukraine", Odessa; e-mail: [email protected]. The objective: to study influence of a stomach resection on the condition of oral cavity mucous membrane (MMOC) of experimental animals with application of biochemical, histological and histochemical methods of research. Materials and methods. Researches are conducted on adult white rats animals to whom didn't carry out surgeries, have made control group, animals with a stomach resection - basic group. Results. At animals after a gastrectomy in MMOC processes of free radical oxidation of lipids became more active, activity of antioxidant enzymes has decreased, activity of sour phosphates has increased; considerable changes of dystrophic and inflammatory character were observed that was shown in vakuolny dystrophy and a hyperkeratosis of own plate of a mucous membrane. Conclusion. Results biochemical and the pathomorphology of researches of rats have synchronously confirmed development of inflammatory process in a gum of rats to whom performed operation of a stomach resection.
Key words: resection of a stomach, MMOC, biochemistry, gistomorphology.
Реферат. Косенко Д. К., Усенко О. Ю., Новицкая И. К., Савицкая И. М., Ткаченко Е. К. БИОХИМИЧЕСКОЕ И ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ РЕЗЕКЦИИ ЖЕЛУДКА. Цель исследований: изучить влияния резекции желудка на состояние слизистой оболочки полости рта (СОПР) экспериментальных животных с применением биохимических, гистологических и гистохимических методов исследования. Материалы и методы. Исследования проведены на половозрелых белых крысах Животные, которым не проводили оперативных вмешательств, составили контрольную группу, животные с резекцией желудка - опытную группу. Результаты исследований. У животных после гастроэктомии в СОПР активизировались процессы свободно-радикального окисления липидов, снизилась активность антиоксидантных ферментов, увеличилась активность кислой фосфатазы; наблюдались значительные изменения дистрофического и воспалительного характера, что проявилось в вакуолярной дистрофии и гиперкератозе собственной пластинки слизистой оболочки. Заключение. Результаты биохимических и патоморфологических исследований крыс синхронно подтвердили развитие воспалительного процесса в десне крыс, которым проводили операцию резекции желудка.
Ключевые слова: резекция желудка, СОПР, биохимия, гистоморфология.
© Косенко Д. К., Усенко О. Ю., Новицкая И. К., Савицкая И. М., Ткаченко Е. К.
Реферат. Косенко Д. К., Усенко О. Ю., Новицька I. К., Савицька I. М., Ткаченко £. К. БЮХЕШЧНЕ I Г1СТОМОРФОЛОГ1ЧНЕ ВИВЧЕННЯ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ РОТОВО1 ПОРОЖНИНИ У ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ТВАРИН П1СЛЯ РЕЗЕКЦП ШЛУНКУ. Мета дослщжень полягала у вивченнi впливу резекцп шлунку на стан слизово! оболонки порожнини рота (СОПР) експериментальних тварин iз застосуванням бiохiмiчних, пстолопчних i гiстохiмiчних методiв дослiдження. Матер1али 1 методи. Дослiдження проведенi на статевозрiлих бiлих щурах. Тварини, яким не провели оперативних втручань, склали контрольну групу, тварини з резекщею шлунку - дослiдну групу. Результати дослвджень. У тварин пiсля гастроектоми в СОПР активiзувалися процеси в№но-радикального окислення лiпiдiв, знизилася активнiсть антиоксидантних ферментiв, збiльшилася активнiсть кисло! фосфатази; спостерталися значнi змiни дистрофiчного i запального характеру, що проявилося у вакуолярнш дистрофи i гiперкератозi власно! пластинки слизово! оболонки. Висновок. Результати бiохiмiчних i патоморфологiчних дослвджень щурiв синхронно пiдтвердили розвиток запального процесу в яснах щурiв, яким проводили операцш резекцi! шлунку.
Ключов1 слова. резекщя шлунку, СОПР, бiохiмiя, пстоморфолопя.
По данным литературы резекция желудка является распространенной хирургической операцией. Основная причина - злокачественные опухоли, язвенная болезнь желудка [1-3]. В настоящее время достаточно широко применяется гастроэктомия для уменьшения объема желудка у тучных людей [4]. Следует отметить, что частичная резекция желудка в большинстве случаев не приводит к нарушению пищеварительной функции, однако встречаются и осложнения [5].
Вместе с тем, следует отметить, что в научной литературе мало сообщений о влиянии резекции желудка на развитие стоматологической патологии.
Одним из важных моментов доказательной медицины являются экспериментальные исследования, в том числе, и при резекции внутренних органов [6]. Поэтому мы посчитали целесообразным провести гистоморфологическое исследование слизистой оболочки полости рта на лабораторных животных.
Цель настоящих исследований. Изучение влияния резекции желудка на состояние слизистой оболочки полости рта (СОПР) экспериментальных животных с применением биохимических, гистологических и гистохимических методов исследования
Материалы и методы исследования. Исследования проводились ГУ «НИХТ имени А.А.Шалимова» НАМН Украины, на половозрелых белых крысах (возраст 3,5-4 месяца). Животные, которым не проводили оперативных вмешательств, составили контрольную группу (6 крыс, 1-я группа), животные с резекцией желудка - опытную группу (7 крыс, 2-я группа). Перед введением в эксперимент животные обеих групп не имели существенных отклонений в поведенческих реакциях и массе тела.
В течение всего послеоперационного периода проводилось наблюдение за животными. Перед эвтаназией проведен внешний осмотр животных, их взвешивание, а также визуальное изучение состояния слизистой оболочки полости рта и зубов, а также пальпаторное обследование больших слюнных желез.
Затем животным вводили тиопентал натрия (20 мг/кг) с последующей эвтаназией методом тотального кровопускания. Для гистологического и гистохимического изучения взяты фрагменты альвеолярной СО во фронтальном участке (губная часть) и дистальных отделов нижней челюсти (щечная часть).
В гомогенатах слизистой оболочки и альвеолярной кости изучали состояние антиоксидантно-прооксидантной системы: содержание малонового диальдегида [7], активность ферментов - каталазы [8], глютатион-редуктазы (ГР) [9] и глютатион-пероксидазы (ГПО) [10], а также активность ферментов кислой фосфатазы (КФ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) [11].
Для гистоморфологического исследования фрагменты слизистой оболочки (СО) фиксировали в 4-7%-ном растворе нейтрального формальдегида, уплотняли заливкой в парафин по общепринятой методике. Срезы толщиной 5-8 мкм получали с помощью санного и роторного микротомов. Для изучения общей гистологической картины срезы окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином. Коллагеновые волокна соединительной
ткани выявляли по методу Ван Гизона [12].
Гистохимический метод применялся для определения полисахаридов. Использован принцип ШИК-реакции. Полисахариды выявляются путем реакции, окисляющей спиртные группы, которые преобразуются в альдегидные группы, с последующим отождествлением путем цветной реакции реагентом Шифф. Цитохимия доказала, что среди морфологически одинаковых клеток имеются существенные химические и ферментативные различия [13].
Результаты исследований и их обсуждение. Осмотр полости рта животных до эвтаназии показал, что у большинства крыс СОПР розовая. Однако были выявлены животные и с ярко красным цветом, свидетельствующим о наличии воспаления, особенно в губной части альвеолярной СОПР: у 1-го животного контрольной группы и 4-х крыс -группы «резекция желудка» (16,7 % и 66,7 % - соответственно).
Биохимические показатели слизистой десны у животных после гастроэктомии изменились следующим образом (табл.): по сравнению с интактными животными активизировались процессы свободно-радикального окисления липидов, о чем свидетельствует увеличение содержания МДА - промежуточного продукта ПОЛ (отличие достоверно); активность же антиоксидантных ферментов - каталазы, ГР и ГПО снизилась, но незначительно. Последнее указывает на то, что система антиоксидантной защиты устойчива и имеет резерв для ингибирования окисления липидов.
Таблица
Биохимические показатели СО десны у животных после резекции желудка (М±м)
Биохимические показатели Группы животных
1-я (контроль) 2-я (гастроэктомия)
Содержание МДА (нмоль/г) 58,3±1,66 63,9±0,46 Р<0,01
Активность каталазы (нкат/г) 89,8±14,9 76,3±13,4 Р>0,05
Активность ГР (нмоль/с*г) 2,42±0,78 2,08±0,20 Р >0,05
Активность ГПО (мкмоль/с*г) 115,0±22,3 92,3±12,6 Р>0,05
Активность КФ(нкат/г) 6,6±1,86 22,5±0,60 Р<0,001
Активность ЩФ (нмоль/с*г) 1509±87,7 1660±132Р >0,05
Примечание: достоверность отличий - Р - рассчитана по отношению к показателям группы контроля.
Активность кислой фосфатазы в десне увеличилась в 3,4 раза в опытной группе животных, что свидетельствует о наличии активного воспалительного процесса.
Что касается активности щелочной фосфатазы, то достоверные изменения по сравнению с контрольной группой не выявлено. На основании биохимических исследований был сделан вывод о развитии воспалительного процесса в десне крыс после проведения операций резекции желудка, что проявилось в активизации ПОЛ и повышении активности кислой фосфатазы.
Результаты гистоморфологических СОПР представлены на рис. 1-8. У контрольной группы крыс слизистая оболочка имела типичное для грызунов строение, представленная многослойным плоским ороговевающим эпителием, характерной особенностью которого является наличие тонкого рогового слоя, который истончается, практически исчезая, по направлению к верхушке альвеолярной кости. Четко выявляется базальная мембрана. Эпителиальные клетки четко дифференцированы по слоям. В поверхностно расположенных клетках выявляются зерна кератогиалина (рис. 1 -4).
Рис. 1. Группа животных «контроль». Слизистая оболочка десны крысы (губная часть). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 100
Рис. 2. Группа животных «контроль» Слизистая оболочка десны крысы (щечная часть).
ШИК-реакция. Увеличение 100.
Рис. 3. Группа животных «контроль». Слизистая оболочка десны крысы (щечная часть). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 400
Рис. 4. Группа животных «контроль» Слизистая оболочка десны крысы (щечная поверхность). ШИК-реакция. Увеличение 400.
После резекции желудка отмечалась значительная кератинизация (гиперкератоз). Эпителиоциты росткового слоя подвергались дистрофическим изменениям (признаки мутного набухания), границы клеток слабо контурировались. Собственная пластинка слизистой оболочки уплотнялась, что хорошо прослеживалось на срезах после проведенной ШИК-реакции (рис. 5 - 8).
Рис. 5. Группа животных «резекция желудка». Значительное утолщение эпителиальной пластинки слизистой оболочки с резким утолщением рогового слоя (гиперкератоз). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 100.
Рис. 6. Группа животных «резекция желудка». Значительное утолщение эпителиальной пластинки слизистой оболочки с резким утолщением рогового слоя (гиперкератоз). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 400.
Рис. 7. Группа животных «резекция желудка». Значительное утолщение рогового слоя эпителиальной пластинки слизистой оболочки десны, уплотнение собственной пластинки и ее выраженная ШИК-позитивность. ШИК-реакция. Увеличение 100.
Рис. 8. Группа животных «резекция желудка». Дистрофические изменения эпителиоцитов, уплотнение собственной пластинки слизистой оболочки и ее выраженная ШИК-позитивность. ШИК-реакция. Увеличение 400.
Обобщая результаты гистологических и гистохимических исследований следует отметить, что у животных после резекции желудка в слизистой оболочке десны наблюдались значительные изменения дистрофического и воспалительного характера. Это проявилось в вакуолярной дистрофии и гиперкератозе собственной пластинки слизистой оболочки.
Таким образом, результаты биохимических и патоморфологических исследований крыс синхронно подтвердили развитие воспалительного процесса в десне крыс, которым проводили операцию резекции желудка.
Литература:
1. Шалимов А. А. Атлас операций на пищеводе, желудке и двенадцатиперстной кишке / А.А.Шалимов, В.Н.Полупан. - Москва: Изд-во «Медицина», 1975 г.-306 с.
2. Hu X. Laparoscopic distal gastrectomy with Billorth I reconstruction for gastric cancer: small incision assisted vs. total laparoscopy. Small incision assisted laparoscopic operation / X.Hu // Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi. - 2015. - Vol. 18. - №8. - Р. 770-771
3. Сажин И.В. Лапароскопическая резекция желудка при язвенной болезни / И.В. Сажин, В.П. Сажин, А.В. Нуждихин // Хирургия. Журнал им.Н.И.Пирогва. - 2014. -№ 4. -С. 8-10.
4. Яшков Ю.И. Эффективность лапароскопической продольной резекции желудка у больных ожирением / Ю.И. Яшков, О.Э. Луцевич, Н.С. Бордан, О.В. Ивлева //Ожирение и метаболизм. - 2015. -Т.12, №1. - С. 20-28
5. Зубарев П.Н. Пострезекционные и постгастроэктомические болезни / Зубарев П.Н., Кочетков А.В. // Практическая онкология: избранные лекции. — СПб.: Центр ТОММ,2004.
- С. 465-472.
6. Гистоморфологическая характеристика бедренной кости крыс при моделировании резекции желудка по методу Бильрот-II / Ш.А. Сапаева, Р.Ю. Рузибаев, У.А. Рузметов [и др.] // Вестник проблем биологии и м едицины. - 2013. - № 1. - С. 199-201
7. Метод определения диеновых конъюгаций ненасыщенных высших жирных кислот / [И. Стальная, Т. Гаришвили ] // Современные методы биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича.
- М. - 1977. - С.63-64.
8. Королюк М. А. Метод определения активности каталазы / М. Королюк, Д. Иванова, И. Майорова // Лабораторное дело. - 1988. - №1. - С. 16-18.
9. Путилина Е. Ф. Определения активности глутатион-редуктазы / Путилина Е. Ф. // Методы биохимических исследований. - М.: Ин. Лит. - 1982. - С.181-183.
10. Способ определения активности глутатион-пероксидазы в биологических тканях / Пахомова В., Козлянина Н., Крюкова Г. // Патент А.С.922637 СССР. МКИ 01 33/48.- Опубл. 25.04.82, Бюл. № 15. - 2 с.
11. Левицкий А. П. Сравнительная оценка трёх методов определения активности фосфатаз слюны человека / А. Левицкий, А. Марченко, Т. Рыбак // Лабораторное дело. -1972. - №10. - С. 624-625.
12. Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники / Меркулов Г. А.. - Изд. 5-е испр. и доп.- Л.: Медицина, Ленингр. отд-ние, 1969. - 424 с.
13. Кононский А. И. Гистохимия /Кононский А. И.- Киев, Вища школа, 1976. - 280 с.
References:
1. Shalimov A. A., Polupan V. N. Atlas operacij na pishhevode, zheludke i dvenadcatiperstnoj kishke. [Atlas operations on the esophagus, stomach and duodenum]. Moskva: Izd-vo «Medicina»; 1975:306.
2. Hu X. Laparoscopic distal gastrectomy with Billorth I reconstruction for gastric cancer: small incision assisted vs. total laparoscopy. Small incision assisted laparoscopic operation. Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi. 2015;8(18):770-771
3. Sazhin I.V., Sazhin V.P., Nuzhdihin A.V. Laparoscopic gastric resection in peptic ulcer disease. Hirurgija. Zhurnal im. N. I .Pirogva. 2014;4:8-10.
4. Jashkov Ju.I., Lucevich O.Je., Bordan N.S., Ivleva O.V. The effectiveness of laparoscopic longitudinal resection of the stomach in obese patients. Ozhirenie i metabolizm. 2015;1(12): 20-28.
5. Zubarev P.N., Kochetkov A.V. Postrezekcionnye i postgastrojektomicheskie bolezni.
Prakticheskaja onkologija: izbrannye lekcii. [Post-resection and post-gastrectomy diseases. Practical Oncology: selected lectures.]. SPb.: Centr TOMM; 2004:465-472.
6. Sapaeva Sh.A., Ruzibaev R.Ju., Ruzmetov U.A. i dr. Histomorphological characteristics of the rat femur in modeling of stomach resection by Bilrot-II method. Vestnik problem biologii i mediciny. 2013;1:199-201.
7. Stal'naja I., Garishvili T., Orehovich V.N. Metod opredelenija dienovyh kon#jugacij nenasyshhennyh vysshih zhirnyh kislot. Sovremennye metody biohimii. [Method of determination of diene conjugation of unsaturated higher fatty acids. Modern methods of biochemistry]. Мoskva; 1977:63-64.
8. Koroljuk M. A., Ivanova D., Majorova I. Method of determination of catalase activity. Laboratornoe delo. 1988;1:16-18.
9. Putilina E. F. Opredelenija aktivnosti glutation-reduktazy. Metody biohimicheskih issledovanij [Determination of glutathione reductase activity. Methods of biochemical research]. M.: In. Lit. 1982:181-183.
10. Pahomova V., Kozljanina N., Krjukova G. Sposob opredelenija aktivnosti glutation-peroksidazy v biologicheskih tkanjah. [A method for determining the activity of glutathione peroxidase in biological tissues.] A .S 922637 USSR. MKI 01 33/48.- Opubl. 25.04.82, Bjul. 15:2.
11. Levickij A. P., Marchenko A., Rybak T. Comparative evaluation of three methods for determining the activity of phosphatases of human saliva. Laboratornoe delo. 1972;10:624-625.
12. Merkulov G. A. Kurs patologogistologicheskoj tehniki [Course patologicheskoi technology]. Izd. 5-e ispr. i dop.- L.: Medicina, Leningr. Otdelenie; 1969:424.
13. Kononskij A. I. Gistohimija [Histochemistry]. Kiev, Vishha shkola; 1976:280.
Работа поступила в редакцию 28.02.2018 года.
Рекомендована к печати на заседании редакционной коллегии после рецензирования
УДК 616.71- 007.234 - 076 : 616.61 - 036 DOI http://dx.doi.org/10.5281/zenodo.1240748
В. Ф. Черемгсгна
ФУНКЦЮНАЛЬНА АКТИВН1СТЬ ТРОМБОЦИТ1В У ЩУР1В ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМУ МОДЕЛЮВАНН1 Г1НГ1В1ТУ
Нацюнальний фармацевтичний унiверситет, м. Харшв
Summary. Cheremisina V. F. FUNCTIONAL ACTIVITY OF PLATELETS IN RATS AT EXPERIMENTAL GINGIVITIS. - National Pharmaceutical University, Kharkov, Ukraine; e-mail: [email protected]. The results of the study of the functional activity of thrombocytes in rats with experimental gingivitis at an aggregation inducer concentration (ADP) of 2.5 and 10.0 ^mol / L are presented. It is established that at gingivitis the aggregation properties of platelets change, microcirculation and regional blood circulation is disturbed, which indicates the initial process of remodeling of connective periodontal tissue.
Key words: experimental gingivitis, platelets aggregation.
Реферат. Черемисина В. Ф. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ У КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МОДЕЛИРОВАНИИ ГИНГИВИТА. В работе представлены результаты изучения функциональной активности тромбоцитов у крыс с экспериментальным гингивитом при концентрации индуктора агрегации (АДФ) 2,5 и 10,0 мкмоль / л. Установлено, что при гингивите изменяются
© Черемюша В. Ф.
