CC BY
30
В.С. Власенко, А.Н. Новиков, Г.П. Неворотова, Е.М. Шулико, Т.С. Реутова ; Мин-во с.-х. и продовольствия Омской области, Всерос. науч.-ис-след. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. -№ 2007139594 ; заявл. 25.10.2007 ; опубл. 10.09.2009. Изобретение № 25.
19. Петров Р.В. Искусственные антигены и вакцины / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов. - М. : Медицина, 1988. - 288 с.
20. Патент 2478399 РФ, МПК А61К 39/04, А61К 47/48. Способ получения специфического иммуномодулятора / М.А. Бажин, А.Н. Новиков, В.С. Власенко, Г.П. Неворотова, С.Ю. Петров, Е.М. Шулико, В.А. Назарова ; Всерос. науч.-ис-след. ин-т бруцеллеза и туберкулеза животных. -№ 2011124695 ; заявл. 16.06.2011 ; опубл. 10.04.2013. Изобретение № 10.
Бажин Михаил Аристоклевич, д-р вет. наук, проф., ФГБНУ ВНИИБТЖ; Власенко Василий Сергеевич, д-р биол. наук, доц., ФГБНУ ВНИИБТЖ, [email protected]; Неворотова Галина Петровна, мл. науч. сотр., ФГБНУ ВНИИБТЖ.
УДК 619:616:577
В.И. Герунов, Д.С. Теущаков, Я.В. Горошенко
V.S. Vlasenko, A.N. Novikov, G.P. Nevorotova, E.M. Shuliko, T.S. Reutova ; Min-vo s.-kh. i prodovolstviya Omskoy oblasti, Vseros. nauch.-issled. in-t brutselleza i tuberkuleza zhivotnykh. -№ 2007139594 ; zayavl. 25.10.2007 ; opubl. 10.09.2009. Izobreteniye № 25.
19. Petrov R.V. Iskusstvennyye antigeny i vak-tsiny / R.V. Petrov, R.M. Khaitov. - M. : Meditsina, 1988. - 288 s.
20. Patent 2478399 RF. MPK A61K 39/04. A61K 47/48. Sposob polucheniya spetsificheskogo immunomodulyatora / M.A. Bazhin, A.N. Novikov, V.S. Vlasenko, G.P. Nevorotova, S.Yu. Petrov, E.M. Shuliko, V.A. Nazarova ; Vseros. nauch.-issled. in-t brutselleza i tuberkuleza zhivotnykh. -№ 2011124695 ; zayavl. 16.06.2011 ; opubl. 10.04.2013. Izobreteniye № 10.
Bazhin Mikhail Aristoklievich, Dr. Vet. Sci., Prof., All-Russian Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals; Vlasenko Vasily Ser-geevich, Dr. Biol. Sci., Ass. Prof., All-Russian Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals, [email protected]; Nevorotova Galina Pe-trovna, Junior Researcher, All-Russian Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals.
БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫВОРОТКИ КРОВИ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ МОРСКИХ СВИНОК ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ПОТРЕБЛЕНИИ МОЛОКА С ДОБАВЛЕНИЕМ МУРАВЬИНОЙ КИСЛОТЫ
Применение органических кислот в животноводстве эффективно и экономично. Они повышают санитарное качество кормов, улучшают пищеварение животных, стабилизируют микрофлору желудочно-кишечного тракта. В настоящее время внедряется технология сквашивания молока для выпойки телят раствором муравьиной кислоты. Однако сведения о профилактической эффективности и безопасности такого молока крайне противоречивы. Цель исследования - установить биохимические показатели крови и патоморфологические изменения во внутренних органах у морских свинок при длительном выпаивании молока с добавлением муравьиной кислоты. Исследование проведено на 20 морских свинках - самцах в возрасте 6 мес. с массой тела 580-660 г, содержащихся в условиях вивария на стандартном рационе. Все животные были разделены на 2 группы (контрольную и опытную) по 10 особей в каждой. В эксперименте использовали молоко, которое сквашивали 8,5%-ным раствором муравьиной кислоты из расчета 20 мл на 1 л при комнатной температуре и многократно перемешивали в течение 6-12 ч. Животным опытной группы молоко с добавлением муравьиной кислоты выпаивали ежедневно в объеме 40-50 мл
©|Герунов В.И., Теущаков Д.С., Горошенко Я.В., 2016
на 1 гол в течение 30 дн. Контрольные морские свинки получали свежее молоко. Забор крови для проведения исследования осуществляли из сердца через 30 сут после начала опыта. По окончании эксперимента всех животных подвергали убою и патолого-анатомическому исследованию. Результаты модельных экспериментов свидетельствуют: длительное выпаивание животным молока с добавлением муравьиной кислоты вызывает хроническое воспаление желудочно-кишечного тракта с преимущественным поражением толстой кишки. Результаты биохимического исследования сыворотки крови и патоморфоло-гическая картина указывают на гепато- и нефротоксическое действие муравьиной кислоты, это необходимо учитывать при внедрении в производство описанной схемы профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят
Ключевые слова: органические кислоты, муравьиная кислота, молоко, морские свинки.
Введение
Профилактика инфекционных заболеваний животных остается приоритетной задачей ветеринарных специалистов на всех этапах развития сельскохозяйственного производства.
Для повышения санитарного качества кормов и стабилизации микрофлоры желудочно-кишечного тракта у молодняка широко используют органические кислоты. Муравьиная кислота известна в качестве консервирующего агента при заготовке корма. Она замедляет процессы гниения и распада, поэтому сено и силос, обработанные ею, дольше сохраняются [1]. В настоящее время в отдельных хозяйствах внедряется технология сквашивания муравьиной кислотой молока для выпойки телят [2]. Заранее приготовленный корм одновременно может быть разлит в индивидуальные поилки на любое количество животных, он не портится и не теряет своих качеств в течение трех суток.
Однако сведения о профилактической эффективности и безопасности муравьиной кислоты крайне противоречивы [3-5].
В связи с этим была поставлена цель - установить биохимические показатели сыворотки крови и патоморфологические изменения во внутренних органах у морских свинок при длительном выпаивании молока с добавлением муравьиной кислоты.
Объекты и методы
Исследование проводили на 20 морских свинках - самцах в возрасте 6 мес. с массой тела 580-660 г, содержащихся в условиях вивария на стандартном рационе. Все животные были разделены на 2 группы (контрольную и опытную) по 10 особей в каждой. В эксперименте использовали молоко, которое сквашивали 8,5% -ным раствором муравьиной кислоты из расчета 20 мл на 1 л при комнатной температуре и многократно перемешивали в течение 6-12 ч. Животным опытной группы молоко с добавлением муравьиной кислоты выпаивали ежедневно в объеме 40-50 мл на 1 гол в течение 30 дн. Контрольные морские свинки получали свежее молоко. Забор крови для проведения исследования осуществляли из сердца через 30 сут после начала опыта [6]. По окончании эксперимента всех животных подвергали убою и патолого-анатоми-ческому исследованию. Все манипуляции осуществляли согласно правилам биоэтики, утвержденным Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для лабораторных целей.
Макроскопическую оценку органов проводили сразу после убоя морских свинок. Для изучения общей гистоморфологической картины патматериал фиксировали в 4%-ном нейтральном растворе формальдегида. Срезы получали с парафиновых блоков и окрашивали гематоксилином и эозином.
Биохимические исследования сыворотки крови проведены на автоматическом биохимическом анализаторе «SCREEN MASTER-PLUS» фирмы Hospitex diagnostics (Италия).
Статистически обрабатывали данные с использованием программы Statistica 6.0 («StatSoft», США). Для оценки достоверности различий между независимыми выборками использовали непараметрический критерий Манна - Уитни. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.
Результаты исследований
Ежедневное выпаивание морским свинкам молока с добавлением муравьиной кислоты приводит через 30 дн. к развитию изменений во внутренних органах (желудочно-кишечном тракте, печени, почках, сердце).
При макроскопическом исследовании желудка у всех морских свинок опытной группы зарегистрированы признаки хронического катарального воспаления. Сосуды стенки желудка умеренно наполнены кровью, на слизистой оболочке значительное количество мутноватой слизи вязкой консистенции. Слизистая оболочка складчатая, окрашена в серый цвет, складки желудка плохо расправляются. При гистоисследовании выявляются изменения, характерные для гипертрофического катара, отмечаются разращения соединительной ткани. Многие клетки покровного эпителия в состоянии слизистой дистрофии. В слизистом секрете выявлены десквамированные эпителиальные клетки и лейкоциты в разных стадиях распада.
Слизистая оболочка кишечника морских свинок, получавших молоко с добавлением муравьиной кислоты, также в состоянии хронического катарального воспаления. Содержимое кишечника с примесью значительного количества слизи. Почти у всех животных опытной группы слизистая оболочка толстой кишки была набухшей, с отдельными кровоизлияниями по типу петехий и экхимозов, что свидетельствует о выраженном раздражающем действии муравьиной кислоты.
Печень увеличена, дряблой консистенции, серого или серо -желтого цвета, малокровная. При ее микроскопическом исследовании выявлена зернистая и жировая дистрофия гепатоцитов. Они имели округлую форму, зернистую или ячеистую цитоплазму. У многих гепатоцитов ядра в состоянии пикноза, рексиса или лизиса. Дистрофия гепатоцитов ярче выражена в центре печеночных долек.
У некоторых животных выявлена токсическая дистрофия печени. Она несколько увеличена в объеме, рисунок пестрый, мозаичный: на красно-коричневом фоне видны участки неправильной формы серо- и бело-желтого цвета. При гистологическом исследовании органа отмечена белково-жировая дистрофия гепатоцитов. Многие клетки в центральной зоне печеночной дольки некротизированы. Внутридольковые кровеносные сосуды переполнены кровью, имеются очаговые кровоизлияния. На периферии долек многие гепатоциты в состоянии зернистой, жировой дистрофии.
Почки у морских свинок увеличены, серого цвета, с тусклой поверхностью разреза. При гистологическом исследовании выявлена картина, характерная для зернистой дистрофии.
Сердце также было вовлечено в патологический процесс. Окраска миокарда неоднородная, тусклая. Поверхность разреза стенки желудочков серо -красная. При гистологическом исследовании отмечено, что отдельные волокна миокарда набухшие, неоднородно окрашенные, поперечная исчерченность отсутствует.
Повреждающее действие кислот зависит от концентрации и длительности контакта с тканями. Сильные органические кислоты при непосредственном контакте с клетками действуют разрушающе, вызывая необратимые изменения в состоянии коллоидов. Эффект обусловлен водородными ионами, образующимися в водных растворах при диссоциации [7].
Результаты биохимического исследования сыворотки крови представлены в таблице.
Биохимические показатели сыворотки крови морских свинок при выпаивании молока с добавлением 8,5%-ного раствора муравьиной кислоты, Ме ^1; Q2), п = 10
Показатель Опыт Контроль
АлАТ 42,7 (41,0; 46,5) 25,1 (23,7; 27,0) *
АсАТ 47,3 (42,5; 51,5) 37,1 (36,3; 40,2) *
ГГТ 12,45 (11,8; 12,7) 8,0 (7,7; 8,3) *
Креатинин 8,3 (7,6; 8,8) 5,4 (5,3; 5,7) *
Мочевина 54,05 (47,6; 58,6) 44,6 (43,4; 47,0) *
Щелочной резерв 55,6 (55,3; 58,6) 87,2 (79,8; 91,3)
* p < 0,05.
Ежедневное потребление морскими свинками молока с муравьиной кислотой вызывает повышение активности миокардиальных (АсАТ) и печеночных (АлАТ) ферментов. Внесердечной причиной увеличения содержания в сыворотке крови АсАТ может быть и поражение печени [8], что подтверждают высокие уровни АлАТ и ГГТ.
Повышение концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови указывает на вовлечение в патологический процесс с нарушением их фильтрационной способ -ности. Изменение щелочного резерва не является статистически значимым.
Заключение
Интенсивные технологии выращивания молодняка сельскохозяйственных животных предусматривают широкое использование органических кислот в кормлении животных. Высокоэкономичной является технология сквашивания сборного молока 8,5%-ным раствором муравьиной кислоты. Однако результаты модельных экспериментов свидетельствуют: длительное выпаивание такого молока животным вызывает хроническое воспаление желудочно-кишечного тракта с преимущественным поражением толстой кишки.
Результаты биохимического исследования сывороток крови и патоморфологичес -кая картина указывают на гепато- и нефротоксическое действие муравьиной кислоты, что необходимо учитывать при внедрении в производство описанной схемы профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят.
V.I. Gerunov, D.S. Teushchakov, Ya. V. Goroshenko
Biochemical indicators of blood serum and pathomorphological changes in guinea pigs' viscera in case of long-term consumption of milk added with formic acid
Use of organic acids in livestock production is effective and economic. They increase sanitary quality of forages, improve digestion in animals, stabilize digestive tract microflora. Currently milk fermentation technology with a solution of formic acid for feeding calves is being implemented. However data on protective efficacy and safety of such milk are extremely contradictory. The purpose of research is to determine biochemical indicators of blood as well as pathomorphological changes in guinea pigs' inner organs in case of long-term consumption of milk added with formic acid. The research was conducted on 20 male guinea pigs at the age of 7 months with the body weight of 580-660 g reared in vivarium conditions on a standard diet. All animals were divided into 2 groups (control and experimental) per 10 specimens in each. In experiment there was used milk that was soured with 8,5% solution of formic acid in an amount of 20 ml to 1 liter at room temperature and repeatedly stirred for 6-12 hours. The animals of the experimental group were fed with milk fermented with formic acid daily in a volume of 40-50 ml per head for 30 days. Control guinea pigs received fresh milk. Blood sampling for a research was taking from heart in 30 days after the beginning of a trial. After the experiment all animals were subjected to slaughtering and pathomorphological research. Results of model tests demonstrate that the long-
term consumption of milk added with formic acid causes a chronic inflammation of digestive tract mainly in the large intestine. The results of biochemical analysis of blood serum and pathological picture indicate hepato- and nephrotoxic effects of formic acid, which should be considered in the implementation of the described scheme for the prevention of gastrointestinal disorders in calves.
Keywords: organic acids, formic acid, milk, guinea pigs.
Список литературы
1. Мухамедянов М.М. Определение степени токсичности консервантов для зеленых трав из побочных продуктов синтеза хлороформа и гидролиза древесины / М.М. Мухамедянов // Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства. - 2004. - № 1. - С. 151.
2. Рациональная система выращивания молочных пород скота / В.Т. Головань [и др.] // Науч. журн. КубГАУ. - 2007. - № 31. -С. 147-161.
3. Крюков В.С. Взаимосвязь кислотосвязы-вающей способности и электролитного баланса кормов / В.С. Крюков, С.В. Зиновьев // Перспективное свиноводство: Теория и практика. -2011. - № 5. - С. 1.
4. Эленшлегер А.А. Сравнительная оценка клинического состояния новорожденных телят при применении антибиотика, пробиотика и сквашенного молока в лечении и профилактике диспепсии телят / А.А. Эленшлегер, Д.А. Акимов // Вестн. АГАУ. - 2014. - № 11 (121). - С. 127-130.
5. Росляков Ю.Ф. Сравнительная оценка эффективности органических кислот как консервантов / Ю.Ф. Росляков, Л.А. Русанова, О.Л. Ко-стенко // Изв. вузов. Пищевая технология. -1996. - № 5-6. С. 88-89.
6. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк [и др.]. - 3-е изд., перераб. и доп. -Киев : Вища школа. - Головное изд-во, 1983. -383 с.
7. Руководство по судебно-медицинской экспертизе отравлений / под ред. Я.С. Смусина [и др.]. - М. : Медицина, 1980. - 424 с.
8. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики / А.А. Кишкун. - М. : ГЭОТАР - Медиа, 2009. - 800 с.
Герунов Владимир Иванович, д-р вет. наук, проф., Омский ГАУ, [email protected]; Теуща-ков Дмитрий Сергеевич, аспирант, Омский ГАУ, [email protected]; Горошенко Яна Вадимовна, студент, Омский ГАУ.
References
1. Mukhamedyanov M.M. Opredelenie stepeni toksichnosti konservantov dlya zelenykh trav iz pobochnykh produktov sinteza khloroforma i gidro-liza drevesiny / M.M. Mukhamedyanov // Sovremen-nye problemy prirodopol'zovaniya, okhotovedeniya i zverovodstva. - 2004. - № 1. - S. 151.
2. Ratsional'naya sistema vyrashchivaniya molochnykh porod skota / V.T. Golovan' [i dr.] // Nauchnyy zhurnal KubGAU. - 2007. - № 31. -S. 147-161.
3. Kryukov V.S. Vzaimosvyaz' kislotosvyazy-vayushchey sposobnosti i elektrolitnogo balansa kormov / V.S. Kryukov, S.V. Zinov'ev // Perspek-tivnoe svinovodstvo: Teoriya i praktika. - 2011. -№ 5. - S. 1.
4. Elenshleger A.A. Sravnitel'naya otsenka klinicheskogo sostoyaniya novorozhdennykh telyat pri primenenii antibiotika, probiotika i skvashennogo moloka v lechenii i profilaktike dispepsii telyat / A.A. Elenshleger, D.A. Akimov // Vestn. AGAU. -2014. - № 11 (121). - S. 127-130.
5. Roslyakov Yu.F. Sravnitel'naya otsenka effektivnosti organicheskikh kislot kak konservantov / Yu.F. Roslyakov, L.A. Rusanova, O.L. Kostenko // Izv. vuzov. Pishchevaya tekhnologiya. - 1996. -№ 5-6. - S. 88-89.
6. Laboratornye zhivotnye. Razvedenie, so-derzhanie, ispol'zovanie v eksperimente / I.P. Zapad-nyuk. - 3-e izd., pererab. i dop. - Kiev : Vishcha shkola. - Golovnoe izd-vo, 1983. - 383 s.
7. Rukovodstvo po sudebno-meditsinskoy ek-spertize otravleniy / pod red. Ya.S. Smusina, R.V. Berezhnogo, V.V. Tomilina, P.P. Shirinskogo. -M. : Meditsina, 1980. - 424 s.
8. Kishkun A.A. Rukovodstvo po laborator-nym metodam diagnostiki / A.A. Kishkun. - M. : GEOTAR - Media, 2009. - 800 s.
Gerunov Vladimir Ivanovich, Dr. Vet. Sci., Prof., Omsk SAU, [email protected]; Teushchakov Dmitriy Sergeevich, Postgraduate, Omsk SAU, [email protected]; Goroshenko Yana Vadi-movna, student, Omsk SAU.
