CC BY
55
7. Фiзiолого-бiохiмiчнi методи дослвджень у бюлогп, твариннищи та ветеринарнш медициш: Довiд. / ред.: В. В.Влiзло; упоряд.: Л. В. Андреева; 1н-т бюлоги тварин УААН. - 3-е вид., переробл. i доповн. - Л., 2004. - 399 с.
8. Templeton CB, Bottoms GD, Fessler JF, Turek JJ, Boon GD: Effects of repeated endotoxin injections on prostanoids, hemodynamics, endothelial cells, and survival in ponies. Circ. Shock 1985, 16, 253-264.
9. Ward DS, Fessler JF, Bottoms GD, Turek J: Equine endotoxemia: cardiovascular, eicosanoid, hematologic, blood chemical, and plasma enzyme alterations. Am. J. Vet. Res. 1987, 48, 1150-1156.
10. van Miert Asjpam: Inhibition of gastric motility by endotoxin (bacterial lipopolysaccharide) in conscious goats and modification on this response by splanchnectomy or adrenergic blocking agents. Arch. Int. Pharmacodyn. 1971, 193, 405-414.
Стаття надшшла до редакцИ 12.10.2015
УДК 619:518.19-002:636.2
Куртяк Б. М., д. вет. н., проф. (e-mail: [email protected]) Собко Г. В., астрант (e-mail: [email protected]) ©
Лье1еський нащональний утеерситет еетеринарног медицины та б1отехнологт
гменг С.З. Гжицького, м. Льеге Бойко О. П., к. вет. н., головний наук. сшвробггник, (e-mail: [email protected])
Досл1дна станщя етзоотологИ 1нституту етзоотологИ НААН БАКТЕР1ОЛОГ1ЧНИЙ МОН1ТОРИНГ ПРИХОВАНИХ ФОРМ МАСТИТ1В -ВАЖЛИВА СКЛАДОВА У ПРОГРАМ1 ПРОФ1ЛАКТИКИ МАСТИТ1В
Бактер1олог1чним дослгдженням ктьюсного та якгсного складу мжрофлори секрету еимет егд корге, хеорих на субклМчт мастити, естаноелено, що ес еони обумоелюються асоцгацгями умоено-патогенних та патогенних мгкрооргатзмге, кожний 1з яких еолодге еластиеою для нього резистенттстю до антибактергальних препарат1е, без ерахуеання яких лжуеання та санащя молочног залози ускладнюеться. Результати наших дослгджень доеодять, що бактергологгчний мониторинг секрету еимет корге, хеорих на будь-яку форму маститу поеинен проеодитися на кожнш молочнотоеарнш фермг.
Ключов'1 слова: соматичш клтини молока, субклтчш мастити, умоено-патогенш мгкрооргатзми, антибготикорезистенттсть.
УДК 619:518.19-002:636.2
Куртяк Б. М., Собко Г. В., Бойко О. П.
Льеоеский национальный униеерситет еетеринарной медицины и биотехнологий
имени С. З. Гжицкого БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ СКРЫТЫХ ФОРМ МАСТИТОВ - ВАЖНАЯ СОСТАВЛЯЮЩАЯ ПРОГРАММЫ ПРОФИЛАКТИКИ МАСТИТОВ
Бактериологическим исследоеанием количестеенного и качестеенного состаеа микрофлоры секрета еымени от корое, больных субклинические маститы, устаноелено, что есе они усложняются ассоциациями услоено-патогенных и патогенных микроорганизмое, каждый из которых обладает присущей ему резистентностью к антибактериальным препаратам, без учета которых лечение и санация осложняются. Результаты наших исследоеаний показыеают, что бактериологический мониторинг секрета еымени корое, больных маститом должен проеодиться на каждой молочно-тоеарной ферме.
© Куртяк Б. М., Собко Г. В., Бойко О. П., 2015
281
Ключевые слова: соматические клетки молока, субклинические маститы, условно-патогенные микроорганизмы, антибиотикорезистентность.
УДК 619:518.19-002:636.2
Kurtyak B., Sobko G., Boiko O.
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S. Z. Gzhytskyj BACTERIOLOGICAL MONITORING OF SUBCLINICAL MASTITIS - IS AN IMPORTANT PART OF MASTITIS PREVENTION PROGRAMS
We conducted bacteriological examinations of quantitative and qualitative composition milk samples' microflora of cow's suffering from subclinical mastitis. It was found that they are specified by complex associations of opportunistic and pathogenic microorganisms. Each of them (microorganisms) is characterized by specific resistance to antibiotics, without which the treatment and rehabilitation is complicated. Our results showed that bacteriological milk monitoring of cows suffering from any form of mastitis should be implemented on each dairy farm.
Key words: Milk somatic cells, subclinical mastitis, opportunistic pathogens, antibiotic resistance.
Постановка проблеми. З року в piK у нашш кра!ш зростають вимоги щодо якосп та безпечносп молока i молочних продукта [1].
Основними показниками ощнки якосп та безпеки молока е piBeHb бактершно! забрудненосп та кшькосп соматичних клпин. Не менш важливе значення мають й iншi показники, що мають вплив на якюну характеристику цього продукту [2].
Захворювання дшних коpiв на piзнi форми мастита негативно впливае на якють молока [3].
AHani3 останшх дослщжень та публжацш. Мастити е найпоширешшою незаразною патолопею коpiв, що завдае значних економiчних збиткiв. Мастит е одшею iз найважливiших причин передчасно! вибраковки велико! кшькосп коpiв у молочних комплексах [4]. Молоко, отримане вщ коpiв хворих на мастит, становить ризик виникнення харчових токсикошфекцш у споживачiв молока та молочних продукпв [5].
Захворювання коpiв на мастит наносить господарствам значш економiчнi збитки, адже захвоpюванiсть на клшчш та субклiнiчнi форми маститу у весняно-лiтнiй пеpiод може сягати 25-30 % [6], а за сучасно! промислово! технологiй виробництва молока - до 60% [7].
Мета дослщження. Виявлення прихованих форм мастита коpiв шляхом дослщження проб молока вщ кожно! дiйно! корови на вмют соматичних клiтин та загальну бактеpiйну забpудненiсть, з наступною iндикацiею та iдентифiкацiею мiкpофлоpи i визначенням !! чутливостi до антибютиюв у пробах молока, якi за вмютом соматичних клiтин давали тдставу вiднести !х до таких, що характерш для маститу.
Матерiал i методи дослщження. Об'ектом дослщження були корови чорно-рябо! породи (n=71) та молоко (секрет) вимеш вiд них у господарствах Самбipського району, Львiвсько! обласп. Кiлькiсть соматичних клiтин у пробах молока визначали за допомогою аналiзатоpа соматичних клiтин «Екомшк АМВ-01-03» [9]. Для бактерюлопчного дослiдження вщбирали проби молока, у яких виявлено високий вмют соматичних клггин (бшьше 1^106 КУО/см3).
282
Вщбраш проби молока дослщжували на вмют МАФАнМ (мезофшьш аеробш i факультативно анаеробнi мiкроорганiзми), а також видшяли та iдентифiкували мшрооргашзми - потенцiйнi збудники маститiв корiв [9, 10, 11,12].
Чутливiсть видшених iзолятiв до антибактерiальних препаратiв визначали диско-дифузшним методом [13].
Результати дослщження та 1х обговорення. Бактерiологiчними дослщженнями 10 проб молока (секрету) вимеш корiв, хворих на субклiнiчнi мастити, видшено 139 iзолятiв мiкробiв. 1х видовий склад та питома вага кожного у загальному масивi видшених iзолятiв вiдображено на рис. 1.
12,5
5,3
15,7
1,6
16,8
8,8
4,8 4
St. aureus St. epidermidis Ps. aeruginosa E. coli Str. uberis Enter. fecalis Candida
1нша микрофлора
Рис. 1. Видовий склад iзолятiв, видшених i3 секрету вимеш KopiB, хворих на мастит, та питома вага кожного з них у загальнш популяцн видшених
мiкроорганiзмiв.
Як видно з даних рис. 1, мшрофлора секрету вимеш вщ хворих на мастит кор1в представлена, як грампозитивними (S. aureus, S. epidermidis, S. uberis), так i грамнегативними (E. coli, P. aeruginosa) мшрооргашзмами та дрiжджовими грибами (Candida).
Найбшьшу частку у загальному масивi видiлених iзолятiв становили культури E. coli (16,8%), S. epidermidis (15,7%) та S. aureus (12,5%).
На переб^ захворювання негативний вплив мають мiкроорганiзми i3 роду Candida, що, у свою чергу, може бути обумовлене наявнютю фiзiологiчного iмунодефiцитного стану у тварин, або ж безсистемним використанням антибютиюв [14]. 1х концентрацiя у дослiджених пробах молока становила у межах 1,2-6х102 КУО/см3, що складало приблизно 8,8% вщ загально! кiлькостi видiлених мiкроорганiзмiв.
Частота видiлень S. uberis i P. aeruginosa становила 4% i 1,6% вщповщно, а не щентифшовано! мiкрофлори - 5,3% вщ загально! кiлькостi видiлених мiкроорганiзмiв.
1нтенсивнють колонiзацi!' зразкiв молока рiзними видами мiкробiв вiдображено у табл. 1.
1з даних, наведених у табл. 1, видно, що лише три види мiкроорганiзмiв - S. aureus, S. epidermidis i E. coli видшено з усiх дослщжуваних проб молока, E. fecalis
283
- i3 5 проб, S. uberis, Candida та не щентифшована мшрофлора - з 4, P. aeruginosa -з 2 проб.
Таблиця 1
Концентращя MiKpoopraHi3MiB (за видами) у дослщжуваних пробах молока вщ __кор1в, хворих на мастит, у КУО/см3_
Вид мiкробiв № проби молока та юльюсть мiкробiв у пробi
1 2 3 4 5 6 7 8 9
S. aureus 2х107 1,8x10 5 3,6x107 2,8x106 1,8x10 5 1,6x104 1,0x10 6 1,2x10 6 1,7x105
S. epidermidis 5х107 1,2x104 4,0x106 3,2x105 2,6x104 1,2x104 2,2x103 1,5x104 1,2x104
P. aeruginosa 1,2x103 - - - 1,1x10 3 - - - -
E. coli 4x105 1,6x105 1,2x103 1,5x104 1,0x104 1,2x103 8,0x102 3,2x103 1,8x102
S. uberis 2x103 - - 1,2x103 1,4x102 - - - 1,1x102
E. fecalis 1,2x105 - 1,6x104 - 1,7x103 1,0x104 1,3x104 - -
Candida - 2x102 - - - - 2,1x102 6x102 1,2x102
1нша мжрофлора - 3,3x103 - - 1,1x103 - 1,7x103 1,4x102 -
Результати бактерюлопчних дослiджень свщчать, що не було жодно! проби молока, яка була б представлена лише одним видом MiKpoopraHi3MiB. Так, по 4 види культур мютили 3 проби молока, по 5 видiв культур - 3 проби, по 6 видiв культур - 2 проби i по 7 видiв - 1 проба.
Дослщженням бiохiмiчних та ферментативних властивостей щентифшованих iзолятiв встановлено, що культури S. aureus, зброджували глюкозу та маншт, продукували плазмокоагулазу, викликали а- чи yS-гемолiз, що свщчить про 1'х потенцiйну патогеннiсть.
Культури S. uberis викликали а-гемолiз, добре росли на сироватковому МПБ з 40 % жовч^ ферментували сахарозу та лактозу, але не ферментували маншт.
Культури E. coli мали типовi для кишково! палички морфолопчш ознаками, володши типовими культуральними (росли на Ендо iз типовим металiчним блиском), бiоxiмiчними (ферментували глюкозу i лактозу, утворювали iндол i не утворювали шрководню, не засвоювали цитратно-амонiйниx солей) та антигенними (давали позитивну РА iз комплексними О-колi аглютинуючими сироватками, тобто були вщнесеш до ентеропатогенних iзолятiв) властивостями.
Отриманi данi свiдчать про потенцшну здатнiсть культур S. aureus S. uberis та E. coli спричиняти захворювання корiв на мастит на rai зниження загально! iмунноl опiрностi органiзму корiв, що може бути спричинене негативним впливом на оргашзм дшних корiв сприяючих та схиляючих факторiв.
Наступним кроком нашо! роботи було визначення чутливостi змшаних культур кожно! проби молока до антибактерiальниx препаратiв (табл. 2).
Як видно iз даних табл. 2, чутливють асоцiйованиx культур до антимшробних препаратiв виявилася неоднаковою. Найбiльш ефективними препаратами виявились ампщилш, амоксицилiн, бензилпенщилш, амоксиклав, цефатаксим (зона затримки росту 17-35 мм). Помiрну бактерiостатичну активнють проявили спектиномiцин, доксициклiн, лiнкомiцин ^аметри зон затримки росту - 13-20 мм). Колютин та сульфадiазин не проявили бактерюстатично! ди на мшрофлору жодно! iз дослiджуваниx проб молока.
284
Таблиця 2.
Чутливкть мжробних асощацш дослщжуваних проб молока до _антибактерiальних препара^в._
Антибактерiальний препарат Вмiст у диску, мкг Дiаметри зон затримки мжробних асощацш у пробах молока: (мм)
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Ампщилш 10 25ч 26 ч 26 ч 20 п 25 ч 25 ч 21 ч 19 п 25 ч
Амоксицилiн 10 27 ч 22 ч 28 ч 20 п 18 п 20 п 21 ч 15 р 26 ч
Бензилпенiцилiн 10 25 ч 14 27 ч 22 ч 26 ч 18 п 15 17 п 23 ч
Амоксиклав 30 36 ч 19 35 ч 23 ч 20 п 18 п 17 п 18 п 22 ч
Цефатаксим 30 33 ч 23 ч 35 ч 27 27 ч 21 ч 22 ч 20 19 п
Енрофлоксацин 10 33 ч 14 р 33 ч 17 п 15 р 16 п 11 р 17 п 20 п
Стрепгомiцин 10 21 ч 14 р 22 ч 18 20 п 20 п 13 р 21 ч 0 р
Гентамiцин 10 27 ч 24 ч 28 ч 21 25 ч 21 ч 19 п 20 п 17 п
Спектиномiцин 100 21 ч 14р 0 р 18 п 0 13 р 0 20 п 15 р
Тилозин 150 0 р 17 п 0 р 16 22 ч 0 р 0 р 0 р 0 р
Колiстин 10 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р
Окситетрациклiн 30 8 р 0 р 0 р 12 р 0 р 0 р 10р 0 р 0 р
Доксициклiн 30 17 п 13 р 20 п 10р 0 р 12 р 10 р 10 р 0 р
Лiнкомiцин 15 24 ч 22 ч 17п 0 р 0 р 25 ч 0 18 п 0 р
Страмщин 30 0 р 23 ч 0 р 0 р 20 п 0 15 п 0 р 0 р
Сульфадiазин 100 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р
Триметоприм 10 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р 0 р
Прим1тка: Ч - чутливi (зона затримки росту вiд 21 мм i вище);
П - помiрно-чутливi (зона затримки росту 16-21 мм); Р - резистентш (зона затримки росту 12-16 мм);
Результати цих дослщжень можна використати для санацп молочно! залози у перюд сухостою кор1в або у випадку клшчного прояву маститу.
У табл. 3 наведено результати дослщження чутливосп видшених та щентифшованих культур м1кроб1в до антибютиюв.
Як видно !з даних табл. 3, щентифшоваш культури !з проб молока мали неоднакову чутливють до антибактер1альних препарата у вказаних дозах. Це, з одного боку, свщчить про те, що цший ряд антибютиюв зовс1м не мають бактерюстатичного впливу на видшеш культури м1крооргашзм1в, тобто !х застосування не мае лшувального ефекту, а лише крие у соб1 ризик забруднення молока та молочно! продукцп [13].
З шшого боку, кожна !з дослщжених проб молока мютить асощацш м1крооргашзм1в, яю р1зняться м1ж собою не лише за патогеннютю, але й за чутливютю до тих чи шших АБП, що передбачае комплексне застосування антибактер1альних препарата з метою санацп молочно! залози у перюд сухостою. Под1бш результати отримаш шшими дослщниками [15, 16].
Тшьки з врахуванням мшробного пейзажу секрету молочно! залози кожно! корови, хворо! на мастит, з подальшим визначенням чутливосп до антибактер1альних препарата потенцшно патогенних !золята { на ц1й основ! розробки схеми лшування та санацп молочно! залози можна проводити ефективну профшактику мастита у кор1в.
Висновки та перспективи подальших дослiджень:
1. Концентрац1я соматичних кл1тин та мшрооргашзм!в в 1 мл визначае сан1тарну безпеку молока - сировини та яюсть продукпв його переробки.
285
2. Рiвень соматичних клгтин у молощ е тдставою для проведення бактерюлопчного монiторингу секрету молочно! залози «скомпрометованих» корiв.
Таблиця 3
Чутливкть отриманих iзолятiв мiкроорганiзмiв до антибактерiальних
Антибактер1альний препарат Вм1ст у диску, мкг Д1аметри зон затримки росту культур (мм)
S. аигеш S. ерь dermidis Е. соИ Str. uberis ЕПег. fecalis Ps. aeruginosa Сап-dida
Ампщилш 10 28 24 20 29 25 18 14
Амоксицилш 10 30 23 25 29 15 17 19
Бензилпенщилш 10 28 18 0 28 0 0 14
Амоксиклав 30 26 19 12 29 18 12 16
Цефатаксим 30 22 16 14 19 21 15 17
Енрофлоксацин 10 32 29 34 31 36 32 30
Стрептомщин 10 26 21 26 21 23 15 15
Гентамщин 10 14 12 32 14 30 29 14
Спектиномщин 100 14 13 20 15 18 16 18
Тилозин 150 12 11 18 0 14 13 10
Кол1стин 10 10 0 12 0 0 0 10
Окситетрацикл1н 30 19 16 14 26 24 13 18
Доксицикл1н 30 34 29 15 29 17 12 12
Лшкомщин 15 30 24 22 21 20 21 20
Сп1рам1цин 30 16 13 12 23 15 10 14
Сульфад1азин 100 10 0 0 0 10 0 0
Триметоприм 10 0 12 10 11 10 0 0
3. Постiйний монiторинг концентрацп соматичних клiтин у пробах молока вщ дiйних корiв дае можливють виявляти корiв хворих на скрип форми маститiв i на основi цього своечасно органiзовувати ефективне лшування та профiлактику субклiнiчних форм мастипв.
4. Подальшi дослiдження будуть спрямоваш на вивчення антигенних та iмуногенних властивостей видiлених вiд маститних корiв мiсцевих iзолятiв з метою конструювання аутогенних вакцин.
Лггература
1. ДСТУ 3662-97 Молоко коровяче незбиране. Вимоги при закутвлг
2. Король С. А. Основш захворювання ВРХ на молочних фермах Украши. Частина 2. Профшактика маститу кор1в. / С. А. Король. - Сучасна ветеринарна медицина. - 2013. - № 6. 56-58.
3. Рубцов В. И. Лечение коров при серозном и катаральном мастите /
B. И. Рубцов // Ветеринария - 1998. - № 1. - С. 36-37.
4. Карташова В. М. Маститы коров / В. М. Карташова, А. И. Ивашура. - М.: ВО «Агропромиздат», 1988. - 256 с.
5. Даниленко I. П. Санггарний контроль виробництва молока на фермах / I. П. Даниленко. - К.: Урожай, 1973. - 72 с.
6. Краевський А. И. Поб1чш ефекти нестеро!дних протизапальних препаратов за маститу кор1в / А. И. Краевський // Ветеринарна бютехнолопя. Бюлетень. - 2013. -Випуск 22.- С. 264-269.
7. Бойко П. К. Особливост мшробного пейзажу за приховано! форми маститу у кор1в / Бойко П. К., Бойко О. П. - Сучасна ветеринарна медицина. - 2014. - № 1. -
C. 64-67.
286
8. Шдрахунок соматичних клгтин. Частина 1. Метод i3 застосуванням мкроскопа (контрольний метод) (ISO 13366-1:2008 IDF 148-1:2008): ДСТУ ISO 133661:2008. - [Чинний вiд 2008-01-01]. - K.: Держстандарт Укра1ни, 2008. - 12 с. -(Нащональний стандарт Укра!ни).
9. Молоко та мoлoчнi продукти. Методи мiкpoбioлoгiчнoгo контролювання. ДСТУ 7357:2013. - К: Мшекомрозвитку Укра!ни, 2014. - 35с. - (Нащональний стандарт Украши).
10. Мшробюлопя харчових продукпв i кopмiв для тварин. Загальш настанови з пiдpaхунку дpiжджiв i мiкpocкoпiчних гpибiв. Технiкa пiдpaхувaння колонш, культивованих за температури 25°С (ISO 7954:1997, IDT): ДСТУ ISO 7954:2006 - K.: Держспоживтандарт Украши, 2008. - 6 с. - (Нащональний стандарт Украши).
11. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (коли формных бактерий). ГОСТ 30518-972006 - K.: ГОСТСТАНДАРТ Украины, 2001. - 8с.
12. Мшробюлопя харчових продукпв i кopмiв для тварин. Горизонтальний метод тдраховування коагулазо-позитивних стафшокошв (Staphylococcus aureus та шших видiв) Частиан 1. Метод з використовуванням агарового середовища Беард-Паркера (ISO 6888-1:1999, IDT): ДСТУ ISO 6888-1:2003 - K.: Держспоживтандарт Украши, 2005. - 8 с. - (Нащональний стандарт Украши).
13. Методичш вкaзiвки «Визначення чутливост мiкpoopгaнiзмiв до aнтибaктеpiaльних препаратов», Ки!в-2015 / [Т. О. Гаркавенко, О. М. Невольмо, Т. Г. Козицька, Д. О. Ординська, Н. А. Меженська]. - Ки!в, днд1лдвсе, 2015.-79с.
14. Nelson V. How to liquidate mastitis at the dairy farms / V. Nelson, G. Filpot, S. Nikkerson // Manuscript. - 1999. - 1000 p.
15. Бойко О. П. Особливост контролю етзоотичного процесу за приховано! форми маститу у кopiв / О. П. Бойко // Сшьський господар. - 2015. - № 1/2. - С. 32-37.
16. Скляр О. I. Роль ветеринарно-саштарних зaхoдiв та правил до!ння кopiв у профшактищ субклшчного маститу / О. I. Скляр // Наук. вюник Львiвcькo! державно! академп вет. медицини iм. С. З. Гжицького. - Л., 2010. - № 3 (45), Т. 12 - С. 278-282.
Стаття надшшла до редакцИ 12.10.2015
УДК 619:616.071:615.331:619:616.34:636.4
Лукащук Б. О., асшрант (E-mail: lukaw4yk@gmail. com) GniBiHCbKa Л. Г., д.вет.н., професор ©
Льегеський нащональний ушеерситет еетеринарног медицини та б1отехнологт 1мен1 С.З. Гжицького, Лье1е, Украгна ВПЛИВ Ф1ТОБ1ОТИКА НА ГЕМАТОЛОГ1ЧН1 ПОКАЗНИКИ П1ДСИСНИХ
ПОРОСЯТ ТА IX ЗБЕРЕЖЕН1СТЬ ЗА НЕЗАРАЗНИХ ХВОРОБ ШЛУНКОВО-КИШКОВОГО ТРАКТУ У статтг представленi результати еплиеу фтобютика ЕКСТРАКТ™ 6930 е складi основного рацюну тдсисних поросят на гх гематологiчнi показники та його профтактична ефектиетсть за незаразних хвороб шлункоео-кишкоеого тракту.
Встаноелено, що застосування ЕКСТРАКТ™ 6930 поросятам до^дног групи сприяло збтьшенню кiлькостi еритроцитiе, концентрацИ гемоглобту та ееличини гематокриту, а також лейкоцитiе в кроеi, значення яких були еiрогiдно еищими порiеняно з показниками поросят контрольног групи.
Використання ЕКСТРАКТ™ 6930 поросятам до^дног групи знизило еiдсоток гх захеорюеаностi i загибелi еiд хвороб шлункоео-кишкоеого тракту незаразног етюлогп, а отже тдеищило гх збережетсть в тдсисний перюд.
© Лукащук Б. О., Слiвiнcькa Л. Г., 2015
287
