CC BY
459
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
БАБЕЗИОЗЫ ЛОШАДЕЙ: ЭТИОЛОГИЯ И ПРОБЛЕМЫ ДИАГНОСТИКИ
BABESIOSIS OF HORSES: ETIOLOGY AND PROBLEM OF DIAGNOSTICS
УДК (636.1:575):619
Т. Калашникова ([email protected]) Л.А. Храброва ([email protected]) ФГБНУ Всероссийский научноисследовательский институт коневодства
T. Kalashnikova L. Khrabrova
The All-Russian Research Institute for Horse
ключевые слов^ key words
БАБЕЗИОЗ • ПИРОПЛАЗМОЗ • НУТТАЛЛИОЗ • ЛОШАДИ BABESIOSIS • PIROPLASMOSIS • NUTTALLIA • HORSES • • КЛЕЩИ • МИКРОСКОПИЯ • ДНК-ДИАГНОСТИКА TICKS • MICROSCOPY • DNA DIAGNOSTICS
аннотация
Бабезиозы лошадей наносят существенный ущерб коневодству в пастбищный период, снижая на длительный срок продуктивность животных, угнетая их воспроизводительную функцию. Тотальное распространение клещей-переносчиков данной группы заболеваний привело к тому, что болезни регистрируют во всех федеральных округах Российской Федерации. В статье рассмотрены причины частых вспышек данного заболевания и его негативные последствия для лошадей и коневладельцев. Рассмотрены проблемы современной диагностики и перспективы ДНК-скрининга бабезиозов непарнокопытных.
summary
Equine piroplasmosis cause significant damage to horse breeding in the grazing period, they reduce the productivity of animals for a long time, and they oppress reproductive function. The total spread of tick vectors of this group of diseases has led to the fact that the disease is registered in all federal districts of the Russian Federation. The article discusses the causes of frequent outbreaks of the disease, the negative effects of diseases for horses and horse owners, as well as the problems of modern diagnostic and prospects DNA screening of Equine Piroplasmosis.
Бабезиозы (пироплазмидозы) непарнокопытных -трансмиссивная природно-очаговая инвазия, этиологическими агентами которой являются простейшие из отряда Piroplasmatidae: Babesia (Piroplasma) caballi и Babesia (Nuttallia, Theileria) equi, паразитирующие в клетках крови [11, 12].
У непарнокопытных в группу пироплазмидозы входят два заболевания: пироплазмоз(бабезиоз) и нуттал-лиоз (тейляриоз, бабезиоз), возбудители которых отличаются друг от друга генетически и морфологически.
Заболевания клинически схожи, но имеют некоторые отличия. Нередко отмечают смешанное проявление инвазии. Пироплазмоз характеризуется резким угнетением, депрессией, выраженной анемией, лихорадкой, желтушностью слизистых оболочек, гемоглобинурией, нарушением функции пищеварительной, дыхательной и сердечно-сосудистой систем. В теплое время года он обычно проявляется в острой форме и является частой причиной смерти лошадей. При нутталлиозе смертность ниже, выделяют острое, подострое и хро-
58
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
VetPharma №1 | ФЕВРАЛЬ-МАРТ 2015
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
ническое течение, при этом переболевшие животные часто остаются носителями нутталлий и способствуют распространению болезни [2, 9].
Пироплазмидозы наносят существенный ущерб коневодству, снижая иммунитет животных, а также их продуктивность и работоспособность на длительный срок. Они приводят к непосредственной гибели заболевших животных, увеличивают затраты на проведение ветеринарно-санитарных и лечебно-профилактических мероприятий. Вспышки пироплазмоза и нутталлиоза препятствуют полноценному проведению случной компании: понижают процент зажеребляемости у кобыл, вызывают аборты у жеребых маток, падеж подсосных жеребят. Одним из общих характерных клинических признаков пироплазмидозов является гемолитическая желтуха, обусловленная активным разрушением пораженных ба-безиями эритроцитов (Рис. 2). Появление желтушности слизистых оболочек в совокупности с повышением общей температуры тела у жеребят и взрослых животных является предрасполагающим фактором для проведения исследований на бабезиозы непарнокопытных.
Диагностика на наличие в крови лошадей возбудителей пироплазмидозов является обязательной при экспорте-импорте лошадей в Российской Федерации и ряде сопредельных стран. В ветеринарном сертификате для вывоза лошадей на спортивные соревнования ветврач также должен регистрировать благополучие местности по бабезиозам в течение 12 предшествующих месяцев.
Поскольку для пироплазмидозов характерна трансмиссивная передача, распространение болезни напрямую связанно с ареалом жизнедеятельности его специфических переносчиков - клещей рода Dermacentor (кожерез), Hyalomma (стеклоглаз), Rhipicephalus (веероголов) (Табл. 1, Рис. 3).
Нужно отметить, что эти членистоногие переносят ряд опасных для человека и других животных болезней (клещевой энцефалит, Омскую геморрагическую лихорадку, туляремию, клещевой североазиатский риккетсиоз и О-лихорадку, пироплазмоз собак и Марсельскую лихорадку). Иксодовые клещи очень устойчивы к неблагоприятным факторам внешней среды. Они способны перезимовывать, переносить затопление мест обитания в течение 12 суток. Самки в голодном состоянии могут жить до 7 лет, они очень плодовиты, откладывают до 5000 яиц. Важной является способность передавать возбудителя пироплазмоза следующим поколениям клеща трансовариально, вследствие этого участки местности, населенные инвазирован-ными клещами, остаются опасными на десятилетия и представляют собой очаги болезни. Нутталлии, в отличие от пироплазм,трансовариально не передаются, но способны к трансплацентарной передаче у воспри-
Рис. 1 Клещи в области подгрудка и нижней трети шеи лошади
Рис. 2 Желтушность видимых слизистых оболочек у жеребенка при пироплазмозе (http://es.slideshare.net/ VetAbdulrhmanSubhi/equine-babesiosis?related=1)
имчивых животных (от матери к плоду) [17, 9]. Клещи способны к миграциям, в результате чего они постепенно заселяют новые территории, формируя новые очаги заболеваний [16]. Если раньше считалось, что болезнь встречается преимущественно в южных регионах, то в последние годы в связи с глобальным потеплением болезнь регистрируют во всех федеральных округах Российской Федерации (Рис. 4).
Бабезиозы состоят на контроле международного эпизоотического бюро, на сайте OIE регулярно обновляется карта распространения бабезиозов лошадей (Equine piroplasmosis) по всему миру (http://www.oie.int/).
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
59
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
VetPharma №1 | ФЕВРАЛЬ-МАРТ 2015
Рис. з Виды клещей семейства Ixodidae: a) Dermacentor; b) Hyalomma; с) Rhipicephalus (фото http://vetbook.org/ wiki/cat/index.php/File:Dermacentor.jpg, http://www.vitadez.ru/o-kleschach/akrologiya/vidi-kleschey-i-ich-foto)
Таблица 1
Специфические клещи-переносчики бабезиозов непарнокопытных
Piroplasma caballi Nuttallia equi
Клещи-переносчики Rhipicephalus sanguineous, Rhipicephalus bursa, Dermacentor reticularis,
Dermacentor marginatus, Hyalomma excavatum
Видоспецифичные клещи-переносчики Dermacentor nitens, Dermacentor salvarum, Rhipicephalus evertsi, Rhipicephalus turanicus,
Hyalomma dromedarii Hyalomma anatolicum
В России заболевание, сходное с пироплазмозом, впервые описали А. Попов (1892) на Кавказе и В. Михайлов (1903) в Смоленской губернии. Раньше инвазию называли «майская» или «весенняя» болезнь, так как пик заболеваемости приходится на май-июнь [9]. В дальнейшем активность клещей снижается, и второй, меньший пик приходится на конец августа - начало сентября. При снижении температуры ниже 5° клещи зарываются в листья, впадают в оцепенение и в таком состоянии перезимовывают. Но известны случаи заболевания «заклещеванных» лошадей и зимой, при размещении их в теплых конюшнях.
Чаще всего появлению болезни в новых местах способствует временный вывоз здоровых лошадей в неблагополучный район в связи с различными мероприятиями (соревнования, конные митинги, выставки и т.п.). Для заражения достаточно одного инвазированного клеща, самца или самки. Описаны случаи болезни лошадей в свободных от переносчиков регионах (остров Сахалин) [2] при транспортировке туда лошадей, зараженных в пути следования.
Важно отметить, что нутталлиоз энзоотически никогда не наблюдается раньше пироплазмоза, а в большинстве случаев сменяет его. Отмечено, что племенные лошади более восприимчивы, чем рабочие. Местные лошади легче переносят инвазию, чем вновь привезенные, но чаще остаются носителями. Восприимчивый молодняк, выводимый на пастбище, быстро заража-
ется и, переболевая в легкой форме, приобретает нестерильный иммунитет, обусловленный носительством бабезий. В клетках крови таких животных длительное время обнаруживаются мелкие включения, при этом никаких клинических признаков болезни не проявляется. Такое животное является фактором риска, так как вывоз его в благополучный район, при наличии в последнем клещей-переносчиков, может спровоцировать возникновение болезни. Наличие антигенов паразитов при премуниции в плазме крови вызывает постоянное антигенное возбуждение в иммунной системе. Носи-тельство может приводить к аутоиммунным анемиям, иммуносупрессиям, в результате данные паразитозы способствуют более частому возникновению других патологических состояний и осложняют течение других болезней [10, 20]. Носительство бабезий становится препятствием культурному и спортивному обмену, продаже племенных лошадей в зарубежные страны, так как в большинстве зарубежных стран с 1970 года введены ограничения на ввоз животных-паразитоно-сителей, а это, в свою очередь, наносит существенные убытки российскому коневодству [2, 9].
Актуальность разработки новых средств диагностики пироплазмидозов лошадей для РФ связана с обеспечением безопасности при импорте племенных и спортивных лошадей из стран, неблагополучных по заболеванию, для минимизации денежных затрат и дополнительных временных потерь при движении конского поголовья.
60
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
VetPharma №1 | ФЕВРАЛЬ-МАРТ 2015
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
Рис. 4 Ареал распространения бабезиозов непарнокопытных в Российской Федерации
Диагноз на пироплазмидозы ставят комплексно, на основании эпизоотологических данных, клинической и патологоанатомической картины, а также лабораторных исследований. В России микроскопия мазка остается пока еще преимущественным методом диагностики пироплазмидозов. В мазках цельной крови, окрашенных по Романовскому-Гимза или по Май-Грюнвальда, обнаруживают характерные формы возбудителя [13, 14, 23]. Для Piroplasma caballi такой формой являются парные грушевидные включения, соединенные между собой тонкой перемычкой под острым углом (Рис. 5a), и обычно они больше радиуса эритроцита.
При нутталлиозе характерными формами являются каплевидные нутталлии, расположенные внутри клетки крови в виде мальтийского креста (Рис. 5b), а также одиночные грушевидные включения. Диагноз по мазку крови ставят, просматривая не менее 100 полей зрения, обнаруживая вышеописанные формы возбудителя. Бабезии определяются как внутри эритроцита, так и отдельно в плазме, а также внутри макрофагов. При анализе крови выявляют анемию, моноцитоз, тромбоцитопению, повышенное СОЭ и паразитемию. Однако с помощью микроскопии практически невозможно установить носительство. При носительстве морфология инвазионного агента меняется, характерных форм может совсем не быть, нутталлии и пироплазмы имеют каплевидную, овальную, амебовидную, серповидную, а чаще точечную форму (Рис. 6).
Бабезий необходимо дифференцировать от других включений (тельца Хауэла-Жоли, тельца Гейнца, плохо отмытый краситель и другие артефакты) [8]. В России также используют серологические методы обнаружения антигенов бабезий в сыворотке крови: РСК (реакция связывания комплимента), РДСК (реакция длительного связывания комплимента) и РНГЛ (реакция непрямой гемагглютинации) для постановки диагноза [2, 6].
В мировой практике для диагностики пироплазмидозов применяют иммуноферментный анализ (РИФА), ферментзависимый иммуносорбционный анализ (ELISA), однако отмечают неудовлетворительную специфичность этих методов из-за перекрестных реакций с другими представителями типа Apicomplexa, что вно-
Рис. 5 Мазки крови лошади, окрашенные по Романовскому-Гимзе
а) Babesia caballi (фото http://www.vetbook.org/ wiki/horse/index.php/Babesia_spp); b) Babesia equi (фото http://www.vetnext.com/search. php?s=aandoening&id=73060442801%20469)
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
61
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
VetPharma №1 | ФЕВРАЛЬ-МАРТ 2015
Рис. 6 Мазки цельной крови лошади, окрашенные по Май-Грюнвальда. Картина крови при носительстве: а) Одиночная грушевидная форма; b, с) Овальные и точечные формы; d) Грушевидная и точечные формы (фото Калашниковой Т.В.)
сит субъективность в окончательные результаты исследования [15, 21, 19].
На сегодняшний день не разработано эффективных вакцин, позволяющих предотвратить распространение данной инвазии, поэтому основными методами борьбы с бабезиозами является их ранняя диагностика. Разработка методов ДНК-диагностики пироплазмидозов лошадей является одной из актуальных задач современной клинической ветеринарии. Методы ДНК-диагностики заболеваний животных уже широко внедряются в практику ветеринарной медицины [7, 1]. Высока чувствительность реакции при обнаружении паразитемии Babesia equi при очень низкой инвазированности. Применение ПЦР также высокоэффективно при смешанной инвазии. Возможность ПЦР-диагностики в обнаружении ДНК бабезий при хроническом течении и носительстве можно улучшить, проверяя несколько образцов крови от одного подозреваемого животного [15].
За рубежом успешно ведется разработка наборов для ПЦР-диагностики бабезиозов, в том числе и для одновременного обнаружения двух возбудителей в одной пробе биоматериала [20]. В нашей стране также проходит апробацию тест-система, позволяющая идентифицировать ДНК-возбудителей пироплазмоза и нутталлиоза (Рис. 5). Важным преимуществом разра-
Рис. 7 Электрофореграмма продуктов амплификации на наличие ДНК Babesia caballi и Babesia equi.
1. Смешанная инвазия. 2. Babesia equi. 3. Babesia caballi. 4. Положительный контроль Babesia caballi.
5. Положительный контроль Babesia equi. 6,7. Отрицательные контроли (фото Кузнецовой М.М.)
батываемой системы является ее пригодность для массового скрининга [3, 4, 5].
При молекулярных исследованиях для родовых отличий в основном используют локус субъединицы ри-босомального гена 18S РНК, поскольку эта часть гена достаточно устойчива к мутациям [6, 18, 20]. Дальнейшее изучение возбудителей бабезиозов непарнокопытных, несомненно, связано с использованием ДНК-методов, что позволит оценить филогенетическое родство между различными видами бабезий, установить полиморфизм Babesia caballi и Babesia equi, характерный для регионов Российской Федерации. Следует отметить, что определение молекулярно-генетических характеристик бабезий, выделенных при обнаружении болезни в различных регионах РФ, является необходимым аспектом в изучении молекулярной эпизоотологии и эволюции этих простейших. ■
Литература
1. Герасимова Н.Н. Разработка ОТ-ПЦР в режиме реального времени для идентификации вируса инфекционной анемии лошадей/Н.Н. Герасимова, О.Л. Колба-сова, С.Ж. Цыбанов, Д.В. Колбасов // Молекулярная диагностика - 2014: сб. тр. VIII Всерос. научно-практ. конференции с междунар. участием. - М., 2014. - Т. II. - С 443-444.
2. Заблоцкий В. Т. Пироплазмидозы лошадей // Ветеринария. - 2008. - №8. - С 17-21.
3. Калашникова Т.В. Молекулярно-генетические методы диагностики пироплазмидозов лошадей/ Т.В. Калашникова, М.М. Кузнецова //Материалы 3-й Междунар. научно-практ. конференции «Молодежь и наука XXI века». - Ульяновск: УГСХА, 2010. - Т. 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии. - С. 25-27.
4. Калашникова Т.В. Молекулярно-генетическая экспресс-диагностика пироплазмидозов лошадей / Т.В. Калашникова, М.М. Кузнецова // Проблемы коневодства Сибири: материалы науч. конференции. -Иркутск, 2009. - С.41- 43.
62
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
VetPharma №1 | ФЕВРАЛЬ-МАРТ 2015
БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
5. Калашникова Т.В. Разработка мультиплексной панели для молекулярно-генетической экспресс-диагностики пироплазмидозов лошадей / Т.В.Калашникова, М.М. Кузнецова //Совр. достижения и проблемы генетики и биотехнологии с-х. жив-х: 8-я Междунар. науч. конференция - школа «БиоТехЖ-2009».- Дубро-вицы, 2009.- С.160-162.
6. Карташов С.И. Бабезиоз собак: новые экологические, молекулярно-генетические и клинико-лабораторные аспекты/ С.И. Карташов, А.М. Ермаков, А.Г Ключников и др. // Ветеринария Кубани. - 2010. - №5. -С.22-24.
7. Кузнецова Э.А. Диагностика протозойных заболеваний животных с помощью полимеразной цепной реакции: дисс. канд. биол. наук/ Всерос. НИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина. - Москва, 2001. - 179 с.
8. Луцук С.Н. Морфология, биология и лабораторная диагностика возбудителей протозойных заболеваний животных/ С.Н. Луцук, А.А. Водянов, В.П. Толоконников и др. - Ставрополь: АГРУС, 2009. - 60 с.
9. Луцук С.Н. Пироплазмидозы лошадей /Луцук С.Н., М.Е. Пономарева. - Ставрополь: ГАУ, 2003. - 156 с.
10. Морозов Е.Н. Перспективы применения методов молекулярной паразитологии в мониторинге за социально-значимыми паразитозами / Е.Н. Морозов // Молекулярная диагностика - 2010: сб. тр. VII Всерос. научно-практ. конференции с междунар. участием. -М, 2010.- Т. II.- С.304-307.
11. Ноттенбелт Д., Паскоу Р. Атлас болезней лошадей /Д. Ноттенбелт, Р. Паскоу. Пер. с англ. - М.: Софион, 2008.- 433 с.
12. Робинсон Э. Болезни лошадей. Современные методы лечения / Э.М. Робинсон. - М.: «Аквариум», 2007. -1007с.
13. Содержание, кормление и болезни лошадей: уч. пособие /Под общ.ред.А.А. Стекольникова. - СПб.: Изд-во «Лань», 2007. - 624 с.
14. Стайков В.В. Бабезиоз / В.В. Стайков // Ветеринария с-х. жив-х. - 2007. - №7. - С. 23-25.
15. Терлецкий А. Биология паразитирования и методы цитологической диагностики представителей рода Babesia в крови животных и человека / А. Терлецкий, Л. Ахмерова, Э. Галиева и др. // Ветеринария с-х. жив-х. - 2009. - №9. - С. 41-43.
16. Христиановский П.И. Рекомендации по выявлению природных очагов пироплазмозов животных / П.И. Христиановский, И.В. Быстров, В.В. Белименко // Росс. паразитологический журнал. - 2009. - №1. - С. 109-115.
17. Allsopp M.T. Molecular evidence for transplacental transmission of Theileria equi from carrier mares to their apparently healthy foals/M.T. Allsopp, B.D. Lewis, B.L. Pen-zhorn//VetParasitol. - 2007. - №148. - Р130-136.
18. Allsopp M.T. Molecular sequence evidence for the reclassification of some Babesia species / M.T. Allsopp, B.A. Allsopp //Annals of the New York Academy of Sciences. -2006. - Р.509-517.
19. Equine Piroplasmosis // Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terristal Animals 2014 - chapter 2. 5. 8. Удаленный доступ: http://www.oie.int/internation-al-standard-setting/terrestrial-manual/access-online/
20. Rampersad J. A field evaluation of PCR for the routine detection of Babesia equi in horses / J. Rampersad, E. Cesar, M.D. Campbelland al.//Vet. Parasitol. - 2003. - №114. -Р. 81-87.
21. Rhalem A. Validation of a competitive enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosing Babesia equi infections of Moroccan origin and its use in determining the seroprev-alence of B. equi in Morocco/A. Rhalem, H. Sahibi, S. Lasri-and al.// Vet. Diagn.fnvest. - 2001. - Vol.13. - P249-251.
22. Ruegg S.R. Estimation of the transmissions dynamics of Theileria equi and Babesia caballi in horses /S.R. Ruegg, D. Heinzmann, A.D. Barbour// Parasitology.- 2008. -№135. - Р 555-565.
23. Uilenberg G. Babesia - a historicaloverview / Uilenberg G. // Vet. Parasitol. - 2006. - №138. - Р3-10.
Компания
«АС-Маркет»
предлагает
работу
настоящим
профессионалам
в зообизнесе и ветеринарии
г. Москва, ул. Рябиновая, д.55, www.as-market.ru, [email protected] +7 (495) 916 91 64, доб. 113, +7 (903) 140 01 71
ПОМНИ О ЖИЗНИ | MEMENTO VIVERE
63
