CC BY
102
PHARMA
АВЕРТЕЛЬ-
_ _ _ _ _ _ _
новый высокоэффективным
противопаразитарный препарат для собак и кошек
На правах рекламы
Введение
Несмотря на значительные достижения в ветеринарии, проблема лечения и профилактики паразитарных болезней домашних собак и кошек остается актуальной. Гельминты, клещи и кровососущие насекомые, инокулируя биологически активные вещества и выделяя продукты жизнедеятельности, вызывают зуд, раздражение, воспалительную аллергическую реакцию и токсикоз у животных. Кроме того, клещи и насекомые являются переносчиками ряда опасных инфекций и инвазий (боррелиозы, риккетсиозы, бабезиозы, эрли-хиозы, дирофиляриозы и др.).
В комплексе мероприятий, направленных на борьбу с гельминтозами, одно из ведущих мест занимает дегельминтизация собак и кошек. Ее успех зависит от наличия высокоэффективных, малотоксичных, общедоступных, простых и удобных по способу применения антигельминтиков. Учитывая довольно частые случаи одновременного паразитирования у собак и кошек паразитов разных классов, все более широкое применение получают комбинированные противопарази-тарные препараты, в состав которых входит несколько активных действующих веществ из разных групп химических соединений. Применение таких препаратов помогает сокращать количество обработок животных.
Данная проблема и послужила толчком к разработке научными сотрудниками ООО НБЦ «Фармбиомед» противопаразитарного препарата нового поколения, который был бы эффективен в отношении как эндо-(нематодозы, цестодозы), так и эктопаразитов (арахно-энтомозы).
В арсенале компании уже имеется зарегистрированный и успешно зарекомендовавший себя в качестве противопаразитарного лекарственного препарата инъекционный Аверсект К&С. Однако данный препа-
рат не обладал цестодоцидным действием. Поэтому исследования были направлены на создание комбинированного препарата на базе Аверсекта К&С с целью расширения его спектра действия. Так появился комплексный лекарственный препарат Авертель, в состав которого вошли в качестве действующих веществ аверсектин С1 и празиквантел.
Оценка острой токсичности лекарственного препарата Авертель
Материалы и методы
Для определения параметров острой токсичности исследуемого препарата при различных путях введения использовали белых беспородных крыс (в возрасте 3-4 месяца массой 180-200 г) и мышей (в возрасте 2,5 месяца массой 18-20 г) согласно дизайну опыта (табл. 1).
Животных содержали в виварии согласно нормативным документам, действующим на территории РФ. Подбор животных в группы проводили произвольно, методом «случайных чисел», используя в качестве критерия массу тела. Каждая опытная группа крыс массой 180-200 г состояла из 60 животных. Каждая группа мышей массой 18-20 г состояла из 100 животных.
Для определения острой пероральной токсичности крысам-самцам массой 180-200 г Авертель вводили однократно в дозах 5000, 7000 и 10 000 мг/кг с помощью желудочного зонда; мышам-самцам массой 1820 г Авертель вводили однократно в дозах 100, 250, 500 мг/кг с помощью желудочного зонда.
Для определения накожной токсичности крысам-самцам массой 180-200 г препарат наносили на неповрежденную кожу в дозах 5000 и 10 000 мг/кг. Для
ТАБЛИЦА 1. Дизайн опыта по определению острой токсичности препарата Авертель
Группа Вид, пол животных Кол-во животных в группе Дозы, кол-во Объем раствора для введения, мл/ животное Режим введения
1 Крысы-самцы массой 180-200 г 60 несколько доз 1,0-2,5 Внутрижелудочно, однократно
2 мыши-самцы массой 18-20 г 100 несколько доз 0,1-0,2 Внутрижелудочно, однократно
3 Крысы-самцы массой 180-200 г 60 несколько доз 0,4-0,8 накожно, однократно
4 Крысы-самцы массой 180-200 г 60 несколько доз 0,4-1,0 подкожно, однократно
5 мыши-самцы массой 18-20 г 100 несколько доз 0,1-0,2 подкожно, однократно
определения острой токсичности при подкожном пути введения испытуемый препарат вводили однократно в область спины крысам в дозах 5000, 7000 и 10 000 мг/ кг; мышам - в дозах 100, 250, 500 мг/кг.
В течение 14 суток проводили наблюдение за общим состоянием и поведением животных и возможной гибелью, а также проявлением симптомов интоксикации; отмечали особенности рефлекторных реакций, приема корма и воды; учитывали состояния шерстного покрова, слизистых и т.д. Значения LD50 и других параметров рассчитывали пробит-анализом [Finney D.J., 1977]. Процент гибели крыс при определении острой токсичности препарата Авертель - 0%.
При пероральном введении симптомы интоксикации появлялись примерно через 2-3 ч после введения препарата. Клиническая картина отравления в основном проявлялась в виде скученности, угнетения, отказа от корма, снижения массы тела и т.п. При накожном и подкожном введении препарата симптомы отравления сводились, главным образом, к незначительному угнетению. Важно отметить, что гибель животных при всех путях введения отсутствовала.
Следующим этапом работы была оценка токсических свойств Авертеля на другом виде животных - мышах. Результаты приведены в таблице 2.
Симптомы интоксикации у мышей были аналогичными симптомам крыс, но они появлялись уже через 1-1,5 ч после введения, а основной падеж мышей наблюдали в первые 3 суток. Необходимо отметить, что у некоторых крыс и мышей наблюдалась реакция (покраснение) в месте подкожного введения, которая проходила в течение нескольких суток.
Подводя итоги данного исследования, можно заключить: LD50 Авертеля при пероральном введении крысам составляет более 10 000 мг/кг. Мыши более чувствительны к препарату Авертель, чем крысы. Сред-
несмертельная доза Авертеля для мышей составляет 350 мг/кг (201,14,498,86). Согласно гигиенической классификации ГОСТ 12.1.007-76, Авертель относится к 3-му классу опасности (классификация проведена соответственно параметрам на более чувствительном виде животных - мышах).
Значение среднесмертельной дозы Авертеля при накожном нанесении крысам составляет более 10 000 мг/кг (согласно гигиенической классификации ГОСт 12.1.00776, Авертель относится к 4-му классу опасности).
Значение среднесмертельной дозы препарата Авертель при подкожном введении крысам составляет более 10 000 мг/кг. Мыши более чувствительны к препарату Авертель по сравнению с крысами. Средне-смертельная доза Авертеля для мышей при подкожном введении составляет 500 мг/кг (375,35,642,65).
Далее в целях наиболее развернутой характеристики препарата было разумным также оценить его токсичность при повторных воздействиях, т.е. в условиях многократного введения. Таким образом, целью дальнейших исследований стала оценка субхронической
ТАБЛИЦА 2.
Гибель животных
Доза, мг/кг (количество павших / общее
количество)
Внутрижелудочно однократно
100 0/100
250 6/100
500 8/100
1000 10/100
Подкожно однократно
100 0/100
250 2/100
500 6/100
1000 10/100
токсичности препарата Авертель на крысах при подкожном введении.
Материалы и методы
Препарат вводили подкожно в область спины, чередуя с одной и другой стороны. Введение препарата проводили ежедневно в течение 10 суток. При расчете дозировок для настоящего опыта полагали, что они должны находиться в пределах от токсических до субтоксических, недействующих. Исходя из этого, в качестве отправной точки использовали значение LD50, точнее, максимально возможной для подкожного введения дозы (10 000 мг/кг), установленной в остром опыте на крысах при подкожном введении. В этом случае кратные дозы составили 2000, 1000 и 500 мг/кг массы тела (соответственно 1/5, 1/10 и 1/20).
В течение всего периода введения препарата наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями и т.п. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела (весы ВР-05 МС-3/0.5-БР, Россия).
Через 1 сутки после последнего введения препарата на 3 крысах из каждой группы определяли диурез, проводили анализ мочи и на 4 крысах ставили поведенческие реакции. Затем всех крыс в каждой группе убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для определения гематологических и биохимических показателей.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе Abacus JuniorVet (Diatron, Австрия) с использованием реактивов ООО «Клиникал Диагностик солюшнз» (Россия), лейкоцитарную формулу - общепринятым методом. Биохимические показатели крови определяли на анализаторе А-15/25 (BioSystems S.A., Испания) с использованием реактивов производства ЗАО «Диакон-ДС» (Россия).
Результаты
При введении испытуемого препарата во всех тестированных дозах гибель крыс составила 0%. Полагаем, что немаловажным также является отсутствие отклонений в состоянии и поведении животных. Иными словами, в течение всего опытного периода не детектировали каких-либо признаков интоксикации.
PharmBi®Med
По результатам внешних наблюдений и пальпации места подкожного введения Авертель не оказывал выраженного раздражающего действия в испытанных дозах, однако основным критерием в данном случае были результаты гистологических исследований.
Одним из объективных показателей переносимости лекарственных препаратов является динамика прироста массы тела. Препарат оказал отрицательное влияние на динамику привесов у крыс при ежедневном введении в течение 10 суток только в дозе 2000 мг/кг. Дозы 1000 и 500 мг/кг были недействующими в данном отношении. Десятикратное введение препарата Авертель отразилось на массовых коэффициентах в двух верхних дозах, составляющих 2000 и 1000 мг/ кг. Введение Авертеля в дозах 2000, 1000 и 500 мг/кг не привело к статистически значимому изменению ни одного тестированного гематологического показателя. Необходимо добавить, что лейкоцитарная формула крови крыс трех опытных групп была сравнима с контролем.
Таким образом, введение Авертеля в тестированных дозах не оказало достоверного влияния на состояние периферической крови крыс.
В данном опыте также исследовали влияние препарата при многократном введении на ряд важных биохимических показателей сыворотки крови (12 показателей) у крыс. Отметим наиболее важные установленные факты, среди которых прежде всего следует выделить информацию, касающуюся функции печени и почек. Традиционно функциональное состояние печени оценивают по ряду биохимических показателей,таких как билирубин, активность аспартата-мино- и аланинаминотрансфераз (ACT и АЛТ), коэффициент Ритиса и др. В данном случае при введении Авертеля в дозах 2000,1000 и 500 мг/кг активность ACT и АЛТ составила соответственно 296,30±19,93, 307,80±24,43 и 279,20±13,97 против контрольного значения 264,80±21,85 Е/л и 61,00±2,41, 69,80±4,06 и 60,10±2,27 по сравнению с 65,00±2,93 Е/л в контроле.
Уровень общего и прямого билирубина не изменялся после введения Авертеля во всех тестированных дозах.
Рассмотрим блок данных, характеризующих функциональное состояние почек, т.е. содержание мочевины и креатинина. Анализ этих
данных дает основание констатировать, что два таких важных показателя не изменялись при введении препарата Авертель во всех дозах. Таким образом, уровень мочевины и креатинина равнялся соответственно тестированным дозам 7,27±0,24, 6,70±0,21 и 6,918±0,24 по сравнению с 6,97±0,27 ммоль/л в контроле и 52,30±1,65, 50,40±1,91 и 49,10±2,02 против 50,10±1,82. С учетом приведенных данных можно констатировать, что подкожное введение Авертеля не оказало отрицательного влияния на функцию печени и почек.
При оценке влияния препарата Авертель во всех тестированных дозах на функциональное состояние ЦНС, судя по визуальным наблюдениям, можно отметить, что в период введения препарата крысы сохраняли двигательную активность, сравнимую с периодом до начала опыта и наблюдаемую у контрольных животных. Крысы опытных групп адекватно реагировали на внешние раздражители. Введение препарата во всех тестированных дозах ни в одном случае не оказало статистически достоверного влияния на поведенческие реакции, такие как стойка без опоры, стойка с опорой, короткий и продолжительный груминг, число пересеченных квадратов, норковый эффект, выход в центр и дефекацию.
При оценке диуреза у крыс после введения препарата показатели составили в порядке убывания доз -7,17±1,30, 7,33±0,44 и 6,83±0,73 мл против контрольного значения 8,17±0,44 мл.
Функцию почек также оценивали по результатам клинического анализа мочи крыс после введения исследуемого препарата. Данные анализа опытных крыс по результатам количественных и качественных тестов практически не отличались от контрольных значений.
В целом следует отметить, что при многократной схеме введения препарата Авертель в течение 10 суток основные признаки токсического действия препарата имели место при введении в самой высокой тестированной дозе, т.е. 2000 мг/кг. Они проявлялись в следующей форме: к концу опыта крысы этой группы достоверно меньше прибавили в массе тела, имели место достоверные изменения массовых коэффициентов внутренних органов. Однако отсутствовали гибель животных и интоксикация.
Введение препарата Авертель в средней дозе, т.е. 1000 мг/кг, привело к менее серьезным последствиям, хотя в основном они имели аналогичный характер (за исключением снижения привесов). Токсические проявления этого или какого-либо другого характера не были обнаружены для дозы 500 мг/кг.
При оценке иммунотоксического и аллергизирую-щего действия препарата Авертель было установлено,
что данный лекарственный препарат аллергизирую-щим действием не обладает. После проведения обширных исследований на лабораторных животных, дающих основание полагать, что применение Авертеля будет безопасным, мы перешли к проведению исследований на собаках и кошках, т.к. создание препарата планировалось именно для этих животных.
оценка эффективности и переносимости лекарственного препарата Авертель на кошках и собаках
Переносимость Авертеля оценивали при введении препарата собакам (условно здоровым) в 2 дозировках: в терапевтической - 0,1 мл/кг массы тела (0,5 мг/кг по аверсектину С и 5 мг/кг по празиквантелу) и трехкратной терапевтической - 0,3 мл/кг массы тела (1,5 мг/кг по аверсектину С и 15 мг/кг по празиквантелу).
Из 150 собак сформировали две опытные группы и одну контрольную группу. Собакам группы 1 и группы 2 препарат Авертель вводили подкожно в указанных дозах в область загривка, чередуя с одной и с другой стороны.
Считаем необходимым обсудить контроль в настоящем опыте. Несмотря на наличие контрольной группы (вводили воду для инъекций производства ОАО «Биохимик», серия 270710, срок годности до 08.2014, животные, которые в большей степени служили для сравнений общего характера, например, поведенческих реакций), реальным контролем служили сами опытные животные. Иными словами, состояние и поведение собак, а также результаты определения клинических, гематологических и биохимических показателей сравнивали с периодом до введения Авертеля. Полагаем, что в данном случае это наиболее удачная модель для клинического (описательного) и статистического сравнения полученных результатов.
До введения, во время введения испытуемого препарата и после этого периода наблюдали за общим состоянием и поведением животных, ежедневно обследовали место введения препарата. До введения препарата (0 сутки) и через 1, 5 и 10 суток после последнего введения препарата Авертель отбирали пробы крови в пробирки с антикоагулянтом и без него для определения гематологических и биохимических показателей. Таким образом, в настоящем опыте имелся десятидневный восстановительный период «отдыха» от препарата, который позволил оценить возможные более дальние последствия введения препарата.
Основные показатели периферической крови собак определяли на гематологическом анализаторе Abacus
JuniorVet (Diatron, Австрия) с использованием реактивов производства ООО «Клиникал Диагностик Солюш-нз» (Россия), лейкоцитарную формулу - общепринятым методом. На анализаторе «А-15/25» (BioSystems S.A., Испания) проводили определение биохимических показателей с использованием реактивов производства ЗАО «Диакон-ДС» (Россия).
На основании проведенного исследования были сделаны следующие выводы. Введение испытуемого препарата не оказало отрицательного влияния на общее состояние, поведение и прием корма у собак по сравнению с периодом до начала опыта и в сравнении с контрольными животными, не говоря уже о том, что гибель животных отсутствовала во всех случаях.
При введении Авертеля в рекомендованной терапевтической дозе местной реакции препарата не отмечали. Такой вывод базируется не только на результатах тщательного обследования места инъекций (внешний осмотр, пальпация), но и на отсутствии у собак системных реакций, например, лейкоцитоза и изменения лейкоцитарной формулы. Однако при введении испытуемого препарата в трехкратной дозе отмечали появление припухлости (за счет больших объемов введения), которая быстро рассасывалась после прекращения введения Авертеля. Лейкоцитоз отсутствовал и в данном случае.
В итоге мы пришли к следующему обоснованному заключению: препарат Авертель хорошо переносится собаками при ежедневном введении в терапевтической и трехкратной терапевтической дозах в течение 7 суток. Результаты наблюдений за общим состоянием и поведением собак, данные определения клинических, гематологических и биохимических показателей свидетельствуют о хорошей переносимости препарата в рекомендованной терапевтической и повышенной дозах.
Заключительным этапом наших исследований стала оценка терапевтической эффективности лекарственного препарата Авертель. Эффективность препарата при гельминтозах проверяли на собаках и кошках, спонтанно и экспериментально зараженных цес-тодами и нематодами, на базе ветеринарных клиник, питомников и приютов для собак и кошек г. Москвы и Московской области и вивария Западно-Казахстанской НИВС.
Большое внимание уделяли переносимости препарата. В течение 10-21 суток после применения Авертеля наблюдали за общим состоянием и поведением животных, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями и т.п.
Для определения эффективности Авертеля против цестод и нематод во всех нижеперечисленных опытах
проводили гельминтокопроскопию и копроовоско-пию (методом Калантарян) проб для постановки диагноза перед обработкой препаратом, а также через 10-14 суток после лечения испытуемым препаратом.
Объектом исследования явились 73 собаки и 42 кошки, экспериментально и спонтанно зараженные гельминтами, паразитическими клещами и насекомыми. нами была изучена эффективность инъекционной формы комбинированного препарата Авертель при гельминтозах и арахноэнтомозах собак и кошек.
Комбинированный препарат Авертель при однократном подкожном применении в дозе 0,5 мг/кг по аверсектину С1 и 5 мг/кг по празиквантелу (в объеме 0,1 мл/кг) показал 100% эффективность у собак и кошек против цестод, эффективность препарата против нематод составила у кошек 100%, у собак - 96,9%.
Комбинированный препарат Авертель при двукратном подкожном применении с интервалом 14 суток в дозе 0,5 мг/кг по аверсектину С1 и 5 мг/кг по празиквантелу показал 100% эффективность при ото-дектозе собак и кошек, саркоптозе собак, нотоэдрозе кошек, линогнатозе и триходектозе собак. При ктено-цефалидозе эффективность у собак составила 83,3%, у кошек - 87,5%.
Авертель показал себя как высокоэффективный противопаразитарный препарат при лечении наиболее распространенных заболеваний собак и кошек. Препарат хорошо переносился всеми животными, независимо от общего состояния, сопутствующего заболевания и возраста. При лечении животных проявлений каких-либо побочных эффектов не наблюдали.
Инъекционная форма препарата значительно упрощает его применение и экономит время, затрачиваемое на обработку животных. Всесторонние и масштабные исследования лекарственного препарата Авертель, проведенные на лабораторных животных, а также на кошках и собаках, т.е. на тех видах животных, для которых он предназначен, позволяют нам сделать вывод о высокой эффективности и безопасности применения препарата Авертель при лечении паразитарных заболеваний собак и кошек.
31 декабря 2015 г. компания «Фармбиомедсервис» получила государственную регистрацию (№ регистрационного удостоверения: 250-3-13.15-2932№ПВИ-3-13.15/04693) на новый препарат Авертель - инъекционное лекарственное средство для лечения и профилактики арахноэнтомозов, нематодозов и цестодозов у собак и кошек.
