CC BY
39
Б >
а
So L 2
о i
Я--
Щ а
^ Г х с mt:
о
а
I-
АУТОИММУННЬШ КОМПОНЕНТ РЕАКЦИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ К
ПАНКРЕАТИТЕ: КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ *
ИССЛЕДОВАНИЕ S
т
Винокурова Л. В., Трубицына И. Е., Живаева Н. С., Губина А. В., Чикунова Б. З., |
Князев О. В., Сагынбаева В. Э. <
Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва
Живаева Наталья Сергеевна 111123, Москва, шоссе Энтузиастов, д. 86 Тел.: 8 (495) 304 0060 E-mail: doc_zhi@mail.ru
РЕЗЮМЕ
Целью работы явилось выявление связи между воспалительными и аутоиммунными процессами при хроническом панкреатите, а также определить прогностическое значение аутоантител к антигенам ацинарных клеток и гепатоцитов, иммуноглобулинов G1-4.
Материалы и методы. У 85 больных с ХП (43 мужчины, 42 женщины) были исследованы аутоантитела к антигенам ацинарных и печеночных клеток, IgG1-4. Из них у 43 больных ХП протекал с осложнениями (кисты, кальциноз, псевдотуморозная форма), у 40 больных — ХП без осложнений, у 2 больных был выявлен хронический аутоиммунный панкреатит (ХАП), подтвержденный гистологически.
20 человек — контрольная группа. Экспериментальные исследования на животных, воспроизведение острого и хронического панкреатита.
Результаты. Максимальное повышение уровня аутоантител — 32,4 ± 5,6 Е/мл (контроль — 10,5 ± 2,5 Е/ мл) (р < 0,01), а также IgG4 - 24 мг/мл при норме (0,8 ± 0,08 мг/мл) — регистрировалось у больных с аутоиммунным панкреатитом. Средние значения аутоантител — у больных с ХП с осложнениями:
24,2 ± 3,8 Е/мл (р < 0,01). Минимальные значения аутоантител — у больных с ХП без осложнений:
18,6 ± 2,6 Е / мл (р < 0,05).
Заключение. Течение аутоиммунного панкреатита сопровождается повышением аутоантител к антигенам ацинарных и печеночных клеток, а также сывороточных IgG1-4, особенно IgG4, что отражает интенсивность аутоиммунных реакций при данном заболевании. Кроме того, при обострении хронического панкреатита с осложнениями хорошо выражен аутоиммунный компонент заболевания Экспериментальные исследования с предварительной иммунизацией животных аллогенными тканями убедительно продемонстрировали, что образование антител происходит не только к антигенам, отражающим специфические особенности этих тканей, но и к общим клеточным структурам других тканей.
Ключевые слова: хронический панкреатит; поджелудочная железа; цитокины; аутоантитела.
SUMMARY
The study was undertaken to identify the relationship between inflammatory and autoimmune processes in chronic pancreatitis and to determine the prognostic significance of autoantibodies to antigens of acinar cells and hepatocytes, immunoglobulin G1-4.
Materials and methods. In 85 patients with CP (43 men, 42 women) were studied autoantibodies to antigens of acinar and liver cells, IgG1-4. Of these, 43 patients HP was characterized by complications (cysts, calcification, pseudotumoral form), 40 patients - HP without complications, 2 patients were diagnosed chronic autoimmune pancreatitis (CAP), confirmed histologically. 20 people - the control group. Experimental studies on animals, reproduction of acute and chronic pancreatitis.
Results. Maximize the level of autoantibodies - 32,4 ± 5,6 U / ml (control - 10,5 ± 2,5 U / ml) (p < 0,01), as well as IgG4 - 24 mg / ml in normal (0, 8 ± 0,08 mg / ml) - was recorded in patients with autoimmune pancreatitis.
The average value of autoantibodies - in patients with CP complications: 24,2 ± 3,8 U / ml (p < 0,01). The ^
minimum value of autoantibodies - in patients with CP without complications: 18,6 ± 2,6 U / ml (p < 0,05).
№08/2010 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ
Conclusion. The course of autoimmune pancreatitis accompanied by an increase of autoantibodies to antigens of acinar and liver cells, as well as serum IgG1-4, especially IgG4, which reflects the intensity of the autoimmune responses in this disease. In addition, the exacerbation of chronic pancreatitis with complications is clearly defined autoimmune component of disease Experimental studies with preimmunization of animals allogeneic tissues have convincingly demonstrated that the formation of antibodies is not only to the antigens, reflecting the specific characteristics of these tissues, but also to general cell structures of other tissues.
Keywords: chronic pancreatitis, pancreas, cytokines, antibodies.
Воспалительные процессы могут сопровождаться активацией аутоиммунных реакций соответствующей органной направленности, что повышает продукцию органоспецифических аутоантител (а-АТ) [1; 2], сопровождаясь повышением синтеза а-АТ к ДНК, бета-2-гликопротеину, кардиолипину, компонентам межклеточного матрикса и другим повсеместно присутствующим антигенам. Имея адаптивное значение, наличие аутоиммунного компонента может провоцировать деструктивные процессы [1; 3; 4].
При хроническом панкреатите (ХП) длительное хроническое воспаление поджелудочной железы (ПЖ) ведет к развитию аутоиммунного компонента, проявляющегося повышением продукции и сывороточного содержания аутоантител к антигенам ацинарных клеток и гепатоцитов.
Поэтому целью работы является выявление связи между воспалительными и аутоиммунными процессами при хроническом панкреатите, а также определение прогностического значения аутоантител к антигенам ацинарных клеток и гепатоцитов, иммуноглобулинов 01-4.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
У 85 больных с ХП (43 мужчины, 42 женщины) были исследованы аутоантитела к антигенам ацинарных и печеночных клеток, 1§01-4. Из них у 43 больных ХП протекал с осложнениями (кисты, кальциноз, псевдотуморозная форма), у 40 больных — ХП без осложнений, у 2 больных был выявлен хронический аутоиммунный панкреатит (ХАП), подтвержденный гистологически. 20 человек — контрольная группа. Диагноз ХП был поставлен на основании клинических и инструментально-лабораторных методов исследования.
Аутоантитела к антигенам ацинарных и печеночных клеток, 1§01-4 оценивались с помощью имму-ноферментного метода тест-системой Еитоттип, О^вМвс, DRG-Diagnostics. №N-7, ТОТ-а определяли иммуноферментным методом, используя тест-системы «Протеиновый контур».
Дополнительная часть исследований — экспериментальное воспроизведение панкреатита путем введения аллогенного гомогената ПЖ. Цель этих исследований — установить время появления антител и снижения толерантности к аутоантителам. Опыты проводили на белых крысах весом 180 - 220 г.
Содержание животных в виварии соответствовало санитарным правилам. Все эксперименты проводились в соответствии с правилами гуманного обращения с животными. Операции выполняли под общей анестезией с соблюдением требований асептики и антисептики. Животные были разделены на 6 опытных и одну контрольную группы, по 5 животных в каждой группе. Первая группа: для предварительной иммунизации использовали гомогенат ткани поджелудочной железы, приготовленный из расчета 1 г ткани в 10 мл физиологического раствора. Крыс иммунизировали по схеме: делали 4 внутрибрюшинные инъекции по 2 мл гомогената, примерно 30 мг белка на инъекцию, через три дня на четвертый. По этой схеме получаются антитела в титре 1:160 - 1:640. Вторая и третья группы (острый панкреатит), вторая — воспроизведение острого повреждения ткани ПЖ уксусной кислотой. Аутопсия животных на вторые сутки после воспроизведения; третья группа — введение в ткань ПЖ содержимого двенадцатиперстной кишки. Четвертая группа — хронический панкреатит через 7 дней после воздействия уксусной кислотой на ткань ПЖ. Пятая и шестая группы — повторное воздействие кислотой и введение содержимого двенадцатиперстной кишки.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Выявлено максимальное повышение концентрации аутоантител к антигенам ацинарных клеток и ге-патоцитов: 32,4 ± 5,6 Е/мл (контроль — 10,5 ± 2,5 Е / мл) (р < 0,001) при аутоиммунном панкреатите, который сочетался в одном случае с синдромом Шегрена, в другом — с аутоиммунным тиреоиди-том. При хроническом аутоиммунном панкреатите на фоне гормональной терапии кортикостероидами отмечалось значительное снижение интенсивности аутоиммунного компонента с позитивной динамикой показателей клинической картины заболевания. Высокие значения 1§С4 были выявлены у 2 пациентов с аутоиммунным панкреатитом и составили 24 мг/мл при норме 0,8 ± 0,08 мг/мл. Уровень 1§С1-3 был также повышен, но менее выражен.
Умеренное повышение концентрации аутоантител: 24,2 ± 3,8 Е/мл (р < 0,01) — при ХП с осложнениями; минимальное: 18,6 ± 2,6 Е/мл (р < 0,05) — ХП без осложнений. Иммуноглобулины класса С
отражают интенсивность антигенной стимуляции, процессов воспаления. Уровень 1д01-4 у больных с ХП: 1§01 - 22,3 ± 2,1 мг/мл, р < 0,001 (М 8,3 ± 0,91), ^02 - 21,6 ± 1,7 мг/мл, р < 0,001 (М 3,9 ± 0,42), ^03 - 3,8 ± 0,3 мг/мл, р < 0,05 (М0,6 ± 0,05), ^04- 3,0 ± 0,4мг/ мл (М 0,8 ± 0,08), р < 0,01.
Экспериментальные исследования. У животных после предварительной иммунизации в сыворотке крови выявлены антитела к париетальным клеткам (195,43 ± 21) после последней в / брюшинной инъекции гомогената ткани ПЖ. Через неделю после последнего введения гомогената ткани ПЖ выявлены антитела к ацинарным клеткам (67,5 ± 6,8 Е/мл), в контроле они отсутствуют. Одновременно в крови и экстрактах ткани ПЖ повышено содержание ЮТ-у — 145,6 ± 7,8 пг/мл, контроль 50,6 ± 5,1 пг/мл; 186,7 ± 8,3 пг/г ткани, контроль 30,2 ± 2,5 пг / г ткани (р < 0,05).
При морфологическом исследовании поджелудочной железы выявлены следующие изменения: отек ткани; полнокровные расширенные сосуды; кровоизлияния; в слизистой оболочке желудка (антральный отдел) и двенадцатиперстной кишки — отек, полнокровные сосуды и кровоизлияния в подслизистом слое. После воздействия кислотой появляются выраженный отек, обширные некрозы, кровоизлияния. Введение содержимого — отек, расширенные сосуды, ограниченные некрозы. Антитела к париетальным и ацинарным клеткам отсутствуют, ШБ-у как в крови, так и в ткани повышен. Четвертая группа — ХП через 7 дней после воздействия уксусной кислотой на ткань ПЖ. Определяется низкий титр антител к париетальным и ацинарным клеткам, уровень содержания антител зависит от глубины повреждения ткани ПЖ. В крови сохраняется повышенное содержание ШБ-у. Пятая и шестая группы — повторное воздействие. Образование дополнительных некрозов, усиление воспалительной реакции. Более высокий титр антител к париетальным и ацинарным клеткам.
Учитывая полученные результаты, можно предположить, что хроническое воспаление ПЖ, сопровождаемое стойкой активацией органоспецифичных аутоиммунных реакций, является лишь одним из частных случаев более широкого биологического явления [5]. В этой связи регистрация и анализ изменений сывороточного содержания разных органоспецифических а-АТ могут стать удобным маркером воспалительных изменений, ведущих к нарушению функциональной активности любых органов. Необходимо отметить, что изменения в содержании а-АТ при развитии локальных патологических процессов, являются универсальным феноменом и соответственно отражают начинающиеся патологические процессы, изменяющие нормальный антигенный баланс в том или ином органе [1].
Таким образом, можно выделить два варианта течения ХП: аутоиммунный и неиммунный. Аутоиммунный вариант характеризуется повышением содержания сывороточных иммуноглобулинов,
прежде всего 1§0, циркулирующих иммунных комплексов. Неиммунный вариант характеризуется менее тяжелым течением, чаще с редкими обострениями, менее значительны биохимические сдвиги, содержание сывороточных иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов снижено. Выделение аутоиммунного варианта ХП предполагает применение в комплексной терапии этих больных иммунокорригирующих средств и методов лечения.
Внешняя и внутренняя среда организма находится в постоянном балансировании между повреждающими и защитными факторами. Некоторые повреждающие факторы возникают вне органа, а некоторые являются плодом деятельности самого организма, включая адаптационные механизмы, которые направлены на защиту органа, ткани и клетки [6]. Аутоантитела указывают на присутствие аутоиммунного компонента.
Они могут вызывать повреждение клеток, если их титр высокий, но в основном они утяжеляют течение уже возникшего повреждения ткани, в частности ПЖ. Аутоантитела в сочетании с увеличением циркулирующих цитокинов отражают интенсивность местной воспалительной реакции [7].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Экспериментальные исследования с предварительной иммунизацией животных аллогенными тканями убедительно продемонстрировали, что образование антител происходит не только к антигенам, отражающим специфические особенности этих тканей, но и к общим клеточным структурам других тканей. Образование аутоиммунного компонента зависит от продолжительности иммунизации, общей дозы введенного антигена. Обладая органной специфичностью, он вовлекает в совместную реакцию другие органы — слизистую желудка (антральный отдел) и двенадцатиперстной кишки. Антитела к париетальным клеткам появляются раньше, чем к ацинарным клеткам, что указывает на низкую иммунную толерантность слизистой оболочки в сравнении с тканью поджелудочной железы.
Обострение аутоиммунного панкреатита сопровождается повышением аутоантител к антигенам ацинарных и печеночных клеток, а также сывороточных 1§С1-4, особенно 1§С4, что отражает интенсивность аутоиммунных реакций при данном заболевании. При обострении хронического панкреатита с осложнениями хорошо выражен аутоиммунный компонент заболевания. Это подтверждается повышением аутоантител и 1§0. Выявление данных маркеров при обострении хронического панкреатита играет важную роль в диагностике заболевания, оценке степени тяжести, прогнозе и лечении больных.
Б >
а
5 О
I- 2
О £ £
Щ а
Н £ X с Шт:
О
а
н
и
га
I.
Б
га
й
<и
т
X
5
<
1-Л
№08/2010 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ
ЛИТЕРАТУРА
1. Арапов Н. А., Овчарова Н. А. и др. Хронический панкреатит как фактор риска развития инсулинозависимого сахарного диабета // Материалы 2-й Моск. конф., 2008. — С. 17 - 19.
2. Chari S., Smyrk T., Levy M. et al. Диагностика аутоиммунного панкреатита: опыт клиники Мейо // Clin. Gastroenterol. and Hepatol-ogy. — 2009. — Vol. 4. — P. 259 - 264.
3. Kamisawa T., Egawa N. et al. Autoimmune pancreatitis is a systemic autoimmune disease // Am. J. Gastroenterology. — 2003. — Vol. 98. — P. 2811 - 2812.
4. Asaumi H., Taguchi M. et al The stimulatory effects of various extracellular matrix on rat pancreatic stellate cells // Pancreatology. — 2008. — Vol. 8, № 3. — P. 299.
5. Odinokova I. V. et al. Mitochondrial mechanisms of death responses of pancreatitis // Pancreatology. — 2008. — Vol. 8, № 3. — P. 287 - 288.
6. Asaumi H., Taguchi M. et al The stimulatory effects of various extracellular matrix on rat pancreatic stellate cells // Pancreatology. — 2008. — Vol. 8, № 3. — P. 299.
7. Venglovecz V., Yegyi P. et al. Effect of bile acids on long conductances in native pancreatic duct cells // Pancreatology — 2008. — 8, № 3. — P. 289.
"O
CM
