CC BY
84
АУТОИММУННЫЙ КОМПОНЕНТ ПРИ АЛКОГОЛЬНОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ У КРЫС
Трубицына И. Е., Воробьева Н. Н., Чикунова Б. З., Федотова Т. Ф., Крюкова Н. Б.
ГУЗ Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии ДЗ, Москва
Трубицына Ирина Евгеньевна
111123, Москва, шоссе Энтузиастов, д. 86
E-mail: gastroenter@rambler.ru
РЕЗЮМЕ
В условиях эксперимента показали наличие аутоиммунного компонента у животных и присутствие сочетанной патологии, в основе которой находится генерализованная аутоиммунная реакция на общие антигены.
Снижение толерантности приводит к сочетанной патологии, и не всегда возможно выявить «первичный» орган, который вызвал присутствие аутоиммунного компонента. Проведение экспериментальных исследований при сенсибилизации животного клетками разных органов дает возможность выявить органы с более низкой или высокой толерантность и наличие совместных повреждений. Установлено, что предварительное алкогольное повреждение печени усиливает и удлиняет время наличия аутоиммунного компонента.
Ключевые слова: моделирование аутоиммунной реакции у крыс; печень; желудок
SUMMARY
The article describes the presence of an autoimmune component and combined pathology on the base generalized autoimmune response to common antigens in animals in the conditions of experiment. Experimental studies on sensibilized animals by cells of different organs give the opportunity to reveal organs with a high or low tolerance and the presence of joint damage. It was found that the prior alcoholic liver damage increases and prolongs the presence of autoimmune component. Keywords: modeling of autoimmune responses in rats, liver, stomach
OJ 1-Л
Морфологические изменения при аутоиммунных болезнях характеризуются воспалительными и дистрофическими изменениями в поврежденных органах. В клетках паренхимы выявляются зернистая дистрофия и некроз. В кровеносных сосудах отмечается мукоидное и фибриноидное набухание и некроз их стенок, тромбоз, вокруг сосудов формируются лимфоцитарно-макрофагальные и плазмо-цитарные инфильтраты. В соединительной ткани стромы органов выявляются дистрофия в форме мукоидного и фибриноидного набухания, некроз и склероз. В селезенке и лимфатических узлах выражена гиперплазия, интенсивная инфильтрация лимфоцитами, макрофагами. Все эти проявления аутоиммунной реакции возникают на конечной стадии развития процесса, когда идет гибель клеток. Начальный этап развития аутоиммунной реакции у больных проследить не удается, хотя аутоиммунные реакции играют важную роль в патогенезе многих болезней животных и человека. Изучение аутоиммунных процессов представляет большой практический интерес. Исследование
аутоиммунитета привело к значительным достижениям в области диагностики и терапии ряда заболеваний человека и животных.
В условиях нормального физиологического состояния степень возможности аутоиммунных процессов строго контролируется.
Признаками аутоиммунной патологии, когда нарушается аутоиммунный гомеостаз, может быть появление антигенов при неадекватных воздействиях на организм факторов внешней среды инфекционного или неинфекционного происхождения, генетически обусловленных дефектах. Вероятно, имеет место предварительная сенсибилизация к аутоанти-генам. аутоантитела, вызывающая повреждение клеток, что лежит в основе аутоиммунных заболеваний;
1) аутоантитела сами по себе не вызывающие, но утяжеляющие течение уже возникшего заболевания (инфаркт миокарда, панкреатит и другие);
2) аутоантитела-свидетели, не играющие существенной роли в патогенезе заболевания, но возрастание титра которых может иметь диагностическое значение.
Аутоиммунный компонент возникает в связи с изменениями антигенных свойств тканей под воздействием эндогенных и экзогенных факторов, Циркулирующие органоспецифические антитела найдены при многих заболеваниях: антипочечные антитела — при почечных заболеваниях, антисердечные антитела — при определенных заболеваниях сердца и т. д. [1].
Для того чтобы принять или отвергнуть вышеприведенные данные, необходимо проводить экспериментальные исследования, которые позволят наблюдать развитие аутоиммунного процесса в ранние сроки, выявить специфичность иммунной реакции и возможность сочетания повреждений в разных органах.
В слизистой оболочке желудка, как и в кишечнике, собственная пластинка содержит лимфоидная ткань с небольшими агрегатами из Т- и В-лимфоцитов и плазматических клеток (в основном типа ^А), это ассоциированная с пищеварительным каналом лимфоидная ткань. В настоящее время роль их в иммунных процессах хорошо известна, но в то же время она может способствовать развитию аутоиммунной реакцию к слизистой оболочке разных отделов ЖКТ при сенсибилизации животных собственными антигенами.
Целью работы было получение в эксперименте на крысах модели аутоиммунного поражения печени.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Использовали белых крыс, обоего пола, вес животных 180 - 220 г. Содержание животных в виварии проводилось в соответствии с санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (от 06.04.1993 г.), кормление в соответствии с нормами утвержденными приказом МЗ РФ № 163 от 10 марта 1996 г. Карантирование животных проводилось в течение 10 дней. Все эксперименты проводились в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ и использования экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР № 775 от 12 августа 1977 года, а также основывались на положениях Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации от 1964 года, дополненной в 1975, 1983 и 1989 гг. Операции выполнялись с соблюдением требований асептики и антисептики, под общей анестезией.
Животные были разделены на четыре группы: три опытных и одна контролная — группы состояли из пяти животных. Ткань для приготовления гомогенатов брали у 10 интактных животных, полученных в одной партии привоза. В опытной группе животных иммунизировали гомогенатами.
I. Две опытные группы— животным в/брюшин-но вводили гомогенат ткани печени 2,0 мл:
1-я: введение гомогената интактным животным;
2-я — введение гомогената животным, которым воспроизводили алкогольное токсическое повреждение печени.
II. Контрольная группа, животным вместо гомогената вводили физиологический раствор, 2 мл.
МЕТОДИКА ИММУНИЗАЦИИ
При иммунизации животного гомогена-тами аллогенных тканей антитела образуются главным образом к антигенам, отражающим специфические особенности этих тканей [1]. Образование специфических и общих для ряда тканей (ядро, митохондрии) антител зависит от продолжительности иммунизации и общей дозы введенного антигена [2].
Крыс иммунизировали по схеме: использовали аллогенный гомогенат ткани, приготовленный из расчета 1 г ткани в 10 мл физиологического раствора (рис. 1).
Делали три внутрибрюшинные инъекции по 2 мл гомогената, примерно 30 мг белка на инъекцию, через три дня на четвертый. По этой схеме получаются антитела в титре 1 : 160 - 1 : 640.
Убой животных проводили на 10-й день после первой инъекции, было сделано всего три введения.
Контрольные животные: при внешнем осмотре слизистая оболочка гастродуоденальной зоны и печень без изменений.
Опытная группа: у всех животных — отек слизистой оболочки тела желудка и дуоденум (рис. 2, см. цветную вклейку). Печень — внешних изменений нет, цвет темно-вишневый.
Контрольная группа: у всех животных — слизистая оболочка тела желудка и двенадцатиперстной кишки без видимых изменений. Печень без изменений.
МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Исследуемый материал — ткань желудка (из фун-дального и антрального отделов), 12-перстной кишки и печени фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, после гистологической проводки заливали в парафин, затем срезы толщиной 4 - 5 мкм окрашивали гематоксилином, эозином и по Ван Гизону.
В ходе исследования было выявлено: в контрольной группе крыс патологических изменений в стенке тела и антрального отдела желудка, двенадцатиперстной кишки и печени выявлено не было.
Опытная группа: в ткани печени наблюдались слабо инфильтрированные (лимфоидными клетками с примесью эозинофилов и макрофагов) портальные тракты, содержащие по 1 - 2 мелких желчных протока, выстланных однослойным кубическим эпителием. Нарушения целостности пограничной пластинки не отмечалось. Некоторые центральные вены были нерезко расширены, умеренно полнокровные. Местами в перицентральных отделах дольки
Б >■
о
Б о
I- О О К
<5 02
Щ о
Нв
¡Е-
п ^
О ¡о
^
I- Ш
и га
I. Б
га х
л
<
га
I-
х ш 2 5 а ш с и
т
1-Л
Рис. 1. Иммунизация экспериментальных крыс
отмечались расширенные синусоиды, не заполненные кровью. В части синусоидов определялись единичные эритроциты, лимфоидные клетки и эози-нофилы. Некоторые гепатоциты находились в состоянии гидропической дистрофии, наблюдались участки их дискомплексации. Кроме того, отмечалась гиперплазия клеток ретикулоэндотелиальной системы, анизокариоз и гиперхромизм ядер гепатоцитов, смещение их к синусоидальному полюсу клетки. При окраске по Ван Гизону фиброзных изменений в ткани печени не выявлено (рис. 3, см. цветную вклейку).
Необычным является то, что при наличии аутоиммунной реакции в ткани печени (сенсибилизация гомогенатом ткани печени) одновременно наблюдается местная иммунная реакция в слизистой оболочки желудка (всех отделов) и двенадцатиперстной кишки. Макро- и микроскопическая картина идентична той, которая наблюдалась в этих органах при сенсибилизации животного гомогенатами ткани слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Местный иммунный аппарат желудка, как и всего желудочно-кишечного тракта, участвует в обеспечении иммунного гомеостаза организма [3]. В ходе проведенного морфологического исследования во всех исследуемых органах (тело и антраль-ный отделы желудка и двенадцатиперстная кишка) отмечалась гиперплазия лимфоидной ткани, то есть местной иммунной системы. Лимфоидная ткань пищеварительной системы позволяет выделить в ней три основные группы: лимфоциты, локализующиеся в эпителии; лимфоциты и плазматические клетки, диффузно «заселяющие» собственную пластинку слизистой оболочки; лимфоидные фолликулы, расположенные в базальных отделах слизистой оболочки. Межэпителиальные лимфоциты первыми из всех иммунокомпетентных клеток встречаются с различными антигенами, находящимися в просвете пищеварительного канала в зависимости от функции желудочного и кишечного эпителия. Эпителий желудка соприкасается с антигенами, находящимися в просвете его, но не абсорбирует их, и это обеспечивает отличия в лимфоцитарной инфильтрации.
Сочетанная реакция «печень — слизистая оболочка желудка и двенадцатиперстной кишки»
ЛИТЕРАТУРА
1. Чеботкевич В. Н. Аутоиммунные заболевания и методы их моделирования. — СПб., 1998.
2. Иммуноморфология и иммунопатология. — Витебск, 1996.
косвенно указывает на нарушение местной толерантности к «общим» антигенам, которыми являются ядро, митохондрии. Это не является реакцией на всю клетку, так как макро- и микроскопически было показано, что имеется тканевая специфичность иммунной реакции на аллогенный гомогенат.
С другой стороны, сочетанной реакции на ал-логенный гомогенат слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной в ткани печени, по крайней мере в исследуемые сроки, нет. Местная толерантность ткани печени требует более значительных воздействий — собственной тканью, более длительное действие антигенов, предварительное токсическое или инфекционное повреждение клеток печени, наличие генетической предрасположенности.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, аутоиммунная патология — это атака иммунной системы против органов и тканей собственного организма, в результате которой происходят их структурно-функциональные повреждения. Аутоиммунный компонент обладает специфичностью к клеткам разных органов и даже разных отделов одного органа (желудок). Но одновременно происходит образование антител и на «общие» клеточные структуры — ядро, митохондрии. Вовлечение в совместную реакцию нескольких органов зависит от местной толерантности органа к собственным антигенам. Снижение толерантности приводит к сочетанной патологии, и не всегда возможно выявить «первичный» орган, который вызвал присутствие аутоиммунного компонента. Проведение экспериментальных исследований при сенсибилизации животного клетками разных органов дает возможность выявить органы с более низкой или высокой толерантностью и наличие совместных повреждений.
Выполненные экспериментальные исследования не только доказали наличие аутоиммунного компонента у животных, но и продемонстрировали присутствие сочетанной патологии, в основе которой находится генерализованная аутоиммунная реакция на общие антигены.
3. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. — М.: Анахарсис, 2005. — С. 174.
ИЛЛЮСТРАЦИИ К СТАТЬЕ
АУТОИММУННЫЙ КОМПОНЕНТ
ПРИ АЛКОГОЛЬНОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ У КРЫС
дуоденум
антрум
Рис. 2. Слизистая оболочка желудка крыс. Сенсибилизация крысы аллогенным гомогенатом печени
а)
б)
в) г)
Рис. 3. Печень. Окраска гематоксилином и эозином:
а) портальный тракт слабо инфильтрирован лимфоцитами с примесью эозинофилов и макрофагов. Слабо выраженная гиперплазия клетокретикулоэндотелиальной системы. Ув. 480;
б) расширенная центральная вена. В просвете расширенных синусоидов единичные лимфоциты, эритроциты и эозинофи-лы. Встречаются двуядерные гепатоциты. Ув. 480;
в) полиморфизм и гиперхромия ядер гепатоцитов. Ув. 480;
г) гидропическая дистрофия гепатоцитов. Ув. 480
