CC BY
45
тГтТм^“ Оригинальные статьи
©2002, СПбРОРААКИ
АУТОАНТИГЕНЫ В ОЦЕНКЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
Зафранская М.М., Коктыш И.В., Милютин А.А., Батян Г.М.* , Бойко Ю.Н.*
Международный экологический университет им, А.Д. Сахарова, Минск, Беларусь;
*Белорусская медицинская академия последипломного образования
Резюме. Одной из основных характеристик органоспецифических аутоиммунных заболеваний является изменение функциональной активности клеток и обнаружение аутоантител. Целью работы явилось изучение пролиферативной и иммуноглобулин-синтезирующей активности лимфоцитов периферической крови детей с аутоиммунными заболеваниями в ответ на действие неспецифических поликлональных активаторов и специфических антигенов. Обследовано 52 больных детей с ювенильным ревматоидным артритом и сахарным диабетом I типа, 21 здоровый ребенок с генетической предрасположенностью к сахарному диабету I типа и 50 здоровых детей в качестве контрольной группы. Для оценки пролиферативной активности применялся культуральный метод с использованием неспецифических поликлональных активаторов и специфических антигенов, коллагена 2 типа и GAD. Содержание IgG в супернатантах оценивали с помощью иммуноферментного анализа. Наличие ревматоидного фактора в сыворотках и супернатантах определяли методом латекс-агглютинации. Обнаружено снижение клеточных и гуморальных реакций со стороны иммунной системы исследуемых больных в ответ на действие специфических аутоантигенов. Установлено угнетение продукции IgG плазматическими клетками больных ювенильным ревматоидным артритом под действием коллагена, положительно коррелирующее с синтезом ревматоидного фактора класса IgG. Обнаружено достоверное снижение исходного пролиферативного ответа мононукле-аров периферической крови и ответа лимфоцитов больных сахарным диабетом I типа на действие GAD (р<0,05, 0<0,01). Аналогичная тенденция наблюдалась и у детей с генетической предрасположенностью к заболеванию сахарным диабетом 1 типа. Определение Ig-синтезирующей и пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови детей, больных аутоиммунными заболеваниями, под влиянием специфических антигенов может стать важной характеристикой для оценки тяжести течения болезни и увеличивает возможности в разработке патогенетической стратегии предупреждения и профилактики аутоиммунных заболеваний.
Ключевые слова: коллаген II типа, GAD, ревматоидный фактор, сахарный диабет I типа, ювенильный ревматоидный артрит.
Zafranskaya М.М., Koktysh I. V, Milutin A.A., Batyan G.M., Boiko Yu.N.
AUTO ANTIGENS IN THE EVALUATION OF PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELL ACTIVITY
The main characteristics of autoimmune diseases with organ specificity are the modification of cell functional activity and the presence of autoantibodies. The aim of the research was to investigate the proliferative and the immunoglobuline-synthesiz-ing activity of В cells in patients with autoimmune diseases. 52 children with juvenile rheumatoid arthritis and type 1 diabetes, 21 healthy children with genetic predisposition to type I diabetes and 50 control children were examined. Cultural method with non-specific mitogens, specific antigens, collagen type II and glutamic acid decarboxilase (GAD), was used. IgG in supernatants was assayed by ELISA. IgG-RF presence in serum and supernatants was determined by latex-agglutination method.
The decreased cellular and humoral immune responses to specific autoantigens in vitro were determined in the examined patients. In IRA patients we observed the suppression of IgG production by collagen-stimulated plasma cells, that positively correlated with IgG-RF synthesis.
The significant decrease in the peripheral blood mononuclear cell initial response and in the lymphocyte response to GAD was shown in patients with type I diabetes. The same trend was found in children genetically predisposed to type I diabetes.
Thus, determination of peripheral blood mononuclear cell “ “ Ig-synthesizing and proliferative activity in response to spe-
Aopec для переписки. cifie antigens in vitro could be taken as a criterion of the
220136, Беларусь, г. Минск, а/я 57 autoimmune disease severity. Identification of the autoim-
зав. кафедрой иммунологии, Зафранской М.М. типе response to specific autoantigens in the premorbid pe-
Тел.: (017) 2302-678, факс (017)2306-888, riod could give a prospect for autoimmune diseases preven-
e-mail: tima@isir.minsk.by tion. (Med.Immunol., 2002, vol.4, N3,pp 447-452)
Введение
В настоящее время нет ответа на ключевой вопрос, что является первичным при аутоиммунных заболеваниях: изменяется ли иммунологическая реактивность и образуется ли аутоагрессивный клон лимфоцитов, атакующий собственные здоровые ткани организма или имеет место появление у ряда тканей новых антигенов, которые неизмененная иммунная система воспринимает как чужеродные, с развитием реакции отторжения чужого. В любом случае происходит срыв естественной иммунологической толерантности [19].
Согласно одной из гипотез этиопатогенеза аутоиммунных заболеваний (АИЗ) срыв толерантности к собственным антигенам может быть обусловлен первичным иммунным дефектом, характеризующимся особенностями функционирования регуляторных Т-лимфоцитов на фоне определенного HLA-фенотипа. В пользу этого механизма свидетельствует возможность дисбаланса СБ4+-Т-лимфоцитов субклассов Thl и Th2 у людей с определенным HLA-фенотипом. Так, для больных ревматоидным артритом (РА) и сахарным диабетом (СД) 1 типа характерна предоми-нантная роль Thl- лимфоцитов в развитии патологии, в то время как у пациентов с системной красной волчанкой или аллергическими заболеваниями - Th2 [14].
Для органоспецифической патологии гиперактивация Thl способствует разрушению тканей ((3-кле-ток при СД 1 типа, синовиальной оболочки при РА) через опосредованное деструктивное влияние INF'/, IL-1, TNFa и т.д. [12,14].
Согласно другой гипотезе, срыв аутотолерантности к собственным антигенам (glutamic acid decarboxilase (GAD), IA-2 при СД1 типа, коллаген II типа при РА, основной белок миелина при рассеянном склерозе и т.д.) может произойти в результате феномена молекулярной мимикрии и кроссреактивности с антигенами окружающей среды [18,19]. В этом случае развитие иммунного ответа против чужеродных антигенов, содержащих гомологичный с собственными антигенами участок пептида, может инициировать аутоиммунную реакцию против этих собственных антигенов.
Механизмы нарушений контроля пролиферации и дифференцировки лимфоцитов, их аутореактивных клонов у больных с аутоиммунной патологией практически не изучены. Исследования этих механизмов позволяют не только понять патогенез, но и разработать новые подходы эффективной иммуно-активной терапии аутоиммунных заболеваний, основанной на коррекции процессов, приводящих к дисбалансу Т-клеточных субпопуляций и гиперактивации В-лимфоцитов.
На основании вышеизложенного нами была изучена пролиферативная и иммуноглобулин-синтезирующая активность лимфоцитов периферической крови детей, страдающих органоспецифической патологией, в ответ на действие неспецифических митогенов и специфических антигенов.
Материалы и методы
Нами обследован 51 ребенок с органоспецифическими АИЗ, из них: 33 ребенка, находившихся на стационарном лечении в Минской областной детской клинической больнице с диагнозом ювенильный ревматоидный артрит (длительность заболевания, в среднем, составила 5,7±3,6 лет, средний возраст -7,7±4,7 лет) и 18 детей с диагнозом СД I типа (длительность заболевания, в среднем, составила 3,89±1,6 лет, средний возраст -6,7±3,8 лет). Все дети, больные СД, получали заместительную терапию. Больным ЮРА проводилась базисная терапия. Кроме того, было обследовано 21 здоровых детей с семейной предрасположенностью к СД 1 типа (сиблинги). Контрольную группу составили 50 практически здоровых детей аналогичного возраста.
Для определения пролиферативной и Ig-синте-зирующей активности мононуклеаров периферической крови (МПК) использовалась цельная свежая кровь, которая культивировалась в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640 (“Sigma”) с 10% инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой (НИИЭМ, Беларусь), 10 мМ HEPES, 2 мМ глутамина и 40 мкг/мл гентамицина.
Клетки в концентрации 2х10б/мл культивировали в течение 72 ч (в случае оценки пролиферативного ответа) и в течение 7-ми суток (в случае оценки продукции иммуноглобулинов) в увлажненной атмосфере с 5% С02 при 37°С. В качестве стимуляторов и костимуляторов использовали:
- фитогемагглютинин (ФГА) в минимальной - 2,5 мкг/мл и оптимальной - 15 мкг/мл конечной концентрациях (“Sigma”, L 9132, ФРГ);
- митоген фитолакки американской (PWM) в концентрации 5 мкг/мл (“Sigma”, L 8777, ФРГ);
- липополисахарид (ЛПС) в концентрации 5 мкг/ мл (“Sigma”, L 4524, ФРГ);
- декарбоксилаза глютаматаминовой кислоты (GAD) в концентрации 5 мкг/мл (“Sigma”, G 2251, ФРГ);
- Коллаген II типа (“Fluka”, 27662, ФРГ) в концентрации 1,25 и 5 мкг/мл.
Пролиферативный ответ клеток оценивали по включению 3Н-тимидина, который вводили за 4 часа до окончания культивирования в дозе 37кБк (1мкКи) на лунку. Уровень (3-излучения измеряли на жидкостном стинцилляционном счетчике “Wallac” (Финляндия) [10].
Определение концентрации IgG в полученных супернатантах и сыворотках крови больных и здоровых детей проводилось иммуноферментным анализом с помощью набора «ИФА-hIgh» (ИБОХ НАН, Беларусь).
Определение ревматоидного фактора (РФ) в исследуемых супернатантах и сыворотках крови проводилось полуколичественным латекс-тестом «RF LATEX» (“Chematil”, Италия).
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием пакета программ “Statistica” (Release 4.3.) под Windows с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни [2].
Результаты
Функциональная активность МПК детей, страдающих СД1 типа. В настоящее временя установлено, что фенотипические и функциональные нарушения клеточного иммунитета при впервые выявленном СД1 типа возникают задолго до манифестации болезни и обусловлены срывом к островковым антигенам. Основным лабораторным критерием для предсказания развития сахарного диабета I-го типа является обнаружение в сыворотках крови здоровых детей положительного титра аутоантител к основным аутоантигенам - GAD, проинсулину, инсулину, 1C А и т.д. [ 11 ]. Однако их возникновение возможно лишь при деструкции Р-клеток островков поджелудочной железы и распознавании аутоантигенов иммунной системой. В связи с этим нами использованы функциональные тесты оценки клеточного ответа мононуклеаров периферической крови на действие неспецифических поликлональных митогенов и специфического аутоантигена - GAD у детей, больных СД1 типа, и их сиблингов.
Наибольшие изменения функциональной активности установлено у больных СД1-типа детей: отмечалось достоверное снижение пролиферативной активности лимфоцитов в ответ как на Т-зависимые митогены (ФГАопт., PWM), так и на поликлональный В-клеточный митоген ЛПС (табл.1).
В группе детей с семейной предрасположенностью отмечается достоверное снижение Т-зависимой и Т-не-
зависимой пролиферации В-лимфоцитов. Эти показатели отражают снижение функциональной активности Th2 и В-лимфоцитов, причиной чего может быть супрессорное действие со стороны Thl. Кроме того, в группе больных детей обнаружено снижение пролиферативной активности МПК при стимуляции их GAD по сравнению со здоровыми детьми из контрольной группы (р<0,05) (рис.1). Аналогичная тенденция наблюдается и в группе детей с семейной предрасположенностью.
Функциональная активность МПК детей, страдающих ЮРА. Несмотря на то, что современные концепции этиопатогенеза рассматривают ЮРА как Thl-медиированное аутоиммунное заболевание, одним из основных звеньев патогенеза данного заболевания остается поликлональная В-клеточная активация, приводящая к накоплению иммунных комплексов, сывороточных иммуноглобулинов, РФ. Активность ревматоидного фактора может быть реализована через стимуляцию клеточно-опосредованных реакций, через превращение иммунных комплексов в комплементе -вязывающие, либо через превращение иммунных комплексов в нерастворимые, облегчая фагоцитоз [4].
Исследование пролиферативной и иммуноглобу-лин-синтезирующей активности МПК больных ЮРА, регуляции РФ-продукции является ключевым для понимания патогенеза ЮРА, а также для получения качественно новых диагностических критериев активности патологического процесса данного заболевания.
Проведенные исследования функциональной активности иммуноцитов периферической крови детей
О Здоровые
□ ЮРА
□ Предрасположенность к СД
□ СД
Рис.1. Индексы пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови под влияниями различных специфических антигенов у детей исследуемых групп.
Табл. 1. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ С СД I ТИПА И ИХ СИБЛИНГОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ МИТОГЕНОВ
Группы Спонтанная пролиферация, имп/мин ИП ФГА, 2,5 мкг/мл ИП ФГА, 15 мкг/мл ИП PWM, 5 мкг/мл ИП ЛПС 5 мкг/мл
больные п=18 386 ± 102 6,1 + 0,8 6,7 ± 0,6* 1,9 + 0,1* 1,3 + 0,02***
сиблинги п=21 432 ± 43 4,5 ± 1,0 9,7 + 0,5 1,5 ± 0,7** 1,1 ± 0,4**
контроль п=15 450 ± 67 4,2 ± 0,6 9,3 ± 0,9 2,9 ± 1,1 1,9 + 0,05
Примечание: ИП - индекс пролиферации, * - р<0,05, ** - р<0,01 ,*** - р<0,001
с ЮРА позволили нам установить достоверные различия пролиферативного ответа иммунокомпетент-ных клеток под влиянием неспецифических Т- и В-клеточных митогенов по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы (табл. 2).
Средние значения спонтанной пролиферативной активности мононуклеаров периферической крови у больных детей выше, чем у здоровых, что характеризует Т-клеточную аутоактивацию иммунной системы при ЮРА.
Отмечено достоверное снижение функциональной активности лимфоцитов периферической крови под действием оптимальной дозы ФГА и под влиянием Т-зависимого-В-клеточного митогена Р\¥М. Причина выраженного подавления активности ТЬ2-лимфоцитов может быть также обусловлена супрессорным влиянием цитокинов, продуцируемых ТЫ [6,17]. Кроме того, у детей, независимо от степени
спонтан.
PWM
ЛПС коллаген 1,25
Рис.2. Продукция 1дв мононуклеарами периферической крови под влиянием неспецифических поликлональных активаторов и специфического антигена у больных ЮРА и здоровых детей.
35
гР 30./ 2 25 | 20./' 15.^'
2 аа
s ю со
I
О
-=Lj±/
□ ЮРА
□ Здоровые
PWM
коллаген коллаген 1,25 5
ЛПС
Рис.З.Случаи выявления РФ в супернатантах у больных ЮРА и здоровых детей.
тяжести течения патологического процесса при ЮРА, отмечено достоверное снижение ответа МПК на стимуляцию специфическим антигеном по сравнению с контрольной группой (рис.1).
У больных ЮРА наблюдается угнетение продукции под действием коллагена (рис.2), причем наиболее выраженное угнетение установлено у детей с III степенью активности патологического процесса (0,23±0,03 мг/мл - контроль, 0,29±0,06 мг/мл
- I ст. активности ЮРА, 0,05±0,01мг/мл - III ст. активности ЮРА, соответственно).
Интересно отметить, что способность МПК больных детей к продукции в ответ на Р\УМ и ЛПС не отличается от спонтанной, что согласуется с полученные нами ранее данными снижения функции ТЬ2 в сочетании с поликлональной В-клеточной активацией при данной патологии.
Проведенные исследования по РФ-синтезирую-щей активности МПК здоровых детей и больных ЮРА показали наличие корреляции (г=0,99, р<0,01) между содержанием в супернатантах ^С, индуцированного коллагеном и наличием ^О-РФ, синтезируемого в ответ на действие того же антигена.
В результате исследования сывороток больных ЮРА и здоровых детей РФ установлено 16% серопозитивных ЮРА и в 9% случаев РФ выявлялся у детей контрольной группы. Интересными представляются результаты выявления РФ в супернатантах больных ЮРА и здоровых детей (рис.З): РФ обнаруживался как у детей с ЮРА (от 17 до 33% случаев
- спонтанная продукция, влияние коллагена и ЛПС), так и у детей контрольной группы (9% случаев - спонтанная продукция, влияние коллагена и ЛПС).
Кроме того, нами установлено, что в супернатантах МПК серонегативных больных обнаруживается спонтанно синтезируемый и продуцируемый под действием коллагена и ЛПС РФ (рис.4).
Обсуждение
Обнаруженный низкий пролиферативный ответ на GAD у больных детей может быть связан с тем, что in vivo при СД1 типа активация лимфоцитов и наработка аутоантител идет на конкретные эпитопы этого антигена, доступные для связывания лишь при данном заболевании, а при внесении экзогенного антигена in vitro сильного активирования не проис-
Табл. 2. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ С ЮРА ПОД ВЛИЯНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ МИТОГЕНОВ
Группы Спонтанная пролиферация, имп/мин ИП ФГА 2,5 мкг/мл ИП ФГА 15 мкг/мл ИП PWM 5 мкг/мл ИП ЛПС 5 мкг/мл
Контроль, п=20 ЮРА, п=22 616,7 ± 62,3 1058,2 ± 311,1* 3,2 ± 1,1 2,0 ± 2,1 16,8 ± 4,4 6,5 ± 3,9** 5,3 ± 1,3 2,1 ± 0,5* 2,8 ± 1,2 2,1 ± 0,8
Примечание: ИП - индекс пролиферации; * - р<0,05, ** - р<0,01
ходит. Кроме того, больные СД1 типа и контрольная группа реагируют с различными регионами молекулы GAD (пациенты с регионом 473-555 или 247-279, контроль - с центральной частью), следовательно, различные эпитопы процессируются и представляются в комплексе с HLA [11].
Известно, что центральная роль в патогенезе СД1 типа отводится аутореактивным Т-лимфоцитам, реагирующим с антигенами [3-клеток островков поджелудочной железы. При АИЗ существует ненормальное распределение субклассов лимфоцитов, а именно CD45RA+ ‘naive’ клеток, CD45RA+RO+ впервые активированных клеток и CD45RO+ клеток памяти, обладающих различной пролиферативной активностью в ответ на действие антигенов. Аутореактивность наиболее выражена в случае впервые выявленного диабета (реагируют CD45RA+RO+-‘primed’-KreTKH) по отношению как к инсулину, так и к (3-клеточным мембранам островков поджелудочной железы. В случаях long-standing СД1 типа и здоровых пациентов реагируют, в основном, клетки- памяти и “naive” клетки. Установлено, что инсулин может явиться причиной изменения иммунологической реактивности при СД1 типа. Механизм этого неизвестен, но может быть связан с вовлечением активации различных субклассов лимфоцитов. Лечение инсулином может стимулировать регуляторные Т-клетки с ‘naive’ фенотипом, которые эффективно супрессируют впервые активированные аутореактивные Т-клетки, что может быть уместно для профилактики данного заболевания (Diabetes-Prevention Trial-1) [16].
В последние годы стали выделять подтипы РА, серопозитивные по IgG-РФ, IgA-РФ, IgM-РФ, отличающиеся друг от друга по ряду клинико-лабора-торных характеристик. РФ класса IgG способен образовывать ИК, которые, вследствие своего меньшего, чем ИК с IgM- РФ, размера, способны проникать в микрососуды, откладываться в тканях, повреждая их. ИК могут активировать систему комплемента, усугубляя альтерацию. IgG-РФ повреждает органы и системы с богатым кровоснабжением и его высокий уровень является показателем тяжелого сустав-но-висцерального течения [1].
Нами обнаружена способность МПК у 9% серонегативных больных продуцировать АТ антиглобу-линовой специфичности под действием коллагена II типа и ЛПС. В настоящее время доказано существование идентичных популяций В-лимфоцитов, потенциально способных к продукции РФ у здоровых и больных РА. Причем РФ+В-клетки больных и здоровых по-разному отвечают на хелперные сигналы
[7,8]. Феномен отсутствия РФ в сыворотке и спонтанного синтеза анти-IgG АТ у серонегативных пациентов РА объясняется тем, что серонегативные больные РА обладают большим количеством предшественников РФ+В-лимфоцитов по сравнению с контрольной группой. Однако В-лимфоцитов, потенциально способных к продукции РФ, не достаточно, чтобы увеличилась концентрация этих ауто-АТ в сыворотке крови [8].
Нами установлено угнетение продукции IgG мо-нонуклеарами под действием коллагена у больных
ЮРА, коррелирующее с содержанием в супернатантах РФ класса IgG, индуцированного тем же антигеном. Поэтому нам представляется возможным использовать индуцированную под действием коллагена продукцию IgG-РФ мононуклеарами периферической крови в качестве прогностического критерия у детей, страдающих ЮРА.
В 9% случаев РФ выявлялся в сыворотке у детей контрольной группы. Эти данные согласуются с По-техиным О.Е. (2000), который отмечает, что РФ бывает положительным у 4-20% здоровых лиц, при острых воспалительных заболеваниях, вирусных инфекциях, туберкулезе, подостром бактериальном эндокардите, заболеваниях печени, системной красной волчанке и др.[3]. Явление транзисторного синтеза РФ во время иммунных реакций привело к гипотезе о физиологической роли РФ как необходимом компоненте нормального иммунного ответа
[4,8]. Тем не менее, накапливание РФ+В-клеток в синовиальной оболочке и продолжающаяся продукция АТ РФ-специфичности характеризует РА. Наиболее вероятным объяснением этого факта является то, что секреция аутоАТ плазмацитами больных РА регулируется различными механизмами.
Исследование регуляции РФ-продукции является ключевым для понимания патогенеза РА. Анализ регуляции продукции анти-IgG В-клетками у пациентов с РА в основном фокусируется на В-клетках периферической крови [5,9,15]. Этими работами установлено, что повышение уровня РФ в сыворотке у больных РА связано с наличием В-лимфоцитов, способных к спонтанной секреции РФ in vitro. Спонтанно секретирующие РФ клетки обнаружены в периферической крови, синовиальной жидкости и костном мозге [15]. Содержание аутоантител к Ig и активированных В-клеток в синовиальной жидкости, синовиальной ткани и периферической крови больных серопозитивным РА выше, чем при серонегативном варианте, что позволяет предполагать особенности нарушения цитокиновой регуляции В-клеточной функции при различных формах РА. Так, установлено, что циркулирующие В-клетки ПфК продуцируют РФ зависимо от содержания IL-10 в крови и локально в суставной полости. IL-10, с одной стороны, ингибирует синтез мононуклеарами провоспалительных цитоки-нов, а с другой - стимулирует В-клеточный рост и дифференцировку [5,15,17].
100%
£ 80%
04
5
I 60%
ш
Оч
§ 40%
I
20%
0%
\ 1- =1 =1 В —,
□ РФ* и Рф+
PWM
коллаген коллаген ЛПС 1,25 5
Рис.4. Случаи выявления РФ в супернатантах у серонегативных больных ЮРА.
Заключение
Нарушение функциональной активности лимфоцитов периферической крови детей, страдающих ЮРА и СД1 типа, характеризуется спонтанной активацией клеток, достоверно сниженной индуцированной Т-клеточными митогенами и специфическими аутоантигенами пролиферации мононуклеаров периферической крови в сочетании с угнетением продукции Ig под влиянием специфических аутоантигенов (на примере ЮРА).
Изучение клеточного иммунного ответа на специфический аутоантиген позволит оценить их потенциальную роль в патогенезе и предсказании (СД1 типа) АИЗ, а также расширит наши представления о механизмах индукции эффективной Т-клеточной толерантности при использовании системных антигенов в лечении Т-клеточно-медиированных АИЗ.
В настоящее время в литературе широко рассматривается вопрос использования аутоантигенов для получения индуцированной иммунной толерантности (“oral tolerance”) при органоспецифических аутоиммунных заболеваниях. Толерогенное состояние при этом может включать три механизма приобретения неотвечаемости на антиген: уничтожение клона (FasL- и TNF-зависимые пути клеточной гибели), клональную анергию антиген-спе-цифических клонов клеток на введение высоких доз антигена и активную супрессию. Малые дозы экзогенного антигена усиливают генерацию супресси-рующих элементов, продуцирующих TGF-P и/или IL-4 и IL-10. Это предполагает активацию ТЬ2-кле-ток, продукты которых ингибируют функцию Thl-клеток [11,13]. Понимание процессов эндогенной регуляции пролиферации откроют перспективу разработки новых подходов к лечению изучаемой патологии.
Список литературы
1. Зборовский А.Б., Сивордова Л.Е., Деревянко Л.И. Эффективность D-пенициламина и метотрексата при лечении РА в зависимости от уровня РФ различных классов. // Терапевтический архив. -1999
- №1 - с.60-63.
2. Гублер Е.В., Генкель А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. - Л.: Медицина - 1973 - 138 с.
3. Потехин О.Е., Малышев B.C. Современное состояние иммунологической диагностики аутоиммунных заболеваний. // Иммунопатология - 2000. -№ls с.44-49.
4. Atkinson J.P. Some thoughts on autoimmunity. / / Arthritis & Rheumatism. - 1995 - Vol.38, №3. - pp. 301-305.
5. Cush J,J, Splawski J.B., Thomas R., McFarlin J.E. Elevated IL-10 levels in patients with Rheumatoid
Arthritis. // Arthritis & Rheumatism. - 1995. - Vol.38, №1. - pp. 96-104.
6. Feldmann М., Brennan F.M., Maini R.N. Role of Cytokines in rheumatoid arthritis. // Annu. Rev. Immunology. - 1996. - pp. 397-440.
7. He X., Goronzy J., Weyand C. The repertoire of Rheumatoid Factor-producing В cells in normal subjects and patients with Rheumatoid Arthritis. // Arthritis & Rheumatism. - 1993. - Vol.36, №8. - pp.1061-1069.
8. He X., Zhong W., McCarthy Т., Goronzy J. Rheumatoid Factor-producing В cells in patients with seronegative Rheumatoid Arthritis. // Arthritis & Rheumatism. - 1993 - Vol.36, №9 (Supplements) - S129
9. Hirohata Sh, Yanagida Т., Koda M. Selective induction of IgM Rheumatoid Factor by CD14+ monocyte-lineage cells generated from bone marrow of patients with Rheumatoid Arthritis. // Arthritis & Rheumatism. - 1995. - Vol.38, №3. - pp. 384-388.
10. Hundson L., Hay F.C. Practical Immunology. Third edition - London: Blackwell scientific publication
- 1989 - p. 154-157.
11. Leslie R.D.G., Atkinson M.A., Notkins A.L. Autoantigens IA-2 and GAD in Type I (insulin-dependent) diabetes // Diabetologia. -1999. - Vol. 42 - pp 3-14.
12. Liblau R.S., Singer S.M., McDevitt H.O. Thl and Th2 CD4+ T-cells in the pathogenesis of organ-specific autoimmune diseases // Immunol.Today. -1995.
- Vol.l6,№l.-p.34-38.
13. Liblau R. S. Systemic antigen in the treatment of T-cell mediated autoimmune diseases // Immunol. Today. - 1997. - Vol.18, №12 - pp 559-603.
14. Miossec P., Chomorat P., Dechanet J. Bypassing the antigen to control rheumatoid arthritis // Immunol.Today. - 1996. - Vol.17, №4. - pp 170-173.
15. Perez L., Orte J., Brieva J.A. Terminal differentiation of spontaneous rheumatoid factor-secreting В-cells from Rheumatoid Arthritis patients depend on endogenous IL-10. // Arthritis & Rheumatism. - 1995 - Vol.38, №12. - pp. 1771-1776
16. Petersen L.D., M. van de Keur, Vries R.R., Roep B.O. Autoreactive and immunoregulatory T-cell subsets in insulin-dependent diabetes mellitus // Diabetologia.
- 1999. - Vol.42 - pp 443-449.
17. Reparon-Schuijt C., W. van Esch, C. van Koteen, Levarht E., Breedveld F., Verweij C. Functional analysis of Rheumatoid Factor-producing В cells from the synovial fluid of Rheumatoid Arthritis patients. // Arthritis & Rheumatism. - 1998. - Vol.41, №12. -pp.2210-2220.
18. Song Y.H., Li Y., Noel K. Maclaren The nature of autoantigens targeted in autoimmune endocrine diseases // Immunol.Today. - 1996. - Vol.17, №5. -pp.232-238.
19. Theofilopoulos A.N. The basis of autoimmunity: part I. Mechanisms of aberrant selfrecognition (review) // Immunology Today. - 1995.
- Vol. 2, №2. - pp.90-98.
поступила в редакцию 21.05.2001 отправлена на доработку 04.07.01 принята к печати 15.05.2002
